相關(guān)申請本申請要求2014年12月22日提交的美國臨時專利申請第62/095210號的優(yōu)先權(quán)，其通過引用全文納入本文。本公開關(guān)于包含il-17抗體及其抗原結(jié)合片段(例如ain457(蘇金單抗))的穩(wěn)定液體藥物組合物的藥物產(chǎn)品，以及制造這些藥物產(chǎn)品和液體藥物組合物的工藝。
背景技術(shù)：
：il-17a是新近定義的炎性t細(xì)胞子集th17細(xì)胞的中心淋巴因子，th17細(xì)胞在一些自身免疫和炎性過程中非常關(guān)鍵。期望用il-17a中和作用來治療免疫介導(dǎo)疾病的潛在病理生理學(xué)，從而提供癥狀緩解。蘇金單抗(ain457)是一種抑制il-17a活性的高親和力的全人源單克隆抗人抗體，作為一種治療各種自身免疫疾病患者的潛在治療而出現(xiàn)，所述自身免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、糖尿病、哮喘、慢性斑塊型銀屑病和多發(fā)性硬化癥。一些ii期和iii期研究已經(jīng)顯示，蘇金單抗在治療慢性斑塊型銀屑病實(shí)現(xiàn)pasi75方面優(yōu)于安慰劑(例如在研究cain457a2220中，在第12周實(shí)現(xiàn)pasi75方面，蘇金單抗3×150mg和3×75mg都優(yōu)于安慰劑(分別為81.5％和57.1％，相對于9.1％)。蘇金單抗目前被用于治療慢性斑塊型銀屑病的全球iii期研究，同樣顯示優(yōu)于安慰劑，且新近發(fā)現(xiàn)還優(yōu)于依那西普。國際專利申請pct/ep2011/069476提供了基于蔗糖的蘇金單抗凍干組合物，其在臨用前用1ml水復(fù)溶。但是pct/ep2011/069476沒有公開具有長期穩(wěn)定性的蘇金單抗即用型藥物產(chǎn)品或液體藥物組合物。事實(shí)上，蛋白質(zhì)在液體組合物中的邊際穩(wěn)定性經(jīng)常妨礙室溫或冷藏條件下的長期儲存。另外，在溶液中可能發(fā)生各種物理和化學(xué)反應(yīng)(聚集[共價和非共價]、脫酰胺化、氧化、剪切、異構(gòu)化、變性)，導(dǎo)致降解產(chǎn)物水平升高和/或生物活性損失。商業(yè)即用型液體抗體組合物應(yīng)在運(yùn)輸和操作過程中提供足夠的抗體物理和化學(xué)穩(wěn)定性，以確保在將該分子施用給患者時符合劑量和產(chǎn)品安全性的要求。具體來說，可接受的液體抗體組合物必須加強(qiáng)穩(wěn)定性并最大程度減少蛋白質(zhì)降解尤其是蛋白質(zhì)聚集，從而避免嚴(yán)重的免疫原反應(yīng)。而且該組合物必須還具有皮下應(yīng)用可接受的滲透壓和ph值，并具有作為制備(配混、過濾、填充)先決條件的低粘性以及可注射性。平衡這么多要求很困難，使得生產(chǎn)商業(yè)可行的水性生物藥物組合物成為一項(xiàng)技術(shù)挑戰(zhàn)。盡管有以上概述的技術(shù)挑戰(zhàn)，我們現(xiàn)已成功地開發(fā)出新穎且有益的本文所述il-17抗體和抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)的即用型藥物產(chǎn)品和液體藥物組合物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本公開提供了藥物產(chǎn)品，包括容器(例如筆、注射器、小瓶、自我注射器)以及置于容器內(nèi)的液體組合物，所述容器的頂部空間包含小于約12％的氧(例如小于約10％的氧、小于約8％的氧、小于約6％的氧等)。該液體組合物并非自凍干物復(fù)溶，而是一種即用型液體組合物，并大體包含至少一種公開的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)、緩沖液、表面活性劑、甲硫氨酸和穩(wěn)定劑，以及其亞組合。我們發(fā)現(xiàn)聯(lián)合使用特定的穩(wěn)定劑以及容器頂部空間中低氧含量，顯著地助益于該液體藥物產(chǎn)品的長期穩(wěn)定性，并防止該組合物中包含的il-17抗體(例如蘇金單抗)氧化。這些液體組合物具有極佳的性質(zhì)，例如：在25℃儲存13個月之后，通過sec測得團(tuán)聚體形成≤3.5％(對于2.5mm甲硫氨酸)，≤3.0％(對于5mm)；且≤2.2％(對于含20mm甲硫氨酸的組合物)；和在25℃儲存13個月之后，通過rp-hplc測得(主峰之前變體之和)降解產(chǎn)物≤39.4％(對于2.5mm)，≤37.8％(對于5.0mm)，且≤34.5％(對于含20mm甲硫氨酸的組合物)。因此本公開提供藥物產(chǎn)品，其包括具有頂部空間的容器和置于該容器內(nèi)的ph為約5.2至約6.2的液體藥物組合物，其中該頂部空間中的氧含量小于約12％，所述組合物包含約20mg/ml至約175mg/ml的蘇金單抗和約2.5至約20mml-甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。本公開還提供藥物產(chǎn)品，其包括具有頂部空間的容器和置于該容器內(nèi)的液體藥物組合物，其中該頂部空間中的氧含量小于約6％，該組合物包含約25mg/ml至約150mg/ml的本文所述il-17抗體(例如蘇金單抗)、約10mm至約30mmph5.8的組氨酸、約200mm至約225mm海藻糖、約0.02％聚山梨醇酯80和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。本公開還提供了一種減少蘇金單抗氧化的方法，該方法包括：制備ph為約5.2至約6.2且包含約25mg/ml至約150mg/ml本文所述il-17抗體(例如蘇金單抗)和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸的液體組合物；將該液體組合物置于具有頂部空間的容器中；并將該頂部空間中的氧含量調(diào)節(jié)至小于或等于約12％。本公開還提供穩(wěn)定的液體藥物組合物，其包含約25mg/ml至約150mg/ml本文所述il-17抗體(例如蘇金單抗)、約10mm至約30mm緩沖液(例如組氨酸)ph5.8、約200mm至約225mm穩(wěn)定劑(例如海藻糖)、約0.02％表面活性劑(例如聚山梨醇酯80)和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸。本公開還關(guān)于這些藥物產(chǎn)品和穩(wěn)定的液體組合物用于治療各種il-17介導(dǎo)疾病(例如自身免疫疾病，例如銀屑病、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的應(yīng)用，以及包含這些藥物產(chǎn)品和穩(wěn)定的液體組合物的試劑盒。其他組合物、產(chǎn)品、方法、方案、應(yīng)用和試劑盒在以下說明書和所附權(quán)利要求書中提供。通過以下說明書和所附權(quán)利要求書，本文公開的其他特征、優(yōu)點(diǎn)和方面對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。附圖說明圖1a-d顯示不同抗氧化穩(wěn)定劑對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：5℃保持8周之后通過光阻法測得的1μm不溶性(sub-visible)顆粒(顆粒/ml)的參數(shù)估計(jì)(a)、25℃保持8周之后通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)(b)、40℃保持8周之后的dp-sec(％)(c)、40℃保持8周之后的ap-sec(％)(d)。圖2顯示25℃儲存時l-甲硫氨酸濃度對25mg/ml蘇金單抗穩(wěn)定性的影響：通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)?