具有降血壓和降血脂雙功能的二肽qe及其用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一個(gè)能與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶結(jié)合、抑制其活性、也能抑制3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶的活性的二肽。具體而言，本發(fā)明公開了一種具有降血壓和降血脂雙功能的二肽QE，該二肽QE的氨基酸序列為：Gln-Glu。本發(fā)明還同時(shí)公開了上述二肽QE在制備ACE抑制肽和/或HMG-CoA還原酶抑制肽中的應(yīng)用。
【專利說明】具有降血壓和降血脂雙功能的二肽QE及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一個(gè)能與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶結(jié)合，抑制其活性，也能抑制3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A (HMG-CoA)還原酶的活性的二肽。
【背景技術(shù)】
[0002]血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensinconverting enzyme, ACE, EC3.4.15.1,文獻(xiàn)中曾用名有kininasell, dipeptidyl carboxypeptidase I等)是一種二羧妝酶，是導(dǎo)致高血壓的一個(gè)關(guān)鍵酶，它通過水解作用把血管緊張肽I轉(zhuǎn)化成血管緊張肽II，與此同時(shí)，ACE還可鈍化血管舒緩激肽，這兩種作用均可導(dǎo)致血管收縮，從而引起高血壓。因此ACE被認(rèn)為是引起高血壓的一個(gè)重要因素。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)，可通過抑制ACE的活性而達(dá)到降血壓的作用。ACE抑制劑廣泛用于治療心血管、高血壓、心力衰竭、腎衰竭等疾病。ACE抑制劑最初是從蛇毒中發(fā)現(xiàn)的，隨后人們發(fā)現(xiàn)從食物原料中提取的ACE抑制肽，如明膠、酪蛋白、魚、無花果樹膠、α-玉米蛋白等都可作為制備ACE抑制肽的原料。
[0003]3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A (HMG-CoA)還原酶是體內(nèi)催化3_羥基_3_甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)生成二羥甲基戊酸(MVA)的關(guān)鍵酶，這一步是體內(nèi)合成膽固醇的限速步驟，也是目前最主要的高血脂癥臨床藥物的靶點(diǎn)。HMG-CoA還原酶抑制劑是降血脂功效成分和藥物篩選主要手段之一。
[0004]降血壓的藥物常見的有:
[0005]①、利尿劑:代表藥物有氫氯噬嗓、氨苯蝶吮、螺內(nèi)酯等。
[0006]②、片受體阻滯劑:代表藥物有普蔡洛爾、美托洛爾、阿替洛爾、納多洛爾等。
[0007]③、鈣通道阻滯劑:代表藥物有硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、尼群地平、拉西地
平等O
[0008]④、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑:代表藥物有卡托普利、苯那普利、賴諾普利、依那普利、西拉普利等。
[0009]⑤、a 一受體阻滯劑:代表藥物有呱哇嗓、特拉哩嗦等。
[0010]⑥、血管緊張素11受體拮抗劑:代表藥物有洛沙坦、擷沙坦、厄貝沙坦、坎地沙坦、伊貝沙坦、替米沙坦等。
[0011]降血脂的藥物有:
[0012]1、苯氧芳酸類:此類藥物有非諾貝特、吉非羅齊、苯扎貝特等。苯氧芳酸類藥物降血脂作用強(qiáng)，起效快，降甘油三酯的作用比降膽固醇的作用強(qiáng)。
[0013]2、三羥甲基戊二酰-輔酶A還原酶抑制劑:此類藥物有洛伐他丁、辛伐他丁、普伐他丁等。此類藥物以降膽固醇為主，降脂作用強(qiáng)，起效快。
[0014]3、煙酸類:此類藥物中氧甲吡嗪較常用，降低血清甘油三脂的作用比降低膽固醇強(qiáng)。
[0015]4、多不飽和脂肪酸類:包括各種植物種子油。如橡膠種子油，月見草子，水飛薊種子的油和海魚的制劑。這類藥物有降血脂和降低血粘度的作用，但作用比較溫和。[0016]5、泛硫乙胺:為輔酶A的衍生物，有降低血清膽固醇、甘油三脂和升高高密度脂蛋白-膽固醇的作用。
[0017]6、藻酸雙酯鈉(PPS):是以海藻撮物為原料的類肝素海洋藥物。具有顯著降低血粘度、擴(kuò)張血管和降低血脂，升高HQE水平的作用。主要用于缺血性心腦血管疾病的防治。
[0018]7、其他降血脂藥物:如銀杏類(天保寧)實(shí)驗(yàn)證明能使血清甘油三脂(TG)顯著降低。
