本發明涉及抗老化用皮膚外用劑，具體而言，涉及作為有效成分，含有選自腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的1種或2種以上的抗老化用皮膚外用劑。
背景技術：
：永葆年輕是人類共同的普遍的的愿望，但隨著年齡增加而人的皮膚上呈現皺紋、細紋、松弛，色斑等的變化為人類長期以來所經歷，伴隨年齡的增加皮膚也老化，皮膚上呈現皺紋、細紋、松弛，色斑等的外觀上的變化，說起來是自然天理，認為不可避免。然而，近年，隨著關于人的皮膚的結構或其新陳代謝的機制等的研究進展，伴隨年齡的增加人的皮膚上呈現皺紋、細紋、松弛，色斑等的變化的原因或結構逐漸明了。即，如充分了解，皮膚由外側的薄表皮(上皮組織)和其下層的厚的真皮(結締組織)構成，表皮作為身體的最外層，抵御外界而保護生物體的同時防止內部的水分或營養分漏出到外界，另一方面，真皮主要具有成纖維細胞、膠原纖維(膠原)、彈性纖維(彈性蛋白)、蛋白聚糖等復合以三維狀擴展的結構的結締組織，擔負給皮膚帶來強度、伸展性及彈力性的作用，但隨著年齡的增加而皮膚中的皮脂或水分的量減少，則皮膚表面的角質層的保濕力喪失，變得容易發生干燥等導致的細紋或皮膚的粗糙。另外，人的表皮從外側起由“角質層(角層)”、“顆粒層”、“棘層”、“基底層”構成，在基底層產生的表皮細胞(角質化細胞)依次向外側移動而成角質層，最終剝落。更具體而言，角質化細胞在位于表皮的最內側的基底層增殖，分化，被推至上層，最終成為位于表皮的最外側的角質層(角層)，成為垢而脫落。將此角質化細胞的增殖、移動、分化、脫落的一系列的過程稃稱為更新，通過角質化細胞以一定的周期更新，保持皮膚的恒定性，但伴隨年齡的增加而皮膚的更新速度變慢，結果，發生皺紋或松弛或皮膚粗糙。皮膚的更新速度盡管隨人的身體的部位而不同，但大致，健康的10多歲的人的皮膚的更新約為20天，20多歲變成約28天，30多歲變成約為40天、40多歲變成20多歲的約2倍的約55天，50多歲變成約為75天(非專利文獻1)。如上所述，伴隨年齡的增加的皮膚的更新速度的延遲帶來皺紋、松弛或皮膚粗糙，對于含從開始在意這些肌膚癥狀的30歲前后至50歲前的年齡層的所謂的老前(pre-aging)世代的皮膚，即使難以使其更新速度返回20多歲的正常的皮膚的更新速度，只要可通過任何手段使伴隨年齡的增加的更新速度的延遲恢復，就可有效改善皺紋或松弛或皮膚粗糙(專利文獻1)。從這樣的觀點來看，認為可通過促進角質化細胞的增殖、移動、分化、脫落的一系列的過程的至少一過程來提高更新速度。但是，尚未有實用的解決手段被提供。角質層是角質細胞幾重重疊構成的層，在角質細胞的最外層存在被稱為守護角質細胞的內部的角質化包膜的由外皮蛋白等的各種各樣的蛋白質構成的強固的膜。上述角質化包膜在皮膚的屏障功能中發揮重要的作用。皮膚的屏障功能降低，則由紫外線、特別是到達真皮的長波長的紫外線A波而存在于真皮的膠原、彈性蛋白、透明質酸等受損傷。另外，也已知如果皮膚的屏障功能降低，則皮膚干燥而保濕力降低，或皮脂的過量分泌被促進而誘發大人粉刺，或導致更新紊亂。伴隨年齡的增加，皮膚的屏障功能降低，由此引發皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等(參照專利文獻2及3)。皮膚的屏障功能是指，皮膚中的與所謂的被稱為第1屏障的皮脂膜的功能成對比的，被稱為第2屏障的角質層的功能、即防止自生物體外向生物體內的異物的侵入、或自生物體內向生物體外的過量的水分釋放的功能、及由存在于與角質層鄰接的表皮顆粒層的被稱為緊密連接的細胞間粘接結構體隔開生物體之內和外的功能。另外，隨年齡的增加而發生真皮中的成纖維細胞或透明質酸減少，或膠原的切斷或彈性蛋白的變性，則形成皺紋，或皮膚的彈性降低而發生松弛或皮膚粗糙。作為具有支持膠原的纖維的作用的纖維的彈性蛋白發揮給皮膚張力或彈力的作用，彈性蛋白的減少與皺紋或松弛的形成關聯(非專利文獻2)。另外，分解膠原的基質金屬蛋白酶-1已知是皺紋的原因(非專利文獻3)。另外，內皮縮血管肽-1是促進黑色素細胞的活化或增殖的物質，已知是色斑的原因。再者，也有見解認為，自黑色素細胞向表皮細胞排出的黑色素未被表皮細胞順利排出成為皮膚色素沉積(色斑)或皮膚的皮膚暗沉的原因(非專利文獻4)。基于這些研究成果或見解，現在已提議多種從科學的見地合理預防或改善伴隨年齡的增加而人的皮膚上呈現皺紋、細紋、松弛，色斑等的變化的所謂的抗老化用的皮膚外用劑(參照例如，專利文獻4～10)，人類進一步接近想要永葆青春的實現。但是，現在提議的抗老化用的皮膚外用劑只不過是追求實現多種可能性之中的極少一部分的可能性，發揮抗老化效果的不同的機制或使用方便性良好，也還包括制造的容易性的觀點，現狀依然期望從更多方面的角度提供新的抗老化用的皮膚外用劑。【現有技術文獻】【專利文獻】專利文獻1：特開2012-056857號公報專利文獻2：特開2004-091376號公報專利文獻3：特開2008-007411號公報專利文獻4：再公表專利第WO2007/011066號公報專利文獻5：特開2007-291102號公報專利文獻6：特開2008-169196號公報專利文獻7：特開2008-255020號公報專利文獻8：特開2008-260721號公報專利文獻9：特開2009-040690號公報專利文獻10：特開2009-249306號公報【非專利文獻】非專利文獻1：Farage等(編者)、“TextbookofAgingSkin”、Springer公司發行、2010年非專利文獻2：小倉等、“日本化妝品技術者會志”、第44卷第4號、278～284頁、2010年非專利文獻3：Fisher等、“AmericanJournalofPathology”、第174卷第1號、101～114頁、2009年非專利文獻4：Gilchrest等、“PhotochemistryandPhotobiology”、第63卷第1號、1～10頁、1996年技術實現要素：【發明要解決的技術課題】本發明鑒于上述以往技術的現狀而完成，旨在提供用于預防或改善伴隨年齡的增加呈現的人的皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等的變化的新的抗老化用皮膚外用劑。【解決課題的技術方案】本發明人為解決上述課題而重復銳意研究努力的結果，發現腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽通過發揮優良的抗老化效果、即，更新改善、皮膚的屏障功能的維持或亢進、皮膚中的纖絲聚集蛋白的表達增強、皮膚中的彈性蛋白的產生促進、皮膚中的基質金屬蛋白酶-1的產生抑制、或者，皮膚中的內皮縮血管肽-1的產生抑制效果，發揮預防或改善伴隨年齡的增加的皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等的抗老化效果，從而完成本發明。即，本發明通過提供作為有效成分含有選自腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的1種或2種以上的抗老化用皮膚外用劑而解決了上述課題。另外，本發明人發現，通過抗壞血酸2-葡萄糖苷、表沒食子兒茶素沒食子酸酯及/或乙二胺四醋酸的聯用而腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的奏的抗老化效果顯著地強化。【發明效果】由本發明的抗老化用皮膚外用劑可改善皮膚的更新，維持或亢進皮膚的屏障功能，增強皮膚中的纖絲聚集蛋白的表達，維持或亢進皮膚中的彈性蛋白的產生，抑制皮膚中的基質金屬蛋白酶-1的產生，或者抑制皮膚中的內皮縮血管肽-1的產生，由此可有效預防或改善伴隨年齡的增加的皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等。【實施方式】本發明的皮膚外用劑作為有效成分，含有腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽。這樣的腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽無論其來源，可為從天然物純化的，也可為化學合成的。