一種治療心腦血管疾病的藥物組合物、制備方法及其質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種治療心腦血管疾病的藥物組合物、制備方法及其質(zhì)量控制方法，涉及制藥領(lǐng)域。所述治療心腦血管疾病的藥物組合物，由下述重量配比的中藥原料制成：地龍30～50份、全蝎15～25份和水蛭30～50份。其制備方法，包括如下步驟：將地龍粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均勻，加水浸泡，將藥材連同浸泡液加入粉碎機進行濕法粉碎，離心，取上清液作采用中空纖維膜過濾，取粗提取液中分子量范圍為9～120KDa的組分即得所述治療心腦血管疾病的藥物組合物。本發(fā)明藥物組合物，去除了藥材中干擾藥效的雜質(zhì)，所以抗血栓方面的藥效較傳統(tǒng)藥物顯著增強，且能顯著減少服用劑量，卻并未檢測到毒性。
【專利說明】—種治療心腦血管疾病的藥物組合物、制備方法及其質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療心腦血管疾病的藥物組合物、制備方法及其質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]心腦血管疾病是一類常見的疾病，特別在中老年人群中發(fā)病率很高，具有高發(fā)病率,高死亡率,高致殘率的特點,對人體健康有著極大的威脅。
[0003]阿司匹林是非選擇性環(huán)氧化酶抑制劑，小劑量的阿司匹林主要抑制血小板中環(huán)氧化酶I (C0X — I)，減少血栓素A2 (TXA2)的生成，用于預防心腦血管病的發(fā)病和短暫性缺血發(fā)作。但服用阿司匹林常常會出現(xiàn)許多不良反應，如長期使用易致胃黏膜損傷，引起胃潰瘍及胃出血，出現(xiàn)中毒性肝炎、心力衰竭以及其他過敏反應，嚴重者甚至出現(xiàn)休克[1]。由此可見，雖然阿司匹林在心腦血管疾病上的療效確切，但其毒副作用亦很明顯(夏路風，付得興.阿司匹林的不良反應與合理應用[J].首都醫(yī)藥，2006，20:48-50.)。
[0004]地龍為矩蝴科動物參環(huán)毛蝴Pheretima aspergiIIum(E.Perrier)、通俗環(huán)毛蟲引Pheretima vulgaris Chen、威廉環(huán)毛蟲引 P.heretima guillelmi (Miehaelsen)或木節(jié)盲環(huán)毛蟲引 Pheretima Pectinifera Michalelsen 的干燥體。
[0005]全蝎為鉗蝎科動物東亞鉗蝎Buthus martensii Karsch的干燥體。
[0006]水輕為水輕科動物螞蟥Whitmania pigra Whitman、水輕 Hirudo nippponicaWhitman或柳葉螞蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全體。水輕具有破血通經(jīng),逐瘀消瘕的功效；地龍又名蚯蚓，味咸，性寒，歸肝、腎、肺經(jīng)，具有清熱定驚，平喘通絡(luò)，利尿之功，可用于風濕痹痛；全蝎為祛風鎮(zhèn)痙之品，又有攻毒散結(jié)之用，三者共用活血破瘀，扶正而祛邪。
[0007]雖然，地龍、全蝎和水蛭是常用的心腦血管藥物，但是全粉入藥，藥效不能令人滿意，口服劑量大，服用不方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明目的是提供一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，藥效強，服用劑量低，卻并未檢測到毒性。
[0009]本發(fā)明的另一目的是提供上述藥物組合物的制備方法，該方法簡單，產(chǎn)率高，能夠?qū)⒂行С煞峙c雜質(zhì)分離，成本低，對環(huán)境友好。
[0010]本發(fā)明的再一目的是提供上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法。
[0011]本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)。
[0012]治療心腦血管疾病的藥物組合物，由下述重量配比的中藥原料制成:地龍30~50份、全蝎15~25份和水蛭30~50份。
[0013]本發(fā)明還提供所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟:(1)將地龍和水蛭粉碎，分別得到地龍粗粉和水蛭粗粉；
