菊糖和菊糖乙酸酯制劑的制作方法
【專利摘要】本公開內容提供了包含β-菊糖或菊糖乙酸酯和活性劑的微粒或納米顆粒的組合物，其中活性劑被包含在單獨微粒或納米顆粒內。活性劑可以是，例如，疫苗接種抗原、抗原肽序列、或免疫球蛋白。可將組合物摻入各種制劑中用于向受試者諸如人或動物施用。本發明還提供了使用組合物和制劑的方法，包括為了治療、預防、或抑制傳染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊亂、腫瘤性疾病、退行性疾病、老化疾病，或其組合的目的刺激受試者中的免疫應答，或增強受試者中的免疫應答的方法。
【專利說明】菊糖和菊糖乙酸酯制劑
[0001] 發明背景 發明領域
[0002] 本發明一般涉及疫苗和佐劑，并且更具體地涉及包含β -菊糖和β -菊糖衍生物 的疫苗和佐劑，其中所述β-菊糖和β-菊糖衍生物用作遞送裝置以及佐劑，包括包含其的 納米顆粒和微粒組合物以及使用所述組合物治療的方法。
[0003] 背景咨料
[0004] 接種疫苗的目的是通過產生對施用抗原的強免疫應答，以提供針對感染的長期保 護。疫苗通常需要加入稱為佐劑的免疫刺激劑，以提高對抗原的特異性免疫應答的效力和 壽命。理想的疫苗佐劑應刺激對共注射的抗原的體液（Th2型）和細胞（Thl型）兩種免疫 應答。需要體液應答以清除細胞外的病原體。細胞應答對消除細胞內的病原體是至關重要 的。
[0005] 在美國用于人類使用的唯一被批準的佐劑明礬（鋁鹽），僅刺激體液免疫應答。雖 然已成功地開發了僅使用明礬作為佐劑引起保護性抗體應答的一些基于重組蛋白的疫苗， 包括用于乙型肝炎和人乳頭狀瘤病毒的那些疫苗，但針對疾病諸如癌癥、瘧疾、皰疹、流感、 結核、HIV和/或AIDS的下一代的重組疫苗，將不僅需要非常強且持久的抗體應答，而且需 要有效的細胞介導的免疫應答。
[0006] 因此，對可促進受試者中抗體應答的新組合物存在需要。還對可促進體液和細胞 兩種免疫應答的新穎疫苗佐劑、抗原遞送系統、和組合物存在需要。
[0007] 發明概沭
[0008] 本發明提供了當作為微粒或納米顆粒遞送時刺激免疫系統的可溶性或不溶性的 多糖聚合物。當作為微粒或納米顆粒配制時，菊糖的亞型菊糖）及其半合成衍生 物菊糖乙酸酯（InAc)可作為新穎疫苗佐劑和抗原遞送系統起作用。顆粒可被用于為了預 防或抑制傳染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊亂、腫瘤性疾病、退行性疾病、或老化疾病的 目的刺激受試者中的免疫應答。
[0009] 在實施方案中，公開了包含菊糖或菊糖乙酸酯和活性劑的微粒或納米顆粒的 組合物，其中活性劑可被包含在單獨微粒或納米顆粒內。活性劑可包括抗原、抗原肽或其序 列、免疫原、免疫球蛋白、或其組合。在相關的方面中，活性劑可以是期望針對其的免疫應答 的半抗原或任何劑。
[0010] 在實施方案中，公開了包含菊糖或菊糖乙酸酯顆粒和活性劑的組合物，其中 活性劑可被包含在單獨顆粒內，或在物理上與β-菊糖或菊糖乙酸酯的顆粒締合，其中當 向人或動物施用時，組合物有效地在人或動物中刺激針對活性劑的免疫應答。
[0011] 在一個方面，疫苗組合物包含抗原和有效佐劑量的菊糖乙酸酯，其中對菊糖乙酸 酯的乙酰化的程度為約0. 1 %至100%。
[0012] 在另一個方面，組合物包含β-菊糖或菊糖衍生物和活性劑的微粒或納米顆粒， 活性劑包括抗原、抗原肽序列、或免疫球蛋白，并且組合物包含有效佐劑量的β-菊糖或菊 糖衍生物，其中菊糖衍生物包括在顆粒制劑形式中的酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、 菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或還原形式、菊糖或其氧化或還原形式與另外的 活性劑的絡合、菊糖的陽離子/陰離子/非離子的修飾、或菊糖的磷酸酯，其中將抗原包封 在顆粒內，涂覆或綴合至顆粒上或可包括其組合。
