四氯十氧(tcdo)的治療應用的制作方法
【專利摘要】本發明部分基于巨噬細胞的調節。此外，本發明提供了使用調節巨噬細胞功能的化合物來治療各種疾病和紊亂的方法。
【專利說明】四氯十氧（TCDO)的治療應用
[0001] 發明背景 發明領域
[0002] 本發明一般涉及免疫學領域，更具體涉及調節巨噬細胞功能的方法。
[0003] 背景信息
[0004] 慢性炎性疾病被假定為通過免疫循環中炎性組分的過度呈現而產生，其部分地由 損傷和在巨噬細胞、小神經膠質細胞、內皮細胞和神經元中激活NF- κ B的免疫（如SCI)刺 激物，以及促炎細胞因子和趨化因子的誘導，TNF- a、IL-Ib和MCP-I的增加 ，TNF α的增加 和/或不適當識別的自身抗原（自身免疫病）所驅動。巨噬細胞區室內的持續激活導致慢 性T細胞激活，其充當持續巨噬細胞激活的正反饋機制。
[0005] 開發靶向巨噬細胞的治療劑需要理解巨噬細胞在人類疾病中的作用。人類疾病的 平衡巨噬細胞激活假說（1)提出，巨噬細胞的主要功能（吞噬作用，抗原呈遞和炎癥）是保 持巨噬細胞炎性活性穩態的宿主調節循環過程的組成。該模型提出慢性疾病是通過循環 中炎癥組分的過度呈現產生，部分地由病毒（如HIV，HCV)、對器官和組織的物理損傷（如 SCI)或者不適當識別的自身抗原（即自身免疫病）驅動。
[0006] 四氯十氧（Tetrachlorodecaoxygen，T(DO)包含亞氯酸鹽作為有效成分 (principle)，導致在巨噬細胞上發現的作用于血紅素的深遠變化。T⑶0誘導基因表達功能 和激活，并且似乎下調不適當的免疫激活，其導致產生慢性炎性反應狀態。在許多疾病狀態 中觀察到的T細胞功能的喪失可能需要慢性激活巨噬細胞的參與。因此，持續激活的巨噬 細胞代表了非高度易變的治療靶標。
[0007] T⑶0的藥理學活性來源于其下調不適當的免疫激活的能力。T⑶0通過影響細胞 增殖和功能從而從質和量上調節免疫反應。通過測量免疫活性細胞的增殖、吞噬指數、氧化 爆發（oxidative burst)、細胞信號傳導以及免疫球蛋白產生來定量多種模型中T⑶0的藥 理學作用。TCDO通過改變單核細胞/巨噬細胞系統、自然殺傷（NK)細胞以及細胞毒性T淋 巴細胞（CTL)的功能來刺激吞噬作用、體液免疫反應和細胞防御系統。非臨床研宄和臨床 研宄提供了這樣的證據，即，TCDO通過去除炎性巨噬細胞對慢性T細胞激活的影響來潛在 地重建免疫平衡從而下調不適當的免疫激活。許多慢性疾病被認為由不適當的免疫激活產 生，部分地由病毒（如HIV，HCV)或者不適當識別的自身抗原（如自身免疫病）所引起。最 近的研宄表明T⑶0能夠特異地調節巨噬細胞基因表達，并且由此抑制T細胞激活。T⑶0的 這種藥理學活性可以用于治療涉及平衡巨噬細胞激活破壞的疾病，如慢性病毒感染、自身 免疫病、變態超敏反應，免疫缺陷相關的細菌和真菌感染、慢性創傷以及作為慢性炎癥的結 果的各種癌癥（例如淋巴癌、胰腺癌）。
[0008] 針對這些慢性炎性疾病的傳統治療方法使用了抗病毒/抗細菌的、類固醇的組合 /混合物，其已證明對患者結果是短暫的、無效的、有害的。新的創新性策略必須針對理解炎 癥介質寬泛的相互作用/激活、細胞因子通路以及新發現通路的新作用，專門解決病毒/細 菌復制，目標是降低病毒負載、細菌抗性、可持續的抗炎癥作用、以及疼痛終止，以強有力的 科學來改善現有療法庫。
[0009] 發明概述
[0010] 本發明部分基于調節細胞免疫，尤其是巨噬細胞的功能。TCDO調節巨噬細胞的功 能并且可以用于治療其中這種調節在治療上有益的疾病/病癥。
[0011] 由此，在一個實施方式中，本發明提供在對象中降低和/或抑制促炎介質反應的 方法，包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。本發明的一個實施方式提供 了在對象中改變細胞免疫的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧 (TCDO)。在另外的實施方式中，本發明提供了在對象中控制慢性炎癥的方法，所述方法包 括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。在一個實施方式中，本發明提供了在 對象中調節巨噬細胞功能的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧 (TCDO) 〇
[0012] -方面，對象具有巨細胞介導的疾病。在另外的方面，巨·細胞介導的疾病為脊 髓損傷、外傷性腦損傷、慢性創傷腦炎、病毒性/細菌性腦炎/腦膜炎、精神分裂癥、纖維肌 痛、慢性疲乏綜合征、慢性抑郁癥、痙攣、萊姆病、多發性硬化、心肌梗塞、中風、病毒感染、微 生物感染、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA)、瘧疾、登革熱、絲蟲病、利什曼病、II型糖尿 病、癡呆、阿爾茲海默癥或者帕金森氏病。在另外的方面，對象需要創傷愈合/修復、燒傷、 神經病變、疼痛終止。而在另外的方面，對象有II型糖尿病。
[0013] 在另一實施方式中，本發明提供了治療對象以使疼痛終止的方法，所述方法包 括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。在另外的實施方式中，本發明提供了 治療對象以產生鎮痛效果的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧 (TCDO)。在另外的實施方式中，本發明提供了在受試對象中促進創傷愈合的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0014] -方面，TCDO通過腸胃外、局部、靜脈內、口、皮下、動脈內、顱內、腹腔內、鼻內或肌 肉內的方式施用。
[0015] 另一方面，T⑶0以約0. lmL/kg體重至I. 5mL/kg體重的劑量施用。在優選方面， T⑶0以約0. 5mL/kg體重至0. 75mL/kg體重的劑量施用。在另一個優選方面，T⑶0以大約 0. 5mL/kg體重的劑量施用。
[0016] 一方面，對象接受至少一個周期的T⑶0,其中周期由以下組成：患者被施用約連 續5天的T⑶0,然后至少約連續16天不施用T⑶0。在另外的方面，所述對象被施用1、2、3、 4、5或者6個周期的TCD0。
[0017] 附圖簡述
[0018] 附圖1描述了人類疾病的平衡巨噬細胞激活假說。
[0019] 附圖2的描述顯示T⑶0治療劑對慢性炎癥的效果。
[0020] 附圖3是顯示TCDO對大鼠中脊髓損傷之后的損傷體積的影響的圖。所有的大鼠 都經歷了脊髓損傷，然后是六周的恢復。用鹽水、NTS-鹽水、或者TCDO溶液注射動物。在第 42天處死動物，然后進行處理以測定損傷體積。用TCDO處理使損傷體積減少25%、50 %和 65 %，但是只有在5 X IO4以及10 X 10 4劑量組，該變化相對于鹽水組（對照組）才是統計學 意義上顯著的。*和**損傷體積顯著減小*P = 0. 0004**P〈0. 0001。
[0021] 附圖4是顯示經歷脊髓損傷的大鼠中的曠場（open-field) (BBB)行為測量的圖。 所有大鼠為假實驗（沒有注射）對照，或者經歷大鼠脊髓損傷并注射鹽水或接受TCDO溶 液。行為分析在損傷后每周一次進行測定持續六周，。圖中只展示了原始數據。*P〈〇. 05相 對于鹽水組和對照組。