本發明中所說腺苷N1-氧化物5′-磷酸的類似物，例如，可舉出腺苷N1-氧化物或3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物、5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物、腺苷N1-氧化物5′-二磷酸、腺苷N1-氧化物5′-三磷酸等。另外，本發明中所說的腺苷N1-氧化物5′-磷酸的鹽，例如，可舉出腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉或腺苷N1-氧化物5′-磷酸鉀等。在作用效果的方面，優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸、腺苷N1-氧化物、3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物，更優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸、腺苷N1-氧化物及3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物，特別優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸及腺苷N1-氧化物。另外，在光穩定性或溶解度的方面，腺苷N1-氧化物5′-磷酸比腺苷N1-氧化物更優選。由于腺苷N1-氧化物5′-磷酸的鹽作為腺苷N1-氧化物5′-磷酸發揮作用，腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其鹽發揮同等的效果，但從溶解度的方面，腺苷N1-氧化物5′-磷酸的鹽比腺苷N1-氧化物5′-磷酸更優選。這些化合物可含制造原料來源的成分或在合成過程發生的副產物，通常，以固體物換算，純度優選95質量％以上，更優選98質量％以上，特別優選99質量％以上。(除非特別說明，在本說明書中將質量％簡單表示為“％”。)以下，具體說明本發明的皮膚外用劑。通常，在本發明的皮膚外用劑的情況中，選自腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的1種或2種以上的配合比例，一般而言，相對于皮膚外用劑的總質量，優選0.001～10.0％，更優選0.01～1.0％。如果這些配合量相對于皮膚外用劑的總質量不足0.001％，則會有上述有效成分的作用不充分地發揮的情況。相反，如果超10.0％，則有由于得不到與使用量成比例的效果而不優選的情況。本發明中使用的腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽由于其自身就發揮更新改善作用、皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、皮膚中的纖絲聚集蛋白的表達的增強、皮膚中的彈性蛋白產生的維持或亢進、皮膚中的基質金屬蛋白酶-1的產生抑制、或者，皮膚中的內皮縮血管肽-1的產生抑制作用，從而其單獨可作為本發明的皮膚外用組合物的有效成分有利地利用。另外，也可隨意與其他成分聯用。腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的奏的抗老化效果通過與抗壞血酸2-葡萄糖苷、表沒食子兒茶素沒食子酸酯及/或乙二胺四醋酸聯用而顯著地強化，所以這些也可作為本發明的皮膚外用組合物的成分有利地利用。再者，本發明中所說的更新改善是指將由“角質層(角層)”、“顆粒層”、“棘層”及“基底層”構成的成為人的表皮的基礎的表皮細胞(角質化細胞)的增殖、移動、分化、脫落的一系列的過程(更新)保持為健全的狀態。更具體而言，是指使伴隨年齡的增加而變長的皮膚的更新周期變短。本發明的含有腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽作為有效成分的皮膚外用劑通過促進角質化細胞的分化，增強轉谷氨酰胺酶活性，促進角質化包膜的產生，改善皮膚的更新，從而可有效預防或改善伴隨年齡的增加的皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等。另外，這樣的皮膚外用劑由于強化皮膚的緊密連接功能，維持或亢進皮膚屏障功能，抑制水分釋放，從而可有效預防或改善伴隨年齡的增加的皮膚的細紋、松弛等。再者，本發明的皮膚外用劑由于可促進給皮膚張力或彈力的彈性蛋白的產生，抑制成為皺紋的原因的基質金屬蛋白酶-1的產生，從而可有效預防或改善皺紋、松弛等。而且，本發明的皮膚外用劑由于可抑制內皮縮血管肽-1的產生，從而可有效預防或改善色斑等。另外，本發明的皮膚外用劑根據其具體的形態而可配合公知的成分。即，在皮膚外用劑的形態的情況中，通常，可在不損害本發明的期望的效果的范圍配合可在皮膚外用劑中使用的成分的1種或2種以上。例如，適宜配合油成分、表面活性劑、防腐劑(抗菌劑)、香料、美白劑、保濕劑、增粘劑、抗氧化劑、鰲合劑、紫外線吸收－散射劑、維生素類、氨基酸類、抗炎癥劑、血行促進劑、海藻提取物、收斂劑、抗皺紋劑、細胞賦活劑、抗老化防止劑、育毛－發毛劑、經皮吸收促進劑、水、醇類、水溶性高分子、pH調整劑、發泡劑、粉體、藥品－準藥品－化妝品－食品用的添加劑、醫藥用－準藥品用的有效成分等，根據常規方法制造皮膚外用劑即可。具體而言，作為油成分，可例示澳洲堅果油、蓖麻子油、橄欖油、可可油、椿油、椰油、木蠟、霍霍巴油、葡萄籽油、鱷梨油等的植物油脂類、貂油、卵黃油等的動物油脂類、蜜蠟、鯨蠟、羊毛脂、巴西棕櫚蠟、小燭樹蠟等的蠟類、流動石蠟、角鯊烷、微晶蠟、地蠟、石蠟、凡士林等的烴類、癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、山崳酸、羊毛脂脂肪酸、亞油酸、亞麻酸、月桂酸、肉豆蔻酸、油酸、異硬脂酸等的天然及合成脂肪酸類、鯨蠟醇、硬脂基醇、己基癸醇、辛基十二醇、月桂基醇、辛基醇、肉豆蔻基醇、鯨蠟基醇、膽甾醇、植物甾醇等的天然及合成高級醇類、肉豆蔻酸異丙基、棕櫚酸異丙基、肉豆蔻酸辛基十二烷基、油酸辛基十二烷基、膽甾醇油酸酯等的酯類等。作為表面活性劑，可例示單月桂酸山梨坦、單棕櫚酸山梨坦、倍半油酸山梨坦、三油酸山梨坦、單月桂酸聚氧乙烯山梨坦、單硬脂酸聚氧乙烯山梨坦、聚乙二醇單油酸酯、聚乙二醇烷酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚二醇二醚、月桂酰二乙醇酰胺、脂肪酸異丙醇酰胺、麥芽糖醇羥基脂肪酸醚、烷基化多糖、烷基葡萄糖苷、糖酯等的非離子性表面活性劑、親油型甘油單硬脂酸酯、自身乳化型甘油單硬脂酸酯、聚甘油單硬脂酸酯、聚甘油烷酸酯、山梨坦單油酸酯、聚乙二醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨坦單油酸酯、聚氧乙烯鯨蠟基醚、聚氧乙烯化甾醇、聚氧乙烯化羊毛脂、聚氧乙烯化蜜蠟、聚氧乙烯固化蓖麻子油等的非離子表面活性劑、硬脂酸鈉、棕櫚酸鉀、鯨蠟基硫酸鈉、月桂基磷酸鈉、棕櫚酸三乙醇胺、聚氧乙烯月桂基磷酸鈉、N-酰基谷氨酸鈉、棕櫚酸鈉、月桂酸鈉、月桂酸鈉、月桂基硫酸鉀、烷基硫酸三乙醇胺醚、土耳其紅油、線性十二烷基苯硫酸、聚氧乙烯固化蓖麻子油馬來酸、酰基甲基牛磺酸等的陰離子表面活性劑、氯化硬脂基二甲基芐基銨、氯化硬脂基三甲基銨、硬脂基三甲基銨氯化物、氯化苯扎銨、月桂基胺氧化物等的陽離子表面活性劑、鹽酸烷基氨基乙基甘氨酸液、卵磷脂等的兩性表面活性劑等。作為防腐劑(抗菌劑)，可例示安息香酸及其鹽類、水楊酸及其鹽類、山梨酸及其鹽類、脫氫醋酸及其鹽類、以對羥基安息香酸烷基酯為首的對羥基安息香酸酯、2,4,4′-三氯-2′-羥基二苯基醚、3,4,4′-三氯二苯脲、六氯酚、氯化苯扎銨、苯氧基乙醇、扁柏酚、間苯二酚、乙醇、1,3-亞丁基二醇、感光素201號等。作為香料，可例示苯甲醛、芐基苯甲酸酯、苯基醋酸酯、檀香酚、丁香酚、百合醛、新鈴蘭醛、芳樟醇、2-甲基-3-(4-甲基苯基)-丙醛、麝香酮、肉桂醛、Beltfix、甲基紫羅蘭酮、甲酸香葉酯、龍涎酮(IsoESuper)、γ-十一碳內酯、己基水楊酸酯、順式-3-己烯基水楊酸酯、甲基二茉莉酸氫、四氫糠基3-巰基丙酸酯、KOVANOL、香蘭素、香蘭醛、老鸛草油、胡薄荷油、樺油、蒿油等。作為美白劑，可舉出抗壞血酸或其衍生物及它們的鹽類、烷氧基水楊酸類及其鹽類、氫醌或其糖苷等的氫醌的衍生物、氨甲環酸或其衍生物及它們的鹽類、間苯二酚的衍生物、曲酸或其衍生物及它們的鹽類、鞣花酸或亞油酸及它們的鹽類、母菊提取物、四氫類姜黃素、藍草提取物等。