(2)將地龍粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均勻，加水浸泡，將藥材連同浸泡液加入粉碎機進行濕法粉碎，得到漿液；將所述漿液離心，取上清液作為粗提取液；
(3)將所述粗提取液采用中空纖維膜過濾，取粗提取液中分子量范圍為9~120KDa的組分即得所述治療心腦血管疾病的藥物組合物。
[0014]步驟(3)中將所述粗提取液先用截留分子量為120kDa的中空纖維膜過濾，取濾過液；將所述濾過液再采用截留分子量為9kDa的中空纖維膜過濾，取截留液，即得分子量范圍為9~120 KDa的組分。
[0015]步驟(3)中所述分子量范圍為9~120 KDa的組分經(jīng)過濃縮得到所述藥物組合物；所述分子量范圍為9~120 KDa的組分經(jīng)過濃縮和冷凍干燥后，得到所述藥物組合物。
[0016]所述冷凍干燥方法為:所述粗提取液中分子量范圍為9~120 KDa的組分在-50° C~-40° C條件下預處理7~10小時；在-6。C~-4。C、絕對壓強為0.05mbr~
0.1mbr條件下冷凍干燥16~24小時，得到的凍干粉，即為該藥物組合物。
[0017]步驟(2)中所述地龍粗粉、全蝎及水蛭粗粉的混合物與水的重量比為1:4~20。步驟(2)中水浸泡的時間為I~6小時。所述漿液中顆粒的平均粒徑< 100 μ m。
[0018]步驟(3)所述中空纖維膜的材質(zhì)為聚醚砜或聚偏氟乙酸。
[0019]本發(fā)明還提供所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括如下步驟:(I)采用雙縮脲法檢測所述藥物組合物的凍干粉，每克藥物組合物凍干粉中的蛋白量不少于0.4g ；
(2)每毫克所述藥物組合物凍干粉的抗凝生物效價不低于0.288U ；
(3)取不同批次的所述藥物組合物凍干粉，配制成濃度為10mg/ml的水溶液，采用SDS-PAGE電泳法，得到參照指紋圖譜；將待測藥物組合物的凍干粉的指紋圖譜與參照指紋圖譜進行相似度評價，相似度應大于0.94 ;所述SDS-PAGE電泳法的檢測條件為:分離膠濃度為12%，濃縮膠濃度為5%，濃縮膠電壓為80mV，分離膠電壓為120mV。
[0020]本發(fā)明藥物組合物的推薦服用劑量為每日0.4~1.2g。
[0021]本發(fā)明治療心腦血管疾病的藥物組合物，是從地龍、全蝎和水蛭中提取得到，去除了藥材中干擾藥效的雜質(zhì)，所以抗血栓方面的藥效較傳統(tǒng)藥物(全粉入藥)顯著增強，且能顯著減少服用劑量，卻并未檢測到毒性。本發(fā)明藥物組合物的抗栓效果可與常用藥物阿司匹林相當，同時服用劑量也處于同一水平。雖然阿司匹林在心腦血管疾病上的療效確切，但其毒副作用亦很明顯，而本發(fā)明藥物組合物卻未檢測出明顯毒性作用，具有廣闊的醫(yī)療發(fā)展前景。
[0022]本發(fā)明上述藥物組合物的制備方法，不僅能夠?qū)⒂行С煞峙c雜質(zhì)分離，顯著提高最終產(chǎn)品的藥效，而且簡單、收率高、成本低，對環(huán)境友好。
[0023]本發(fā)明上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，簡單、重復性好，可靠性高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1是10種不同批次樣品的電泳指紋圖譜，其中sl-slO是10批不同的樣品。
[0025]圖2是10種不同批次樣品電泳指紋圖譜的光密度吸收曲線，其中sl-slO是10批不同的樣品。【具體實施方式】
[0026]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明 實施例1:制備藥物組合物
(I)將地龍飲片，水蛭飲片，分別粗粉碎后，過二號篩(24目)，分別得到地龍粗粉和水蛭粗粉。
[0027](2)處方1:地龍粗粉30克、全蝎18克和水蛭粗粉30克。按照處方I分別稱取地龍粗粉、水蛭粗粉及全蝎，混合均勻，加入400mL水，浸泡2小時。將藥材連同浸泡液加入振動式超微粉碎機(濟南貝力粉有限公司出品，BL-6型)，粉碎lOmin，使藥材顆粒的平均粒徑(D50) < IOOym,得到漿液。漿液在4° C條件下高速冷凍離心后，取上清液為粗提取液。該粗提取液含生藥量0.195g.mL'
[0028](3)將粗提取液先用截留分子量為120kDa的中空纖維膜過濾，取濾過液；將濾過液采用截留分子量為9kDa的中空纖維膜過濾，取截留液。