[0022] 附圖5是顯示了炎性標記物變化的圖。A.施用IODO后GFAP的免疫反應性。B.施 用WF-10后IL-I的免疫反應性。C.施用WF-10后⑶-68的免疫反應性。所有大鼠為假實 驗（沒有注射）對照，或者經歷大鼠脊髓損傷并注射鹽水或接受TCDO(WF-IO)溶液。在研 宄的最后進行免疫組化分析（N= 10,每只動物3張切片用于分析）。圖中只展示了原始數 據。
[0023] 附圖6描述了不存在（A)和在IODO(WF-10, B)存在的情況下APP轉基因小鼠（3 月齡）的腦。從淀粉樣沉積物之前開始，WF-10每天以1/400稀釋物靜脈注射，持續90天。
[0024] 附圖7描述了 T⑶0對幫助創傷愈合的作用的方法。
[0025] 發明詳述
[0026] 本發明部分基于調節細胞免疫，尤其是巨噬細胞功能。TCDO調節巨噬細胞的功能 并且可以用于治療其中這種調節在治療上有益的疾病或紊亂。
[0027] 在描述本發明的組合物和方法之前，要了解的是，本發明不限于所描述的具體組 合物、方法和實驗條件，因為這樣的組合物、方法和狀況可以改變。還需要了解的是，本文使 用的術語僅僅是是為了描述特定的實施方式，并且不意圖限制，因為本發明的范圍僅僅在 所附的權利要求中受到限定。
[0028] 如本說明書和所附的權利要求中使用的，單數形式的"一（a、an) "以及"該（the) " 包含復數涵義，除非上下文另有清楚指示。因此，例如，提及"該方法（the method)"，包括 一種或多種方法，和/或本文所述類型的步驟，其對于閱讀本公開之后的本領域技術人員 而目是顯而易見的，等等。
[0029] 除非另外指出，本文中所使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域普通 技術人員常規理解相同的含義。盡管任何與本文所述相似或者相同的方法和物質都可以用 于本發明的實踐或者測試，但是現在描述優選的方法和物質。
[0030] 如本文所使用的，術語"巨細胞介導的疾病（macrophage mediated disease) " 是指由涉及巨噬細胞的機體免疫系統的異常活性應引起的狀況。巨噬細胞介導的疾病包括 但不限于，脊髓損傷、外傷性腦損傷、多發性硬化、心肌梗塞、中風、病毒感染、微生物感染、 II型糖尿病、創傷愈合、痛/慢性疼痛、阿爾茲海默癥以及帕金森氏病。
[0031] 如本文中所使用的，術語"TCD0"是指化合物四氯十氧。術語"WF10"、"WF10/ MACR0STAT"、"MACR0STAT"、"0X0-K933" 和 "Nuderm" 是指 TCDO 的藥物制劑。
[0032] 術語"治療有效量"是指在對象或哺乳動物中有效產生治療有益反應的治療劑的 量。
[0033] 在一個實施方式中，本發明提供在對象中降低和/或抑制促炎介質反應的方法， 所述方法包括向所述對象施用治療有效量的TCD0。本發明的一個實施方式提供在對象中改 變細胞免疫的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的TCD0。在另外的實施方式 中，本發明提供了在對象中控制慢性炎癥的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效 量的TCD0。在一個實施方式中，本發明提供了在對象中調節巨噬細胞功能的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的TCD0。
[0034] -方面，對象患有巨噬細胞介導的疾病。在另外的方面，巨噬細胞介導的疾病為脊 髓損傷、外傷性腦損傷、多發性硬化、心肌梗塞、中風、病毒感染、微生物感染、Π 型糖尿病、 阿爾茲海默癥或帕金森氏病。在另外的方面，對象需要創傷治愈或疼痛終止。而在另外的 方面，對象患有II型糖尿病。
[0035] TCDO是巨噬細胞調節物，其似乎通過去除炎性巨噬細胞對慢性T細胞激活的影響 以潛在地恢復免疫平衡來起作用。
[0036] 巨噬細胞是通過組織中單核細胞分化產生的細胞。單核細胞和巨噬細胞是吞噬細 胞。巨噬細胞在脊椎動物的非特異性防御（先天性免疫）和特異性防御機制（適應性免疫） 中起作用，并且幫助啟動特異性免疫機制。它們的功能是作為固定的或者移動的細胞，吞噬 細胞碎片和病原體。它們還刺激淋巴細胞和其他免疫細胞對病原體產生應答。它們是特化 的吞噬細胞，其通過破壞和攝取來攻擊外源物、感染性微生物以及癌細胞。巨噬細胞可以用 流式細胞術或免疫組化染色通過多種蛋白質的特異表達來鑒定，所述多種蛋白質蛋白包括 CD14、CD40、CDllb、CD64、F4/80 (小鼠 ）/EMRl (人）、溶菌酶 M、MAC-1/MAC-3 以及 CD68。
[0037] 開發巨噬細胞靶向治療劑需要了解巨噬細胞在人類疾病中的作用。人類疾病的平 衡巨噬細胞激活假說提出，巨噬細胞的主要功能（吞噬作用、抗原呈遞和炎癥）是保持巨噬 細胞炎性活性穩態的宿主調節循環過程的組成。該模型提出慢性疾病通過循環中炎癥組分 的過度呈現產生，部分地由病毒（如，HIV，HCV)、器官和組織的物理損傷（如SCI)或者不適 當識別的自身抗原（即自身免疫病）驅動。這個示例在附圖1中提出。
[0038] 吞噬作用。巨噬細胞激活的第一步是吞噬作用。巨噬細胞吞食病原體，例如，細 菌、真菌和病毒。在成功吞噬外源物之后，巨噬細胞通過蛋白水解途徑來處理這種物質，將 單個蛋白質切成小肽，所述小肽然后參與巨噬細胞激活的二步：抗原呈遞給T細胞。吞噬作 用是基本的巨噬細胞功能，其解釋了該名稱的由來，"巨噬細胞來自'巨（macro)'，意思是大 (big)，以及'噬（phage) '，意思是食者（eater)，因此賦予巨噬細胞術語'巨噬（大的食者） (macrophage) ' " 的來源。
[0039] 抗原呈遞。外源物質被切成肽后，巨噬細胞利用主要組織相容性抗原類I (HLA)和 類2 (DR)將抗原呈遞給T淋巴細胞，并啟動正常免疫反應的擴展（第二步）。T細胞激活主 要通過這種抗原呈遞細胞功能發生。對病毒感染細胞、癌癥以及真菌特異的標準細胞毒性 T細胞發育，其最終導致它們成功的免疫清除。在成功激活之后，T細胞表達各種激活抗原， 如⑶38,并且分泌因子，如IL-2,其允許T細胞增殖，以及IFNy，其引發進一步的巨噬細胞 激活和第三步。
[0040] 經典巨噬細胞激活。T細胞激活的產物，IFNy，導致完全的炎性變化和經典巨噬 細胞激活。這種激活引起炎癥細胞因子如IL-l、IL-6和TNFa的上調。處于這種狀態的巨 噬細胞是極其具有炎性并可以引起繼發效應，如發燒，以及當受到慢性刺激時，引起重量減 輕和免疫反應的進一步非特異性激活。
[0041] Thl 和 Th2 (活性-抑制性 T 細胞（active-to-inhibitory T cell))的轉換。在 最終導致細胞毒性T細胞和生成IL-2的Thl細胞產生的細胞反應的起始期間，T細胞的第 二主要類別，Th2細胞，受到誘導。Th2細胞涉及B細胞激活和增殖、高丙種球蛋白血癥、IgE 上調、嗜曙紅細胞增多以及變態反應。最終結果是過量的IL-10產生中斷了第二步。雖然 如通過T細胞增殖測量到的經典免疫應答性主要考慮Thl樣應答，但Thl和Th2細胞激活 過程在體外（和可能在體內）幾乎同時發生。Th2應答的關鍵特征是產生IL-4,其已知激 活巨噬細胞替代激活途徑（AMP)。
[0042] T⑶O似乎下調不適當的免疫激活。之前的研宄已經顯示T⑶O在體內減少抗原呈 遞，并且最近的基因表達研宄提供了 TCDO通過調節巨噬細胞功能減少不適當的T細胞激活 的證據。由TCDO通過抗原呈遞誘導適當的巨噬細胞調節產生的促炎介質抑制，導致無變應 性反應（耐受）。根據這個模型，將會預測直接影響巨噬細胞激活的劑引起對T細胞激活的 繼發效應。
