人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效保健食品中的應用，所述復合多糖為人參和何首烏復合多糖，該復合多糖以人參和/或何首烏為原料，經水提、濃縮和醇沉工藝獲得，本發明中的復合多糖經秀麗線蟲模型實驗證實，其能夠有效延長野生型、氧化脅迫模型和蛋白聚集毒性模型的平均壽命，作用途徑與提高線蟲抗氧化能力、抑制毒性蛋白脅迫、增強熱休克蛋白活性和調節胰島素信號通路關鍵節點密切相關，表明其具有良好的延緩衰老和防治衰老相關疾病的作用。
【專利說明】人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用

【技術領域】
[0001]本發明屬于健康食品/保健食品【技術領域】，具體涉及一種人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用。
技術背景
[0002]現代研究表明，衰老是體內外多種脅迫因素共同作用的結果，同時這些脅迫條件和衰老本身也是多種疾病病理進程中的重要影響因素。例如，氧化應激、毒性聚集蛋白與生物體衰老以及神經退行性疾病和腫瘤等多種疾病密切相關。盡管衰老是不可避免的自然規律，但延緩衰老是可能的。隨著全球人口老齡化的問題日益嚴峻，衰老相關疾病的發病率也在逐年上升。除了利用醫藥手段治療已有疾病不適之外，在日常生活中積極進行養生保健、預防衰老的必要性和需求正在逐步擴大。因此，加強對延緩衰老及防治衰老相關疾病的策略研究具有重大的民生意義，已成為了當今保健食品領域研發的重點和熱點。
[0003]秀麗線蟲(Caenorhabditis elegans)是一種研究衰老及相關疾病常用的模式動物，具有生命周期短、實驗操作簡單、遺傳資源豐富等突出優點。此外，它還是第一個完成全基因組測序的多細胞生物，其基因組含有2/3的人類疾病相關基因，而且容易構建轉基因疾病模型，利用GFP標記和全基因組RNAi技術，可以在個體水平上對退行性病變及潛在藥物進行系統完整的終身跟蹤研究，這對衰老及相關疾病研究顯得尤為重要。因此，秀麗線蟲的廣泛應用極大地推進了衰老相關病理機制的闡釋和活性化合物的研發。
[0004]我國豐富的中草藥種類為延緩衰老和防治相關神經退行性疾病提供了龐大的資源庫，其中藥食同源品種無疑具有巨大的醫療藥用和營養保健價值。例如，人參是我國傳統的補氣類中藥，具有補脾益肺、安神益智、補元固脫和生津止渴等功效；何首烏作為著名的補血類中藥，具有補肝腎、益精血、烏須發和強筋骨等抗衰老功效。現代研究表明，這些抗衰老中草藥來源的多糖也具有延緩衰老及防治相關疾病的潛在生物學活性。然而，由于衰老及其相關疾病的發生和發展具有多因性、復雜性和潛伏性，單一多糖可能存在作用靶點有限、活性功能不足等問題，因此擴大并增強多糖活性對于深入開發和改良多糖類產品是必不可少的。最近有研究表明，黃芪多糖和硫酸化淫羊藿多糖聯用可以提高雞免疫系統功能，從而緩解環磷酰胺致免疫抑制；刺五加多糖可協同增強二甲雙胍對糖尿病小鼠的治療作用。這些研究表明中藥多糖與其它化合物聯用或復合多糖具有增強治療作用的效果。因此，加強復合多糖在抗衰老功效方面的研究不僅有利于推動其在醫藥保健領域的深入應用，拓寬多糖產品的應用范圍，還能為衰老及其相關疾病的防治提供新的活性物質。


【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品(健康食品或功能食品)中的應用。
[0006]本發明所述的上述目的是通過以下技術方案來實現的:上述人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品(健康食品或功能食品)中的應用。
[0007]本發明所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比優選為1:4 ?9:1。
[0008]本發明所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比進一步可以優選為2:3?2:1。
[0009]作為本發明的一種優選的實施方式:本發明所述的人參和何首烏復合多糖優選通過以下方法制備獲得:以人參和何首烏為原料，經含水提、濃縮和醇沉工序制備獲得復合多糖，所述的復合多糖具有抗衰老作用，能夠制備具有抗衰老功效的保健食品。
[0010]在該人參和何首烏復合多糖的制備方法中:
[0011]本發明所述的人參和何首烏的質量配比優選為1:4?9:1。
[0012]本發明所述的人參和何首烏的質量配比較佳為2:3?2:1。