[0013] 在實施方案中，公開了為了治療或抑制傳染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊亂、 腫瘤性疾病、遺傳性疾病、退行性疾病或老化疾病的目的刺激受試者中免疫應答的方法，其 中方法包括向需要其的受試者施用有效量的本文描述的組合物。
[0014] 在實施方案中，公開了提供為了治療或抑制傳染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊 舌U腫瘤性疾病、遺傳性疾病、退行性疾病或老化疾病的目的增強受試者中免疫應答的方 法，其中方法包括向需要其的受試者施用有效量的本文描述的組合物。
[0015] 在實施方案中，公開了誘導受試者中免疫原性應答的方法，包括對所述受試者施 用有效量的本文描述的組合物。
[0016] 在另一個實施方案中，公開了治療感染的方法，包括向需要其的受試者施用有效 量的本文描述的組合物。感染可由細菌、支原體、真菌、病毒、原生動物、或其他微生物、或其 組合引起。
[0017] 在實施方案中，公開了治療動物或人中侵染的方法，包括向患有侵染的動物或人 施用有效量的本文描述的組合物。侵染可由微生物、蠕蟲、寄生物、或其組合引起。
[0018] 在實施方案中，公開了用于產生抗體或用于刺激免疫細胞的方法，包括用包含本 文描述的組合物的制劑免疫動物或人，并從被免疫的動物或人收集抗體或免疫細胞。抗體 可以是，例如，單克隆抗體或多克隆抗體或其功能片段（例如，Fab、scFv、抗體綴合物或類 似的抗體片段）。
[0019] 在實施方案中，公開了用于生產抗血清的方法，包括用具有本文描述的組合物的 制劑免疫動物或人，并從免疫的動物或人、或從免疫的動物或人的產物（諸如動物的卵） 收集抗血清。抗血清可包含抗體，其中抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體。動物可以 是靈長類動物（primate)、狗（dog)、貓（cat)、奶牛（cow)、小羊（lamb)、豬（pig)、閹豬 (hog)、家禽（poultry)、馬（horse)、母馬（mare)、驟（mule)、雄性動物（jack)、雌性動物 (jenny)、駒（colt)、犢（calf)、一歲動物（yearling)、公牛（bull)、牛（ox)、綿羊（sheep)、 山羊（goat)、美洲能（llama)、野牛（bison)、水牛（buffalo)、蓋羊（lamb)、小山羊（kid)、 小豬（shoat)、母雞（hen)、小雞（chicken)、火雞（turkey)、鴨（duck)、鵝（goose)、能鳥 (ostrich)、鳥（fowl)、兔（rabbit)、野兔（hare)、豚鼠 （guinea pig)、倉鼠（hamster)、小 鼠（mouse)、大鼠（rat)、卩齒齒動物（rodents)、魚（fish)、水生動物（aquatic animal)或兩 棲動物（amphibian)。
[0020] 組合物可通過注射、吸入、口服、直腸、陰道、鼻、或局部施用。在與顆粒包封或締合 前，活性劑可與生理上可接受的無毒媒介物組合來制備，或在與活性劑包封或締合后，顆粒 可與生理上可接受的無毒媒介物組合。
[0021] 在一個方面，本文描述的微粒或納米顆粒可被用作佐劑。在一個相關方面，本文描 述的組合物的顆粒可以是微粒。微粒可具有約lgm至約30 μ m、約1. 5gm至約25 μ m、或約 2 μ m至約20 μ m的直徑。顆粒還可以是納米顆粒。納米顆粒可具有約10nm至約lOOOnrn、約 10nm 至約 950nm、約 10nm 至 5 約 900nm、約 50nm 至約 900nm、約 100nm 至約 800nm、約 10nm 至約400nm、約400nm至約900nm、或約20nm至約750nm的直徑。
[0022] 在另一個方面，β -菊糖或菊糖乙酸酯可具有約4kDa至約25kDa的分子量。
