大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，包括以下步驟：麻黃提取液的制備、麻黃總生物堿的含量測定、麻黃中三種主要成分含量測定、大孔樹脂的預處理、上樣、洗脫，提供了一種純化麻黃總生物堿的最佳工藝，操作簡便，得率高，為進一步的制劑學和藥效學研究提供借鑒。
【專利說明】大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝
【技術領域】
[0001]本發明屬于中藥領域，具體是一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝。
【背景技術】
[0002]餘黃Ephedrae ZferAa系麻黃植物草麻黃sinica Stapf,中麻黃intermedia Schrenk et CU.和木賊麻黃equisetina Bge的干燥草質莖，為《中國藥典》收載的傳統中藥。現代研究表明，麻黃中的總生物堿具有興奮中樞，鎮咳平喘、松弛氣管、降血壓、影響組織抗氧化功能、降低血糖[等藥理作用，是其發揮藥效的有效部位。
[0003]然而，麻黃總生物堿的分離純化研究鮮見報道，僅有使用樹脂對麻黃中單一組分——鹽酸麻黃堿進行純化工藝的考察，未能表明對麻黃總生物堿的純化情況。
[0004]

【發明內容】

[0005]為了解決上述技術問題，本發明提供了一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝。
[0006]一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于包括以下步驟:
1)精密稱取麻黃細粉適量，加入8倍量的0.5%鹽酸水溶液，60°C、250W超聲提取lh，抽濾，用旋轉蒸發儀減壓濃縮至所需濃度；` 2)精密吸取適量的麻黃供試品溶液，依次加入pH7.5磷酸鹽緩沖液10 mL, 0.05%溴麝香草酚藍溶液4 mL，絡合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取兩次，分取氯仿層，測定416nm波長處的吸光度值，以鹽酸麻黃堿為對照，計算總生物堿的含量；
3)取適量的麻黃供試品溶液，進行HPLC分析，測定麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿三種主要成分的含量；
4)將大孔樹脂置于燒杯中，用95%乙醇浸泡24h，使其充分膨脹，抽濾后加入95 %乙醇洗滌大孔樹脂至洗滌液加適量蒸餾水無白色渾濁現象，再用蒸餾水洗凈乙醇，真空抽濾后備用;
5)上樣、洗脫，其中上樣藥液pH為5—6，上樣濃度為0.1—0.15 g-mr1,上樣流速為
0.3—0.7 mLiirr1，洗脫劑體積為7.5—8 BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為0.8—1.2mT,?min-1n
[0007]所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟3)中色譜條件為:色譜柱 Agilent Zorbax SB-C18C250 mmX 4.6 mm, 5 U m), 0.1% 憐酸:乙臆=95:5,檢測波長為210 nm;柱溫30 V ;流速I mL.min—1，進樣量20 UL0
[0008]所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟4)中所述的大孔樹脂為HPD100型大孔樹脂。
[0009]所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟5)中上樣藥液pH為5.3—5.7，上樣濃度為0.11—0.13 g.mL—1，上樣流速為0.4—0.6 mLmirr1，洗脫劑體積為7.7—7.9 BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為0.9—1.1mL-1nin^10
[0010]所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟5)中上樣藥液pH為5.5，上樣濃度為0.12 g.mL—1，上樣流速為0.SmLmiiT1，洗脫劑體積為7.8 BV,洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為1.0mLmin'
[0011]本發明的大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，提供了一種純化麻黃總生物堿的最佳工藝，操作簡便，得率高，為進一步的制劑學和藥效學研究提供借鑒。
[0012]
【具體實施方式】[0013]儀器與試劑
Agilent 1260 Infinity 型高效液相色譜儀(美國 Agilent Technologies) ;UV_2800H型紫外可見分光光度計(尤尼克上海儀器有限公司)；SHA-A型恒溫數顯水浴振蕩器(上海雙舜實驗發展有限公司)；KQ-250E型數控超聲清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)，RE-52A型旋轉蒸發儀(上海亞榮生物儀器廠);METTLER AL104型萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器公司)。
[0014]大孔樹脂HPD100 (河北省滄州寶恩吸附材料科技有限公司)；溴麝香草酚藍(香港Fisher Science公司)；乙腈為色譜純(美國TEDIA公司)；乙醇、磷酸、鹽酸、氨水、氯仿等均為分析純；鹽酸麻黃堿對照品N0.171241-201007、鹽酸偽麻黃堿對照品N0.171237-201208、鹽酸甲基麻黃堿對照品N0.171247-200301 (中國藥品生物制品檢定所)，玻璃層析柱(內徑1.5cm，杭州匯普化工儀器有限公司訂制)。