[0013]水提時，人參和何首烏藥材與水的質量體積比為1:2?1:20，提取溫度為50?100°c，提取時間為I?1h ;濃縮時，濃縮溫度為40?100°C;醇沉時，乙醇和濃縮液的體積比為2:1?9:1。
[0014]人參是指人參的藥用部位根部，何首烏是指何首烏的藥用部位塊根。
[0015]作為本發明的另一種優選的實施方式:本發明所述的人參和何首烏復合多糖優選通過以下方法制備獲得:以人參或何首烏為原料，經含水提、濃縮和醇沉工序制備獲得人參多糖或何首烏多糖，再將二者按計量比混合，制備獲得人參和何首烏復合多糖，所述的復合多糖具有抗衰老作用，能夠制備具有抗衰老功效的保健食品。
[0016]在該人參和何首烏復合多糖的制備方法中:
[0017]水提時，人參或何首烏藥材與水的質量體積比為1:2?1:20，提取溫度為50?100°c，提取時間為I?1h ;濃縮時，濃縮溫度為40?100°C;醇沉時，乙醇和濃縮液的體積比為2:1?9:1。
[0018]所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比優選為1:4?9:1。
[0019]所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比進一步可以優選為2:3?2:1。
[0020]人參是指人參的藥用部位根部，何首烏是指何首烏的藥用部位塊根。
[0021]本發明所述的抗衰老功效是指在體內外脅迫條件下對生物體壽命的延長作用以及對這些脅迫因素誘導病癥的改善作用。
[0022]本發明提供的人參和何首烏復合多糖具有抗衰老功效具體可以體現在其能夠在整體動物水平上延長秀麗線蟲模型在正常衰老、氧化脅迫和毒性蛋白脅迫條件下的壽命，其作用方式與降低線蟲體內活性氧自由基水平和脂質過氧化物含量、提高抗氧化酶活力、抑制多聚谷氨酰胺和β -淀粉樣蛋白聚集及其毒性、增強熱休克蛋白活性以及調控胰島素信號通路關鍵節點密切相關，因此可用于延緩衰老以及防治以氧化脅迫和蛋白質異常聚集為主要病理機制的衰老相關疾病。
[0023]本發明所述保健食品的劑型可以為膠囊、粉劑、顆粒劑、片劑或口服液等。如可以將上述復合多糖添加其它原料如乳清蛋白、輔料如麥芽糊精，可制備成為具有抗衰老功效的健康食品或保健食品。
[0024]本發明具有如下優點:
[0025](I)本發明中的人參和何首烏復合多糖，其制備工藝簡潔完善，穩定高效，適合大規模生產；
[0026](2)本發明制備的人參和何首烏復合多糖經證明其在秀麗線蟲整體動物水平上能夠延緩衰老，對衰老相關的氧化脅迫、蛋白質異常聚集及毒性均有抑制作用，表明其可應用于具有抗衰老功效的固液制劑健康食品或保健食品中，為衰老相關疾病的防治和健康老齡化提供了新型方案，并能促進多糖產品的深入應用和中藥現代化發展。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]下面通過【具體實施方式】及藥效學研究結果對本發明作進一步說明。
[0028]圖1為實施例7中采用實施例1中人參和何首烏復合多糖和單一多糖對秀麗線蟲在正常、氧化脅迫以及毒性蛋白脅迫條件下壽命作用的數據表征圖，其中圖1A表征2mg/mL復合多糖、人參多糖和何首烏多糖對秀麗線蟲N2的壽命延長作用，圖1B表征2mg/mL復合多糖、人參多糖和何首烏多糖對秀麗線蟲N2在百草枯氧化脅迫下的壽命延長作用，圖1C表征2mg/mL復合多糖、人參多糖和何首烏多糖對秀麗線蟲CL2355的壽命延長作用，圖1D表征2mg/mL復合多糖、人參多糖和何首烏多糖對秀麗線蟲HA759的壽命延長作用；
[0029]圖2為實施例8中采用實施例2中人參和何首烏復合多糖降低秀麗線蟲體內活性氧水平的數據表征圖，其中圖2A表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖降低秀麗線蟲N2體內活性氧自由基水平，圖2B表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖降低秀麗線蟲CL2355體內活性氧自由基水平，圖2C表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖降低秀麗線蟲HA759體內活性氧自由基水平，其中*代表p〈0.05 ；
[0030]圖3為實施例10中采用實施例3中人參和何首烏復合多糖抑制秀麗線蟲CL2355體內淀粉樣蛋白毒性的數據表征圖，其中圖3Α表征2mg/mL復合多糖對秀麗線蟲CL2355趨化行為影響的示意圖，圖3B表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖改善秀麗線蟲CL2355的趨化能力，其中*代表ρ〈0.05 ；