；疑摼€：10mml-甲硫氨酸/5％頂部空間氧含量數(shù)據(jù)的線性擬合；黑色虛線：0mml-甲硫氨酸/5％頂部空間氧含量數(shù)據(jù)的線性擬合。圖3顯示25℃儲存6個月時l-甲硫氨酸、海藻糖和聚山梨醇酯80對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)。圖4a和b顯示，在5mm和0mml-甲硫氨酸存在下，在5℃儲存時l-甲硫氨酸濃度對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響ap-sec(％)(a)和通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)(b)。圖5顯示在5℃保持30個月和在25℃保持13個月之后，l-甲硫氨酸濃度對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：ap-sec(％)(a)和通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)(b)。圖6a和b顯示在40℃儲存3個月之后，l-甲硫氨酸濃度對25mg/ml蘇金單抗液體在小瓶(10％頂部空間氧含量)穩(wěn)定性方面的影響：ap-sec(％)(a)和通過ce-sds測得的雜質(zhì)之和(非還原性)(％)(b)。圖7顯示在25℃儲存時頂部空間氧含量對注射器中的150mg/ml蘇金單抗液體的影響：ap-sec(％)。圖8a-d顯示在25℃(a,b)和5℃(c,d)儲存后，頂部空間氧含量和填充體積對注射器中的150mg/ml蘇金單抗液體ap-sec(％)的影響。a和c的填充體積為0.5ml。b和d的填充體積為1.0ml。圖9顯示在5℃和25℃保持6個月之后，頂部空間氧含量和填充體積對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：通過rp-hplc測得的純度。圖10顯示在25℃儲存6個月之后，l-甲硫氨酸濃度和頂部空間氧含量對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響(a)：ap-sec(％)。圖11顯示氮?dú)獯祾吆蚻-甲硫氨酸濃度對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：通過rp-hplc測定主峰之前的物質(zhì)(％)。圖12a和b顯示在40℃儲存4周之后，ph對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：穩(wěn)定性的分級估計(jì)/2(ph增量為0.3單位的影響)，通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％變化)(a)和ap-sec(％變化)(b)。圖13a-d顯示在5℃儲存之后，ph對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：濁度(ntu)(a)、通過sec測得的純度(％)(b)、通過cex測得的酸性變體(％)(c)、ap-sec(％)(d)。圖14顯示在25℃儲存8周之后，穩(wěn)定劑對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：ap-sec的參數(shù)估計(jì)。圖15顯示搖動之后，表面活性劑對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：通過光阻法測得的≥1μm不溶性微粒的參數(shù)估計(jì)(顆粒/ml)。圖16a-d顯示緩沖劑類型對150mg/ml蘇金單抗液體在注射器穩(wěn)定性方面的影響：凍融應(yīng)力之后的ap-sec(％)參數(shù)估計(jì)(a)、搖動應(yīng)力之后的ap-sec(％)(b)、在25℃儲存8周之后通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)(％)(c)、搖動應(yīng)力之后的dp-sec(％)(d)。具體實(shí)施方式術(shù)語“包含”涵蓋了“包括”以及“由……組成”的含義，例如“包含”x的組合物可僅由x組成，也可包括一些其他成分，例如x+y。關(guān)于數(shù)值x的術(shù)語“約”表示±10％，除非上下文中另外指明?！懊總€月”表示大約每4周(例如每4周)，其約為每28天(例如每28天)。本文所述的術(shù)語“抗體”是指包括整個抗體及其任意抗原結(jié)合片段或單鏈。天然產(chǎn)生的“抗體”是包含通過二硫鍵互相連接的至少兩個重鏈(h)和兩個輕鏈(l)的糖蛋白。各重鏈包含重鏈可變區(qū)(本文縮寫為vh)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個域，ch1、ch2和ch3。各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(本文縮寫為vl)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個域cl。vh和vl區(qū)可進(jìn)一步細(xì)分：稱為高變區(qū)或互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的高度易變區(qū)之間綴有被稱為框架區(qū)(fr)的更保守區(qū)域。各vh和vl包含三個cdr和四個fr，按以下順序從氨基端排列至羧基端：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合域。抗體的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫球蛋白結(jié)合宿主組織或因子，包括免疫系統(tǒng)的各細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(c1q)。在所公開的方法、方案、試劑盒、工藝、應(yīng)用和組合物的一些實(shí)施方式中，采用il-17抗體或il-17受體的抗體，優(yōu)選il-17的抗體，例如蘇金單抗。本文所用“分離的抗體”表示的抗體基本不含具有不同抗原特異性的其他抗體(例如，特異結(jié)合il-17的分離的抗體基本上不含特異結(jié)合il-17以外其他抗原的抗體)。本文使用術(shù)語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”表示單分子組合物的抗體分子制劑。本文使用的術(shù)語“人型抗體”意在包括具有其中框架和cdr區(qū)都源自人來源序列的可變區(qū)的抗體。“人型抗體”不一定由人、人體組織或人體細(xì)胞產(chǎn)生。本文公開的人型抗體可包含并非由人序列編碼的氨基酸殘基(例如通過如下引入的突變：通過在體外隨機(jī)或定點(diǎn)突變形成、通過在抗體基因重組過程中在體內(nèi)在接合處添加n-核苷酸或通過在體內(nèi)體細(xì)胞突變)。在所公開的方法、方案、試劑盒、工藝、應(yīng)用和組合物的一些實(shí)施方式中，il-17抗體是人型抗體、分離的抗體和/或單克隆抗體。本文所使用術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”表示保持特異結(jié)合抗原(例如il-17)的能力的抗體片段。已經(jīng)顯示抗體的抗原結(jié)合功能可通過全長抗體的片段進(jìn)行。