[0043] 慢性炎性疾病被假定為通過免疫循環的炎癥組分的過度呈現產生，其部分地是由 損傷或在巨噬細胞、小神經膠質細胞、內皮細胞和神經元內激活NF- κ B的免疫（如SCI)刺 激物，以及促炎細胞因子和趨化因子的誘導，TNF- a、IL-Ib和MCP-I的增加 ，TNF α的增加 和/或不適當識別的自身抗原（自身免疫病）所驅動。根據模型，巨噬細胞區室內的持續 激活導致慢性T細胞激活，其充當持續巨噬細胞激活的正反饋機制。TCDO的這種藥理學活 性可以用于治療涉及平衡巨噬細胞激活破壞相關的疾病，如慢性病毒感染、自身免疫病、變 態超敏反應，免疫缺陷相關的細菌和真菌感染、慢性創傷、和作為慢性炎癥的結果的各種癌 癥（例如淋巴癌）、多發性硬化、SCI、外傷性腦損傷、帕金森氏病、阿爾茲海默癥以及動靜脈 血管疾病。
[0044] 有大量的TCDO的免疫調節功能，尤其是引發天然防御機制和抑制不適當激活的 適應性免疫反應的證據。已顯示TCDO通過改變單核細胞/巨噬細胞系統、自然殺傷（NK)細 胞以及細胞毒性T淋巴細胞（CTL)的功能來刺激吞噬作用、體液免疫反應和細胞防御系統。 TCDO增加巨噬細胞吞噬、刺激單核細胞中的氧化爆發、降低巨噬細胞抗原呈遞、并且抑制巨 細胞中的TNF-α表達。"平衡巨細胞激活（balanced macrophage activation)"提出 的概念提供了免疫功能失調和過度激活在不同疾病發病機理中的作用的解釋，所述疾病例 如慢性病毒感染、自身免疫病、變態超敏反應，免疫缺陷相關的細菌和真菌感染、慢性創傷、 和作為慢性炎癥的結果的各種癌癥（例如淋巴癌、胰腺癌）。TCDO的這些藥理學活性提示 其可以通過逆轉免疫功能失調和恢復平衡巨噬細胞激活而具有治療益處。
[0045] 在單核細胞、巨噬細胞和淋巴細胞的一系列體外實驗中，觀察到T⑶0增加吞噬作 用、刺激單核細胞中的氧化爆發、降低巨噬細胞腫瘤壞死因子（TNF)-a表達、減少抗原呈 遞以及增強巨噬細胞-成纖維細胞的協作。在體外，TCDO還表現出抗HIV的性質，該性質 沒有顯示出涉及藥物的巨噬細胞靶向作用機制。體內實驗研宄了 TCDO對單核細胞、巨噬細 胞和淋巴細胞的作用，對體液免疫和細胞免疫的作用，以及對局部或者全身身體照射反應 的作用。在人創傷愈合模型中，TCDO增加滲透到皮膚水皰中的巨噬細胞數量。
[0046] 在大鼠中，在全身X照射后，TCDO增加粒細胞、外周血單核細胞（PBMCs)以及大顆 粒淋巴細胞（LGLs)的比率，并且刺激紅細胞發生。在小鼠中，T⑶0刺激接受了亞致死劑量 的J照射的造血干細胞重生。在其他研宄中，TCDO表現出針對輻射誘導的、化學誘導的、以 及轉移性惡性和良性腫瘤的直接抗腫瘤效應。TCDO改變脾臟和胸腺中輔助性T細胞以及抑 制性/細胞毒性T細胞的比例，并增加分別通過溶血空斑和足墊腫脹試驗的體液和細胞免 疫反應。在靜脈注射施用來自大腸桿菌（E coli)055B5的脂多糖（LPS)之前的時期期間施 用TCDO (0. 2ml/kg，靜脈注射）兩次，降低BALB/cABOM小鼠對內毒素的敏感性，使LD50值從 346mg增加到518mg。T⑶0減少內毒素毒性與在體外觀察到的TNF-α表達的下調相一致。
[0047] 在吞噬作用檢測中，大腸桿菌（E. coli)攝入在對應于0. 5mL/kg體重的T⑶O劑量 濃度時最大。在每天以范圍為0.33到2. OmL/kg體重的劑量向大鼠施用T⑶0 90天后，血 中單核細胞和大顆粒淋巴細胞的水平顯著升高至比四天內的基線值大三倍。該升高的水平 在給藥期的余下時間得以保持。在停止施用TCDO后，單核細胞水平逐漸下降并在30天后 回歸到正常值。在停止T⑶0后16天，單核細胞水平高于基線約50%。
[0048] 另外，在臨床試驗中已經顯示TCDO對遭受自身免疫性疾病伴有皮膚表現的患者 是治療上有益的。在該研宄之前的5-10年，遭受慢性光化性皮炎的患者出現光敏性。患者 的臉變成面具樣，并且隨著陽光和煙而惡化。患者的皮膚變得褪色和干燥，伴有出血損傷。 類固醇治療造成失明，需要更換晶狀體。以0. 5mL/kg體重的TCDO兩個周期，患者得以成功 治療。尋常天皰瘡是這樣的疾病，其中自身抗體針對角質形成細胞的細胞表面。用高劑量 的類固醇和環磷酰胺的治療控制水皰，但將患者置于產生膿毒癥的危險之中，并且水皰傷 沒有治愈。以〇. 5mL/kg體重用兩個周期的TCD0,患者得以成功治療。遭受膿皰性牛皮癬 的患者經歷了廣泛的膿皰，其下面具有積累的血管，伴有癢和疼痛持續多于5年。用維甲酸 類藥物進行治療沒有成功。以〇.5mL/kg體重用兩個周期的TCD0,患者得以成功治療。遭 受HIV相關牛皮癬的患者表現出影響全身的牛皮癬。這種狀況之前用氨甲蝶呤治療，其導 致白血細胞的顯著降低。以〇.5mL/kg體重用四個周期的T⑶0,患者得以成功治療。遭受濕 瘆的患者表現出手上和腳上有濕瘆，皮膚非常干燥。用類固醇膏的治療引起皮膚惡化。以 0. 5mL/kg體重用四個周期的T⑶0,患者得以成功治療。
[0049] 另外，已經顯示TC DO在局部應用時對治愈創傷的治療有效。在271名患者的研 宄中，顯示T⑶0在局部應用時對于創傷清潔和新組織形成顯著優于鹽水。進一步，在隨機 化的臨床研宄中，顯示TCDO優于吡咯烷酮碘（PVP-iodine，聚維酮碘）治療，導致創傷表面 減小74. 9%。另外，顯示TCDO在局部應用時逆轉可的松對創傷的作用。
[0050] 總之，T⑶0具有促氧化活性，其在人體的特定微環境如腸粘膜內源性產生，代表下 調不需要的潛在危害性抗原驅動的免疫反應的生理學原理。TCDO代表了顯示可以安全地施 用于人的促氧化活性的化合物。TCDO針對體外刺激的淋巴細胞和單核細胞以更明顯的形 式，發揮抗炎癥活性。TCDO在體外降低編碼促炎癥細胞因子的基因的表達，并且應用于人之 后，在體內上調基因表達。
[0051 ] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有巨噬細胞介導的疾病的對象的方法， 所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。一方面，巨噬細胞介導的疾 病為脊髓損傷、外傷性腦損傷、多發性硬化、心肌梗塞、中風、病毒感染、微生物感染、Π 型糖 尿病、痛/慢性疼痛、創傷愈合、阿爾茲海默癥以及帕金森氏病。在另一實施方式中，本發明 提供了治療對象以使疼痛終止的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十 氧（TCDO) 〇
[0052] 在另一個實施方式中，本發明提供了治療對象以產生鎮痛作用的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。在另一個實施方式中，本發明提供了 在受試對象中促進創傷愈合的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧 (TCDO) ·
[0053] 急性和慢性神經性炎癥
[0054] 單詞神經性炎癥（neuroinflammation)代表慢性炎癥樣膠質反應，其可以產生神 經變性癥狀，如空斑形成、營養不良的突起生長以及過度的tau磷酸化。區分急性和慢性神 經性炎癥是非常重要的。急性神經性炎癥通常由一些神經元損傷引起，在神經元損傷之后 小膠質細胞迀移到損傷部位，吞噬死細胞和碎片。術語神經性炎癥通常是指更加慢性的、持 續的損傷，此時小膠質細胞的反應促進并擴展了神經破壞效應，惡化了疾病進程。