[0031]圖4為實施例11中采用實施例3中人參和何首烏復合多糖抑制秀麗線蟲ΗΑ759體內多聚谷氨酰胺毒性的數據表征圖，其中圖4Α表征未經處理和經2mg/mL復合多糖處理的HA759秀麗線蟲ASH神經元示意圖，圖4B表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖抑制HA759秀麗線蟲體內多聚谷氨酰胺聚集毒性，圖4C表征lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖改善多聚谷氨酰胺聚集毒性導致的行為學缺陷，其中*代表P〈0.05 ；
[0032]圖5為實施例12中采用實施例4中人參和何首烏復合多糖對秀麗線蟲體內熱休克蛋白調控作用的數據表征圖，其中圖5A表征2mg/mL復合多糖對秀麗線蟲CL2070體內HSP16.2表達影響的示意圖，圖5B表征2mg/mL復合多糖促進秀麗線蟲CL2070體內HSP16.2的表達，其中*代表P〈0.05 ；
[0033]圖6為實施例13中采用實施例5中人參和何首烏復合多糖對秀麗線蟲體內胰島素信號通路調控作用的數據表征圖，其中圖6A表征2mg/mL復合多糖對秀麗線蟲CB1370壽命的延長作用，圖6B表征2mg/mL復合多糖對秀麗線蟲TJ1052壽命的延長作用，圖6C表征2mg/mL復合多糖對秀麗線蟲DR26壽命的影響，圖6D表征2mg/mL復合多糖促進秀麗線蟲TJ356體內DAF-16的入核。

【具體實施方式】
[0034]下面列舉一部分具體實施例對本發明進行說明，有必要在此指出的是以下具體實施例只用于對本發明作進一步說明，不代表對本發明保護范圍的限制。其他人根據本發明做出的一些非本質的修改和調整仍屬于本發明的保護范圍。
[0035]實施例1
[0036]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比1:1進行混合，其中人參是指人參的藥用部位根部，何首烏是指何首烏的藥用部位塊根，下同，粉碎后按照料液比l:10(g/mL)加水，在90°C下加熱攪拌提取4h。過濾獲得的藥渣按照料液比為l:5(g/mL)加水，在90°C下繼續提取4h。合并兩次提取液，經過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照1:4體積比將4倍體積95% (體積百分含量，下同)乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0037]或將人參粉碎后按照料液比1:10 (g/mL)加水，在90°C下加熱攪拌提取4h。過濾獲得的藥渣按照料液比為l:5(g/mL)加水，在90°C下繼續提取4h。合并兩次提取液，經過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照1:4體積比將4倍體積95 %乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得人參多糖，何首烏多糖的制備方法同人參多糖，將何首烏多糖與人參多糖按1:1的質量配比混勻，制備獲得人參和何首烏復合多糖。
[0038]采用第一種方法和第二種方法制備的人參和何首烏復合多糖，二者性能等基本相同，無論采用哪一種方法制備人參和何首烏復合多糖均可。
[0039]實施例2
[0040]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比2:3進行混合，粉碎后按照料液比l:15(g/mL)加水，在90°C下加熱攪拌提取6h。減壓濃縮后離心獲得澄清濃縮液，按照1:3體積比將3倍體積95%乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0041]本實施例也可以同實施例1中一樣分別采用人參或何首烏為原料，制備人參和何首烏復合多糖。
[0042]實施例3
[0043]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比3:2進行混合，粉碎后按照料液比l:10(g/mL)加水，在95°C下加熱攪拌提取3h。過濾獲得的藥渣按照上述料液比、溫度和時間繼續提取一次。合并兩次提取液，經過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照I: 2體積比將2倍體積95 %乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0044]本實施例也可以同實施例1中一樣分別采用人參或何首烏為原料，制備人參和何首烏復合多糖。