術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”所涵蓋的結(jié)合片段的示例包括fab片段，一種由vl、vh、cl和ch1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；f(ab)2片段，一種包含在鉸鏈區(qū)通過二硫橋連接的兩個fab片段的二價片段；fd片段，由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成；fv片段，由抗體單臂的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成；dab片段(ward等，1989nature341：544-546)，由vh結(jié)構(gòu)域組成；和分離的cdr。示例性的抗原結(jié)合部位包括蘇金單抗的cdr，如seqidno:1-6和11-13(表1)中所示，優(yōu)選重鏈cdr3。而且，雖然fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域vl和vh由獨(dú)立的基因進(jìn)行編碼，它們可通過合成接頭采用重組方法連接，從而使得它們可作為單蛋白鏈制得，其中的vl和vh區(qū)配對形成單價分子(作為單鏈fv(scfv)已知；參見例如bird等，1988science242:423-426；huston等，1988proc.natl.acad.sci.85：5879-5883)。這些單鏈抗體也涵蓋在術(shù)語“抗體”內(nèi)。單鏈抗體和抗原結(jié)合片段可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得。在所公開的方法、方案、試劑盒、工藝、應(yīng)用和組合物的一些實(shí)施方式中，采用針對il-17(例如蘇金單抗)或il-17受體抗體的單鏈抗體或抗原結(jié)合片段。術(shù)語“藥物產(chǎn)品”是指其中置有藥物組合物的容器(例如筆、注射器、袋、泵等)。“容器”是指容納液體藥物組合物的任意方式，例如筆、注射器、小瓶、自我注射器、貼片等。各容器具有“頂部空間”，即容器內(nèi)不含液體藥物組合物的區(qū)域。這種頂部空間包含氣體，例如氧和空氣中常見的其他氣體的混合物。頂部空間中的氧含量可進(jìn)行調(diào)節(jié)，例如通過在頂部空間中引入惰性氣體(例如氮、氬等)代替氧。這可主動地實(shí)現(xiàn)(例如通過吹掃)，或者被動地實(shí)現(xiàn)(通過例如將容器放置在一系統(tǒng)中并除去氧(例如通過真空等))。吹掃(例如使用惰性氣體、優(yōu)選氮)可以發(fā)生在將組合物填充到容器中之前、在填充過程中或在放置塞子之前和放置塞子的過程中。本文使用術(shù)語“頂部空間中的氧含量”指給定容器的頂部空間中所發(fā)現(xiàn)的氧百分比?！胺€(wěn)定的”組合物是其中的蛋白質(zhì)在儲存下基本保持其穩(wěn)定性(例如物理、化學(xué)和/或生物活性)的組合物。本領(lǐng)域中有多種測定蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的分析技術(shù)，并綜述于《肽和蛋白質(zhì)藥物遞送》(peptideandproteindrugdelivery)，247-301，vincentlee編輯，marceldekker，inc.，newyork，n.y.，pubs.(1991)和jones，a.adv.drugdeliveryrev.10：29-90(1993)?？稍谶x定溫度下測試選定時間周期內(nèi)的穩(wěn)定性。“穩(wěn)定的”液體抗體組合物是在冷藏溫度(2-8℃)下保持至少6個月、12個月、優(yōu)選2年、更優(yōu)選3年，或在室溫(23-27℃)下保持至少3個月、優(yōu)選6個月、更優(yōu)選1年，或在應(yīng)力條件(～40℃)下保持至少1個月、優(yōu)選3個月、更優(yōu)選6個月后，沒有觀察到明顯變化的液體抗體組合物?？墒褂酶鞣N穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)，例如不超過10％、優(yōu)選5％的抗體單體發(fā)生降解(例如通過sec純度、rp-hplc純度、cex純度、ce-sds純度(非還原性)等測定)?；蛘?，若通過視覺分析或通過使用懸液計(jì)發(fā)現(xiàn)溶液保持清澈至略微乳白色，則可顯示穩(wěn)定性。或者，若在給定時間周期例如至少3個月、優(yōu)選6個月、更優(yōu)選1年之后，組合物的濃度、ph和滲透壓的變化不超過±10％，則可顯示穩(wěn)定性?；蛘?，若在給定時間周期例如至少3個月、優(yōu)選6個月、更優(yōu)選1年之后，效力(例如通過抑制或cex檢測等之中的生物活性所測得)在對照的70-130％(例如至少70％，至少75％，至少76％，至少80％，至少90％，至少91％，至少95％)、優(yōu)選80-120％之內(nèi)，則可顯示穩(wěn)定性。或者，若在給定時間周期例如至少3個月、優(yōu)選6個月、更優(yōu)選1年之后，觀察到抗體的剪切不超過10％、優(yōu)選5％(例如通過dp-sec等測定)，則可顯示穩(wěn)定性?；蛘?，若在給定時間周期例如至少3個月、優(yōu)選6個月、更優(yōu)選1年之后，形成的聚集小于10％、優(yōu)選小于5％(例如通過ap-sec等測定)，則可顯示穩(wěn)定性。或者，若在25℃儲存13個月之后，通過sec測得形成的聚集≤約3.5％、≤約3.0％或≤約2.2％，則可顯示穩(wěn)定性。或者，若在25℃儲存13個月之后，形成的降解產(chǎn)物(通過rp-hplc測得(主峰之前的物質(zhì)))≤約39.4％、≤約37.8％或≤約34.5％，則可顯示穩(wěn)定性。若通過顏色和/或透明度(濁度)的視覺檢查，或通過紫外光散射、尺寸排除色譜(sec)和動態(tài)光散射(dls)測得，抗體的聚集、沉淀和/或變性沒有顯示明顯增加，則該抗體在藥物組合物中保持其物理穩(wěn)定性。另外，蛋白質(zhì)構(gòu)象不應(yīng)該顯著改變，例如通過熒光光譜(確定蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu))或通過ftir光譜(確定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu))評價。若抗體顯示沒有明顯化學(xué)變化，則該抗體在藥物組合物中保持其化學(xué)穩(wěn)定性?；瘜W(xué)穩(wěn)定性可通過檢測并量化該蛋白質(zhì)的化學(xué)改變形式來評估。經(jīng)常改變蛋白質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)的降解過程包括水解或剪切(通過例如尺寸排除色譜[sec]和sds-page的方法來評價)、氧化(通過例如肽圖聯(lián)合質(zhì)譜或maldi/tof/ms的方法來評價)、脫酰胺化(通過例如陽離子交換色譜(cex)、毛細(xì)管等電聚焦、肽圖、異天冬氨酸測定的方法來評價)和異構(gòu)化(通過測定異天冬氨酸含量、肽圖等來評價)。若蛋白質(zhì)/抗體在給定時間的生物活性在制備該藥物組合物時表現(xiàn)出的生物活性的預(yù)定范圍之內(nèi)，則該抗體在藥物組合物中保持其生物活性?？衫缤ㄟ^抗原結(jié)合elisa檢測、效能檢測(例如評價il-17抗體(例如蘇金單抗)結(jié)合il-17并抑制il-6從軟骨細(xì)胞釋放的能力)或半胱胺-cex衍生化來確定抗體的生物活性。本文使用“rp-hplc純度”表示rp-hplc中主峰的百分比，可用于評估蘇金單抗的穩(wěn)定性。使用rp-hplc根據(jù)疏水性分離蘇金單抗及其變體。rp-hplc主峰之前的物質(zhì)是在主峰之前洗出的峰的百分比之和，可包含該抗體的片段化、異構(gòu)化和氧化的物質(zhì)。本文使用“cex純度”表示cex中主峰的百分比，可用于評估蘇金單抗抗體的穩(wěn)定性。使用cex通過測定酸性和堿性變體的百分比來評價蘇金單抗的電荷異質(zhì)性。本文使用“sec純度”表示sec中單體的百分比，可用于評估蘇金單抗的穩(wěn)定性。