作為保濕劑，可例示赤蘚糖醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇、甘油、亞丙基二醇、1,3-亞丁基二醇、聚甘油、聚乙二醇、二亞丙基二醇、1,2-戊烷二醇、異戊二烯二醇等的多元醇類、葡萄糖、麥芽糖、海藻糖、海藻糖的糖質衍生物、糊精、環糊精、有國際公開WO02/10361號說明書中公開的環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}的結構的環狀四糖、有特開平2005-95148號公報中記載的環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}的結構的環狀四糖等的糖類、氨基酸、乳酸鈉、吡咯烷酮羧酸鈉等的天然保濕成分、糖原、豆角膠、木糖葡聚糖、榅桲籽、角叉菜膠、果膠、甘露聚糖、凝膠多糖、琥珀酰葡聚糖、半乳聚糖、皮膚素硫酸、角質素硫酸、軟骨素、硫酸軟骨素、硫酸粘多糖、硫酸角質素、殼多糖、乙酰肝素硫酸、透明質酸等的粘多糖類或這些粘多糖類的水解物、絲或膠原等的蛋白質－肽或這些的水解物等的水溶性高分子物質、這些的鹽類、二甲基聚硅氧烷、甲基苯基硅氧烷等的硅類、乳酸菌－雙歧菌等的培養上清等。作為增粘劑，可例示藻酸鈉、黃原膠、硅酸鋁、榅桲種子提取物、阿拉伯膠、羥基乙基瓜爾膠、羧基甲基瓜爾膠、瓜爾膠、葡聚糖、黃蓍膠、淀粉、出芽短梗孢糖、殼多糖、殼聚糖、瓊脂、纖維素、等的天然高分子物質、羥基丙基纖維素、甲基羥基丙基纖維素、甲基纖維素、羧基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、可溶性淀粉、陽離子化纖維素、羧基甲基殼多糖等的半合成高分子物質、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、乙烯基醇－醋酸乙烯基共聚物等的合成高分子物質等。作為抗氧化劑，可例示二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、沒食子酸丙基、抗壞血酸、維生素E、兒茶素類、類黃酮類或這些的衍生物等。作為鰲合劑，可例示依地酸二鈉、乙二胺四醋酸鹽、焦磷酸鹽、六偏磷酸鹽、檸檬酸、酒石酸、葡萄糖酸等。作為pH調整劑，可例示氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺、次氮基三乙醇、檸檬酸、檸檬酸鈉、硼酸、硼沙、磷酸氫鉀等。作為紫外線吸收－散射劑，可例示對氨基安息香酸系統紫外線吸收劑、鄰氨基苯甲酸系紫外線吸收劑、水楊酸系紫外線吸收劑、桂皮酸系紫外線吸收劑、二苯甲酮系紫外線吸收劑、糖系紫外線吸收劑、3-(4′-甲基苯亞甲基)-d-樟腦、3-苯亞甲基-d,1-樟腦、尿刊酸、尿刊酸乙基酯、2-苯基-5-甲基苯并噁唑、2,2′-羥基-5-甲基苯基苯并三唑、2-(2′-羥基-5′-t-辛基苯基)苯并三唑、2-(2′-羥基-5′-甲基苯基苯并三唑、二亞芐基吖嗪、二茴香酰甲烷、4-甲氧基-4′-t-丁基二苯甲酰甲烷、5-(3,3-二甲基-2-亞降冰片基)-3-戊烷-2-酮、2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮、辛基二甲基對氨基苯甲酸酯、乙基己基對甲氧基桂皮酸酯、氧化鈦、高嶺土、滑石等。作為維生素類，可例示維生素A及其衍生物、維生素B1及其衍生物、維生素B2及其衍生物、維生素B6鹽酸鹽、維生素B6三棕櫚酸鹽、維生素B6二辛酸鹽、維生素B12、維生素B15及其衍生物等的維生素B類、抗壞血酸及其衍生物、α-生長酚、β-生長酚、γ-生長酚、維生素E乙酸鹽等的維生素E類、維生素D類、維生素H、泛酸、泛硫乙胺、維生素F、維生素K、維生素P及其衍生物、維生素U、阿魏酸、γ-谷維素、α-硫辛酸、乳清酸、輔酶Q10等或它們的衍生物等，也可為它們的鹽類。作為氨基酸類，可例示甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、牛磺酸、色氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、肉毒堿、瓜氨酸及它們的衍生物等，也可為它們的鹽類。使用本發明的皮膚外用劑時的形態無特別限定，能以例如水溶液系統、增溶系統、乳化系統、粉末分散系統、固體條系統、水-油2層系統、水-油-粉末3層系統等各種的形態適用本發明的皮膚外用劑。另外，其具體的劑形也無特別限定，無藥品、準藥品、化妝品等的藥事法上的區別約束。本發明的皮膚外用劑是指作為藥品、準藥品或化妝品適用于皮膚、口唇或頭皮等的外皮及口腔內的劑，具體而言，可例示軟膏、乳霜、乳液、洗液、精華液、果凍、凝膠、包裝、洗發水、潤洗液、護發液、罩、睫毛膏、眼線、育毛劑、唇膏(口紅)、唇蜜、粉底、腮紅、眼影、粉末、修指甲劑、皂、身體ー肥皂、浴用劑、粉齒磨、潤性齒磨、牙膏、水齒磨、藥用齒磨、口中清涼劑、口中清涼膜、漱口液、漱口藥等。以下，通過實驗說明本發明。【實施例】【實驗1：腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給正常人表皮角質化細胞的更新帶來的影響】將角質化細胞的增殖、移動、分化、脫落的一系列的過程稱為更新，角質化細胞以一定的周期更新而保持皮膚的恒定性，伴隨年齡的增加而皮膚的更新速度變慢，結果，發生皺紋或松弛或皮膚粗糙。其故認為、如果誘導角質化細胞的分化，更新速度會變快，由此可改善皺紋或松弛或皮膚粗糙。因此，在本實驗中，將腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物的更新促進作用作為角質化細胞的分化誘導作用、產生角質化包膜的促進作用及轉谷氨酰胺酶活性增強作用的指標進行評價。再者，實驗根據"Hasegawa等、“Lipids”、第46卷第6號、529～535頁、2011年"及"Sturniolo等、“TheJournalofBiologicalChemistry”、第278卷第48號、48066～48073頁、2003年"進行。【實驗1-1：對角質化細胞的分化的影響】向12孔板添加1ml用含有生長因子的角質化細胞用培養基(商品名“EpiLife”，LifeTechnologies公司制)調制成2.5×104個/ml的濃度的正常人表皮角質化細胞，培養至細胞占孔的底面的一半程度的狀態。其后，將培養基替換為不含生長因子的角質化細胞用培養基而培養2天，再者，將培養基各自替換為以表1所示的各濃度添加表1中記載的被驗物質的不含生長因子的角質化細胞用培養基而培養3天。再者，將除了不添加被驗物質以外同樣培養的作為對照。顯微鏡下進行細胞形態的觀察，根據以下的基準評價角質化細胞分化誘導能力。評分0：無變化評分1：顯示扁平形態的細胞數是全體的50％以下評分2：顯示扁平形態的細胞數是全體的50％以上評分3：細胞的大致全部取不規則的形態，確認一部分有光澤的細胞評分越大，表明細胞的分化越被促進。進行3次實驗，求出其平均評分。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對角質化細胞的分化誘導的作用示于表1。【表1】從表1可知，在未添加被驗物質的對照中見不到正常人表皮角質化細胞的形態的變化，與此相比，當腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物濃度為10μM時確認到形態變化，當為20～40μM時扁平的細胞進一步脫核而變小，細胞變得取不規則的形態，其中也確認到有光澤的細胞，分化在進行。當3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物的濃度各自為40～80μM及200～400μM時確認到形態變化，當各自160μM及800μM時扁平的細胞進一步脫核而變小，細胞變得取不規則的形態，其中也確認到有光澤的細胞，分化在進行。一方面，腺苷即使濃度為400μM，3′-α-葡萄糖基腺苷及5′-α-葡萄糖基腺苷即使濃度為800μM也確認不到形態變化。腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物、3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物在試驗的濃度范圍內均確認到角質化細胞的分化促進，該效果在腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物被確證到更強。這些結果表明，由于腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽促進角質化細胞的分化，從而作為更新改善劑有用。【實驗1-2：給角質化包膜的產生帶來的影響】角質化包膜在皮膚的屏障功能中實現重要的作用。如果皮膚的屏障功能降低，則引發皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等。因此，在本實驗中研究了腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給角質化包膜的形成帶來的影響。再者，實驗根據"Hasegawa等、“Lipids”、第46卷第6號、529～535頁、2011年"進行。除了以表2所示的各濃度添加表2中記載的被驗物質以外，與實驗1-1同樣地培養正常人表皮角質化細胞。將培養的正常人表皮角質化細胞用磷酸緩沖生理鹽水清洗1次之后，加0.5ml磷酸緩沖生理鹽水而刮取附著于板上的細胞。向得到的細胞懸浮液加1/4液量的10％月桂基硫酸鈉溶液而攪拌，于-80℃冷凍。解凍后，進行離心分離(12000×g,15分鐘)，將回收的細胞殘渣用含有2％月桂基硫酸鈉的磷酸緩沖生理鹽水清洗1次之后，再進行離心分離(12000×g,15分鐘)，使回收的細胞殘渣懸浮于含有2％月桂基硫酸鈉及20mM二硫蘇糖醇的磷酸緩沖生理鹽水。將此細胞殘渣懸浮液在沸騰水浴中煮沸1小時之后，測定310nm的吸光度而作為角質化包膜產生量。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，同樣地將310nm的吸光度作為100％，基于下述計算式，相對評價角質化包膜產生量。計算式：角質化包膜產生量(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對伴隨角質化細胞的分化的角質化包膜的產生的作用示于表2。【表2】從表2可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物在25μM的濃度，角質化包膜產生量提高至約180％，確認到顯著的角質化包膜產生促進作用。另外，3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在200μM的濃度確認到顯著的角質化包膜產生促進作用。5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在600μM的濃度確認到顯著的角質化包膜產生促進作用。腺苷5′-磷酸在400μM的濃度確認到促進角質化包膜的產生的傾向。一方面，腺苷及3′-α-葡萄糖基腺苷即使各自在400μM及800μM的濃度也確認不到角質化包膜產生促進作用。在試驗的濃度，確證在腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物、3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物確認到角質化包膜的產生促進，該效果是腺苷N-1氧化物、腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物更強，腺苷N-1氧化物及腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉最強。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽促進角質化包膜的形成，從而作為更新改善劑有用。【實驗1-3：給轉谷氨酰胺酶活性帶來的影響】轉谷氨酰胺酶是催化蛋白質的交聯的酶，與角質化包膜的形成相關。因而、通過增強轉谷氨酰胺酶活性，促進角質化包膜的形成，從而可預防或改善皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等。因此，在本實驗中研究了，腺苷N-1氧化物5′-磷酸及其類似物給轉谷氨酰胺酶活性帶來的影響。再者，實驗根據"Sturniolo等、“TheJournalofBiologicalChemistry”、第278卷第48號、48066～48073頁、2003年"進行。除了以表3所示的各濃度添加表3中記載的被驗物質以外，與實驗1-1同樣地培養正常人表皮角質化細胞。對于培養的正常人表皮角質化細胞，添加100μM的熒光素尸胺而靜置4小時。其后，用磷酸緩沖生理鹽水將細胞清洗1次，再者，用冷甲醇處理10分鐘而固定細胞。用冷甲醇將細胞清洗3次之后，添加磷酸緩沖生理鹽水。將由轉谷氨酰胺酶攝入細胞的熒光素尸胺使用細胞成像工作站(MolecularProbes公司制)解析，將其熒光強度作為轉谷氨酰胺酶活性。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，其熒光強度設為100％，基于下述計算式，相對評價轉谷氨酰胺酶活性。計算式：轉谷氨酰胺酶活性(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的熒光強度/對照的熒光強度)×100實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對與角質化包膜產生相關的轉谷氨酰胺酶活性的作用示于表3。【表3】從表3可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物在20μM的濃度將轉谷氨酰胺酶活性各自提高至約570％及約630％，確認到顯著的轉谷氨酰胺酶活性增強作用。另外，5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在400μM的濃度確認到顯著的轉谷氨酰胺酶活性增強作用。3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在100μM的濃度確認不到轉谷氨酰胺酶活性增強作用，但5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在400μM的濃度確認到效果，所以認為，對3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物以更高濃度使用確認到效果。腺苷、腺苷5′-磷酸、3′-α-葡萄糖基腺苷及5′-α-葡萄糖基腺苷在400μM的濃度確認不到轉谷氨酰胺酶活性增強作用。在試驗的濃度，在腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物確認到轉谷氨酰胺酶活性的增強，確證該效果是腺苷N-1氧化物及腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉更強。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽有增強轉谷氨酰胺酶活性的作用，作為更新改善劑有用。【實驗2：腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給對人上皮樣細胞癌來源細胞的緊密連接功能強化作用帶來的影響】緊密連接有防止自生物體外向生物體內的異物的侵入或自生物體內向生物體外的過量的水分釋放的功能。因而認為，通過強化緊密連接功能，與皮膚屏障功能的亢進或保濕關聯。因此，在本實驗中，研究了腺苷N-1氧化物5′-磷酸及其類似物給緊密連接帶來的影響。再者，實驗根據"Suzuki及Hara、“JournalofNutrition”、第139卷第5號、965～974頁、2009年"進行。向12孔插入杯各自添加各2ml用以表4所示的各濃度添加表4中記載的被驗物質的培養基調制成1×105個/ml的濃度的人上皮樣細胞癌來源A-431細胞，培養至細胞占孔的底面全體的狀態。使插入杯的內側和外側的培養液量各自達到2mL，確認無水面的變化，向插入杯的內側作為透過物的模型添加作為熒光染料的熒光黃(LifeTechnologies)至成終濃度100μM。