一種中藥刺激性評價的檢測方法
【專利摘要】本發明提供了一種中藥刺激性評價的檢測方法，該方法是將中藥原液或提取液，皮下注射到實驗動物的足趾，以動物的提足次數反應藥物刺激所導致的疼痛，以腫脹度反應藥物刺激所引導的炎癥，結合疼痛和炎癥，綜合評價藥物的刺激性。經過對蟾酥、斑蝥、華蟾素注射液、得力生注射液等2種生藥和2種注射液的檢驗，表明該方法可有效地評價藥物刺激性的強弱。方法具有靈敏、直觀、簡便、快捷的優勢，可廣泛用于各種中藥刺激性的評價和檢驗。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種檢測方法，具體設計一種廣泛適用于中藥刺激性評價的檢測方 法。 一種中藥刺激性評價的檢測方法

【背景技術】
[0002] 中藥作為有效防治疾病的手段，其對疾病的治療理念順應了二十一世紀醫藥學發 展的新趨勢，展示出了強大的生命力和廣闊的發展前景。中藥在當前中西醫院臨床中的使 用也在明顯增加，特別是中藥在西醫院臨床創新藥物中的排名已大大提高。中藥的銷售額 近年來不斷加大，如文山市的三七，年銷售額近50億。
[0003] 但是中藥在臨床使用時經常有不良反應發生，具有安全隱患。不良反應類型多樣， 最常發生的是藥物刺激性。例如，華蟾素注射液具有抗腫瘤的作用，但是對血管有刺激性； 六神丸成分較多，對機體產生一定的刺激性。溶血反應也是藥物刺激性反應的一種表現形 式，例如魚腥草注射液中吐溫-80超標容易引起溶血。此外，還涉及心血管系統、消化系統、 神經系統、泌尿系統、感覺器官、皮膚及其附件等多個系統的不良反應。一定程度上限制了 中藥的用藥安全和新藥開發。
[0004] 對于中藥刺激性，有效的檢驗和檢測方法至關重要。近年來關于刺激性評價的動 物模型研究較多，一般為局部刺激實驗，如兔眼刺激試驗等。但是這些模型缺乏明顯直觀且 可定量化的疼痛與炎癥指標，需要發展新的藥物刺激性評價方法。本發明利用藥物刺激大 鼠足趾模型，以提足次數（疼痛）和腫脹度（炎癥）兩個指標來評價藥物的刺激性，建立一 種直觀、簡單和實用的中藥刺激性評價方法。


【發明內容】

[0005] 發明目的：本發明所要解決的技術問題是克服現有技術不能有效檢測中藥刺激性 的不足，提供一種具有普適性，且直觀、方便、快捷的中藥刺激性評價方法。
[0006] 技術方案：為了實現以上目的，本發明采取的技術方案為：
[0007] -種中藥刺激性評價的檢測方法，將藥物原液或將藥物原液濃縮富集后，皮下注 入實驗動物足趾，計算提足次數，測量足趾腫脹度和記錄注射藥液前后的足趾體積來評價 中藥刺激性。
[0008] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，藥物原液濃縮富集的方 法包括超濾濃縮、干燥濃縮、離心濃縮。
[0009] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，藥物原液濃縮富集的倍 數為1-100倍。更加優選將藥物原液濃縮富集10倍。
[0010] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，藥物原液的濃度為 0· l-1000mg/ml。特別優選的藥物原液的濃度為20mg/ml。 toon] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，實驗動物優選大鼠，注入 體積為〇. 01-2ml，更加優選的注入體積為0. lml。
[0012] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，皮下注入藥物后，記 錄提足反應的產生時間，并計數產生提足后5min-8h的提足次數，更加優并首次提足后 10min-30min內的提足次數。
[0013] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，所述的藥物原液為中藥、 中成藥或中藥注射液的原液。當然本發明也可以用于西藥的刺激性評價。
[0014] 作為優選方案，以上所述的中藥刺激性評價的檢測方法，所述的足趾腫脹脹度可 用足趾腫脹儀來檢測。
[0015] 中藥制劑在生產和存放過程中可能產生微量的刺激性物質，研究需要高濃度的刺 激性物質。超濾、冷凍、離心等方法可以達到濃縮藥物的作用，而超濾是一種有效排除小分 子干擾的技術，而且3KD的超濾管可截留并富集到高濃度刺激物；冷凍干燥是一種把低濃 度水提液干燥至粉末的技術，可由粉末配制成高濃度刺激物；離心濃縮是一種揮去提取液， 直接濃縮藥液的技術。這些濃縮方法具有損耗小、效率高、操作便捷的優點，使藥物刺激性 更加明顯，可增加刺激性檢測方法的靈敏性。
[0016] 有益效果：本發明提供的中藥刺激性評價的檢測方法和現有技術相比具有以下優 占·
[0017] 傳統的藥物刺激性評價模型為家兔眼球刺激法，該方法主觀定性觀測藥物的刺激 性，無法客觀的定量評價藥物因此的疼痛和炎癥反應。為了實現上述目的，本發明創新性 采用了藥物刺激大鼠足趾模型，皮下注射藥物后，大鼠出現提足反應，并且足趾出現明顯的 紅腫現象。以計數提足次數反應藥物刺激的疼痛，以藥物注射前后足部體積的變化反應藥 物誘導的炎癥，并總體評估藥物的刺激性，建立一種直觀、準確和廣泛的中藥刺激性評價方 法。