[0055] 當小膠質細胞被激活時，它們呈現出變形蟲樣的形狀，并增強了其基因表達。增強 的基因表達導致許多潛在神經毒性介質的產生。這些介質在小膠質細胞的正常功能中是重 要的，并且一旦它們的任務完成，其生成通常減少。在慢性神經性炎癥中，小膠質細胞在較 長的時間保持激活，在該較長的時間介質的生成比平常持續更長的時間。介質的這種增加 促進神經元的死亡。
[0056] 神經性炎癥相比其他器官中的炎癥是獨特的，但是包括一些相似的機制，如化學 引誘物分子的生成局限于炎癥部位。以下列表包含小膠質細胞激活時分泌的眾多物質中的 少數：
[0057] 細胞因子
[0058] 小膠質細胞激活中樞神經系統（CNS)中的促炎癥細胞因子：IL_1 a、IL-I β和 TNF-α。當小膠質細胞保持持續激活狀態時，細胞因子在神經變性中具有潛在的作用。將 細胞因子IL-Ia、IL-I β和TNF-α直接注射到中樞神經系統中導致局部炎性反應和神經 元退化。這與這些細胞因子在急性神經性炎癥期間的潛在神經營養（誘導神經元生長）作 用形成對比。
[0059] 趨化因子
[0060] 趨化因子是在體內和體外刺激炎性細胞定向迀移的細胞因子。趨化因子分為四個 主要的亞家族：c、cc、cxc以及CX 3C。小膠質細胞是一些趨化因子的來源，并特別表達單核細 胞趨化蛋白I (monocyte chemoattractant protein-l，MCP_l)趨化因子。其他炎性細胞因 子，如IL-I β和TNF-α以及細菌來源的脂多糖（LPS)，可以刺激小膠質細胞以產生MCP-1、 MIP-I α以及MIP-I β。在體外小膠質細胞可以表達CCR3、CCR5、CXCR4、以及CX3CR1。趨化 因子具有促炎性，因此有助于神經性炎癥過程。
[0061] 蛋白酶
[0062] 當小膠質細胞被激活時，它們誘導潛在涉及許多功能的蛋白水解酶合成和分泌。 存在許多蛋白酶，其具有降解在小膠質細胞附近的胞外基質和神經元細胞從而釋放這些化 合物的潛在能力。這些蛋白酶包括：組織蛋白酶B、L和S，基質金屬蛋白酶MMP-1、MMP-2、 MMP-3和MMP-9,以及金屬蛋白酶解聯蛋白ADAM8纖維蛋白溶酶原，其在小膠質細胞外面形 成并降解胞外基質。已經發現組織蛋白酶和MMP-3在阿爾茲海默癥（AD)中增加， 并且組織蛋白酶B在多發性硬化中增加。另一種蛋白酶，彈性蛋白酶，可對胞外基質具有大 的負作用。
[0063] 淀粉樣前體蛋白
[0064] 小膠質細胞應答于興奮性神經毒性損傷而合成淀粉樣前體蛋白（APP)。空斑由膜 結合APP的異常蛋白水解裂解產生。淀粉樣蛋白空斑可以刺激小膠質細胞產生神經毒性化 合物，例如細胞因子、興奮性神經毒素 、i NOS--氧化氮（i NOS-nitric oxide)和親脂性 胺（lipophylic amines)，其全部引起神經損傷。阿爾茲海默癥中的空斑包括激活的小膠質 細胞。研宄已經顯示將淀粉樣蛋白直接注射到腦組織中激活小膠質細胞，其降低神經元的 數量。小膠質細胞還被提出作為分泌的β淀粉樣蛋白的可能來源。
[0065] 衰老
[0066] 小膠質細胞在損傷期間經歷一陣有絲分裂活性，這種增殖之后是凋亡，以使細胞 數量減少回到到基線。小膠質細胞的激活將負載置于在合成代謝和分解代謝機制上，導致 激活的小膠質細胞比未激活的細胞更快地死亡。為了彌補小膠質細胞隨時間推移的損失， 小膠質細胞經歷有絲分裂并且骨髓來源的祖細胞通過腦膜和脈管系統迀移到腦中。
[0067] 正常衰老過程中發生的輕微神經元損傷的累積可將小膠質細胞轉變成增大和激 活的細胞。這些慢性、與年齡有關的小膠質細胞激活和IL-I表達的增加可通過有利于神 經空斑形成在易患病患者中促進阿爾茲海默癥風險隨著年齡的增長而增加。DNA損傷可能 有助于年齡相關的小膠質細胞激活。另一種因素可能是高級糖化終末產物的累積，其隨著 衰老而累積。.這些蛋白質強烈地抵抗蛋白質水解過程，并且促進蛋白質交聯。研宄已經 發現營養不良的（發育缺陷）人小膠質細胞。"這些細胞的特征在于其細胞質結構異常，如 去分枝的（deramified)、萎縮的、成片段的或者不尋常扭曲的過程，通常產生球狀或者球根 狀腫脹。"營養不良的小膠質細胞的發生隨著衰老而增加。小膠質細胞變性和死亡在朊病 毒疾病、精神分裂癥和阿爾茲海默癥的研宄中被報道，指示小膠質細胞惡化可能涉及神經 變性疾病。這個理論的復雜在于，難以區分人腦中"激活的（activated)"和"營養不良的 (dystrophic) "小膠質細胞。
[0068] 神經性炎癥的治療
[0069] 激活/無變應性-耐受的抑制
[0070] 一種控制神經性炎癥的方法是抑制小膠質細胞激活。對小膠質細胞的研宄已經 顯示它們由不同的刺激物激活，但是其依賴于促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK)的激活。之前下調激活的小膠質細胞的方法集中于免疫抑制劑。目 前，有希望的治療是T⑶0,其下調TNFa抑制化合物，該化合物也下調IL-1、IL-2。最近的 研宄（Kindy等人）表明T⑶0通過激活的小膠質細胞抑制促炎癥細胞因子和超氧化物陰離 子的生成。
[0071] 趨化因子受體的調節
[0072] 趨化因子受體CX3CR1在中樞神經系統的小膠質細胞中表達。 Fractalkine(CX3CLl)是CX3CR1的唯一配體，其作為趨化因子可從其釋放的跨膜糖蛋白而 生成。Cardona等人于2006年提出"使用三種不同的體內模型，我們展示了 CX3CR1缺乏使 小膠質細胞反應失調，導致神經毒性。"對CX3CR1如何調節小膠質細胞神經毒性的進一步 研宄可導致用于神經保護的新的治療策略。
[0073] 淀粉樣蛋白沉積的抑制
[0074] 淀粉樣蛋白沉積的抑制劑包括負責產生胞外淀粉樣蛋白的酶，如β分泌酶和γ 分泌酶抑制劑。目前，γ分泌酶抑制劑處于作為阿爾茲海默癥治療的II期臨床試驗，但是 它們具有免疫抑制特性，這可限制其應用。另一個策略包括增加針對淀粉樣蛋白片段的抗 體。這種治療也處于阿爾茲海默癥治療的II期臨床試驗。
[0075] 細胞因子合成的抑制
[0076] 糖皮質激素是抗炎性類固醇，其抑制中樞和外周細胞因子的合成及作用。在最近 的研宄中，發現洛伐他汀和苯乙酸鈉抑制大鼠小膠質細胞中的TNF-α、IL_1 β、和IL-6。這 表明甲羥戊酸途徑在控制小膠質細胞中細胞因子的表達中起作用，并且可能在開發治療神 經變性疾病的藥物中是重要的。納曲酮可能提出了對小膠質細胞產生的炎性介質的解決方 法。盡管納曲酮的主要作用是競爭性地結合到阿片樣物質受體上由此上調受體的數量；而 且，其被用于幫助具有阿片樣物質依賴的患者。新的研宄表明低劑量的納曲酮可以抑制小 膠質細胞的細胞因子合成。雖然該機制仍然處于其初期，但已經證明其幫助一些遭受纖維 肌痛綜合征的患者。
[0077] 小膠質細胞在神經變性中的作用
[0078] 神經變性紊亂的特征是特定的神經元群體中逐漸的細胞損失。"當細胞在漸進 的神經變性紊亂中發生慢性激活時，神經膠質的很多正常營養功能可能喪失或者被摧毀 (overwhelmed)，因為存在充分的證據，S卩，在這些紊亂中，激活的神經膠質通過直接和間接 的炎癥攻擊發揮了破壞作用。"以下是小膠質細胞在神經變性紊亂中的作用的突出例子。
[0079] 阿爾茲海默癥
[0080] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有阿爾茲海默癥的對象的方法，包括向 所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO).