sec被用于根據(jù)非變性條件下的尺寸將單體蘇金單抗從聚集體和片段中分離。在主峰之前洗出的峰之和報告為聚集產(chǎn)物百分比(ap-sec)，在主峰之后洗出的峰之和報告為降解產(chǎn)物百分比(dp-sec)。本文使用“ce-sds純度”表示ce-sds中完整抗體的百分比，可用于評估蘇金單抗的穩(wěn)定性。使用ce-sds根據(jù)非還原性條件下的分子尺寸將副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物從完整的蘇金單抗中分離。與主峰分離的峰之和報告為雜質(zhì)百分比。本文使用“液體藥物組合物”表示并非自凍干物復(fù)溶的水性組合物，其包含至少一種il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)和至少一種其他賦形劑(例如緩沖液)。該液體藥物組合物可包含其他賦形劑(穩(wěn)定劑、表面活性劑)和其他活性成分。這種制劑也稱為“即用型”制劑。本文使用術(shù)語“凍干物”表示大體上無水的干燥的(例如冷凍干燥的)藥物組合物?？贵w凍干技術(shù)已為本領(lǐng)域中所熟知，例如參見rey和may(2004)《藥物和生物產(chǎn)品的冷凍干燥/凍干》(freeze-drying/lyophilizationofpharmaceutical&biologicalproducts)isbn0824748689。將凍干物復(fù)溶得到水性組合物——通常用于立即使用(例如在1-10天之內(nèi))——因?yàn)閮龈晌镌趶?fù)溶之后往往具有有限的保存期。術(shù)語“高濃度”是指組合物包含大于50mg/ml抗體或其抗原結(jié)合片段。在優(yōu)選實(shí)施方式中，高濃度液體組合物包含≥約50mg/ml、≥約75mg/ml、≥約100mg/ml、≥約125mg/ml、≥約150mg/ml、≥約175mg/ml、≥約200mg/ml或≥約225mg/ml。術(shù)語“il-17”是指il-17a，之前稱為ctla8，包括來自不同物種(例如人、小鼠和猴)的野生型il-17a、il-17a的多形變體和il-17a的功能等價物。根據(jù)本公開的il-17a的功能等價物優(yōu)選與野生型il-17a(例如人il-17a)具有至少約65％、75％、85％、95％、96％、97％、98％或甚至99％的整體序列同一性，并基本保持誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞產(chǎn)生il-6的能力。術(shù)語“kd”意在表示特定抗體-抗原相互作用的離解速率。本文使用術(shù)語“kd”意在表示離解常數(shù)，其從kd相對于ka的比值獲得(即kd/ka)，并表示為摩爾濃度(m)?？贵w的kd值可采用本領(lǐng)域沿用已久的方法確定。確定抗體kd的一種方法是通過使用表面等離子共振，或使用生物傳感器系統(tǒng)例如系統(tǒng)。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-17結(jié)合的kd約為100-250pm(通過測得)。術(shù)語“親和力”是指在單個抗原位點(diǎn)的抗體和抗原之間的相互作用強(qiáng)度。在各抗原位點(diǎn)內(nèi)，抗體“臂”的可變區(qū)通過弱非共價力與抗原在很多位點(diǎn)相互作用；相互作用越多，則親和力越強(qiáng)。本領(lǐng)域中已知評價抗體對各物種il-17的結(jié)合親和力的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，包括例如elisa、蛋白質(zhì)印記法和ria。還可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法來評估結(jié)合動力學(xué)(例如結(jié)合親和力)，例如通過分析。本文使用的術(shù)語“對象”和“患者”包括任何人或非人動物。術(shù)語“非人動物”包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，例如非人靈長類、羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。通過根據(jù)本領(lǐng)域已知和如本文所述方法學(xué)確定的“抑制”一或多種這些il-17功能性質(zhì)(例如，生物化學(xué)、免疫化學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)或其他生物活性等)的抗體，應(yīng)理解為與特定活性相對于無抗體時(或存在不相關(guān)特異性的對照抗體時)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低相關(guān)。抑制il-17活性的抗體會造成所測參數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低，例如降低至少約10％，至少50％、80％或90％，在所公開的方法、應(yīng)用、工藝、試劑盒和組合物的一些實(shí)施方式中，所用il-17抗體可抑制超過95％、98％或99％的il-17功能活性。本文所用的“抑制il-6”表示il-17抗體(例如蘇金單抗)降低來自軟骨細(xì)胞的il-6產(chǎn)生的能力。il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)的生物活性可基于其抑制il-17誘導(dǎo)的永生化的人軟骨細(xì)胞系例如c-20/a4釋放il-6的能力來測定。簡而言之，在檢測的第一天，將c-20/a4細(xì)胞接種到96孔板中，使其貼附，然后在固定的次高濃度的il-17(例如在培養(yǎng)基中為約20-200ng/ml，例如約80ng/ml)和各濃度抗體(例如在檢測板中為約0.01μg/ml-約4μg/ml，例如約0.5μg/ml-約2μg/ml)的存在下孵育過夜。還包含促進(jìn)il-17誘導(dǎo)的il-6產(chǎn)生的tnfalfa(例如在培養(yǎng)基中為約0.01ng/ml-約1ng/ml，例如約0.5ng/ml)，以增加該檢測的動態(tài)范圍。在第二天，通過elisa定量細(xì)胞上清液中的il-6濃度。細(xì)胞上清液中il-6的量與樣品中存在的il-17抗體的活性成反比。通過將其抑制il-17依賴性il-6釋放的能力與抗體參比標(biāo)準(zhǔn)的能力進(jìn)行比較，對抗體測試樣品的生物活性進(jìn)行量化?；诘鞍踪|(zhì)含量將樣品和標(biāo)準(zhǔn)歸一化。根據(jù)歐洲藥典使用平行線測定來計(jì)算相對效力。最終結(jié)果表示為與參比標(biāo)準(zhǔn)相比較的樣品相對效力(百分比)。除非另外指明，術(shù)語“衍生物”用于定義根據(jù)本公開的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)、例如特定序列的(例如可變域)的氨基酸序列變體和共價修飾(例如聚乙二醇化、脫酰胺化、羥基化、磷酸化、甲基化等)?！肮δ苎苌铩卑ň哂兴_il-17抗體或其抗原結(jié)合片段常見的定性生物活性的分子。功能衍生物包括如本文所公開的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段的片段和肽類似物。片段包含位于根據(jù)本公開多肽(例如特定序列)的序列之內(nèi)的區(qū)域。本文所公開的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段的功能衍生物(例如蘇金單抗的功能衍生物)優(yōu)選包含與本文所公開il-17結(jié)合分子的vh和/或vl序列具有至少約65％、75％、85％、95％、96％、97％、98％、或甚至99％的整體序列同一性的vh和/或vl結(jié)構(gòu)域(例如表1的vh和/或vl序列)，并基本保持結(jié)合人il-17或例如抑制il-17誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞的il-6產(chǎn)生的能力?！