[0045]實施例4
[0046]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比2:1進行混合，粉碎后按照料液比1:5 (g/mL)加水，在75°C下加熱攪拌提取3h。過濾獲得的藥渣按照上述料液比、溫度和時間繼續提取兩次。合并三次提取液，經過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照I: 9體積比將9倍體積95 %乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0047]本實施例也可以同實施例1中一樣分別采用人參或何首烏為原料，制備人參和何首烏復合多糖。
[0048]實施例5
[0049]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比4:1進行混合，粉碎后按照料液比1:20 (g/mL)加水，在80°C下加熱攪拌提取10h。減壓濃縮后離心獲得澄清濃縮液，按照1:4體積比將4倍體積95%乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0050]本實施例也可以同實施例1中一樣分別采用人參或何首烏為原料，制備人參和何首烏復合多糖。
[0051]實施例6
[0052]本實施例提供的一種人參和何首烏復合多糖，其通過如下方法制備獲得:將人參和何首烏藥材按照重量比9:1進行混合，粉碎后按照料液比l:15(g/mL)加水，在50°C下加熱攪拌提取lh，提取3次，合并濾液，減壓濃縮后離心獲得澄清濃縮液，按照2:1體積比將
0.5倍體積95%乙醇加入濃縮液中，混勻后于4°C下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經過真空冷凍干燥即獲得復合多糖。
[0053]本實施例也可以同實施例1中一樣分別采用人參或何首烏為原料，制備人參和何首烏復合多糖。
[0054]實施例7
[0055]壽命長短是衡量生物體衰老最直接和重要的指標之一。因此,通過研究復合多糖對秀麗線蟲在正常和脅迫條件下的壽命調控作用，可以直觀地判斷多糖是否具有延緩衰老和改善衰老相關病癥的潛在活性。首先通過同步化操作準備大量LI期野生型秀麗線蟲N2，加入SMedium調整蟲密度至10?20條/10 μ L，再加入大腸桿菌0Ρ50使0D570 ^ 0.4，在20 V下培養42?45h后，線蟲即進入L4期。取適量蟲液，加入S Medium稀釋蟲密度至10?20 條 /100 μ L，同時補充 0Ρ50 使 0D570 ^ 0.6,再依次加入 100 μ g/mL5_FUDR 溶液、50 μ g/mL羧芐青霉素溶液和0.1 μ g/mL兩性霉素溶液，將調整好的蟲液在20°C下繼續培養2d至成蟲初期。將蟲液按照90 μ L/孔加入96孔板中，復合多糖組加入10 μ L由實施例1制得的復合多糖。單一多糖組分別加入10 μ L由實施例1制得的人參多糖和何首烏多糖。復合多糖和單一多糖的終濃度均為2mg/mL。對照組加入10 μ LS Medium。多糖組和對照組均各設10個平行孔。然后用parafilm封蓋，在酶標儀上振蕩30sec使多糖和蟲液混合均勻。將準備好的96孔板置于20°C下培養，以開始給藥為第O天，每隔2d統計每孔中秀麗線蟲的存活狀況，直至其全部死亡。統計過程中將身體僵直不動并對輕微震動無反應的秀麗線蟲判斷為死亡狀態。秀麗線蟲存活率用Kaplan-Meier法進行分析,并以log-rank test比較多糖組與對照組的差異性。
[0056]結果如圖1A所示，在正常條件下，野生型秀麗線蟲N2的平均壽命為23.6d。當給予2mg/mL多糖后，復合多糖(26.9d)和人參多糖(26.3d)均表現出壽命延長作用，而何首烏多糖(23.2d)對線蟲壽命的影響不大。
[0057]自由基學說是在衰老機制方面得到了廣泛研究證實的權威學說之一。該理論認為，大量自由基所誘導的氧化應激破壞了細胞內核酸、蛋白質和脂類等大分子的結構和功能，能夠引起細胞功能失常甚至衰退死亡。盡管氧化應激并不是導致衰老的唯一因素，但是其在衰老及多種相關疾病的發生發展過程中扮演了重要角色。因此，減輕氧化應激壓力無疑有利于延緩衰老和緩解衰老相關病癥。將實施例1制得的復合多糖，以2mg/mL濃度加入經5-FUDR處理的L4期N2幼蟲中，同時以10mM百草枯進行氧化脅迫造模。單一多糖組為分別加入由實施例1制得的人參多糖和何首烏多糖，多糖濃度均為2mg/mL。對照組以等體積的S Medium代替多糖溶液。給藥后于20°C中培養，以加入多糖和百草枯的時間計為第0h，每隔12h統計秀麗線蟲的存活狀況，直至其全部死亡。秀麗線蟲死亡狀態判斷和存活率統計方法如上所述。