其后，測定插入杯的內側和外側各自的培養液中的熒光黃的熒光強度，由下述計算式，求出外側的熒光強度對插入杯的內側和外側的熒光強度的和的比例，作為熒光黃的透過率。計算式：熒光黃的透過率(％)＝{插入杯的外側的吸光度/(插入杯的內側的吸光度+插入杯的外側的吸光度)}×100除了不添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，將其熒光黃的透過率作為100％，基于下述計算式，相對評價緊密連接功能的強化導致的透過率的減少。計算式：熒光黃的相對透過率(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的透過率/對照的透過率)×100實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對人上皮樣細胞癌來源細胞的緊密連接功能的作用示于表4。【表4】從表4可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在20μM的濃度熒光黃透過率減少到約60％，確認到顯著的緊密連接功能強化作用。另外，腺苷N-1氧化物在10～20μM的濃度確認到顯著的緊密連接功能強化作用。再者，腺苷在200～400μM的濃度確認到顯著的緊密連接功能強化作用。但是，3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物、5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物、腺苷5′-磷酸、3′-α-葡萄糖基腺苷及5′-α-葡萄糖基腺苷在200～400μM的濃度確認不到緊密連接功能強化作用。在試驗的濃度范圍，緊密連接功能強化作用，從效果的方面，優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物及腺苷，更期望是腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物有緊密連接功能的強化作用，從而作為皮膚屏障功能亢進劑及保濕劑有用。【實驗3：腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在正常人表皮角質化細胞中的纖絲聚集蛋白表達增強作用】作為對于皮膚的屏障功能的形成或水分保持發揮重要的作用的蛋白質之一已知纖絲聚集蛋白。纖絲聚集蛋白作為纖絲聚集蛋白原在表皮產生，這經分解而成為纖絲聚集蛋白，擔負皮膚的屏障功能。另外，纖絲聚集蛋白再受分解而也作為天然的保濕因子發揮作用。再者，近年，纖絲聚集蛋白的表達降低和特應性皮膚炎的關聯性被指出("Osawa等“AllergologyInternational”、第60卷第1號1～9頁、2011年")。從而在本實驗中研究了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在正常人表皮角質化細胞中的纖絲聚集蛋白表達增強作用。再者，實驗根據"Otsuka等、“TheJournalofAllergyandClinicalImmunology”、第133卷第1號139～146頁、2014年"進行。在6孔板中，用含有生長因子的角質化細胞用培養基(商品名“EpiLife”，KURABO公司制)將以5×104個/孔的濃度接種的正常人表皮角質化細胞于37℃培養4天。在第4天細胞占孔的80％時，通過每隔2天培養基更換為添加腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉至成2μM、5μM、10μM的EpiLife培養基而再培養4天來誘導纖絲聚集蛋白的表達。除了代替腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉而使用添加氯化鈣至成0.5mM的Epilife培養基以外，同樣地培養正常人表皮角質化細胞而作為陽性對照。培養4天后，將細胞用Dulbecco-磷酸緩沖生理鹽水清洗，添加0.1mL含蛋白分解酶抑制劑的SDS樣品緩沖液(62.5mMTris-HClpH6.8、2％SDS、10％甘油、50mMDTT)，使用細胞刮具回收細胞。將回收的細胞煮沸10分鐘后進行超聲波破碎，用PierceBCA蛋白測定試劑盒(ThermoFisherScientific公司制)進行蛋白定量。將一定量(100μg/泳道)的樣品由定法供于SDS-聚丙烯酰胺電泳，其后轉印到PVDF膜。將PVDF轉印膜使用BLOCKACE(DSPharmaBiomedical公司制)封閉之后，使與作為第1抗體的小鼠抗纖絲聚集蛋白抗體(AKH1,SantaCruz公司制、200倍稀釋)或小鼠抗肌動蛋白抗體(MAB1501、ChemiconInternational公司制、20,000倍稀釋)反應，接下來使與作為第2抗體的HRP標記抗小鼠免疫球蛋白抗體(P0447、Dako公司制、2,000倍稀釋)反應。反應后，使用ECLPlusWesternBlottingDetectionSystem(GEHealthcare公司制)，在化學發光用膜HyperfilmECL(GEHealthcare公司制)上檢測條帶。檢測的條帶由圖像解析軟件“ImageJ”解析而數值化。數據以未添加被驗物質的作為對照，其纖絲聚集蛋白/肌動蛋白的條帶的強度比設為100％，將纖絲聚集蛋白的表達量以纖絲聚集蛋白/肌動蛋白的條帶的強度比的升高率相對評價。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉給正常人表皮角質化細胞中的纖絲聚集蛋白的表達帶來的的作用示于表5。【表5】從表5可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉以添加濃度依賴性地使纖絲聚集蛋白的表達量升高，在10μM是308％，確認到與陽性對照的0.5mM的氯化鈣同等水平的表達升高作用。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉導致的緊密連接功能強化作用的一部分經纖絲聚集蛋白的表達增強作用，本物質作為皮膚屏障功能亢進劑及保濕劑有用。再者，近年，隨著皮膚屏障功能降低而外來的異物經皮膚侵入，結果指出，對外來變應原的致敏變得容易成立與特應性皮膚炎的發癥關聯。此實驗結果顯示，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉經纖絲聚集蛋白的表達增強作用而還與特應性皮膚炎發癥的防止關聯。【實驗4：腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物給對正常人皮膚成纖維細胞的彈性蛋白產生促進作用帶來的影響】作為具有支持膠原的纖維的作用的纖維的彈性蛋白發揮給皮膚張力或彈力的作用，一但發生彈性蛋白的變性，則皮膚的彈性降低而與皺紋或松弛的形成關聯。因而，通過促進彈性蛋白的產生，可預防或改善皺紋或松弛。因此，在本實驗中，研究了腺苷N-1氧化物5′-磷酸及其類似物給彈性蛋白產生帶來的影響。再者，實驗根據"Syedain及Tranquillo、“JournalofBiomechanics”、第44卷第5號、848～855頁、2011年"進行。向24孔板各自添加0.5mL使用含有10％牛胎兒血清的Dulbecco改良的Eagle培養基調制成3×105個/ml的濃度的正常人皮膚成纖維細胞，培養1天。將細胞用Dulbecco-磷酸緩沖生理鹽水清洗后，通過以表5所示的各濃度添加表5中記載的被驗物質的Dulbecco改良的Eagle培養基再培養2天來誘導彈性蛋白合成。其后，回收培養上清，將細胞用1mL的Dulbecco-磷酸緩沖生理鹽水清洗后，添加0.1mL的0.25％胰蛋白酶及乙二胺四醋酸而于37℃處理2分鐘而將細胞從板剝離。向板加0.5mL的Dulbecco-磷酸緩沖生理鹽水，將得到的細胞懸浮液回收到1.5mL管，離心分離(3,000×g,5分鐘)而回收剝離的細胞。彈性蛋白的定量使用彈性蛋白比色定量試劑盒(BIOCOLOR公司制)進行。首先，使用回收的培養上清使細胞懸浮，添加0.16mL的1M草酸(試劑盒試劑)而于100℃反應1小時而使彈性蛋白增溶。添加0.66mL的彈性蛋白沉淀劑(試劑盒試劑)而顛倒混合15分鐘，離心分離(10,000×g,10分鐘)而使蛋白質沉淀。