盎就弧北硎鞠嚓P(guān)的氨基酸或核苷酸序列(例如vh或vl結(jié)構(gòu)域)與特定參考序列相同或具有非實(shí)質(zhì)差異(例如通過保守氨基酸取代)。非實(shí)質(zhì)差異包括較小的氨基酸變化，例如在指定區(qū)(例如vh或vl結(jié)構(gòu)域)的5個氨基酸序列中的1或2個取代。在抗體的情況中，第二抗體具有相同的特異性，并具有至少50％的相同親和力。與本文所公開的序列基本相同(例如至少約85％的序列同一性)的序列也屬于本申請的一部分。在一些實(shí)施方式中，相對于所公開的序列，衍生il-17抗體(例如蘇金單抗衍生物，例如蘇金單抗生物類似抗體)的序列同一性可約為90％或大于90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高。在本文中將關(guān)于天然多肽及其功能衍生物的“同一性”定義為在比對序列并(若需要)引入空位來實(shí)現(xiàn)最大的同一性百分比、且不考慮任意保守取代作為序列同一性部分之后，候選序列中與相應(yīng)天然多肽的殘基相同的氨基酸殘基的百分比。n-或c-端的延伸和插入都不應(yīng)理解為降低同一性。用于比對的方法和計(jì)算機(jī)程序是眾所周知的。同一性百分比可通過標(biāo)準(zhǔn)比對算法確定，例如altshul等描述的基本局部比對檢索工具(basiclocalalignmentsearchtool)(blast)((1990)j.mol.biol.，215：403-410)；needleman等的算法((1970)j.mol.biol.，48：444-453)；或meyers等的算法((1988)comput.appl.biosci.，4：11-17)。一組參數(shù)可以是空位罰分為12、空位延伸罰分為4且移碼空位罰分為5的blosum62評分矩陣。兩個氨基酸或核苷酸序列間的同一性百分比也可采用e.meyers和w.miller((1989)cabios，4：11-17)的算法確定，其已整合進(jìn)align程序(2.0版)中，采用pam120權(quán)重殘基表、空位長度罰分為12且空位罰分為4。“氨基酸”是指所有天然產(chǎn)生的l-α-氨基酸(舉例而言)且包括d-氨基酸?！鞍被嵝蛄凶凅w”是指與根據(jù)本公開的序列相比，在其氨基酸序列中具有一些差異的分子。根據(jù)本公開多肽的(例如指定序列的)氨基酸序列變體，仍具有結(jié)合人il-17、或例如抑制il-17誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞產(chǎn)生il-6的能力。氨基酸序列變體包括取代變體(在根據(jù)本公開的多肽中有至少一個氨基酸殘基被除去并在相同位置處插入不同氨基酸)、插入變體(在根據(jù)本公開的多肽中在特定位置處緊鄰某一氨基酸插入一或多個氨基酸)和刪除變體(在根據(jù)本公開的多肽中除去一或多個氨基酸)。術(shù)語“藥學(xué)上可接受”表示不干擾活性成分的生物活性有效性的非毒性材料。使用與化合物例如il-17結(jié)合分子或另一種試劑相關(guān)的術(shù)語“施用”表示通過任何途徑將該化合物遞送給患者。本文使用的“治療有效量”表示il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗的量，其以單或多劑施用于患者(例如人)能有效用于治療、預(yù)防、防止發(fā)作、治愈、延遲、減輕嚴(yán)重性、改善疾病或復(fù)發(fā)疾病的至少一種癥狀或者延長患者生存超出無此治療所預(yù)期。當(dāng)用于單獨(dú)應(yīng)用的個體活性成分(例如il-17抗體，例如蘇金單抗)時，該術(shù)語僅指該成分。當(dāng)用于組合時，該術(shù)語指導(dǎo)致治療效果的活性成分的總量，無論是否組合、序列或同時施用。術(shù)語“治療”是指預(yù)防性治療以及治愈或疾病改善性治療，包括治療存在感染疾病風(fēng)險或疑似感染疾病以及已經(jīng)得病或者被診斷出罹患疾病或醫(yī)學(xué)癥狀的患者，還包括抑制臨床復(fù)發(fā)。為了使一或多種病癥或復(fù)發(fā)病癥得以防止、治愈、延遲發(fā)作、減輕嚴(yán)重性或者改善，或者為了延長患者的預(yù)期生存超出無此治療所預(yù)期，可將治療施用于已經(jīng)有醫(yī)學(xué)癥狀或最終可能得病的患者。使用“施用手段”表示向患者全身性施用藥物的任何可用器具，包括但不限于預(yù)填充注射器、小瓶和注射器、注射筆、自我注射器、靜脈滴注袋、泵、膜片泵等。患者可用這些器具自行施用藥物(即獨(dú)自施用藥物)或者內(nèi)科醫(yī)師可用這些器具施用藥物。通常，以“mg/kg”給出的劑量經(jīng)由靜脈途徑施用，以“mg”給出的劑量經(jīng)由肌內(nèi)或皮下注射施用。在所公開的方法、試劑盒、方案和應(yīng)用的一些實(shí)施方式中，經(jīng)由靜脈途徑將il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗遞送給患者。在所公開的方法、試劑盒、方案和應(yīng)用的一些實(shí)施方式中，經(jīng)由皮下途徑將il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗遞送給患者。il-17抗體及其抗原結(jié)合片段所公開的藥物產(chǎn)品、組合物、液體組合物、方案、工藝、應(yīng)用、方法和試劑盒包含或利用il-17抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(vh)，其包含高變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有氨基酸序列seqidno:1，所述cdr2具有氨基酸序列seqidno:2，所述cdr3具有氨基酸序列seqidno:3。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含至少一個免疫球蛋白輕鏈可變域(vl)，其包含高變區(qū)cdr1’、cdr2’和cdr3’，所述cdr1’具有氨基酸序列seqidno:4，所述cdr2’具有氨基酸序列seqidno:5，所述cdr3’具有氨基酸序列seqidno:6。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含至少一個免疫球蛋白重鏈可變域(vh)，其包含高變區(qū)cdr1-x、cdr2-x和cdr3-x，所述cdr1-x具有氨基酸序列seqidno:11，所述cdr2-x具有氨基酸序列seqidno:12，所述cdr3-x具有氨基酸序列seqidno:13。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含至少一個免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和至少一個免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域，其中：a)該免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域包含(例如依次是)：i)高變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1具有氨基酸序列seqidno:1，所述cdr2具有氨基酸序列seqidno:2，所述cdr3具有氨基酸序列seqidno:3；或ii)高變區(qū)cdr1-x、cdr2-x和cdr3-x，所述cdr1-x具有氨基酸序列seqidno:11，所述cdr2-x具有氨基酸序列seqidno:12，所述cdr3-x具有氨基酸序列seqidno:13；和b)該免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域包含(例如依次是)高變區(qū)cdr1’、cdr2’和cdr3’，所述cdr1’具有氨基酸序列seqidno:4，所述cdr2’具有氨基酸序列seqidno:5，所述cdr3’具有氨基酸序列seqidno:6。