中藥骨碎補(bǔ)黃酮羧甲基衍生物制備方法和臨床應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種骨碎補(bǔ)的黃酮類羧甲基衍生物的制備方法。本發(fā)明的目的可通過(guò)下述技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)：骨碎補(bǔ)—干燥—粉碎—乙醇提取—提取液離心過(guò)濾—減壓蒸餾除去乙醇—濃縮—干燥—羧甲基化反應(yīng)。該方法制備簡(jiǎn)單，產(chǎn)物易溶于水，治療效果好，原料來(lái)源廣，成本低廉，無(wú)副作用。研究表明，骨碎補(bǔ)的黃酮類提取物衍生物預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松疾病，效果顯著。
【專利說(shuō)明】中藥骨碎補(bǔ)黃酮羧甲基衍生物制備方法和臨床應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)臨床用藥，具體說(shuō)是涉及一種適用于骨質(zhì)疏松的治療與預(yù)防的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]骨質(zhì)疏松癥(OP)是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生退行性改變?yōu)樘卣?，?dǎo)致骨脆性增加及骨折發(fā)生率增高的全身性疾病，其最大危害是并發(fā)骨折。資料表明，美國(guó)現(xiàn)有1500~2000萬(wàn)OP患者，每年約有600萬(wàn)人因骨質(zhì)疏松而引起自發(fā)性骨折，其中近500萬(wàn)是絕經(jīng)期婦女。一般認(rèn)為，在我國(guó)50歲以內(nèi)人群中，OP發(fā)病率為15%~50%，60歲以上老年人OP發(fā)生率為56 %，而并發(fā)骨折者高達(dá)12 %。目前全世界患OP總?cè)藬?shù)超過(guò)2億，是位居第6位的常見(jiàn)病、多發(fā)病。因此，該病已越來(lái)越受到臨床醫(yī)生的重視。(冀依骨質(zhì)疏松藥物治療概述【D】天津藥學(xué)，2004，16 (2) =683-684.) 原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥嚴(yán)重影響著絕經(jīng)期婦女和老年人群的生活質(zhì)量，對(duì)其常規(guī)治療藥主要有三大類，第一類為促骨礦化劑，包括鈣劑和維生素D ;第二類為骨吸收抑制劑，涵概雙膦酸鹽，依普黃酮、雌激素或選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，降鈣素；第三類為骨形成促進(jìn)荊，如氟化物.甲狀旁腺激素等，三類藥物在骨質(zhì)疏松癥亞型的治療中各具優(yōu)勢(shì)，聯(lián)合治療相得益彰，成為臨床應(yīng)用的一線和首選藥。但是這些藥物價(jià)錢(qián)昂貴，而且有副作用。
[0003]骨碎補(bǔ)(Drynariae Rhizoma)為水龍骨科植物槲蕨的干燥根莖,是著名的骨傷科常用中藥。其性溫，味苦歸腎、肝經(jīng)，具有療傷止痛，補(bǔ)腎強(qiáng)骨，外用消風(fēng)祛斑的功效。臨床上用于治療跌撲閃挫，筋骨折傷，腎虛腰痛，筋骨痿軟，耳鳴耳聾，牙齒松動(dòng)；外治斑禿，白癜風(fēng)。據(jù)現(xiàn)代研究，骨碎補(bǔ)中的黃酮類化合物是其主要活性成分，有促進(jìn)骨折愈合、防治骨質(zhì)疏松、抗氧化、調(diào)血脂、抗炎、鎮(zhèn)痛等生物活性。骨碎補(bǔ)的黃酮類化學(xué)成分4個(gè)化合物，分別為木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷、北美素、柚皮素、山奈酚。(陳宏斌，張東.骨碎補(bǔ)黃酮類活性化學(xué)成分的研究，陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)[j]，2012，35 (5):96-97)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種用于骨質(zhì)疏松的治療和預(yù)防的骨碎補(bǔ)黃酮提取物衍生物的制備方法。
[0005]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是制備方法制備簡(jiǎn)單，且易溶于水，治療效果好，原料來(lái)源廣，成本低廉，無(wú)副作用。
[0006]本發(fā)明的目的可通過(guò)下述技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn):骨碎補(bǔ)-干燥-粉碎-乙醇提取-提取液離心過(guò)濾-減壓蒸餾除去乙醇-濃縮-干燥-全乙酰化反應(yīng)
[0007]骨碎補(bǔ)黃酮的提取:骨碎補(bǔ)80°C干燥5h，取出粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，精密稱取骨碎補(bǔ)粉末30g，加人300mL95 %乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓蒸餾回收溶劑至少量，提取液經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到黃色固體，即為骨碎補(bǔ)黃酮提取物，收率約3%。[0008]骨碎補(bǔ)黃酮衍生物制備:
按每100g骨碎補(bǔ)黃酮加入200-250ml (2mol/L)的氫氧化鈉液體和15g —氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g骨碎補(bǔ)黃酮再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到骨碎補(bǔ)黃酮衍生物，生成物干燥。
[0009]所述的藥物組合物，在制備促進(jìn)人骨質(zhì)疏松的治療和預(yù)防中的應(yīng)用。
[0010]為了進(jìn)一步的驗(yàn)證本發(fā)明成品制劑的療效，我們將上述具體制備方法中制備的藥物進(jìn)行了相應(yīng)的動(dòng)物試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。 [0011]目的:探討骨碎補(bǔ)黃酮衍生物對(duì)骨質(zhì)疏松的治療的影響，有效地開(kāi)發(fā)中藥骨碎補(bǔ)黃酮提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).[0012]方法:
[0013]動(dòng)物分組及模型制備:取6月齡清潔級(jí)雎性SD大鼠30只。體重約261±12g。隨機(jī)分為治療組、對(duì)照組2組，每組15只大鼠。兩組大鼠均于每日上午灌服維甲酸75mg/kg，連續(xù)灌胃15d造成骨質(zhì)疏松模型。
[0014]給藥方法:在大鼠造模的同時(shí)，實(shí)施灌胃給藥，治療組大鼠予骨碎補(bǔ)黃酮衍生物10mg/kg/d，對(duì)照組大鼠予灌胃等體積的生理鹽水。續(xù)灌胃21d，并于最后一次給藥后12h處死全部大鼠.[0015]標(biāo)本采集與組織學(xué)處理:取大鼠股骨做組織學(xué)制備。每組標(biāo)本隨機(jī)抽取5個(gè)骨折斷端進(jìn)行脫鈣石蠟切片。股骨用4% PFA加0.1M磷酸緩沖液調(diào)整PH值為7.2，室溫固定3d。然后用20% EDTA加0.1M磷酸緩沖液調(diào)整PH值為7.2，浸泡8~IOd脫鈣。再經(jīng)系列乙醇脫水，石蠟包埋，沿股骨干長(zhǎng)軸方向行厚度切成5 μ m厚片，行HE染色。隨機(jī)取5張股骨片，分別在X 400奧林巴斯FV1000放大激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察。
[0016]結(jié)果與結(jié)論:
[0017]與對(duì)照組相比，模型組大鼠股骨骨小梁面積、平均骨小梁厚度、骨小梁密度顯著降低，而髓腔質(zhì)間隔寬度則明顯增加；經(jīng)過(guò)骨碎補(bǔ)黃酮提取物衍生物治療后，治療組大鼠股骨平均骨小梁密度，平均骨小梁厚度和骨小梁面積較模型組均顯著上升，同時(shí)髓腔質(zhì)間隔寬度明顯下降；說(shuō)明骨碎補(bǔ)黃酮衍生物能有效促進(jìn)骨細(xì)胞生長(zhǎng)，可治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01)。
[0018]【具體實(shí)施方式】
以下是本
【發(fā)明內(nèi)容】
的具體實(shí)施例，用于闡述本申請(qǐng)文件中所要解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為治療21d后模型組大鼠股骨病理片。模型組大鼠股骨骨小梁面積、平均骨小梁厚度、骨小梁密度顯著降低，而髓腔質(zhì)間隔寬度則明顯增加(sp，400X)。
[0020]圖2為治療21d后治療組大鼠股骨病理片。治療組大鼠股骨平均骨小梁密度，平均骨小梁厚度和骨小梁面積較模型組均顯著上升，同時(shí)髓腔質(zhì)間隔寬度明顯下降(SP，400 X) ο
[0021]實(shí)施例[0022]骨碎補(bǔ)黃酮的提取:骨碎補(bǔ)80°C干燥5h，取出粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，精密稱取骨碎補(bǔ)粉末30g，加人300mL95 %乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓蒸餾回收溶劑至少量，提取液經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到黃色固體，即為骨碎補(bǔ)黃酮提取物，收率約3%。
[0023]骨碎補(bǔ)黃酮衍生物制備:按每100g骨碎補(bǔ)黃酮加入200_250ml (2mol/L)的氫氧化鈉液體和15g—氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g骨碎補(bǔ)黃酮再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24 h，得到骨碎補(bǔ)黃酮衍生物，生成物干燥。
【權(quán)利要求】
1.一種骨碎補(bǔ)的黃酮羧甲基衍生物的制備方法，其特征在于骨碎補(bǔ)經(jīng)乙醇提取，減壓回收溶劑，濃縮，干燥得提取物；然后按每100g骨碎補(bǔ)黃酮加入200-250ml (2mol/L)的氫氧化鈉液體和15g—氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g骨碎補(bǔ)黃酮再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到骨碎補(bǔ)黃酮衍生物，生成物干燥。
2.根據(jù)權(quán)利I 所述的骨碎補(bǔ)的黃酮提取物羧甲基衍生物，在制備促進(jìn)人骨質(zhì)疏松的治療和預(yù)防中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/11GK103919820SQ201410142875
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月2日
【發(fā)明者】郭宏昌 申請(qǐng)人:郭宏昌