【具體實施方式】
[0018] 下面結合具體實施例，進一步闡明本發明，應理解這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍，在閱讀了本發明之后，本領域技術人員對本發明的各種等價 形式的修改均落于本申請所附權利要求所限定的范圍。
[0019] 實施例1蟾酥生藥的刺激性檢測
[0020] 一、方法
[0021] 1、蟾酥生藥的提取和配制
[0022] 稱取蟾酥生藥粉末0. 3492g置于玻璃試管中，加8ml0. 5% DMS0超純水超聲提 取兩次，20min/次，過濾，合并濾液。將濾液冷凍干燥至粉末狀態，重0. 1211g，即得率為 34. 68%。取冷凍干燥后的粉末0. 0419g，溶于0. 419ml0. 5% DMS0的水中，即得濃度為 100mg/ml的母液，過濾，分別配成濃度為10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml的溶液即可。
[0023] 2、大鼠足部刺激性試驗
[0024] 選取雄性SD大鼠40只，隨機分成4組，即正常組（生理鹽水）、給藥組（10mg/ml、 20mg/ml、50mg/ml)，每組 10 只。
[0025] 在各組大鼠右后肢踝關節處作一標記，用排水法測量其右后爪體積。給大鼠右后 足足墊處注射以上四組不同的藥物，每只大鼠注射〇. lml，觀察大鼠的提足反應，記錄大鼠 開始提足后lOmin內的提足次數，測定藥物注射30min后大鼠右后足的體積，并計算大鼠右 后足實驗前后的體積差，即腫脹度。
[0026] 腫脹度=注射藥物后足趾體積一注射藥物前足趾體積
[0027] 二、結果
[0028] 配制不同濃度蟾酥生藥水提液，采用上述建立的大鼠足部刺激性檢測方法檢測。
[0029] 結果表明，與生理鹽水組相比，不同濃度蟾酥水提液（10mg/ml、20mg/ml、50mg/ ml)10min內提足次數顯著增加，分別從不提足增加至（14±5、41±9、99±8)次/10min(P < 0.01)，表明大鼠足部疼痛。
[0030] 并且蟾酥不同濃度給藥組30min后腫脹度也顯著增加，從生理鹽水組 (0.071±0.009)ml 分別增力卩至（0.702±0.093、0.788±0.096、L 027±0.11)ml(P < 0. 01)，表明大鼠足部出現炎癥現象。
[0031] 綜合提足次數（疼痛）和腫脹度（炎癥）兩個指標，反應了蟾酥生藥具有較明顯 的刺激性。
[0032] 表1不同濃度蟾酥水提液對大鼠刺激性的影響
[0033]

【權利要求】
1. 一種中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，將藥物原液或將藥物原液濃縮富集 后， 皮下注入實驗動物足趾，計算提足次數和測量足趾腫脹度來評價中藥刺激性。
2. 根據權利要求1所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的方法包括超濾濃縮、干燥濃縮或離心濃縮。
3. 根據權利要求1所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的倍數為0.01-100倍。
4. 根據權利要求3所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的倍數為10倍。
5. 根據權利要求1所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，藥物原液的濃度 為 0· 01-1000mg/ml。
6. 根據權利要求5所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，藥物原液的濃度 為 20mg/ml。
7. 根據權利要求1至6任一項所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，實驗動 物為大鼠，藥物注入體積為0. 〇l-2ml。
8. 根據權利要求7所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，皮下注入藥物后， 記錄提足反應的產生時間，并計數首次提足后10min-30min內的提足次數。
9. 根據權利要求8所述的中藥刺激性評價的檢測方法，其特征在于，所述的藥物原液 為中藥、中成藥或中藥注射液的原液。
【文檔編號】A61K49/00GK104107439SQ201410363961
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年7月28日 優先權日:2014年7月28日
【發明者】馬宏躍, 段金廒, 龔艷, 曹琴, 錢大瑋, 王子月 申請人:南京中醫藥大學