[0019]現(xiàn)有藥物報(bào)道，除中藥外，同時(shí)具有降血壓和降血脂作用的藥物很少見。因?yàn)檫@兩種藥所作用的靶標(biāo)不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0020]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有降血壓和降血脂雙功能的二肽QE及其用途。
[0021]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種二肽QE，該二肽QE的氨基酸序列為:Gln-Glu0
[0022]本發(fā)明還同時(shí)提供了上述二肽QE的用途:作為ACE抑制肽和HMG-CoA還原酶抑制肽。
[0023]本發(fā)明的二肽QE可通過委托吉爾生化(上海)有限公司合成獲得。
[0024]本發(fā)明所報(bào)道的二肽QE是針對ACE和HMG-CoA還原酶兩個(gè)靶標(biāo)均具有抑制活性，從而表現(xiàn)出同時(shí)具有降血壓和降血脂雙功能的特性。
[0025]本發(fā)明中所涉及的各項(xiàng)檢測方法具體如下:
[0026]1、ACE抑制活性的檢測方法:
[0027]ACE在37°C，pH值為8.3的條件下催化分解血管緊張素I的模擬物Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine (HHL)產(chǎn)生馬尿酸(HA),該物質(zhì)在紫外225nm處具有特征吸收峰；當(dāng)加入ACE抑制劑時(shí)ACE對HHL的催化分解作用受到抑制，馬尿酸的生成量減少，通過HPLC方法，測定加入抑制劑前后所生成馬尿酸的量的變化即可算出抑制活性的大小。
[0028]反應(yīng)體系為:依次分別加入20 μ L0.lU/mL的ACE、50 μ L ACE抑制肽(即QE 二肽)在37°C溫浴5min，然后加入10 μ L5mM的HHL底物啟動ACE的催化反應(yīng)，在37°C振蕩水浴301^11后加入25(^1^1.0moL/L的HCl終止反應(yīng)，體系溶液過0.45 μ m濾膜后進(jìn)行RP-HPLC檢測分析馬尿酸(HA)的含量。上述同樣條件，以50 μ L0.1moL/L的硼酸緩沖液中(含0.3moL/L的NaCl，pH=8.3)代替ACE抑制劑作為空白反應(yīng)體系。
[0029]注:上述ACE、HHL底物均是以0.1moL/L的硼酸緩沖液(含0.3moL/L的NaCl，pH=8.3)為溶劑。
[0030]ACE抑制肽(QE 二肽)，以不同濃度溶解在0.1moL/L的硼酸緩沖液中(含0.3moL/L 的 NaCl，pH=8.3)中而得。
[0031]RP-HPLC檢測:溶劑I為0.05% (V/V)三氟乙酸(TFA)和0.05% (v/v)的三乙胺(TTA)溶于去離子水中，溶劑II為100%的色譜純乙睛。溶劑I與溶劑II的比例為70%:30%(體積比)，流速為0.5mL/min，檢測波長為225nm，檢測柱溫為30°C。
[0032]ACE抑制活性根據(jù)下式計(jì)算:
[0033]1%= (A-B)/AX 100%[0034]A:不加入短肽抑制劑時(shí)的馬尿酸的峰面積；
[0035]B:加入短肽抑制劑時(shí)的馬尿酸的峰面積；
[0036]ACE:1U單位定義為,在標(biāo)準(zhǔn)檢測條件下,在37°C, Imin時(shí)間內(nèi)催化底物(Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine，HHL)，產(chǎn)生I μ M馬尿酸所消耗ACE的量。即，為ACE的活性單位。
[0037]2、降血脂肽活性的體外檢測方法:
[0038]色譜條件
[0039]Symmetry? Cl8 色譜柱(5 μ m, 4.6mmX 250mm)。流動相為:V (K2HPO4-KH2PO4):V (甲Il) =85:15, ρΗ7.2，等度洗脫，流速lmL/min ;檢測波長337nm ;進(jìn)樣量20 μ L ;柱溫25。。。
[0040]反應(yīng)體系實(shí)驗(yàn)步驟
[0041]反應(yīng)中各種組分的加入量及順序如表1，反應(yīng)溫度37°C水浴，反應(yīng)完成后加入200 μ L0.5mol/L NaOH溶液終止反應(yīng)，按上述的色譜條件測量樣品中NADPH的濃度。反應(yīng)時(shí)間根據(jù)酶對照組時(shí)間梯度來確定。
[0042]表1反應(yīng)體系組成成分
[0043]
【權(quán)利要求】
1.具有降血壓和降血脂雙功能的二肽QE，其特征是:所述二肽QE的氨基酸序列為:Gln-Glu0
2.如權(quán)利要求1所述的具有降血壓和降血脂雙功能的二肽QE在制備ACE抑制肽和/或HMG-CoA還原酶抑制肽中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K38/05GK103739666SQ201310753363
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】王楠, 王偉, 張玉, 楊玉英 申請人:浙江樹人大學(xué)