[0023] 在一個方面，組合物還可包括一種或更多種免疫調節因子，諸如淋巴因子、細胞 因子、胸腺細胞刺激因子、單核細胞或巨噬細胞刺激因子、內毒素、病原體相關分子模式 (PAMS)、模式識別受體的配體（PRR)、或其組合。
[0024] 在另一個方面，活性劑可以是抗原、抗原肽、或抗原序列、或免疫球蛋白。在相關 的方面，抗原可以是，例如，DNA或RNA，或包含DNA或RNA的生物組分。在另外的相關方 面，活性劑還可包括細菌的溶解產物或病毒病原體、癌細胞、或與病原體或疾病相關的其 他生物組分（a lysate of a bacterial or a viral pathogen, cancer cell, or other biological component associated with a pathogen or a disease) 〇 例如，生物組分可 以是肽、蛋白、脂質、DNA、或單獨的多糖。
[0025] 在一個方面，組合物還可包括有效量的與顆粒包封或締合的或與顆粒一起被包含 在制劑中的第二活性劑。
[0026] 在另一個方面，本文描述的組合物的施用可刺激免疫應答。免疫應答可包括 Thl(IgG-2a、細胞毒性T細胞）或Th2(IgG-l、IgA)類型的免疫應答、或其組合。在相關的 方面，向動物或人的施用可減少由活性劑、或與活性劑相關的疾病或狀況引起的癥狀的至 少一個。
[0027] 在一個方面，免疫組合物包括，與藥學上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑組合的 本文描述的組合物。在相關的方面，可將免疫組合物配制為液體、半固體、膠體或固體劑型。 在另外的相關方面，載體可以是液體媒介物或稀釋劑可以是固體稀釋劑，例如，用于干粉吸 入的固體稀釋劑。
[0028] 在實施方案中，公開了 β -菊糖或β -菊糖衍生物，諸如菊糖乙酸酯的微粒和納米 顆粒制劑，以及其用作免疫刺激劑的用途。在相關的方面，向受試者施用后的前30分鐘，制 劑可具有小于約30wt. %的包封的或物理上締合的分子的突釋。
[0029] 在實施方案中，在向受試者施用后的前30分鐘，制劑可具有小于約20wt. %的突 釋、小于約15wt. %的突釋、或小于約10wt. %的突釋。在相關的方面，包封的材料的〉約 90wt. %的釋放是〉約20天。
[0030] 在實施方案中，公開了本文描述的組合物用于疾病的醫療、獸醫、和人畜共患病的 (zoonotic)治療或預防的用途。在一個方面，藥物治療可以是預防和治療癌癥或其他惡性 腫瘤，包括，但不限于乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、腦癌、或結腸癌、以及淋巴瘤和白血 病、和骨骼、血液、或淋巴系統的癌癥。
[0031] 在實施方案中，公開了如本文描述的組合物用于制造治療哺乳動物中疾病，例如 人的癌癥的藥劑的用途。在一個方面，公開了如本文描述的組合物用于制造治療非哺乳動 物物種中疾病的藥劑的用途。在相關的方面，藥劑可包括藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或 載體。
[0032] 在實施方案中，公開了試劑盒，包括包含菊糖或菊糖乙酸酯的微粒或納米顆 粒的組合物；任選地活性劑；容器；一種或更多種緩沖液，用于活性劑與所述組合物締合的 說明書；以及標簽。
[0033] 附圖簡沭
[0034] 以下附圖構成本說明書的一部分，并且被包括以進一步說明本公開內容的某些實 施方案或各個方面。在一些情況下，本公開內容的實施方案可通過參照附圖結合本文提供 的詳細說明書被最好地理解。
[0035] 說明書和附圖可突出顯示本公開內容的某些具體實施例、或某些方面。然而，本領 域技術人員將理解，該實施例或方面的部分可與本公開內容的其他實施例或方面結合來使 用。
[0036] 圖1示出由FTIR光譜學對β-菊糖和菊糖乙酸酯的IR光譜的比較。