[0081] 阿爾茲海默癥是一種漸講的神經病奪的疾病，其中腦產牛異常閉塊（淀粉樣蛋白 斑）以及纏結的纖維東（神經原纖維纏結）。
[0082] 阿爾茲海默癥（AD)是最常見的癡呆形式。對該疾病不存在治愈，其隨著進展 而惡化，并最終導致死亡。阿爾茲海默癥的原因和進展還沒有得到很好的了解。研宄提 示該疾病與腦中的斑和纏結有關。目前的治療只有助于該疾病的癥狀。沒有可用的阻 止或逆轉該疾病進展的治療手段° http: //en. wikipedia. org/wiki/Non-steroidal anti-inflammatory drug〃。
[0083] 各種炎癥過程和細胞因子也可能在阿爾茲海默癥的病理學中具有作用。炎癥是任 何疾病中組織損傷的一般標志，并可以是AD組織損傷的次級反應或者免疫反應的標志。
[0084] 中樞神經系統包含兩種不同的單核吞噬細胞群體：腦實質的小膠質細胞和位于血 管周圍間隙、腦膜褶皺和脈絡叢中的巨噬細胞。已知這兩類吞噬細胞在特異細胞因子生成、 細胞表面免疫抗原表達以及促進先天性與適應性免疫反應的能力方面有差異。外周巨噬細 胞幾個特性使得其成為有效的專業A β吞噬細胞。首先，發育成為外周巨噬細胞的單核細 胞前體具有動態的生命周期，而腦固有的小膠質細胞則有延長的壽命和有限的分裂能力。 其次，已提出外周巨噬細胞在整個生命過程中可以進出中樞神經系統區室。相比之下，小膠 質細胞是中樞神經系統的永久居民，其表型受到其中的聚居地的顯著影響。因此，考慮到精 確的中樞神經系統調整的免疫反應但受限制的功能性所有組成成分，腦固有的小膠質細胞 在空間和時間上受到更加嚴格的調控。在其靜止（休息）狀態，人腦固有的小膠質細胞通 常缺乏MHC-2 (HLA-DR)抗原、細胞因子表達、⑶45抗原以及其它抗原呈遞和吞噬作用所需 要的表面免疫分子。可選地，外周單核吞噬細胞持續表達HLA-DR，并且能具有先天性免疫反 應的全部所有組成成分。因此，雖然小膠質細胞充當破壞神經組織中的內源穩態的警衛并 且限制了先天性免疫反應，外周單核吞噬細胞吞食并消化細胞碎片和病原物的能力卻沒有 受到限制。
[0085] 已知外周巨噬細胞起源于存在于骨髓和循環系統中的單核細胞/樹突狀細胞前 體（祖細胞，prognitors)，這些細胞可以在外周中以微創的方式被治療性地革El向。相反地， 由于存在血腦屏障（BBB)，治療劑靶向腦固有的小膠質細胞是具有挑戰性的。并且，由于外 周巨噬細胞通常被視為專門的吞噬細胞的事實，它們比其遠親免疫抑制小膠質細胞具有更 大的A β吞噬細胞潛力。
[0086] 研宄已經顯示巨噬細胞可能有益于阿爾茲海默癥的治療。因此，用調節巨噬細胞 的免疫劑如TCDO的治療，可在治療上對于阿爾茲海默癥的治療是有用的。附圖6顯示了在 阿爾茲海默癥的動物模型中使用T⑶0的結果。
[0087] 帕金森氏病
[0088] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有帕金森氏病的對象的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0089] 帕金森氏病是一種運動障礙，其中腦內生成多巴胺的神經元沒有像其應該的那樣 起作用。
[0090] 帕金森氏病（PD)是中樞神經系統的退行性疾病。帕金森氏病的運動癥狀起因于 在黑質一一中腦的一個區域一一中生成多巴胺的細胞死亡；這種細胞死亡的原因是未知 的。在該疾病進程的早期，最明顯的癥狀是運動相關的；這些癥狀包括震顫、強直、運動減緩 以及行走和步態困難。然后，可能產生認知和行為問題，在該疾病的晚期通常發生癡呆。
[0091] 現代治療對疾病的早期運動癥狀的控制是有效的，主要通過使用左旋多巴和多巴 胺激動劑。隨著疾病的進展和多巴胺能神經元的持續損失，這些藥物最終變得對治療這些 癥狀無效并同時產生稱為運動障礙的并發癥，其標志為無意識的扭動運動。研宄方向包括 研宄該疾病的新動物模型以及基因治療、干細胞移植和神經保護劑的潛在效用的新動物模 型。最近發現涉及免疫反應的基因與帕金森氏病進展的風險相關聯，強化了 ro可能部分起 因于有害的免疫反應如炎癥、感染或者自免疫的理論。
[0092] ro腦的另一種突出病理學特征是存在強烈的炎癥反應，其由黑質（SN)受影響區 域中的激活的小膠質細胞和反應性星形膠質細胞介導。由于病原物入侵或者組織損傷，小 膠質細胞促進了炎癥反應，其用于通過將其他細胞募集到腦損傷部位而進一步參與免疫系 統，并開始組織修復。然而，未受控制的炎癥反應可導致可能高度有害的神經毒性因子的產 生。中樞神經系統中（CNS)中的炎癥和小膠質細胞的持續過度激活，S卩，反應性小膠質細胞 增生（microgliosis)，現在被認為活躍地參與各種神經變性疾病一一包括帕金森氏病、阿 爾茲海默癥、多發性硬化（MS)以及肌萎縮側索硬化癥（ALS) -一的發病機理。因此，利用調 節巨噬細胞的劑如TCDO的治療，可在治療上有益于帕金森氏病的治療。
[0093] 外傷性腦損傷
[0094] 在一個實施方式中，本發明提供了治療具有外傷性腦損傷的對象的方法，所述方 法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0095] 外傷性腦損傷（TBI)，也被稱為顱內損傷，其在外部力量外傷性地損傷大腦時發 生。外傷性腦損傷可根據嚴重性、機制（閉合性或穿透性腦損傷）或者其他特征（如，在特 定部位或者廣泛分布的區域發生）來分類。
[0096] 急性外傷性腦損傷的特征是有兩個損傷階段，原發性和繼發性階段。原發性腦損 傷是腦細胞的直接損傷，其在初始撞擊的時候引起。這導致一系列生化過程，該生化過程隨 后導致繼發性腦損傷。這是在TBI之后細胞免疫反應的復雜級聯，其使繼發性腦損傷擴散。 該炎癥過程持續若干小時到若干天，持續促進繼發性腦損傷。由急性外傷性腦損傷產生的 炎癥反應不局限于腦部，通常可以看到多器官功能障礙綜合征。腦中涉及這個級聯的主要 分子是生長因子、兒茶酚胺類、神經激肽（neutrokinin)、細胞因子和趨化因子。
[0097] 繼發性損傷在損傷后數分鐘開始，并且可以在初始損傷后持續若干年。外傷性腦 損傷之后的繼發性損傷涉及的機制包括谷氨酸興奮性神經毒性、血腦屏障的破壞、繼發性 出血、缺血、線粒體功能障礙、凋亡性和壞死性細胞死亡以及炎癥。作為腦對感染、損傷和疾 病的先天性免疫應答的主要介質，小膠質細胞在數分鐘內對損傷做出反應。事實上，小膠質 細胞可以代表損傷后的第一道防線。
[0098] 小膠質細胞還在損傷后產生許多神經保護物質，包括抗炎性細胞因子（IL-10、 IL-I受體拮抗劑（Il-Ira))和神經營養因子（神經生長因子、轉化生長因子β (TGF-β))。 IL-10在人損傷后急劇升高，已在損傷實驗模型中顯示其具有有益作用）。這些神經保護作 用可以是小膠質細胞促炎細胞因子的產生受到抑制的結果。還已顯示TGF-β在損傷后也 具有神經保護作用，包括功能增強、損傷面積減小以及iNOS生成減少。
[0099] 外傷性腦損傷后炎性細胞因子（如IL-6)的增加是一把雙刃劍；神經毒性和神經 保護都可被其誘導。炎性細胞因子通過促進興奮性神經毒性和炎癥反應來促進神經毒性， 但同時其促進神經營養機制并誘導神經保護性的細胞生長因子。
[0100] 因此，使用調節巨噬細胞的劑如ra)〇的治療，可在治療上有益于外傷性腦損傷的 治療。
[0101] 脊髓損傷
[0102] 在一個實施方式中，本發明提供了治療具有脊髓損傷的對象的方法，所述方法包 括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO).
[0103] 每年大約有14000例脊髓損傷新報告病例。在大鼠中，脊髓損傷的影響引起損傷 部位即刻的出血性和機械性損傷。在初始創傷后的幾小時和幾天內還有組織的損失。這被 更好地稱為"繼發性損傷"。有許多不同的發展參數涉及這種繼發性損傷，如細胞自我平衡 機制的破壞、胞內信使的激活以及各種免疫反應。繼發性損傷的另一種因素是過量谷氨酸 釋放導致的過度刺激引起興奮性神經毒性細胞死亡。炎癥似乎是應答損傷的關鍵因素，并 且可能是細胞死亡和行為缺陷的主要原因。
[0104] 在脊髓損傷（SCI)中炎癥的作用是有爭議的，尚待進行明確的定義。炎性細胞與 遲發性神經元死亡和脫髓鞘有關，并且其還可能是神經再生不可或缺的。
[0105] 近期臨床前和臨床研宄表明外傷性脊髓損傷在脊髓和全身內引發非常強烈的炎 癥反應。具體地，展示了外傷性脊髓損傷激活巨噬細胞、小膠質細胞、內皮細胞和神經元中 的NF- K B。NF- K B是一種轉錄因子，其在脊髓和激活的巨噬細胞中在調節炎癥和可能的凋 亡性細胞死亡途徑，以及誘導促炎癥細胞因子和趨化因子、TNF-a、IL-Ib以及MCP-I方面起 重要作用。