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含：a)免疫球蛋白重鏈可變域(vh)，其包含如seqidno:8所示的氨基酸序列；b)免疫球蛋白輕鏈可變域(vl)，其包含如seqidno:10所示的氨基酸序列；c)免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域，其vh包含如seqidno:8所示的氨基酸序列，其vl包含如seqidno:10所示的氨基酸序列；d)免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域，其包含如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示的高變區(qū)；e)免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域，其包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示的高變區(qū)；f)免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域，其包含如seqidno:11、seqidno:12和seqidno:13所示的高變區(qū)；g)免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域，其vh包含如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示的高變區(qū)，其vl包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示的高變區(qū)；或h)免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域，其vh包含如seqidno:11、seqidno:12和seqidno:13所示的高變區(qū)，其vl包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示的高變區(qū)。為便于參考，基于kabat定義以及通過x射線分析測定并采用chothia及同事的方法，下表1中提供了蘇金單抗單克隆抗體高變區(qū)的氨基酸序列。表1：蘇金單抗單克隆抗體高變區(qū)的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，恒定區(qū)也優(yōu)選包含合適的人恒定區(qū)，例如如“免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)序列(sequencesofproteinsofimmunologicalinterest)”，kabate.a.等，美國健康和人服務(wù)部(usdepartmentofhealthandhumanservices)，公眾健康服務(wù)(publichealthservice)，國家健康研究院(nationalinstituteofhealth)中所述。編碼蘇金單抗的vl的dna如seqidno:9中所示。編碼蘇金單抗的vh的dna如seqidno:7中所示。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:10的三個cdr。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體包含seqidno:8的三個cdr。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體包含seqidno:10的三個cdr和seqidno:8的三個cdr。按照chothia和kabat的定義，seqidno:8和seqidno:10的那些cdr可見于表1中。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:14的輕鏈。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:15的重鏈。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:14的輕鏈和seqidno:15的重鏈。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:14的三個cdr。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:15的三個cdr。在其他實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗包含seqidno:14的三個cdr和seqidno:15的三個cdr。按照chothia和kabat的定義，seqidno:15和seqidno:17的那些-cdr可見于表1中。高變區(qū)可與任意種類的框架區(qū)相連，盡管優(yōu)選人源。合適的框架區(qū)如kabate.a.等(同前)中所述。優(yōu)選的重鏈框架是人重鏈框架，例如蘇金單抗抗體的重鏈框架。其依次由例如fr1(seqidno:8的氨基酸1至30)、fr2(seqidno:8的氨基酸36至49)、fr3(seqidno:8的氨基酸67至98)和fr4(seqidno:8的氨基酸117至127)區(qū)組成。考慮到通過x射線分析確定的蘇金單抗高變區(qū)，另一優(yōu)選的重鏈框架依次由fr1-x(seqidno:8的氨基酸1至25)、fr2-x(seqidno:8的氨基酸36至49)、fr3-x(seqidno:8的氨基酸61至95)和fr4(seqidno:8的氨基酸119至127)區(qū)組成。在一種類似方式中，輕鏈框架依次由fr1’(seqidno:10的氨基酸1至23)、fr2’(seqidno:10的氨基酸36至50)、fr3’(seqidno:10的氨基酸58至89)和fr4’(seqidno:10的氨基酸99至109)區(qū)組成。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗選自人il-17抗體，其至少包含：a)免疫球蛋白重鏈或其片段，其包含可變域以及人重鏈的恒定部分或其片段，該可變域依次包含高變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3；所述cdr1具有seqidno:1的氨基酸序列，所述cdr2具有seqidno:2的氨基酸序列，所述cdr3具有seqidno:3的氨基酸序列；和b)免疫球蛋白輕鏈或其片段，其包含可變域以及人輕鏈的恒定部分或其片段，該可變域依次包含高變區(qū)cdr1’、cdr2’和cdr3’，所述cdr1’具有seqidno:4的氨基酸序列，所述cdr2’具有seqidno:5的氨基酸序列，所述cdr3’具有seqidno:6的氨基酸序列。在一個實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗選自包含抗原結(jié)合位點(diǎn)的單鏈結(jié)合分子，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)包含：a)依次包含高變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的第一結(jié)構(gòu)域，所述cdr1具有seqidno:1的氨基酸序列，所述cdr2具有seqidno:2的氨基酸序列，所述cdr3具有seqidno:3的氨基酸序列；和b)依次包含高變區(qū)cdr1’、cdr2’和cdr3’的第二結(jié)構(gòu)域，所述cdr1’具有seqidno:4的氨基酸序列，所述cdr2’具有seqidno:5的氨基酸序列，所述cdr3’具有seqidno:6的氨基酸序列；和c)連接第一結(jié)構(gòu)域的n-端末端和第二結(jié)構(gòu)域的c-端末端或連接第一結(jié)構(gòu)域的c-端末端和第二結(jié)構(gòu)域的n-端末端的肽接頭。