[0037] 圖2示出卵白蛋白從InAc微粒的體外釋放曲線。釋放研究用在pH 7. 4下的lmL 的lOOmM PBS中分散的10mg的微粒以約lOOrpm震動在37°C下來進行。在不同時間間隔取 樣，并用等體積的新鮮PBS來代替。卵白蛋白濃度通過二辛可寧酸（BCA)蛋白質測定法來 測量（η = 3)。
[0038] 圖3示出樹突狀細胞對抗原（ova)的攝取。㈧將DC2. 4細胞與在溶液中或在菊 糖微粒中的FITC ova溫育后的流式細胞術。（B)由熒光顯微鏡示出如與3A中的相同的結 果，DC2. 4細胞的細胞核用DAPI來染色。
[0039] 圖4示出了（A) InAc通過MyD88或Mai依賴性TLR激活巨噬細胞，且⑶InAc微 粒與TLR-4相互作用。*指示使用student t檢驗，結果在統計上是顯著的（P〈0. 05)。
[0040] 圖5示出了免疫的小鼠血清中ova-特異性總IgG、IgG-l和IgG-2a抗體滴度。在 第1天和第21天將小鼠 （η = 4-5/組）皮內注射單獨ova(100 μ g)、ova與明研^ (200 μ g)、 ova與空白的β -菊糖微粒、或在β -菊糖微粒中裝載的ova，作為初次劑量和加強劑量。在 免疫接種后1周和3周時，收集血清，用于使用間接ELISA分析抗-ova抗體滴度。
[0041] 圖6示出卵白蛋白（ova)從β -菊糖微粒的釋放曲線。釋放研究用在pH7. 4下的 lmL的lOOmM PBS (磷酸鹽緩沖鹽水）中分散的10mg的微粒以約lOOrpm震動在37°C下來 進行。在不同時間間隔取樣，并用等體積的新鮮PBS來代替。FITC-Ova濃度由熒光比色分 析來測量（η = 3)。
[0042] 圖7示出了免疫的小鼠血清中ova-特異性總IgG、IgG-Ι和IgG_2a抗體滴度。 在10,第1天和第21天將小鼠 （η = 4-5只/組）皮內注射單獨ova(100 μ g)、ova與明研^ (200 μ g)、ova與空白InAc微粒、或在InAc微粒中裝載的ova，作為初次免疫和加強免疫。 在初次免疫和加強免疫后1周和3周時，收集血清，用于使用間接ELISA分析IgG滴度。
[0043] 圖8示出響應于抗原（Ova)的脾細胞體外增殖。從用單獨ova、ova與明研 或在β-菊糖或InAc微粒中裝載的ova免疫的小鼠制備脾細胞，并且在伴刀豆球蛋白 A(ConA，2. 5yg/mL)或ova(100yg/mL)或RPMI1640培養基的存在下培養72小時。脾細胞 增殖通過MTT測定法來測量并顯示為刺激指數（SI)。SI =抗原（ova)或有絲分裂原（ConA) 處理的培養物的吸光度值除以未刺激的培養物（RPMI處理）的吸光度值。ConA是增殖的陽 性對照。*指示使用student t檢驗與ova免疫的組相比，值是統計學顯著的（P〈0. 001)。
[0044] 圖9示出Thl (IFN-g和IL-2)和Th2 (IL-4和IL-10)細胞因子的測量。從用單獨 ova、ova與明研^、或裝載ova的InAc微粒免疫的小鼠制備脾細胞，并且在0va(100 μ g/mL) 的存在下培養72小時。72小時后，從不同處理組收集上清液，并且不同細胞因子的濃度使 用夾心ELISA來測量。*指示使用student t檢驗與ova免疫的組相比，值是顯著更高的 (P〈0. 001)。
[0045] 圖10示出免疫的小鼠中的DTH應答。將Ova(5 μ g)注射在每個免疫的小鼠的左 足墊并且PBS注射在右足墊。足墊腫脹程度在Ova和PBS處理后24小時來測量。數據表 示來自每組的3-4只免疫的小鼠的腫脹的平均程度+標準偏差。*指示使用student t檢 驗與ova免疫的組相比，值是統計學顯著的（P〈0. 001)。
[0046] 圖11示出菊糖乙酸酯顆粒的大小對免疫的小鼠血清中ova-特異性總IgG滴度的 產生的效應。在第1天和第21天將小鼠 （η = 4-5只/組）用單獨或連同CFA(完全弗氏 佐劑）或在InAc微粒或納米顆粒中裝載的ova (100、10或1 μ g)皮下注射，作為初次免疫 和加強免疫。在初次免疫和加強免疫后1周和3周時收集血清用于使用間接ELISA分析總 IgG滴度。CFA被用作陽性對照（最強佐劑）。