[0106] 損傷引起炎癥介質從神經元、小膠質細胞、星形膠質細胞以及內皮細胞的釋放。這 些介質包括了即-&、幾-1、11^-6、血紅素氧合酶以及(：(《-2。脊髓具有有限的抗氧化保護。中 樞神經系統具有非常有限量的過氧化氫酶、超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽歧化酶。中性粒 細胞迀移到損傷部位，接著出現大量的單核細胞。
[0107] 在接下來的幾小時到幾天，神經元通過凋亡或者脫髓鞘而進一步破壞。NF- κ B和 生長因子（TGF-B)上調。神經膠質細胞增殖并留下包含硫酸角質素的瘢痕，干擾神經元經 過損傷區域再生長。隨后間充質細胞誘導另外的瘢痕，其增加了損傷體積并減緩任何修復 進程。研宄人員已經在尋找改變免疫反應的方法，使得脊髓損傷的最終結果將會得到改善。 現有的抗炎藥物選擇和護理標準，甲基脫氫皮質醇（methylprednisolone)(免疫抑制劑） 被嘗試了數年并且發現其對改善脊髓損傷的結果是無效的。到目前為止沒有發現其他干預 是有效的。
[0108] 當前非選擇性抑制炎癥的策略沒有改善脊髓損傷后的結果，可能是因為慢性炎癥 在脊髓損傷后的增加了有益作用更多的副作用。在脊髓損傷患者中針對慢性炎癥的更加靶 向性的免疫策略存在需要，其應該提供延長的神經保護，限制或者消除神經元損傷以及改 善的神經學結果。基于我們的TCDO作用機理的知識以及迄今為止進行的兩個動物研宄的 結果，我們認為TCDO是對急性脊髓損傷以及后續并發癥有效的治療手段。
[0109] 中風
[0110] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有中風的對象的方法。所述方法包括向 所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0111] 中風，或腦血管意外（CVA)，是由于血液供向腦的障礙引起的腦功能迅速喪失。這 可能是由于堵塞（血栓，動脈栓塞）或者失血而引起的缺血（缺乏血液流動）。炎癥在缺 血性中風和其他形式的缺血性腦損傷的發病機理中起重要的作用。在實驗和臨床上，腦應 答缺血性損傷伴有急性和延長的炎癥過程，特征是固有細胞（主要是小膠質細胞）的迅速 激活、促炎癥介質的產生以及多種類型炎性細胞（包括嗜中性粒細胞、T細胞的不同亞型、 單核細胞/巨噬細胞以及其他細胞）浸潤到缺血腦組織中。在實驗上，病灶性腦出血在實 驗性中風中引起炎性細胞一一包括嗜中性粒細胞、T細胞以及單核細胞/巨噬細胞一一的 時間依賴性募集和激活，并且抑制炎性反應，減少梗塞面積，和改善神經學上的缺陷。盡管 已經證明抗炎癥手段在動物模型中是成功的，但是嘗試將其轉到臨床應用中卻沒有成功， 這可能是人類疾病狀態中缺血后腦的炎癥機制的異質性和炎癥反應能夠靶向的時窗的不 確定的結果。小膠質細胞是腦的固有巨噬細胞，其應答于腦損傷而迅速激活。多數現有數 據已經顯示血液源的巨噬細胞被募集到缺血腦組織中，在中風后第3天到第7天最多（但 在腦缺血后的3天之前不顯著）。清除來自炎性部位的浸潤性嗜中性粒細胞及其潛在的細 胞毒性物質的主要途徑是凋亡，然后由激活的小膠質細胞/巨噬細胞吞食。巨噬細胞可以 消除嗜中性粒細胞，并且因此通過引發嗜中性粒細胞凋亡，吞食它們，并由此阻止細胞毒性 物質釋放到周圍組織中來降低神經元損傷。在消除炎性反應和阻止缺血損傷的進一步惡化 中，通過反應性小膠質細胞/巨噬細胞來誘導凋亡和凋亡嗜中性粒細胞的吞噬是關鍵的步 驟。存在的證據一一炎性細胞浸潤在缺血性中風后的早期是顯著有害的一一越來越多。
[0112] 顯然，巨噬細胞在中風已發生后起到不可或缺的作用。因此，用劑如T⑶0調節巨 噬細胞可在治療上有益于中風的治療。
[0113] 多發性硬化
[0114] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有多發性硬化的對象的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0115] 多發性硬化（MS)是中樞神經系統（CNS)的慢性炎性疾病。多發性硬化的主要神 經病理學標志是與包括巨噬細胞和淋巴細胞的外周血管浸潤物有關的炎性脫髓鞘損傷。巨 噬細胞在多發性硬化發病機理中發揮重要作用，在多發性硬化和實驗性自身免疫性腦脊髓 炎（EAE) -一多發性硬化癥的動物模型一一中已經觀察到巨噬細胞有害和有益的作用，這 得到廣泛的接受。激活的巨噬細胞分泌許多促進多發性硬化損傷中可見的軸突和少突細胞 損傷的產物，如基質金屬蛋白酶（MMPs)、NO和谷氨酸。通過氯膦酸鹽（clodronate)脂質體 清除浸潤性巨噬細胞，抑制了 EAE的臨床體征。已發現軸突損傷和損失的位置及數量與包 括巨噬細胞的細胞浸潤物之間的關聯。這些研宄提示巨噬細胞起有害的作用，但巨噬細胞 的有益作用也有報道。髓磷脂碎片的吞噬對于軸突修復/再生以及再髓鞘化是重要的，因 為已知髓磷脂成分是抑制生長的。此外，發現激活的巨噬細胞/小膠質細胞是神經營養蛋 白和生長因子的來源，如多發性硬化損傷中的腦源性神經營養因子（BDNF)，并且浸潤性巨 噬細胞的清除減少了脫髓鞘模型的再髓鞘化。
[0116] 因此，使用調節巨噬細胞的劑如T⑶0的治療，可以在治療上有益于多發性硬化的 治療。
[0117] 心血管疾病/心肌梗塞
[0118] 在一個實施方式中，本發明提供了治療患有心肌梗塞的對象的方法，所述方法包 括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。最近報道了具有心肌梗塞的大鼠中的小 膠質細胞的激活。這種激活對于涉及心血管調節的腦核團（brain nuclei)是特異的，說明 小膠質細胞激活在心力衰竭發病機理中可能的作用。
[0119] 心肌梗塞（MI)在冠狀動脈堵塞時發生，導致供應到下游心肌的氧不足。在心肌梗 塞（MI)之后，循環血液單核細胞應答于趨化因子，迀移到梗塞的心肌中，并分化成巨噬細 胞。在損傷部位，巨噬細胞除去壞死的心肌細胞和凋亡的嗜中性粒細胞；分泌細胞因子、趨 化因子和生長因子；并調節生血管反應階段。因此，巨噬細胞是初始應答細胞類型，其在多 個水平參與心肌梗塞后創傷愈合的調節。巨噬細胞影響若干創傷愈合事件，包括瘢痕形成 所需的成纖維細胞激活和血管生成所需的內皮細胞激活。
[0120] 心肌梗塞后巨噬細胞的主要功能是通過吞噬壞死細胞以及分泌生長因子和生血 管分子促進創傷愈合。巨噬細胞的迀移由來自損傷心肌的信號引導，所述信號包括來自固 有細胞（肌細胞）和急性炎性細胞（嗜中性粒細胞）的信號。反過來，激活的巨噬細胞生 產許多細胞因子、趨化因子和蛋白酶如MMPs。
[0121] 在心肌梗塞之后，炎性反應是愈合和瘢痕形成的先決條件。最近幾個實驗室已顯 示M-CSF治療增加心肌梗塞后的巨噬細胞浸潤，導致功能改進和梗塞修復加速，但在低溫 損傷小鼠模型中，用包含氯膦酸鹽的脂質體使巨噬細胞耗竭損害了創傷愈合。
[0122] 因此，使用調節巨噬細胞的劑如T⑶0的治療，可在治療上有益于心肌梗塞的治 療。
[0123] 病毒/細菌/寄生蟲感染
[0124] 在一個實施方式中，本發明提供了治療具有微生物感染的對象的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0125] 在另一個實施方式中，本發明提供了治療具有病毒感染的對象的方法，所述方法 包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0126] 在另一個實施方式中，本發明提供了治療具有寄生蟲感染的對象的方法，所述方 法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0127] 先天性免疫系統負責應答微生物或者病毒感染。當檢測到感染劑并且其不是抗原 特異性的時候，先天性免疫系統立刻作出反應。
[0128] 當檢測到感染劑時，嗜中性粒細胞開始信號轉導級聯。凝血系統肽、補體產物以及 細胞因子被釋放以開始炎癥級聯。巨噬細胞和其他免疫細胞被募集到檢測到感染劑的部 位，引發局部炎癥。樹突狀細胞也參與，吞食外來有機體并經歷激活。這些細胞將通過向T 細胞呈遞抗原而與適應性免疫系統相互作用。最終，感染劑通過吞噬作用而被消滅。
[0129] HIV
[0130] 巨噬細胞在先天性免疫反應中起重要作用。作為實例，巨噬細胞在HIV-I感染中 起關鍵性作用。它們是HIV-I最早感染的細胞之一，并且已被提出在受感染人中形成HIV-I 儲庫。感染有HIV-I的單核吞噬細胞是HIV相關癡呆綜合征（HAD)發展的重要因素。唯一 "有成效地（productively) "感染有病毒的腦細胞類型是小膠質細胞。也變得清楚的是，由 腦小膠質細胞釋放的神經毒性介質在HIV-I的發病機理中起到重要作用。