[0058]結果如圖1B所示，百草枯產生的急性氧化脅迫將導致秀麗線蟲快速死亡，對照組的平均存活時間為55.2h，而分別采用2mg/mL復合多糖、人參多糖和何首烏多糖處理后，秀麗線蟲的平均存活時間延長至64.1h,59.7h和62.Sh0相比于單一多糖處理，復合多糖在氧化脅迫下的壽命延長作用更加顯著。
[0059]蛋白質的動態平衡是維持細胞生理功能的重要條件。研究表明，在外界環境和體內生理條件改變所產生的脅迫影響下，細胞蛋白質的合成、修飾、折疊和降解等生化過程往往會受到破壞，從而擾亂了蛋白動態平衡，影響正常生理功能的發揮并誘導細胞衰老和病變。以常見老年病如阿爾茨海默癥和亨廷頓舞蹈癥中的關鍵致病蛋白A β 42 ( β -淀粉樣蛋白 42 片段，β -amyloid peptide42, Αβ 42)和 polyQ(多聚谷氨酰胺，polyglutamine,polyQ)為毒性誘導物，通過在秀麗線蟲中表達這些毒性易聚蛋白來誘導衰老相關的病癥，比如壽命縮短和行為異常等，從而研究復合多糖對衰老相關疾病癥狀的改善作用。將實施例I制得的復合多糖，以2mg/mL濃度分別加入經5-FUDR處理的L4期CL2355 (泛神經元表達Αβ42)和HA759(ASH神經元中表達polyQ40)幼蟲中。單一多糖組為分別加入由實施例1制得的人參多糖和何首烏多糖，多糖濃度均為2mg/mL。對照組以等體積的S Medium代替多糖溶液。將準備好的96孔板置于20°C下培養，以開始給藥為第O天，每隔2d統計每孔中秀麗線蟲的存活狀況，直至其全部死亡。秀麗線蟲死亡狀態判斷和存活率統計方法如上所述。
[0060]結果如圖1C和ID所示，在毒性蛋白脅迫條件下，CL2355秀麗線蟲的平均壽命為
21.4d。分別采用2mg/mL復合多糖和人參多糖處理后，秀麗線蟲的平均壽命延長至23.8d和
22.5d，而2mg/mL何首烏多糖(21.7d)不能延長CL2355秀麗線蟲的平均壽命；對于HA759秀麗線蟲，復合多糖、人參多糖和何首烏多糖能夠將其平均壽命由22.9d分別延長至25.5d、24.6d和24.3d。相比于單一多糖處理，復合多糖在毒性蛋白脅迫下的壽命延長作用更加顯著。
[0061]以上結果顯示，復合多糖能夠在整體動物水平上顯著延長秀麗線蟲在正常條件、氧化脅迫條件和毒性蛋白脅迫條件下的壽命，表明其具有良好的抗衰老作用。
[0062]實施例8
[0063]根據自由基學說的觀點，降低體內活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平將有助于減少氧化脅迫傷害，對衰老的延緩可能有所裨益。將實施例2制得的復合多糖，以lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL濃度分別加入LI期的N2、CL2355和HA759幼蟲中。對照組為加入等體積的S Medium。在15°C下培養3天后收集秀麗線蟲，加入含I %吐溫20的PBS,在冰上勻漿后加入DCFH-DA探針溶液(ROS水平指示劑)，在37°C下避光孵育，然后用熒光酶標儀檢測熒光值，激發波長為485nm，發射波長為530nm。相對熒光強度以mean土 SEM表示，采用T檢驗比較復合多糖組和對照組的差異性。
[0064]結果如圖2所示，N2秀麗線蟲的DCF相對熒光值為49.3，2mg/mL和4mg/mL復合多糖處理能夠分別降低DCF相對熒光值至40.7和36.9 ；CL2355秀麗線蟲的DCF相對熒光值為61.3,采用lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL復合多糖處理后,DCF相對突光值分別下降至52.8、45.7和43.5 ；HA759秀麗線蟲的DCF相對熒光值為53.9，2mg/mL和4mg/mL復合多糖處理能夠分別降低DCF相對熒光值至44.2和42.5。這些結果表明復合多糖能夠顯著降低秀麗線蟲體內的ROS水平，具有良好的體內抗氧化活性。
[0065]實施例9
[0066]由于氧化損傷與ROS水平和氧化產物有關，因此通過提高ROS清除能力(如抗氧化酶)和降低過氧化產物(如丙二醛)，可以達到減少氧化損傷的目的。首先準備處于成蟲初期的N2、CL2355和HA759秀麗線蟲，調整蟲密度為40-50條/100 μ L，將蟲液按照