[0047] 圖12示出菊糖乙酸酯顆粒的大小對免疫的小鼠血清中血清ova-特異性IgG-Ι滴 度的產生的效應。在第1天和第21天時，將小鼠 （η = 4-5只/組）用單獨或連同CFA或 在InAc微粒或納米顆粒中裝載的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次和加強免 疫后1周和3周時收集血清用于使用間接ELISA分析IgG-Ι滴度。
[0048] 圖13示出菊糖乙酸酯顆粒的大小對免疫的小鼠血清中的ova-特異性IgG_2a滴 度的產生的效應。在第1天和第21天時，將小鼠 （η = 4-5只/組）用單獨或連同CFA或 在InAc微粒或納米顆粒中裝載的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加 強免疫后1周和3周時收集血清用于使用間接ELISA分析IgG-2a滴度。
[0049] 圖14示出InAc微粒中裝載的抗原的量對免疫的小鼠血清中的ova-特異性IgG滴 度的產生的效應。在第1天和第21天時，將小鼠 （η = 4-5只/組）用單獨或連同CFA或 裝載在InAc微粒中的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加強免疫后1 周和3周時收集血清用于使用間接ELISA分析總IgG、IgG-Ι和IgG-2a滴度。
[0050] 圖15示出InAc納米顆粒中裝載的抗原的量對免疫的小鼠血清中的ova-特異性 IgG滴度的產生的效應。在第1天和第21天時，將小鼠 （η = 4-5只/組）用單獨或連同 CFA或裝載在InAc納米顆粒中的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加 強免疫后1周和3周時收集血清用于使用間接ELISA分析總IgG、IgG-Ι和IgG-2a滴度。
[0051] 圖16示出補體旁路路徑（APC)激活測定的結果。人血清引起兔RBC溶解，其通過 在700nm處確定0D值來分析。在與RBC溫育以溶解之前，人血清用各種樣品來處理。通過 將未處理的人血清的RBC溶解視為100 %，計算％ RBC溶解。酵母聚糖（陽性對照）激活 APC，并因此抑制了兔RBC溶解。
[0052] 圖17示出了佐劑注射部位處的皮膚組織的H&E染色。（A)示出了在低放大率下來 自InAc納米顆粒注射（左）、InAc微粒注射（中）、和完全弗氏佐劑注射（CFA)(右）的部 位的三幅圖，且（B)示出了在較高的放大率下InAc微粒（左）和CFA(右）的兩幅圖。
[0053] 發明詳沭
[0054] 定義
[0055] 如本文中使用，列舉的術語具有以下含義。本說明書中使用的所有其他術語 和短語具有其如本領域技術人員將理解的普通含義。此類通常含義可通過參考技術詞 典，諸如由 R. J. Lewis 的 Hawley? s Condensed Chemical Dictionary,第 14 版，John Wiley&Sons, New York, Ν· Υ·，2001 來獲得。
[0056] 在說明書中提及" 一個實施方案（one embodiment) "、" 一個實施方案（an embodiment) "等指示描述的實施方案可包括特定方面、特征、結構、部分、或特性，但不是每 個實施方案都必定包括該方面、特征、結構、部分或特性。此外，這樣的短語可，但不一定，是 指在本說明書的其他部分所提到的相同的實施方案。此外，當特定方面、特征、結構、部分 或特性在結合實施方案描述時，影響或連接無論是否明確描述的其他實施方案的這樣的方 面、特征、結構、部分或特性在本領域技術人員的知識范圍內。
[0057] 除非上下文另外明確指示，否則單數形式"一個（a) "、"一個（an) "和"該（the) " 包括復數指代對象。因此，例如，提及"一種化合物"包括多個此類化合物，使得化合物X包 括多個化合物X。還應注意，權利要求書可撰寫成排除任何任選的要素。因此，這一聲明旨 在充當使用與權利要求要素或使用的"否定"限制的列舉有關的排他術語，諸如"單獨地"、 "僅"以及類似的術語的前提基礎。