[0131] "HIV-1可以通過CD4受體和趨化因子受體--諸如CCR3、CCR5和CXCR4, CCR5是 其中最重要的 進入小膠質細胞中。有趣的是，具有CCR-5雙等位基因缺失的人實際上 對通過性途徑獲得的HIV免疫（盡管可通過嗜CCXR4病毒（CCXR4tropic virus)的IV傳 播感染）。IL-4和IL-10分別通過上調⑶4和CCR5的表達來增強小膠質細胞中HIV-I的 進入和復制。趨化因子CCL5/RANTES、CCL3/MIP-1 a、CCL4/MIP-1 β--其均結合CCR5-- 明顯地通過其阻斷病毒進入的能力，抑制HIV-I在小膠質細胞中的復制"。
[0132] 感染的小膠質細胞在細胞內包含病毒顆粒。在癡呆的嚴重性和小膠質細胞產生神 經毒素之間存在關聯。
[0133] HAD的一個不同點是，與出現的許多CNS異常相比，HIV-I感染的小膠質細胞的數 量有限。這說明由小膠質細胞釋放的化學因子促進神經元的損失。"越來越明顯的是，HIV 感染的小膠質細胞活躍地分泌內源性神經毒素如TNF-α、IL-Ιβ、CXCL8/IL-8、谷氨酸、喹 啉酸、血小板激活因子、類花生酸，和NO以及神經毒性病毒蛋白Tat、gpl20、和gp41"。
[0134] 小膠質細胞是腦中HIV-I的主要靶標。當被HIV-I或病毒蛋白激活時，它們分泌 或者誘導其它細胞分泌神經毒性因子；這個過程伴隨著神經元功能障礙（HAD)。
[0135] 在體內研宄中，評估了 TCDO對細胞HIV復制機制的作用和HIV病毒體（virons)的 T⑶0感染性的結果。通過滴定測定并且隨后計算50%組織培養感染劑量來定量HIV感染 細胞的TCDO補充培養物上清中的病毒產量或TCDO治療的病毒庫（virus stock)的病毒感 染性。TCDO不影響HIV在持續感染的淋巴細胞和單核細胞細胞系或者在外周血單核細胞中 的復制。此外，HIV病毒庫補充有TCDO以濃度依賴的方式顯著地降低了 HIV顆粒的感染性。 另外，通過與TCDO進行預溫育阻斷HIV-I的gpl20包膜糖蛋白與細胞結合。進一步，在從新 感染細胞培養物中通過反轉錄酶抑制劑3'-疊氮-3'-脫氧胸苷（疊氮胸苷（zidovudine)) 抑制HIV復制不受同時加入TCDO的影響。然而，在亞最佳濃度的疊氮胸苷的存在下培養物 中HIV的延遲病毒蔓延可以顯著地被同時加入T⑶0所阻斷。另外，T⑶0不在T淋巴瘤細 胞系ACH2中誘導染色體整合的HIV-I原病毒。T⑶0似乎直接滅活HIV病毒顆粒，但對HIV 的細胞內復制機制沒有影響。結果提示，應該考慮TCDO復合物作為HIV感染和完全型艾滋 病（full-blown AIDS)的化學療法的臨床評價，尤其是在同時接受疊氮胸苷的患者中。
[0136] 單純皰疼病毒
[0137] 單純皰瘆病毒（HSV)可以在嬰兒和免疫活性成年人中引起皰瘆腦炎。研宄已經顯 示長期的神經免疫激活在皰瘆感染的患者中持續存在。小膠質細胞產生對神經元有毒性的 細胞因子；這可能是HSV相關中樞神經系統損傷的基本機制。已發現"在HSV腦炎患者中 的活性小膠質細胞在抗病毒治療后繼續存在超過12個月"。
[0138] 細菌感染
[0139] 脂多糖（LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的主要成分。已顯示LPS在體外激活小 膠質細胞并刺激小膠質細胞產生細胞因子、趨化因子和前列腺素。盡管LPS已用作經典的 激活劑，但是大鼠小膠質細胞的最近研宄說明，長時間的LPS暴露引發與急性暴露于LPS的 小膠質細胞明顯不同的激活狀態。
[0140] 鏈球菌性肺炎
[0141] 鏈球菌性肺炎是細菌性腦膜炎最常見的原因。其主要定位于蛛網膜下腔，同時細 胞因子和趨化因子在血腦屏障內產生。小膠質細胞通過其TLR2受體與鏈球菌相互作用；然 后這種相互作用激活小膠質細胞產生具有神經毒性的一氧化氮。由小膠質細胞引發的炎性 反應可引起腦水腫。
[0142] 鏡狀痕原蟲（plasmodium falciparum)
[0143] 鐮狀瘧原蟲（蚊載體）是在人類中引發瘧疾的寄生蟲。瘧疾的嚴重并發癥是腦型 瘧（CM)。CM在紅細胞突破血腦屏障引起微出血、缺血以及神經膠質細胞生長時發生。這可 以導致小膠質細胞聚集，稱為皰疾肉芽腫（Durck 's granuloma)。最近研宄顯示小膠質細 胞在CM的發病機理中起主要作用。
[0144] 其它可以用T⑶0有益地治療的寄生蟲感染的例子包括，但不僅限于，萊姆病無應 答/慢性、登革熱、利什曼病和西尼羅病毒。
[0145] 明顯的是，巨噬細胞在治療細菌、病毒以及寄生蟲感染中具有不可或缺的作用。因 此，用劑如TCDO調節巨噬細胞可以在治療上有益于患有細菌、病毒和寄生蟲感染的患者。
[0146] 創傷愈合/修復
[0147] 本發明的一個實施方式提供了促進對象中創傷愈合/修復的方法，所述方法包括 向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0148] 在另外的實施方式中，本發明提供了治療患有II型糖尿病的對象的方法，所述方 法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0149] 在進一步的實施方式中，本發明提供了治療患有潰瘍的對象的方法，所述方法包 括向所述對象施用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。一方面，潰瘍是II型糖尿病的結果。
[0150] 創傷愈合（wound healing)，或傷口愈合（cicatrisation)，是一個復雜的過程，其 中皮膚（或者另外的器官-組織）在損傷后自身修復。創傷愈合的經典模型分為三個或四 個相繼的、但重疊的階段：（1)止血（一些作者不視為一個階段），（2)炎性的，（3)增殖的 以及（4)重塑。皮膚損傷后，在一個密切協調的級聯中發生一組復雜的生化事件以修復損 傷。在損傷后數分鐘內，血小板（凝血細胞）在損傷部位聚集以形成纖維蛋白凝塊。該凝 塊起到控制活動性出血的作用（止血）。
[0151] 巨噬細胞對創傷愈合是必不可少的。它們在損傷后兩天取代嗜中性粒細胞作為創 傷中的主要細胞。被血小板和其它細胞釋放的生長因子吸引到創傷部位，血流中的單核細 胞通過血管壁進入該區域。創傷中單核細胞的數量在損傷發生后的一天到一天半達到峰 值。一旦它們處于損傷部位，單核細胞成熟為巨噬細胞。脾臟中含有機體儲備的一半的單 核細胞，準備部署到受傷的組織。
[0152] 巨噬細胞的主要功能是吞噬細菌和損傷的組織，并且其還通過釋放蛋白酶來清除 損傷組織。巨噬細胞還分泌多種因子諸如生長因子和其它細胞因子，尤其是在損傷后的第 三天和第四天。這些因子將參與愈合增殖階段的細胞吸引到該區域，雖然它們可限制收縮 階段。巨噬細胞受其周圍低含氧量的刺激而產生誘導和加速血管發生的因子。它們還刺激 使創口上皮再形成的細胞、產生肉芽組織以及建造 （lay down)新的細胞外基質。通過分泌 這些因子，巨噬細胞有助于將創傷愈合過程推入下一階段。
[0153] II型糖尿病（DM)患者經常形成眾所周知難以治療的足部潰瘍。通過增強經由巨 噬細胞的吞噬作用和呈遞粒細胞的激活來促進創傷的抗感染性可有助于愈合過程。Th-U Th-2和同樣地NK細胞的更好地細胞介導的反應。激活的巨噬細胞與導致新的肉芽組織快 速形成的成纖維細胞相互作用，通過"增強巨噬細胞激活"促進創傷愈合。增強激活的巨噬 細胞表達導致新血管發生（組織氧合）的基因。另外，DM潰瘍患者常常伴有的神經病可導 致神經發生和髓鞘修復。T⑶0可以證明在創傷形成和潰瘍之前經由Nf- κ B和細胞因子途 徑的TNF-a以及慢性炎性反應的適當介導降低。巨噬細胞、小膠質細胞、內皮細胞和神經 元。NF-κ B是這樣的轉錄因子，其在調節炎癥，以及可能的凋亡細胞死亡途徑和促炎癥細胞 因子與趨化因子、TNF-a、IL-lb和MCP-I的誘導中起關鍵作用。因此，調節巨噬細胞的治療 方法，如TCD0,對治療創傷以及最終的創傷愈合可在治療上是有用的。
[0154] 痛終止/慢性痛
[0155] 本發明的一個實施方式提供了治療需要疼痛終止的對象的方法，所述方法包括施 用治療有效量的四氯十氧（TCDO)。
[0156] 痛是一種不愉快的感覺和情緒體驗，其與實際的或潛在的組織損傷有關，或根據 這些損傷來描述。一段時間以來，已經認識到免疫細胞釋放的炎性介質可以促進這些持續 的痛狀態。
[0157] 已經報道激活的巨噬細胞一固有或由趨化細胞因子從血液中募集的一促進實驗 上的痛狀態。它們可以釋放許多炎性介質，尤其是促炎細胞因子（特別是腫瘤壞死因子 a (TNFa)和白細胞介素_1β (IL-Ιβ))、神經生長因子（NGF)、一氧化氮（NO)和前列腺素 類。在實驗上當巨噬細胞從外周組織中耗竭或募集到外周組織中時，已顯示它們顯著地促 進由酵母聚糖和刺激性乙酸產生的炎性痛。另外，巨噬細胞激活似乎對其它細胞類型（嗜 中性粒細胞）隨后向炎性部位募集和激活有顯著作用。越來越認識到抗炎途徑可能在限制 炎性反應的持續時間中是重要的。