[0029](4)藥物組合物I的濃縮干燥:將步驟(3)得到的截留液用RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)減壓濃縮至生藥量為0.5g-mr1時取出，于-50° C下冷凍7小時，然后于溫度為-4° C、絕對壓強為0.1mbr條件下冷凍干燥16小時，收集凍干粉，即得藥物組合物I。其得粉率約為原藥材的14.63%。
[0030]藥物組合物I具有顯著抗凝活性(按照實施例4標題2方法檢測)，其活性回收率可達到78.21%。
[0031]實施例2
(I)將地龍飲片，水蛭飲片，分別粗粉碎后，過二號篩(24目)，分別得到地龍粗粉和水蛭粗粉。
[0032](2)處方2:地龍粗粉50克、全蝎25克和水蛭粗粉50克。按照處方2分別稱取地龍粗粉、水蛭粗粉及全蝎，混合均勻，加入1900mL水，浸泡4小時。將藥材連同浸泡液加入振動式超微粉碎機(濟南貝力粉有限公司出品，BL-6型)，粉碎lOmin，使藥材顆粒的平均粒徑(D50) ( 100 μ m，得到漿液。漿液于4° C高速冷凍離心，取上清液為粗提取液。粗提取液含生藥量0.066g.Inr10
[0033](3)將粗提取液先用截留分子量為120kDa的中空纖維膜過濾，取濾過液；將濾過液再采用截留分子量為9kDa的中空纖維膜過濾，取截留液。
[0034](4)藥物組合物2的濃縮干燥:將步驟(3)得到的截留液減壓濃縮至生藥量為1.0g.mr1時取出，于-40° C下冷凍10小時，然后于溫度為-6° C、絕對壓強為0.05mbr條件下冷凍干燥24小時，收集凍干粉，得到藥物組合物2，其得粉率約為原藥材的15.09%。
[0035]藥物組合物2具有顯著抗凝活性(按照實施例4標題2方法檢測)，其活性回收率可達到79.08%ο
[0036]實施例3 藥物組合物的效果及毒性試驗
傳統(tǒng)藥物(全粉入藥)的制備:分別取地龍、水蛭藥材進行粉碎，取過六號篩(100目)的最細粉。由于全蝎含水量較高，將全蝎藥材于真空干燥箱內(nèi)45° C烘一天一夜，再進行粉碎，取過六號篩(100目)的最細粉；按藥物組合比例分別取地龍細粉30克、全蝎細粉18克及水蛭細粉30克，混合均勻，即得傳統(tǒng)藥物。[0037]1.對ADP誘導大鼠血小板聚集的影響
SD大鼠110只，隨機分為11組，每組10只，第I組為NS陰性對照組(不給藥)，第2組為阿司匹林陽性對照組(每日劑量0.0270g/kg), 3、4、5組為傳統(tǒng)藥物高、中、低(1.35、0.675、
0.3375g生藥/kg)劑量組，6、7、8組為藥物組合物I高、中、低(1.35、0.675,0.3375g生藥/kg)劑量組，9、10、11組為藥物組合物2高、中、低(1.35、0.675,0.3375g生藥/kg)劑量組；各組藥物均為灌胃給藥，每日I次，共7日。具體給藥方法見表1。
[0038]用2%戊巴比妥鈉溶液，40mg/kg麻醉上述11組SD大鼠下頸總動脈取全血。將9倍體積的3.8%枸櫞酸鈉溶液加入到I倍體積全血中，進行抗凝處理，輕輕搖勻，以1000rpm離心IOmin,吸出上清液，即為富血小板血衆(zhòng)(PRP)，剩余部分再以3000rpm離心IOmin,吸取上清液為貧血小板血漿(PPP)。用PPP稀釋PRP，使血小板數(shù)約為4 X 108/ml左右，以ADP(二磷酸腺苷)為誘導劑，用LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析儀進行測試并計算其聚集率(%)及聚集抑制率(%)(操作及計算方法可參見LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析儀的使用說明書)。
[0039]結(jié)果見表1，表明傳統(tǒng)藥物高、中、低劑量組及藥物組合物I和2的高、中、低劑量組均可抑制ADP誘導的血小板聚集。其中傳統(tǒng)藥物1.35,0.675g生藥/kg劑量組及藥物組合物I和2的1.35,0.675,0.3375 g生藥/kg組與陰性對照組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P〈0.01)。服用各劑量藥物組合物I和2的SD大鼠，其血小板聚集率平均值均顯著低于服用相同劑量傳統(tǒng)藥物的SD大鼠，其差異亦具有顯著統(tǒng)計學意義(P〈0.01)，說明采用本發(fā)明方法除去了大量影響藥效的雜質(zhì)，使得相同生藥量的藥物組合物I和2與傳統(tǒng)藥物相比，藥效顯著增加。藥物組合物I和2具有顯著的抑制ADP誘導的血小板聚集的作用，其效價顯著高于傳統(tǒng)藥物組。