[0058] 術語"和/或"意指項目的任何一個、項目的任何組合、或與該術語相關的全部項 目。短語"一個或更多個"由本領域技術人員，特別是當閱讀使用其的上下文時容易地理解。 例如，一種或更多種任選的成分可被包括在特定制劑中，因此一個或更多個可指一至約四、 或一至約五、或作為在特定制劑中被需要的許多組分。
[0059] 術語"約"可指指定的值的±5%、±10%、±20%、或±25%的變化。例如，"約 50"百分數可在一些實施方案中進行從45%至55%的變化。對于整數范圍，術語"約"可包 括比在范圍的每個端點處列舉的整數更大和/或更小的一個或兩個整數。除非本文另外指 明，否則術語"約"旨在包括在單獨成分、組合物、或實施方案的功能性方面等同的值，例如， 鄰近列舉的范圍的重量百分比。
[0060] 如本領域技術人員應當理解，所有數字，包括表示成分的數量、性質，諸如分子量、 反應條件等等的那些，都是近似值，并且被理解為在所有情況下任選地被術語"約"修飾。這 些值可取決于本領域技術人員利用本文說明書的教導追求獲得的期望的特性而發生變化。 還應理解，這些數值固有地包含必然地由其各自的測試測量中發現的標準偏差而引起的可 變性。
[0061] 如本領域技術人員應理解，為了任何和所有目的，特別是在提供書面描述的方面， 本文中列舉的所有范圍還包括任何及所有可能的子范圍和子范圍的組合，以及組成范圍的 單獨數值，特別是整數值。列舉的范圍（例如，重量百分比或碳基團數）包括范圍內的每一 個具體的值、整數、小數或恒等式（identity)。任何列出的范圍可被容易地認為充分描述 并使相同的范圍被分解為至少相等的兩份、三份、四份、五份、或十份成為可能。作為非限制 性實例，本文討論的每個范圍可容易地被分解為下三分之一、中間三分之一和上三分之一 等。如本領域技術人員還應理解，所有措辭，諸如"多達"、"至少"、"大于"、"小于"、"多于"、 "或以上"，以及類似的措辭，包括列舉的數字，并且這樣的術語是指可隨后被分解為如以上 討論的子范圍的范圍。以相同的方式，本文列舉的所有比率還包括落入更寬比率內的所有 子比率。因此，對原子團、取代基和范圍列舉的具體值僅用于說明；其不排除在用于原子團 和取代基的限定的范圍內的其他限定的值或其他值。
[0062] 本領域技術人員還將容易地認識到，當成員被以共同的方式分組在一起，諸如馬 庫什組（Markush group)時，本發明不僅包括總體上列出的整個組，還單獨地包括組的每個 成員以及主要組的所有可能的亞組。另外，對于所有的目的，本發明不僅包括了主要組，還 包括了缺失一個或更多個組員的主要組。因此，本發明設想，明確排除列舉的組的成員中的 任何一個或更多個。
[0063] 因此，附帶條件可以適用于任何公開的類別或實施方案，由此列舉的要素、種類、 或實施方案的任何一個或更多個，可被排除在這樣的類別或實施方案之外，例如，如用于明 確否定性限制。
[0064] 術語"接觸"是指觸碰、使接觸、或使直接或緊密靠近的行為，包括例如，在細胞或 分子水平引起生理反應、化學反應或物理變化，例如，在溶液中、在反應混合物中、在體外或 體內。
[0065] "有效量"是指有效治療疾病、紊亂和/或狀況，或導致列舉的效果的量。例如，有 效量可以是有效減少被治療的狀況或癥狀的進展或嚴重程度的量。
[0066] 治療有效量的確定在本領域熟練技術人員的能力范圍內。術語"有效量"是指包 括本文中描述的化合物、或本文描述的化合物的組合，例如，有效治療或預防疾病或狀況， 或治療宿主中疾病或狀況的癥狀的量。因此，"有效量"通常意指提供期望的效果的量。