[0158] 外周神經的損傷可以加速神經性痛。這種痛經常是持續性的，并且沒有得到現有 療法很好的治療，因為神經元損傷引發了不同的機制。神經性痛是由于許多形式的神經損 傷，包括糖尿病性神經病、HIV神經病、皰瘆后神經痛、藥物誘導的神經病和外傷性神經損傷 而產生。在損傷的外周神經中，如在其他組織中，巨噬細胞由趨化分子募集到微環境中。
[0159] 明顯的是，巨噬細胞作為炎癥途徑的部分在痛中起作用。因此，巨噬細胞的調節， 如T⑶0,可以在治療上對疼痛終止有益。
[0160] 藥物制劑
[0161] 本發明的藥物制劑包括除活性成分外的其它劑。例如，用于注射的合適藥物組合 物可包括緩沖劑（如，乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑）、表面活性劑（如，聚山梨醇酯 (polysorbate))，任選地穩定劑（如，人白蛋白），等等。
[0162] T⑶0是一種獨特的亞氯酸鹽溶液。T⑶0的分析特征為包含作為活性組分的亞氯 酸鹽離子（4. 25% )，以及非活性組分氯化物（1. 9% )、氯酸根（1. 5% )和硫酸根（0. 7% ) 離子，以鈉作為陽離子。一毫升T⑶0包含約0. Ig T⑶0于水中用于注射（Ph. Eur. /USP)，相 當于約4. 25mg (63 μ mol)亞氯酸鹽離子（C102 -)。摩爾濃度通過亞氯酸鹽離子含量來計 算：TCDO分別包含693mM和63mM亞氯酸鹽。
[0163] 治療方法
[0164] 治療劑可以通過腸胃外、局部、靜脈內、口、皮下、動脈內、顱內、腹腔內，鼻內或肌 肉內的方式施用，用于預防性和/或治療療法。雖然所有這些施用方式顯然均考慮在本發 明的范圍之內，但施用的形式將是用于注射的溶液，尤其是用于靜脈或動脈內注射或點滴。 一方面，TCDO通過腸胃外、局部、靜脈內、口、皮下、動脈內、顱內、腹腔內，鼻內或肌肉內的方 式施用。
[0165] T⑶0通常施用于患者至少一個周期。在本發明的一個實施方式中，一個周期包括 向患者施用約5個連續每日劑量的T⑶0,然后至少約16天不治療。一方面，對象被施用至 少一個周期的TCDO治療。另一方面，受試對象可按照需要被施用1、2、3、4、5、6、7或者更多 個周期。本發明的一個實施方式提供了 T⑶0可以大約至少0. lmL/kg體重/天到大約至少 0. 5mL/kg體重/天劑量被施用給對象。在優選的方面，T⑶0以大約0. 5mL/kg體重/天到 至少I. 5mL/kg體重/天劑量被施用。在進一步的方面，T⑶0以大約至少0. 5mL/kg體重/ 天到大約至少0. 75mL/kg體重/天的劑量被施用。一方面，T⑶0以大約至少0. 5mL/kg體 重/天的劑量被施用。
[0166] 以下實施例旨在說明但不限制本發明。
[0167] 實施例1 :脊髓損傷后的血管事件：促進繼發性發病機理
[0168] 方法和材料
[0169] 動物：雌性 Sprague-Dawley 大鼠 （Harlan Sprague-Dawley，印第安納波利斯， 印第安納），體重為200-225g，在實驗之前每只大鼠均自由獲取食物和水。用克他命 (ketamine) (80mg/kg)和賽拉嘆（xylazine) (10mg/kg)麻醉動物。使用直腸溫度計來監測 腦溫度。動物的體溫通過使用水套式加熱墊維持在37C。在損傷之前1小時到損傷之后6 小時監測腦溫度并以30分鐘的間隔記錄。
[0170] 實驗組。本研宄使用的脊髓損傷模型得到詳細描述（Rabchevsky等人，2002 ; J. Neurosci. Res. 68:7)。使用氣動沖擊器（the Precision Scientific Inc)使年輕的成年 雌性Sprague-Dawley大鼠接受脊髓撞傷。使用雌性動物，原因是麻痹與損傷有關和便于排 空膀胱。在手術之前，基于隨機區組設計將大鼠分配到不同的治療組，以使在任何指定的手 術日包括所有的治療組。在執行第10胸椎（TlO)椎板切除術之前大鼠用克他命（ketamine) (80mg/kg)和賽拉嘆（xylazine) (10mg/kg)麻醉。脊柱在上胸椎（T8)和腰椎（Tll)水平上 用角夾固定，頂端直徑為2mm的沖擊器以約50千達因（kdynes)傳遞給背脊柱上面的暴露 的完整硬膜。立刻撤掉沖擊器，創傷用鹽水沖洗，肌肉和皮膚開口縫合在一起。
[0171] 藥物施用。化合物以下述形式施用：在損傷后15分鐘以0.5ml/kg (IX 104, 5 X IO4 以及ioxio4tcdo)靜脈注射鹽水或者藥物溶液，劑量為。從指定的時間開始，每天施用藥 物1次，持續5天。鹽水對照組與藥物治療組平行進行。
[0172] 行為分析：Basso、Beattie和Bresnahan運動評定量表。對于行為分析，在手術 前，以及手術后1、2、3、4、5、6周測試動物。將動物置于一個曠場室（40cmX40cmX40cm，墻 高25cm)4分鐘，以確定所有的對象獲得12分的最高分，其運用改良的Basso, Beattie, and Bresnahan(BBB)運動評定量表（Ferguson 等人，2004 ;J. Neurotrauma 21:1601 ;參見下 面）。大鼠置于曠場4分鐘，并錄像來評分。
[0173] 組織學。在本研宄的最后，處死動物，用4%的多聚甲醛固定脊髓。對于分析，20 μπι 的冰凍切片用絡花青（EC)染色以區分白質和胞體（cell bodies)，計算通過損傷部位的剩 余組織的量。在組織上進行免疫細胞化學分析。通過計算機圖像分析通過損傷的TlO節段 的10份均勻間隔的切片來測定組織剩余。壞死組織的體積除以總橫
【權利要求】
1. 在對象中降低和/或抑制促炎介質反應的方法，所述方法包括向所述對象施用治療 有效量的四氯十氧（TCDO)。
2. 在對象中改變細胞免疫的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十 氧（TCDO) 〇
3. 在對象中控制慢性炎癥的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十 氧（TCDO) 〇
4. 在對象中調節巨噬細胞功能的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四 氯十氧（TCDO)。
5. 權利要求1-4任意一項所述的方法，其中所述對象患有巨噬細胞介導的疾病。
6. 權利要求5所述的方法，其中所述巨噬細胞介導的疾病選自脊髓損傷、外傷性腦損 傷、多發性硬化、心肌梗塞、中風、病毒感染、微生物感染、寄生蟲感染、慢性痛、Π型糖尿病、 阿爾茲海默癥和帕金森氏病。
7. 權利要求1-6任意一項所述的方法，其中所述患者需要創傷愈合或疼痛終止。
8. 權利要求7所述的方法，其中所述患者患有II型糖尿病。
9. 在對象中實施疼痛終止的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯十 氧（TCDO) 〇
10. 在對象中產生鎮痛作用的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯 十氧（TCDO)。
11. 在對象中促進創傷愈合的方法，所述方法包括向所述對象施用治療有效量的四氯 十氧（TCDO)。
12. 權利要求1-11任意一項所述的方法，其中T⑶0通過腸胃外、局部、靜脈內、口、皮 下、動脈內、顱內、腹腔內、鼻內或肌肉內方式施用。
13. 權利要求1-12任意一項所述的方法，其中T⑶0以約0. lmL/kg體重至I. 5mL/kg體 重的劑量被施用。
14. 權利要求13所述的方法，其中IODO以約0. 5mL/kg體重至0. 75mL/kg體重的劑量 被施用。
15. 權利要求13所述的方法，其中IODO以約0. 5mL/kg體重的劑量被施用。
16. 權利要求1-15任意一項所述的方法，其中所述對象接受至少一個周期的TCD0,其 中周期包括約連續5天施用T⑶0,然后至少約連續16天不施用T⑶0。
17. 權利要求16所述的方法，其中所述對象被施用1、2、3、4、5或6個周期的T⑶0。
【文檔編號】A61K33/40GK104519890SQ201380015277
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年1月18日 優先權日:2012年1月19日
【發明者】O·M·A·欽, D·L·賽爾科羅斯, M·S·金迪, A·A·奧哈迪 申請人:Ibt美國公司