可選地，所公開方法中所用的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗可包含如本文由序列所示分子的衍生物(例如蘇金單抗的聚乙二醇化的形式)?；蛘撸_方法中所用的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗的vh或vl結(jié)構(gòu)域可具有與本文中所示的vh或vl結(jié)構(gòu)域(例如在seqidno:8和10中所示的那些)基本相同的vh或vl結(jié)構(gòu)域。本文所公開的人il-17抗體可包含與如seqidno:15所示基本相同的重鏈和/或與如seqidno:14所示基本相同的輕鏈。本文公開的人il-17抗體可包含包含seqidno:15的重鏈和包含seqidno:14的輕鏈。本文所公開的人il-17抗體可包含：a)重鏈，其包含可變域和人重鏈的恒定部分，該可變域具有與seqidno:8中所示基本相同的氨基酸序列；和b)輕鏈，其包含可變域和人輕鏈的恒定部分，該可變域具有與seqidno:10中所示基本相同的氨基酸序列?；蛘?，所公開方法中所用的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗可以是本文所示參考分子的氨基酸序列變體。在所有這些衍生物和變體的情況中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗能在約50nm或更小、約20nm或更小、約10nm或更小、約5nm或更小、約2nm或更小、或更優(yōu)選約1nm或更小的所述分子濃度下抑制約1nm(＝30ng/ml)人il-17的活性50％，所述抑制活性是在人皮膚成纖維細(xì)胞中通過人-il-17誘導(dǎo)的il-6產(chǎn)生而測定。對il-17結(jié)合至其受體的抑制可方便地在包括例如w02006/013107中所述的各種檢測中進(jìn)行測試。術(shù)語“達(dá)到相同程度”表示在本文提及的一種檢測中，參比和衍生物分子在統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)上表現(xiàn)出基本上相同的il-17抑制活性(參見wo2006/013107實(shí)施例1)。例如，對于人皮膚成纖維細(xì)胞中由人il-17誘導(dǎo)il-6產(chǎn)生的抑制，按wo2006/013107實(shí)施例1中所述檢測時，本文公開的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段通常具有低于約10nm、更優(yōu)選約9、8、7、6、5、4、3、2或約1nm的ic50，優(yōu)選與相應(yīng)參比分子的ic50基本相同?；蛘?，所用檢測可以是通過可溶性il-17受體(例如wo2006/013107實(shí)施例1的人il-17r/fc結(jié)構(gòu))和本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段來競爭性抑制il-17結(jié)合的檢測。本公開還包括il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗，其中的vh或vl結(jié)構(gòu)域的一或多個氨基酸殘基(通常僅數(shù)個，例如1-10)相對于seqidno:8和seqidno:10所示的vh或vl結(jié)構(gòu)域發(fā)生改變；例如通過突變，例如相應(yīng)dna序列的定向誘變。本公開包括編碼這些發(fā)生改變的il-17抗體的dna序列。本公開還包括對人il-17具有結(jié)合特異性的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗，尤其是能抑制il-17結(jié)合至其受體的il-17抗體以及能以以下所述分子濃度抑制1nm(＝30ng/ml)人il-17活性50％的il-17抗體：約50nm或更小、約20nm或更小、約10nm或更小、約5nm或更小、約2nm或更小、或更優(yōu)選約1nm或更小(所述抑制活性通過在人皮膚成纖維細(xì)胞中由人-il-17誘導(dǎo)的il-6產(chǎn)生測定)。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體例如蘇金單抗結(jié)合至包含leu74、tyr85、his86、met87、asn88、val124、thr125、pro126、ile127、val128、his129的成熟人il-17表位。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體例如蘇金單抗結(jié)合至包含tyr43、tyr44、arg46、ala79、asp80的成熟人il-17表位。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體例如蘇金單抗結(jié)合至具有兩條成熟人il-17鏈的il-17同型二聚體的表位，所述表位在一條鏈上包含leu74、tyr85、his86、met87、asn88、val124、thr125、pro126、ile127、val128、his129，并在另一條鏈上包含tyr43、tyr44、arg46、ala79、asp80。用于定義這些表位的殘基編號方案是基于作為成熟蛋白質(zhì)第一個氨基酸的殘基(即缺少23氨基酸n-端信號肽并以甘氨酸開始的il-17a)。不成熟il-17a的序列在swiss-prot記錄q16552中示出。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體具有約100-200pm的kd，例如通過測定。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體對于體外中和約0.67nm人il-17a生物活性的ic50約為0.4nm。在一些實(shí)施方式中，皮下(s.c.)施用il-17抗體的絕對生物利用度具有約60-約80％的范圍，例如約76％。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體例如蘇金單抗，具有約4周的消除半衰期(例如約23至約35天、約23至約30天、例如約30天)。在一些實(shí)施方式中，il-17抗體例如蘇金單抗具有約7-8天的tmax。本公開的方法、應(yīng)用、試劑盒等所用的特別優(yōu)選的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗是人型抗體，特別是如wo2006/013107(us7807155，其通過引用全文納入本文)的實(shí)施例1和2中所述的蘇金單抗。蘇金單抗是一種igg1/kappa同種型的重組高親和力全人源單克隆抗人白細(xì)胞介素-17a(il-17a、il-17)抗體，目前在臨床試驗(yàn)中用于治療免疫介導(dǎo)的炎性病癥。蘇金單抗(參見例如wo2006/013107和wo2007/117749)對于il-17具有非常高的親和力，即，kd約為100-200pm(例如通過測定)，且體外中和約0.67nm人il-17a生物活性的ic50約為0.4nm。因此，蘇金單抗以約1:1的摩爾比抑制抗原。這種高結(jié)合親和力使得蘇金單抗抗體特別適合治療應(yīng)用。