[0067] 術語"治療（treating) "、"治療（treat) " 和"治療（treatment) " 包括：（i)預防 疾病、病理或醫學狀況發生（例如，預防）；（ii)抑制疾病、病理或醫學狀況或阻止其發展； (iii)緩解疾病、病理或醫學狀況；和/或（iv)減少與疾病、病理或醫學狀況相關的癥狀。 因此，術語"治療"、"治療"和"治療"擴展至預防（prophylaxis)并包括預防（prevent)、預 防（prevention)、預防（preventing)、降低、停止或逆轉被治療的狀況或癥狀的進展或嚴 重程度。因此，術語"治療"適當地包括醫學、治療兩者和/或預防施用。
[0068] 術語"抑制（inhibit) "、"抑制（inhibiting) "和"抑制（inhibition) "是指減慢、 停止、或逆轉疾病、感染、狀況或細胞的組的生長或進展。例如，與治療或接觸的不存在下發 生的生長或進展相比，抑制可以大于約20%、40%、60%、80%、90%、95%或99%。
[0069] 術語"菊糖"是本領域熟知的，并且是指a -D-吡喃葡糖基-[a -D-呋喃果糖基] (n-l)-D-呋喃果糖苷，由線性β-?(2->1)聚呋喃果糖基α-D-葡萄糖的家族組成的多糖 類，其中將典型多達約1〇〇果糖部分的無支鏈的鏈（對于植物衍生的材料η =約5至約100 且對于微生物衍生的材料約5至約100, 000)連接至單一末端葡萄糖單元。
[0070]
【權利要求】
1. 一種組合物，所述組合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)和活性劑的微粒或納米 顆粒，其中所述活性劑被包含在單獨微粒或納米顆粒內。
2. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括微粒。
3. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括具有約1 μ m至約30 μ m的直徑的 微粒。
4. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括納米顆粒。
5. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括具有約10nm至約lOOOnm的直徑 的納米顆粒。
6. 如權利要求1所述的組合物，其中所述β -菊糖或InAc具有約4kDa至約16kDa的 分子量。
7. 如權利要求1所述的組合物，所述組合物還包括一種或更多種免疫調節因子，其中 所述一種或更多種免疫調節因子是淋巴因子、細胞因子、胸腺細胞刺激因子、單核細胞或巨 噬細胞刺激因子，內毒素、或其組合。
8. 如權利要求1所述的組合物，其中所述活性劑包括抗原、DNA、RNA、抗原肽或抗原序 列、免疫原、或免疫球蛋白。
9. 如權利要求1所述的組合物，其中所述活性劑包括細菌的溶解產物或病毒病原體、 癌細胞、或與病原體或疾病相關的其他生物組分。
10. 如權利要求9所述的組合物，其中所述生物組分包括肽、蛋白、脂質、DNA或多糖。
11. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物還包括有效量的第二活性劑。
12. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物體內或原位刺激免疫應答，并且所述 免疫應答包括Thl (IgG-2a)型或Th2 (IgG-Ι)型免疫應答、或其組合。
13. -種組合物，所述組合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)顆粒和活性劑，其中所 述活性劑被包含在單獨顆粒中或物理上與β -菊糖或InAc的顆粒締合，并且其中所述組合 物在人或動物中刺激針對活性劑的免疫應答。
14. 如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物是包含菊糖乙酸酯的疫苗，并且其中 對所述菊糖乙酸酯的乙酰化作用的程度為約〇. 1%至100%。
15. 如權利要求1所述的組合物，其中所述β-菊糖是選自由以下組成的組的菊糖衍生 物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或還原 形式、和菊糖磷酸酯。