向沉淀添加0.5mL的染色劑(試劑盒試劑)而顛倒混合90分鐘，離心分離(10,000×g,10分鐘)而回收結合染料的沉淀。其后，添加0.25mL的染料分離劑(試劑盒試劑)而顛倒混合1小時，測定490nm的吸光度而算出每孔的彈性蛋白量。使用試劑盒附屬品制成標準曲線。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，同樣地490nm的吸光度設為100％，基于下述計算式，相對評價彈性蛋白產生量。計算式：彈性蛋白產生量(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100另外，為了確認在同條件下的細胞增殖，向96孔微平板各自添加0.1mL使用含有10％牛胎兒血清的Dulbecco改良的Eagle培養基調制成2.5×105個/ml的濃度的正常人皮膚成纖維細胞，培養1天。用Dulbecco-磷酸緩沖生理鹽水清洗后，用以表5所示的各濃度添加表5中記載的被驗物質的Dulbecco改良的Eagle培養基培養基培養2天。除去上清后，添加0.2mL用培養基10倍稀釋的Alamar藍，于37℃反應2小時而測定熒光強度(激發波長544nm,熒光波長590nm)，除未添加被驗物質以外同樣地處理的對照的熒光強度設為100％而求出被驗物質添加時的細胞數的變化率。實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對正常人皮膚成纖維細胞的彈性蛋白產生的作用示于表6。【表6】從表6可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物在10μM的濃度使彈性蛋白產生量提高到約120％，確認到顯著的產生彈性蛋白的增強作用。另外，腺苷5′-磷酸在10～40μM的濃度有增強彈性蛋白產生的傾向，在100μM的濃度確認到顯著的產生彈性蛋白的增強作用。再者，在本實驗系統未見到對細胞增殖的影響。在試驗的濃度范圍，彈性蛋白產生促進作用，從效果的方面，優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物及腺苷5′-磷酸，更期望是腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及作為其類似物的腺苷N-1氧化物有促進彈性蛋白產生的作用，從而作為抗皺紋劑有用。【實驗5：腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給對正常人皮膚成纖維細胞的基質金屬蛋白酶-1產生抑制作用帶來的影響】膠原被基質金屬蛋白酶-1分解，膠原被分解，則皺紋形成，或皮膚的彈性降低而發生松弛。因而，通過抑制基質金屬蛋白酶-1的產生，可預防或改善皺紋或松弛。在本實驗中，研究了腺苷N-1氧化物5′-磷酸及其類似物給基質金屬蛋白酶-1產生帶來的影響。再者，實驗根據"Fuller等、“JournalofCosmeticDermatology”、第5卷第1號、30～38頁、2006年"進行。向96孔微平板各自添加0.1mL使用含有10％牛胎兒血清的Dulbecco改良的Eagle培養基調制成2.5×105個/ml的濃度的正常人皮膚成纖維細胞，培養至占孔的底面全體的狀態。接下來，將培養基更換為無血清培養基而培養24小時，將以表6所示的各濃度添加表6中記載的被驗物質再培養24小時。其后，添加人IL-1β至終濃度成1ng/ml，再培養24小時。進而，使用特異性ELISA試劑盒(R&DSystems公司制)檢測培養上清中的基質金屬蛋白酶-1，用四甲基聯苯胺顯色之后，測定450nm的吸光度。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，對照中的培養上清中的基質金屬蛋白酶-1設為100％，根據下述計算式，相對評價基質金屬蛋白酶-1產生量。計算式：基質金屬蛋白酶-1產生量(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100另外，細胞數由細胞數測定試劑盒(染色法)測定，對照設為100％而求出被驗物質添加時的細胞數的變化率。實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對正常人皮膚成纖維細胞的基質金屬蛋白酶-1產生量的作用示于表7。【表7】從表7可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在10～20μM的濃度使基質金屬蛋白酶-1產生量減少到約80～30％，確認到濃度依賴性并且顯著的產生抑制作用。腺苷N-1氧化物在5～20μM的濃度確認到同樣的產生抑制作用。另外，3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在200～800μM的濃度確認到濃度依賴性并且顯著的產生抑制作用，但其效果是3′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物比5′-α-葡萄糖基腺苷N-1氧化物強。腺苷、腺苷5′-磷酸、3′-α-葡萄糖基腺苷及5′-α-葡萄糖基腺苷確認不到顯著的基質金屬蛋白酶-1產生抑制作用。在試驗的濃度范圍，基質金屬蛋白酶-1產生抑制作用，從效果的方面，優選為腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物、3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物，更期望是腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及腺苷N-1氧化物。這些結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽有抑制基質金屬蛋白酶-1的產生的作用，作為抗皺紋劑有用。【實驗6：腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給對正常人表皮角質化細胞的內皮縮血管肽-1產生抑制作用帶來的影響】內皮縮血管肽-1是促進黑色素細胞的活化或增殖的物質，已知是色斑的原因。再者，也有見解認為，從黑色素細胞排出到表皮細胞的黑色素未被表皮細胞順利排出成為皮膚色素沉積(色斑)或皮膚的皮膚暗沉的原因。因而，通過抑制內皮縮血管肽-1產生，可預防或改善皮膚色素沉積(色斑)或皮膚的皮膚暗沉。因此，在本實驗中，研究了腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物給內皮縮血管肽-1產生帶來的影響。再者，實驗根據"Ishida及Sakaguchi、"Biological&PharmaceuticalBulletin"、第30卷第5號、928～934頁、2007年"進行。在96孔微平板中，使用含有生長因子的角質化細胞用培養基(商品名“EpiLife”，LifeTechnologies公司制)增殖至正常人表皮角質化細胞占孔的底面全體的狀態之后，將培養基替換為不含生長因子的角質化細胞用培養基而再培養2天。其后，將腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉添加至成10、20或50μM，靜置6小時。用Hanks緩沖液清洗后，以40mJ/cm2的強度向細胞照射紫外線B波，加含有生長因子的角質化細胞用培養基而再培養24小時。進而，使用特異性ELISA試劑盒(R&DSystems公司制)檢測培養上清中的內皮縮血管肽-1，用四甲基聯苯胺顯色之后，測定450nm處的吸光度。未添加腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉以外同樣地處理而作為對照，對照中的培養上清中的內皮縮血管肽-1產生量設為100％，根據下述計算式，相對評價內皮縮血管肽-1產生量。計算式：內皮縮血管肽-1產生量(相對值％)＝(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100另外，用亞甲基藍測定細胞的增殖，對照設為100％而求出被驗物質添加時的細胞數的變化率。實驗進行3次，對對照進行Dunnett的多重比較檢驗。危險率p<0.01作為有顯著差異，以＊表示。將腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉對正常人表皮角質化細胞的內皮縮血管肽-1產生的作用示于表8。【表8】從表8可知，與未添加被驗物質的對照比較，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉有在20μM的濃度抑制內皮縮血管肽-1的產生的傾向，在50μM的濃度使內皮縮血管肽-1的產生量減少到約50％，確認到顯著的內皮縮血管肽-1產生抑制作用。再者，在本實驗系統中未見到對細胞增殖的影響。結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸有內皮縮血管肽-1產生抑制作用，從而作為抗色斑劑有用。【實驗7：表沒食子兒茶素沒食子酸酯和腺苷N1-氧化物5′-磷酸的聯用給角質化細胞分化誘導帶來的影響】實驗是，除了以表8及表9所示的各濃度添加各自表8及表9中記載的被驗物質以外，根據各自實驗1-2及實驗1-3記載的方法進行，研究了向化妝品聯用作為抗氧化劑使用的表沒食子兒茶素沒食子酸酯導致的腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉對角質化包膜產生促進作用及轉谷氨酰胺酶活性增強作用的影響。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，各自基于下述計算式，求出相對于對照的角質化包膜產生量增加率及轉谷氨酰胺酶活性增加率。計算式：角質化包膜產生量增加率(％)＝{(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100}-100計算式：轉谷氨酰胺酶活性增加率(％)＝{(被驗物質添加樣品的熒光強度/對照的熒光強度)×100}-100各自的結果示于表9及表10(確認到效果的組合的增加率以＊表示。)。【表9】【表10】從表9及表10可知，當聯用15μM的腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉和1.6～6.5μM的表沒食子兒茶素沒食子酸酯時，角質化包膜產生量增加率及轉谷氨酰胺酶活性增加率均比各自單獨添加腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及表沒食子兒茶素沒食子酸酯時的增加率的簡單加和更顯著地增加。因此判斷，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉和表沒食子兒茶素沒食子酸酯的聯用有對角質化包膜產生促進作用及轉谷氨酰胺酶活性增強作用的協同效果。另外，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉和表沒食子兒茶素沒食子酸酯的摩爾比期望是15μM：6.5μM～15μM：1.6μM的范圍、即，2.3:1～9.4：1。結果表明，向腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽配合表沒食子兒茶素沒食子酸酯的組合物協同地促進或增強角質化包膜的產生及轉谷氨酰胺酶活性，從而作為抗色斑劑有用。【實驗8：腺苷N1-氧化物5′-磷酸和乙二胺四醋酸的聯用給緊密連接功能帶來的影響】實驗除了以表11所示的各濃度添加表11中記載的被驗物質以外，根據實驗2記載的方法進行，研究了向化妝品聯用作為保存料使用的乙二胺四醋酸的導致的腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉鹽對緊密連接功能強化作用的影響。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，基于下述計算式，求出相對于對照的熒光黃的相對透過率的減少率。計算式：熒光黃的相對透過率的減少率(％)＝100-{(被驗物質添加樣品的透過率/對照的透過率)×100}結果示于表11(確認到效果的組合的減少率以＊表示)。【表11】被驗物質熒光黃相對透過率減少率(％)10μM腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉21.63mM乙二胺四醋酸-24.73mM乙二胺四醋酸+10μM腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉17.0*從表11可知，盡管作為保存料在化妝品中使用的乙二胺四醋酸其自身就示減弱緊密連接功能的作用，但如果將腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉和乙二胺四醋酸聯用，則確認到減弱乙二胺四醋酸的緊密連接功能的作用被大幅地緩和。另外，上述的結果顯示，如果腺苷N1-氧化物5′-磷酸與乙二胺四醋酸的摩爾比是至少10μM：3mM以上、即，至少1:300以上，則即使在乙二胺四醋酸存在時，也可通過使用腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉，圖充分的緊密連接功能的強化。結果表明，向腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽配合乙二胺四醋酸的組合物在緊密連接功能強化作用上示顯著的效果，從而作為皮膚屏障功能亢進劑及保濕劑有用。【實驗9：抗壞血酸2-葡萄糖苷和腺苷N1-氧化物5′-磷酸或其類似物的聯用給基質金屬蛋白酶-1產生帶來的影響】實驗除了以表12所示的各濃度添加表12中記載的被驗物質以外根據實驗5記載的方法進行，研究了向化妝品聯用作為美白劑使用的抗壞血酸2-葡萄糖苷導致的腺苷N1-氧化物5′-磷酸類似物對抗皺紋作用的影響。除未添加被驗物質以外同樣地處理而作為對照，基于下述計算式，求出相對于對照的基質金屬蛋白酶-1產生量減少率。計算式：基質金屬蛋白酶-1產生量減少率(％)＝100-{(被驗物質添加樣品的吸光度/對照的吸光度)×100}結果示于表12(確認到效果的組合的減少率以＊表示)。【表12】從表12可知，當聯用5～10μM的腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉或其類似物的腺苷N-1氧化物與200μM的抗壞血酸2-葡萄糖苷時，基質金屬蛋白酶-1產生量減少率相比各自單獨使用腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N-1氧化物及抗壞血酸2-葡萄糖苷時的減少率的簡單加和更顯著地增加。因此判斷，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉或腺苷N-1氧化物和抗壞血酸2-葡萄糖苷的聯用有對基質金屬蛋白酶-1產生抑制作用的協同效果。另外，腺苷N1-氧化物5′-磷酸或腺苷N1-氧化物和抗壞血酸2-葡萄糖苷的摩爾比期望是5μM：200μM～10μM：200μM、即，1:40～1：20。結果表明，腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物或其鹽與抗壞血酸2-葡萄糖苷配合的組合物協同地抑制基質金屬蛋白酶-1的產生，從而作為抗皺紋劑有用。【實驗10：光給腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物帶來的影響】皮膚外用劑被推定在其使用時曝光，所以其中所含的有效成分不僅不示光毒性、優選對于光穩定。光毒性是指，施用化學物質或其混合物后，施用的物質在曝光時反應而對皮膚的細胞呈現障礙的現象。在本實驗中，測定并比較腺苷N1-氧化物5′-磷酸和作為其類似物的腺苷N1-氧化物及5′-葡萄糖基腺苷N-1氧化物對光的穩定性。對于表13中記載的被驗物質25mg，向各自加調整到各pH的McIlvain緩沖液而至50ml，向根據試驗數分的透明玻璃螺旋管瓶(5ml)各自分注各2.0ml。在熒光燈下(約4000Lux,溫度28℃)，將分注各被驗物質的透明玻璃螺旋管瓶以橫躺的狀態設置。對于腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉，則在實驗開始時和自起8周后，對于腺苷N1-氧化物及5′-葡萄糖基腺苷N-1氧化物，則在實驗開始時和自起8周后的每2周，取出1條分注被驗物質的透明玻璃螺旋管瓶，使用HPLC進行分析。