[0015]藥材N0.201304購自浙江震元醫藥連鎖有限公司，由浙江中醫藥大學資源與鑒定教研室陳錫林副教授鑒定為草麻黃sinica的草質莖。
[0016]方法與結果
1)精密稱取麻黃細粉適量，加入8倍量的0.5%鹽酸水溶液，60°C、250W超聲提取lh，抽濾，用旋轉蒸發儀減壓濃縮至所需濃度；
2)精密吸取適量的麻黃供試品溶液，依次加入pH7.5磷酸鹽緩沖液10 mL, 0.05%溴麝香草酚藍溶液4 mL，絡合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取兩次，分取氯仿層，測定416nm波長處的吸光度值，以鹽酸麻黃堿為對照，計算總生物堿的含量；
3)取適量的麻黃供試品溶液，進行HPLC分析，測定麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿三種主要成分的含量，色譜條件為:色譜柱Agilent Zorbax SB-C18 (250 mmX 4.6 mm, 5 u m),0.1%磷酸:乙腈=95:5，檢測波長為210 nm ;柱溫30°C ;流速I mL.mirT1，進樣量20 u L ；
4)將HPD100型大孔樹脂置于燒杯中，用95%乙醇浸泡24h，使其充分膨脹，抽濾后加入95%乙醇洗滌大孔樹脂至洗滌液加適量蒸餾水無白色渾濁現象，再用蒸餾水洗凈乙醇，真空抽濾后備用；
5)上樣、洗脫，其中上樣藥液pH為5.5，上樣濃度為0.12 g-mr1,上樣流速為0.SmLmirT1，洗脫劑體積為7.8 BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為1.0mLmin'
[0017]經試驗驗證后，所得的麻黃總生物堿的綜合指標比吸附量為5.58 mg.g'綜合指標比解吸量為5.50 mg.g'接近預測值(綜合值依據麻黃總生物堿和三種主要成分的比吸附量、比解吸量用熵權法賦予相應的權重后計算得到)。[0018]將洗脫液旋轉蒸發儀蒸干得麻黃總生物堿純化物，測定其中總生物堿的含量和三種主要成分的含量，計算所得麻黃總生物堿及其三種主要成分的得率分別達到30.01%和28.63%，提升為純化前的2.18倍和2.25倍。
[0019]大孔樹脂具有物理化學穩定性高、選擇性好、再生處理方便等特點，本試驗所用HPD100型非極性大孔樹脂，相比其他大孔樹脂對麻黃總生物堿的吸附和解吸性能具有明顯優勢。平衡吸附量可達15.49 mg.g—1，靜態吸附率達到89.95 %和靜態解吸率達到85.48 %。一般情況下，非極性吸附樹脂適合從極性溶液吸附非極性物質，反之亦然。麻黃中生物堿成分極性較大，而HPD100型大孔樹脂對其有較大吸附量，可能與它具有較大的比面積650-700 (m2*g^),適當的平均孔徑90-100 (
I)有密切關系。
[0020]以上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改 、等同替換和改進等，均包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于包括以下步驟: 1)精密稱取麻黃細粉適量，加入8倍量的0.5%鹽酸水溶液，60°C、250W超聲提取lh，抽濾，用旋轉蒸發儀減壓濃縮至所需濃度； 2)精密吸取適量的麻黃供試品溶液，依次加入pH7.5磷酸鹽緩沖液10 mL, 0.05%溴麝香草酚藍溶液4 mL，絡合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取兩次，分取氯仿層，測定416nm波長處的吸光度值，以鹽酸麻黃堿為對照，計算總生物堿的含量； 3)取適量的麻黃供試品溶液，進行HPLC分析，測定麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿三種主要成分的含量； 4)將大孔樹脂置于燒杯中，用95%乙醇浸泡24 h，使其充分膨脹，抽濾后加入95 %乙醇洗滌大孔樹脂至洗滌液加適量蒸餾水無白色渾濁現象，再用蒸餾水洗凈乙醇，真空抽濾后備用; 5)上樣、洗脫，其中上樣藥液pH為5—6，上樣濃度為0.1—0.15 g-mr1,上樣流速為.0.3—0.7 mLiirr1，洗脫劑體積為7.5—8 BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為0.8—1.2mT.min-1n
2.如權利要求1所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟3)中色譜條件為:色譜柱 Agilent Zorbax SB-C18 (250 mmX4.6 mm, 5 u m), 0.1% 磷酸:乙腈=95:5，檢測波長為210 nm ;柱溫30 V ;流速I mL.min—1，進樣量20 u L。
3.如權利要求1所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟4)中所述的大孔樹脂為HPD100型大孔樹脂。
4.如權利要求1所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟5)中上樣藥液pH為5.3—5.7，上樣濃度為0.11—0.13 g.mL'上樣流速為0.4—0.6 mL*min_1,洗脫劑體積為7.7—7.9 BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為0.9— 1.1mL-1nin^10
5.如權利要求1所述的一種大孔樹脂純化麻黃總生物堿的工藝，其特征在于步驟5)中上樣藥液pH為5.5，上樣濃度為0.12 g-mr1,上樣流速為0.5mL*min^,洗脫劑體積為7.8BV，洗脫劑為95%的乙醇，洗脫流速為1.0mLmin'
【文檔編號】A61K125/00GK103800397SQ201410047475
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月11日 優先權日:2014年2月11日
【發明者】何昱, 萬海同, 鄭孟凱, 周惠芬, 陶雪芬 申請人:浙江中醫藥大學