16. -種組合物，所述組合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)和活性劑的微粒或納 米顆粒，其中所述活性劑被包含在單獨微粒或納米顆粒中，所述組合物用于在傳染病、自身 免疫性疾病、遺傳性疾病、過敏癥、糖尿病、免疫缺陷紊亂、腫瘤性疾病、退行性疾病或老化 疾病的治療中使用。
17. 如權利要求16所述的組合物，其中所述β-菊糖是選自由以下組成的組的菊糖衍 生物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或還 原形式、和菊糖磷酸酯。
18. 如權利要求16或17所述的組合物，其中所述組合物在動物中經由TLR誘導免疫原 性應答。
19. 如權利要求16、17或18所述的組合物，其中所述組合物是疫苗。
20. 如權利要求19所述的組合物，其中所述組合物包括InAc微粒。
21. -種用于產生抗體的方法，所述方法包含用包含根據權利要求1-20的任一項的組 合物的制劑免疫動物或人，并且從所免疫的動物或人收集所述抗體。
22. 如權利要求21所述的方法，所述方法還包括刺激免疫細胞，其中所述免疫細胞是 巨噬細胞，其中所述抗體是單克隆抗體或來自多克隆血清的抗體，并且其中所述細胞在所 述刺激后收集。
23. -種用于產生抗血清的方法，所述方法包含用包含根據權利要求1-20的任一項的 組合物的制劑免疫動物或人，并從所免疫的動物或人，或從所免疫的動物或人的產物收集 所述抗血清，其中所述組合物遞送抗原至構成所述動物或人的免疫細胞作為TLR激動劑。
24. 如權利要求23所述的方法，其中所述抗血清包含抗體。
25. 如權利要求24所述的方法，其中所述抗體是單克隆抗體或來自多克隆血清的抗 體。
26. 如權利要求24或25所述的方法，其中所述動物是靈長類動物、狗、貓、奶牛、小羊、 豬、閹豬、家禽、馬、母馬、騾、雄性動物、雌性動物、駒、犢、一歲動物、公牛、牛、綿羊、山羊、美 洲鴕、野牛、水牛、羔羊、小山羊、小豬、母雞、小雞、火雞、鴨、鵝、鴕鳥、鳥、兔、野兔、豚鼠、倉 鼠、小鼠、大鼠、嚙齒動物、魚、水生動物或兩棲動物。
27. 如權利要求23-36的任一項所述的方法，其中所組合物通過注射、吸入、口服、直 腸、陰道、鼻、或局部來施用。
28. 權利要求1-18的任一項的微粒或納米顆粒作為佐劑的用途。
29. -種試劑盒，所述試劑盒包括： a) 包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)的微粒或納米顆粒的組合物； b) 任選的活性劑； c) 容器； d) -種或更多種緩沖液， e) 用于將活性劑與所述組合物締合的說明書；以及 f) 標簽。
30. 如權利要求29所述的試劑盒，其中所述活性劑選自由以下組成的組：抗原、DNA、 RNA、抗原肽、或抗原序列、免疫原、或免疫球蛋白。
31. 如權利要求29所述的試劑盒，所述試劑盒還包括用于在動物或人中產生抗血清的 說明書。
32. 如權利要求29所述的試劑盒，其中所述β-菊糖是選自由以下組成的組的菊糖衍 生物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或還 原形式、和菊糖磷酸酯。
33. 如權利要求30所述的試劑盒，其中所述活性劑包括細菌的溶解產物或病毒病原 體、癌細胞、或與病原體或疾病相關的其他生物組分。
34. 如權利要求33所述的試劑盒，其中所述生物組分包括肽、蛋白、脂質、DNA或多糖。
35. 如權利要求29所述的試劑盒，其中所述組合物包括InAc的微粒。
【文檔編號】A61P17/00GK104203218SQ201380015232
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2013年1月22日 優先權日:2012年1月20日
【發明者】海馬錢德·圖馬拉, 桑尼·庫馬爾 申請人:南達科他州立大學