[0040]另外，通過分 析表1，藥物組合物I和2的每日劑量為0.3375g生藥/kg時，折算成實際固體粉末服用劑量為0.0494g/kg和0.0509g/kg，對血小板的抑制作用低于0.027g/kg的阿司匹林陽性對照組；當藥物組合物I和2的每日劑量為0.6750g生藥/kg時，折算成實際固體粉末服用劑量為0.0987g/kg和0.1014g/kg，對血小板的抑制作用已優(yōu)于0.027g/kg的阿司匹林陽性對照組，由此可以發(fā)現(xiàn)藥物組合物I和2抑制ADP誘導的血小板聚集的劑量與阿司匹林可同處于一個數(shù)量級別。
[0041]表1各藥物對ADP誘導大鼠血小板聚集率的影響
【權(quán)利要求】
1.一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于由下述重量配比的中藥原料制成:地龍30~50份、全蝎15~25份和水蛭30~50份。
2.權(quán)利要求1所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將地龍和水蛭粉碎，分別得到地龍粗粉和水蛭粗粉； (2)將地龍粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均勻，加水浸泡，將藥材連同浸泡液加入粉碎機進行濕法粉碎，得到漿液；將所述漿液離心，取上清液作為粗提取液； (3)將所述粗提取液采用中空纖維膜過濾，取粗提取液中分子量范圍為9~120KDa的組分即得所述治療心腦血管疾病的藥物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟(3)中將所述粗提取液先用截留分子量為120kDa的中空纖維膜過濾，取濾過液；將所述濾過液再采用截留分子量為9kDa的中空纖維膜過濾，取截留液，即得分子量范圍為9~120KDa的組分。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述分子量范圍為9~120 KDa的組分經(jīng)過濃縮得到所述藥物組合物；所述分子量范圍為9~120 KDa的組分經(jīng)過濃縮和冷凍干燥后，得到所述藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于所述冷凍干燥方法為:所述粗提取液中分子量范圍為9~120 KDa的組分在-50° C~-40° C條件下預處理7~10小時；在-6° C~-4° C、絕對壓強為0.05mbr~0.1mbr條件下冷凍干燥16~24小時，得到的凍干粉，即為該藥物組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-5之一所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述地龍粗粉、全蝎及水蛭粗粉的混合物與水的重量比為1:4~20。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中水浸泡的時間為I~6小時。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述漿液中顆粒的平均粒徑< 100 μ m。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，其特征在于所述中空纖維膜的材質(zhì)為聚醚砜或聚偏氟乙酸。
10.權(quán)利要求1所述治療心腦血管疾病的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟:(1)采用雙縮脲法檢測所述藥物組合物的凍干粉，每克藥物組合物凍干粉中的蛋白量不少于0.4g ； (2)每毫克所述藥物組合物凍干粉的抗凝生物效價不低于0.288U ； (3)取不同批次的所述藥物組合物凍干粉，配制成濃度為10mg/ml的水溶液，采用SDS-PAGE電泳法，得到參照指紋圖譜；將待測藥物組合物的凍干粉的指紋圖譜與參照指紋圖譜進行相似度評 價，相似度應大于0.94 ;所述SDS-PAGE電泳法的檢測條件為:分離膠濃度為12%，濃縮膠濃度為5%，濃縮膠電壓為80mV，分離膠電壓為120mV。
【文檔編號】A61K35/56GK103610703SQ201310657998
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月9日
【發(fā)明者】郭立瑋, 付廷明, 朱華明, 朱華旭, 張啟春, 劉峰, 張偉 申請人:陜西步長制藥有限公司, 南京中醫(yī)藥大學