實驗進行3次，從對于實驗開始時的HPLC層析譜中的被驗物質的峰面積的面積比，基于下述計算式算出各被驗物質的平均殘留率。表13示腺苷N1-氧化物5′-磷酸及其類似物對光的穩定性。計算式：被驗物質的殘留率(％)＝(被驗物質的在各pH的一定時間經過后的平均峰面積/被驗物質的在各pH的實驗開始時的平均峰面積)×100【表13】從表13可知，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在實驗開始8周后，在pH4～9的條件下殘留率是約89～97％，對于光非常地穩定。一方面，腺苷N1-氧化物在實驗開始8周后，在pH6～9的條件下，殘留率是約63～66％，在pH4～5的條件下，殘留率是約25％，對于光不穩定。另外，5′-葡萄糖基腺苷N-1氧化物在實驗開始8周后，在pH6～9的條件下，殘留率是約24～34％，在pH4～5的條件下，殘留率是約10％，對于光非常地不穩定。由于在太陽光照射下被預測比在熒光燈照射下更快速地分解，顯示腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉在各種的pH條件下，與其類似物比較對于光更穩定的上述結果顯示腺苷N1-氧化物5′-磷酸作為皮膚外用劑的有效成分更有用。再者，根據作為用于評價化學物質或其混合物的安全性的國際上認可的試驗方法的OECD測試指南的“TG432：體外3T3NRU光毒性試驗”進行試驗的結果，腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉、腺苷N1-氧化物、3′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物及5′-α-葡萄糖基腺苷N1-氧化物上確認不到光毒性。因此，含有腺苷N1-氧化物5′-磷酸、其類似物及其鹽的皮膚外用劑被認為安全。以下，舉實施例進一步詳細地說明本發明，但本發明的技術范圍不應被解釋為受這些實施例的任何限定。【實施例1：化妝水】【配合處方】配合成分(質量％)(1)甘油4.0(2)亞丙基二醇3.0(3)1,2-戊烷二醇0.1(4)腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉1.0(5)聚氧乙烯(20摩爾)油醇0.5(6)虎耳草提取物2.0(7)乙醇5.0(8)香料適量(9)純化水余量將上述配合處方的成分(1)乃至(4)溶解于純化水(9)后，緩慢地添加成分(5)乃至(8)的混合物而混合，由此調制化妝水。本品由于配合了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉，是促進皮膚的更新的優良的化妝水，作為在皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、彈性蛋白產生的維持或亢進作用、抗皺紋作用、抗細紋作用、抗松弛作用、抗色斑作用上也優良的抗老化用化妝水有用。另外，由于配合了1,2-戊烷二醇，所以是防腐效果及保濕性優良的化妝水。【實施例2：乳液】【配合處方】配合成分(質量％)(1)1,2-己烷二醇5.0(2)辛基十二醇4.0(3)腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉0.1(4)抗壞血酸2-葡萄糖苷(株式會社林原銷售、商品名“AA2G”)2.0(5)聚氧乙烯油基醚(20E.O.)1.0(6)硬脂酸0.5(7)乳油木果油2.0(8)密蠟4.0(9)對羥基安息香酸酯0.2(10)榅桲種子提取物5.0(11)黃原膠0.1(12)植酸0.02(13)維生素E0.01(14)純化水余量將上述的成分(1)、(3)、(10)、(11)及純化水(14)混合而作為水相。接下來，將成分(2)、(5)～(9)、(12)及(13)加熱、混合而作為油相。向油相添加水相，均一地混合之后，冷卻，加成分(4)而均質地混合而得到乳液。本品由于配合了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及抗壞血酸2-葡萄糖苷，所以是促進皮膚的更新的優良的乳液，作為在皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、彈性蛋白產生的維持或亢進作用、抗皺紋作用、抗細紋作用、抗松弛作用、抗色斑作用上也優良的抗老化用乳液有用。【實施例3：化妝用乳液】【配合處方】配合成分(質量％)(1)硬脂酸2.5(2)鯨蠟醇1.5(3)凡士林5.0(4)流動石蠟10.0(5)聚氧乙烯油酸酯2.0(6)醋酸生長酚0.5(7)甘草酸二鉀0.2(8)聚乙二醇(1500)3.0(9)腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉0.1(10)表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.5(11)1,2-己烷二醇0.1(12)純化水余量根據上述處方，將配合成分根據常規方法混合之后，再者，加適量的香料而制造乳液。本品由于配合了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉及表沒食子兒茶素沒食子酸酯，所以是促進皮膚的更新的優良的乳液，作為在皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、彈性蛋白產生的維持或亢進作用、抗皺紋作用、抗細紋作用、抗松弛作用、抗色斑作用上也優良的抗老化用乳液有用。【實施例4：化妝用乳霜】【配合處方】配合成分(質量％)(1)硬脂酸5.0(2)鯨蠟基醇5.0(3)角鯊烷8.0(4)凡士林3.0(5)甘油三2-乙基己酸酯7.0(6)二亞丙基二醇6.0(7)甘油4.0(8)腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉0.1(9)依地酸二鈉0.01(10)亞丙基二醇單硬脂酸酯3.0(11)聚氧乙烯(20)鯨蠟基醇醚3.0(12)1,2-己烷二醇0.2(13)香料適量(14)純化水余量向純化水(14)加成分(6)乃至(9)，加溫到60℃，調制水相。另行、將成分(1)乃至(5)、(10)乃至(13)混合，加溫到70℃而調制油相，添加到先調制的水相。將其根據常規方法乳化而制造乳霜。本品由于配合了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉，所以是促進皮膚的更新的優良的乳霜，由于配合了依地酸二鈉(乙二胺四醋酸二鈉)，所以穩定。作為在皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、彈性蛋白產生的維持或亢進作用、抗皺紋作用、抗細紋作用、抗松弛作用、抗色斑作用上也優良，無粘糊而使用感也良好的抗老化用化妝乳霜有用。【實施例5：美容液】【配合處方】配合成分(質量％)(1)麥芽糖醇7.5(2)抗壞血酸2-葡萄糖苷(株式會社林原銷售、商品名“AA2G”)2.0(3)1,2-鏈烷二醇5.0(4)聚乙二醇15001.0(5)乙醇5.0(6)羧基乙烯基聚合物0.4(7)聚丙烯酸鈉0.1(8)聚氧乙烯油基醚(20E.O.)1.5(9)橄欖油0.2(10)腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉0.1(11)氫氧化鉀適量(12)香料適量(13)純化水余量根據上述處方，將配合成分根據常規方法混合，調制美容液。由于配合了腺苷N1-氧化物5′-磷酸鈉，所以本品是促進皮膚的更新的優良的美容液，作為在皮膚的屏障功能的維持或亢進作用、彈性蛋白產生的維持或亢進作用、抗皺紋作用、抗細紋作用、抗松弛作用、抗色斑作用上也優良，涂布到皮膚上也無粘膩感，使用感優良的抗老化用美容液有用。【工業實用性】如以上說明，由本發明的抗老化用皮膚外用劑可改善皮膚的更新，維持或亢進皮膚的屏障功能，增強皮膚中的纖絲聚集蛋白的表達，維持或亢進皮膚中的彈性蛋白的產生，抑制皮膚中的基質金屬蛋白酶-1的產生，或者抑制皮膚中的內皮縮血管肽-1的產生，所以可有效預防或改善伴隨年齡的增加的皮膚的皺紋、細紋、松弛，色斑等。本發明是對本領域有巨大貢獻的有意義的發明。當前第1頁1 2 3