0.9mL/孔加入24孔板中，在25°C下繼續培養18d。將實施例2制得的復合多糖，以2mg/mL濃度加入到秀麗線蟲中，對照組加入0.1mL S Medium。在25°C下繼續培養2d后，收集蟲液并離心獲得線蟲，然后加入ImL預冷S Medium重懸線蟲，再加入ImL預冷60%蔗糖溶液，混勻后在5min內離心，吸取上層漂浮有線蟲的液體，再用ImL S Medium洗滌3次以除去蔗糖。用ImL PBS重懸線蟲，在冰水浴中超聲勻漿lOmin。離心收集上清即酶液，采用BCA蛋白質定量法測定蛋白質濃度，并利用碧云天檢測試劑盒分別測定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、過氧化氫酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutath1ne peroxidase, GPX)活力以及丙二醒(Malondialdehyde, MDA)含量。
[0067]結果如下表I所示，與未處理的秀麗線蟲N2相比，復合多糖能夠顯著提高SOD和GPX活力并降低MDA含量；對于CL2355和HA759秀麗線蟲，復合多糖能夠顯著提高S0D、CAT和GPX活力并降低MDA含量。這些結果表明復合多糖能夠通過提高秀麗線蟲抗氧化能力和減少過氧化產物來清除ROS并降低氧化損傷，具有良好的體內抗氧化活性。
[0068]表I為復合多糖在2mg/mL濃度下對秀麗線蟲N2、CL2355和HA759體內抗氧化酶SOD、CAT和GPX活性以及脂質過氧化物MDA含量影響的數據表征表
[0069]

【權利要求】
1.人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用。
2.根據權利要求1所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比為1:4 ?9:1。
3.根據權利要求2所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:所述人參和何首烏復合多糖中人參多糖與何首烏多糖的質量配比為2:3 ?2:1。
4.根據權利要求1-3任一項所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:所述的人參和何首烏復合多糖通過以下方法制備獲得:以人參或何首烏為原料，經含水提、濃縮和醇沉工序制備獲得人參多糖或何首烏多糖，再將二者按計量比混合，制備獲得人參和何首烏復合多糖，或所述的人參和何首烏復合多糖通過以下方法制備獲得:以人參和何首烏為原料，經含水提、濃縮和醇沉工序制備獲得人參和何首烏復合多糖；所述的復合多糖具有抗衰老作用，能夠制備具有抗衰老功效的保健食品。
5.根據權利要求4所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:以人參或何首烏為原料時，所述人參多糖和何首烏多糖的質量配比為1:4?9:1，以人參和何首烏為原料時，所述的人參和何首烏的質量配比為1:4?9:1。
6.根據權利要求5所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:以人參或何首烏為原料時，所述人參多糖和何首烏多糖的質量配比為2:3?2:1，以人參和何首烏為原料時，所述的人參和何首烏的質量配比為2:3?2:1。
7.根據權利要求4所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:水提時，人參和/或何首烏藥材與水的質量體積比為1:2?1:20，提取溫度為50?100°C，提取時間為I?1h ;濃縮時，濃縮溫度為40?100°C;醇沉時，乙醇和濃縮液的體積比為2:1?9:1。
8.根據權利要求4所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:人參是指人參的藥用部位根部，何首烏是指何首烏的藥用部位塊根。
9.根據權利要求1所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:所述的抗衰老功效是指在體內外脅迫條件下對生物體壽命的延長作用以及對這些脅迫因素誘導病癥的改善作用。
10.根據權利要求1所述的人參和何首烏復合多糖在制備具有抗衰老功效的保健食品中的應用，其特征是:所述保健食品的劑型為膠囊、粉劑、顆粒劑、片劑或口服液。
【文檔編號】A61K31/715GK104171797SQ201410361618
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月28日 優先權日:2014年7月28日
【發明者】胡明華, 梁明, 李海峰, 馬方勵 申請人:無限極（中國）有限公司