專利名稱：一種從白花地膽草中提取白花地膽草平a、b的方法
技術領域：
本發明屬于中藥化學領域，涉及一種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法。
背景技術：
白花地膽草是中藥苦地膽的植物來源，民間認為苦地膽具有清熱、涼血、利濕的功效。現代藥理研究表明，白花地膽草具有抗菌、抗炎、保肝、抗腫瘤、抗糖尿病、解熱和降血壓等藥理活性。Sim等人對菲律賓產白花地膽草煎劑抑菌實驗表明，其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有強烈的體外抑制作用，海南產白花地膽草全草乙醇提取物、水提取物均具有抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌活性和抗金黃色葡萄球菌活性。白花地膽草中的活性成分已有大量報道，主要含有倍半萜、黃酮苷、酚酸等。白花地膽草平A(Tomenphantopin A),分子式為C2tlH24O7,分子量為376. 41,為無色粉末，具有細胞毒活性，對KB細胞的ED5tl為2. 5 μ g/mL ；白花地膽草平B (TomenphantopinB)，分子式為C19H22O7,分子量為362. 38，為無色針晶，具有細胞毒活性，對KB細胞的ED5tl為5. O μ g/mL ο目前未見有關自天然植物白花地膽草中同時提取制備白花地膽草平A和白花地膽草平B的方法報道和專利申請。

發明內容
本發明的目的是提供一種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，該方法操作簡單、重現性好。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案
一種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，其特征在于包括以下步驟將白花地膽草洗凈、陰干、粉碎，然后用70-90%乙醇室溫浸泡提取3-4次，每次8-36小時，合并提取液，提取液減壓蒸餾回收乙醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用乙酸乙酯萃取，將得到的乙酸乙酯萃取物用葡聚糖凝膠柱層析進行分離純化，石油醚-丙酮100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1梯度洗脫，洗脫液經薄層層析檢測，最后經制備液相色譜制備，得到白花地膽草平A、白花地膽草平B。所述薄層層析檢測時展開劑為體積比10:1-30:1的石油醚-丙酮。所述制備液相分離中，甲醇和水混合溶液是指甲醇和水的體積比為(70-80):(30-20)。本發明首次從白花地膽草中分離得到白花地膽草平A和白花地膽草平B，制備方法簡單、原料易得、重現性好，為大規模工業化生產提供了可能。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1:
將干燥的白花地膽草全草IOkg洗浄、陰干、粉碎，室溫下用80%こ醇提取3次，毎次分別用時30h、24h、12h，將所得提取液減壓濃縮回收こ醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用こ酸こ酯萃取，將こ酸こ酯萃取液減壓濃縮至萃取體積的1/20，加入S印hadex LH-20柱進行柱層析，用體積比為100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、I: I的石油醚-丙酮混合溶液進行洗脫，分別收集洗脫液，然后用TLC薄層檢驗，展開劑為30:1的石油醚-丙酮，根據Rf值來判斷、合并相同或類似部分，采用制備液相色譜分離純化，流動相為甲醇水=72:28，流速為3. 8ml/min，收集相應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度大于98%的白花地膽草平A765mg、白花地膽草平B973mg。實施例2:
將干燥的白花地膽草全草IOkg洗浄、陰干、粉碎，室溫下用90%こ醇提取3次，毎次分別用時36h、20h、10h，將所得提取液減壓濃縮回收こ醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用こ酸こ酯萃取，將こ酸こ酯萃取液減壓濃縮至萃取體積的1/20，加入S印hadex LH-20柱進行柱層析，用體積比為100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、I: I的石油醚-丙酮混合溶液進行洗脫，分別收集洗脫液，然后用TLC薄層檢驗，展開劑為10:1的石油醚-丙酮，根據Rf值來判斷、合并相同或類似部分，采用制備液相色譜分離純化，流動相為甲醇水=76:24，流速為3. 6ml/min，收集相應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度大于98%的白花地膽草平A806mg、白花地膽草平B981mg。實施例3:
將干燥的白花地膽草全草IOkg洗浄、陰干、粉碎，室溫下用70%こ醇提取4次，毎次分別用時24h、15h、10h、8h，將所得提取液減壓濃縮回收こ醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用こ酸こ酯萃取，將こ酸こ酯萃取液減壓濃縮至萃取體積的1/20，加入S印hadex LH-20柱進行柱層析，用體積比為100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1的石油醚-丙酮混合溶液進行洗脫，分別收集洗脫液，然后用TLC薄層檢驗，展開劑為20:1的石油醚-丙酮，根據Rf值來判斷、合并相同或類似部分，采用制備液相色譜分離純化，流動相為甲醇水=78:22，流速為3. 5ml/min，收集相應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度大于98%的白花地膽草平A793mg、白花地膽草平B978mg。
權利要求
1.一種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，其特征在于包括以下步驟將白花地膽草洗浄、陰干、粉碎，然后用70-90%こ醇室溫浸泡提取3-4次，毎次8-36小時，合并提取液，提取液減壓蒸餾回收こ醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用こ酸こ酯萃取，將得到的こ酸こ酯萃取物用葡聚糖凝膠柱層析進行分離純化，石油醚-丙酮100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1梯度洗脫，洗脫液經薄層層析檢測，最后經制備液相色譜制備，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮對應組分，得到白花地膽草平A、白花地膽草平B。
2.如權利要求I所述的ー種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，其特征在于所述薄層層析檢測時展開劑為體積比10:1-30:1的石油醚-丙酮。
3.如權利要求I所述的ー種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，其特征在于所述制備液相分離中，甲醇和水混合溶液是指甲醇和水的體積比為(70-80) : (30-20)。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種從白花地膽草中提取白花地膽草平A、B的方法，其制備方法為將白花地膽草洗凈、陰干、粉碎，然后用乙醇室溫浸泡提取，減壓蒸餾回收乙醇，得到的提取物溶于飽和食鹽水中，用水飽和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水層繼續用乙酸乙酯萃取，將得到的乙酸乙酯萃取物用葡聚糖凝膠柱層析進行分離純化，最后經制備液相色譜制備，得到白花地膽草平A、白花地膽草平B。該制備方法操作簡便、原料易得、重現性好。
文檔編號C07D493/18GK102863455SQ201210356640
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月24日 優先權日2012年9月24日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司