而且，已確定蘇金單抗具有非常長的半衰期，即約4周，這允許施用間的周期延長，在治療慢性終生病癥例如銀屑病時是一種優(yōu)越的性質(zhì)。包含il-17抗體或抗原結(jié)合片段的藥物產(chǎn)品本公開寬泛地提供了包括容器和置于該容器內(nèi)的液體組合物的藥物產(chǎn)品，該容器的頂部空間中包含小于約12％的氧，該液體組合物包含上述il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗。容器本公開的藥物產(chǎn)品采用初級包裝即容器來儲存、運(yùn)輸和保持所公開的液體組合物。藥學(xué)上可接受的用作所公開藥物產(chǎn)品一部分的容器包括注射器(例如可獲自becktondickinson、nuovaompi等)、帶塞子的小瓶、藥匣、自我注射器、膜片泵和注射筆。頂部空間氧我們發(fā)現(xiàn)，通過包含特定穩(wěn)定劑(例如甲硫氨酸)并同時用惰性氣體(例如氬、氦、氮)優(yōu)選n2替換藥物產(chǎn)品的頂部空間中的氧，能增強(qiáng)本公開液體組合物中il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)的穩(wěn)定性。具體來說，我們發(fā)現(xiàn)相對于未吹掃產(chǎn)品，容器經(jīng)過氧吹掃、即頂部空間中的氧小于約12％的藥物產(chǎn)品具有提高的穩(wěn)定性，例如通過sec和rp-hplc測定。使用吹掃(例如氮吹掃)來改變頂部空間中的氧含量可在填充階段和/或壓塞階段(或兩者)期間實(shí)現(xiàn)。可通過(例如使用針)主動引入惰性氣體或在壓塞期間實(shí)現(xiàn)吹掃(例如氮吹掃)。在一些實(shí)施方式中，頂部空間中的氧含量小于約12％(例如小于約10％、小于約8％、小于約6％等)。在一些實(shí)施方式中，頂部空間中的氧含量小于約6％。頂部空間中的氧含量可通過激光吸收光譜或熒光猝滅或氣相色譜來監(jiān)控。應(yīng)理解，給定容器頂部空間中的氧含量可能隨時間增大，例如因?yàn)槁?。因此，本文使用“頂部空間中的氧含量”表示產(chǎn)品封閉(例如壓塞)之后即刻的容器頂部空間中的初始氧含量。液體組合物本公開的液體組合物包含如上所述的至少一種il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)，以及至少一種其他賦形劑，例如緩沖劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑等。在一些實(shí)施方式中，液體組合物包含至少兩種其他賦形劑，例如緩沖劑和穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施方式中，液體組合物包含緩沖液、至少一種穩(wěn)定劑和表面活性劑。一般來說，藥物組合物配制有與預(yù)期施用途徑相容的賦形劑(例如，口服組合物通常包含惰性稀釋劑或可食用載劑)。施用途徑的示例包括胃腸外(例如靜脈內(nèi))、皮內(nèi)、皮下、經(jīng)口(例如通過口或吸入)、透皮(局部)、透黏膜和直腸。本公開的液體抗體組合物適合于胃腸外施用例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下注射；特別適合于皮下注射。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存6個月后保持至少約86％的rp-hplc純度，在25℃/60％rh儲存6個月后至少約76％的rp-hplc純度(優(yōu)選至少約76％)，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后至少約60％的rp-hplc純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持至少約84％的rp-hplc純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存6個月后保持至少約77％的cex純度，在25℃/60％rh儲存6個月后至少約62％的cex純度，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后至少約50％的cex純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持至少約73％的cex純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存6個月后保持至少約98％的sec純度，在25℃/60％rh儲存6個月后至少約96％的sec純度，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后至少約94％的sec純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持至少約97％的sec純度。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存6個月后保持至少約97％的ce-sds純度(非還原性條件)，在25℃/60％rh儲存6個月后至少約95％的ce-sds純度(非還原性條件)，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后至少約94％(優(yōu)選至少約92％)的ce-sds純度(非還原性條件)。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持至少約97％的ce-sds純度(非還原性條件)。在一些實(shí)施方式中，本文公開的液體組合物在2-8℃儲存6個月后保持小于約0.57％的ce-sds雜質(zhì)(還原性條件)，在25℃/60％rh儲存6個月后小于約1.1％的ce-sds雜質(zhì)(還原性條件)，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后小于約1.9％的ce-sds雜質(zhì)(還原性條件)。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持小于約0.91％的ce-sds雜質(zhì)(非還原性條件)。在一些實(shí)施方式中，本公開的液體組合物在2-8℃儲存24個月后保持抑制c-20/a4軟骨細(xì)胞il-6釋放的至少約88％的相對生物活性，在25℃/60％rh儲存6個月后抑制軟骨細(xì)胞il-6釋放的至少約94％的相對生物活性，和/或在30℃/75％rh儲存6個月后抑制軟骨細(xì)胞il-6釋放的至少約85％的相對生物活性。抗體濃度本公開液體組合物中所用的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)如上所述。一種優(yōu)選的組合物包含蘇金單抗。我們發(fā)現(xiàn)至少在約25mg/ml至約150mg/ml的范圍內(nèi)，抗體濃度不會顯著影響組合物穩(wěn)定性。因此在一些實(shí)施方式中，液體組合物中的抗體以至少25mg/ml的濃度存在(例如約25mg/ml至約150mg/ml)。在一些實(shí)施方式中，液體組合物中的抗體濃度為至少約25mg/ml、至少約50mg/ml、至少約75mg/ml、至少約100mg/ml或至少約150mg/ml的高濃度。在一些實(shí)施方式中，液體組合物中的抗體濃度為約25mg/ml-約150mg/ml的高濃度。在一個實(shí)施方式中，液體組合物中的蘇金單抗?jié)舛葹榧s25mg/ml。在一個實(shí)施方式中，液體組合物中的蘇金單抗?jié)舛葹榧s150mg/ml。緩沖液和ph用于本公開液體組合物的合適緩沖試劑包括但不限于葡糖酸鹽緩沖液、組氨酸緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽[例如鈉或鉀]緩沖液、琥珀酸鹽[例如鈉]緩沖液、乙酸鹽緩沖液、tris緩沖液、甘氨酸、精氨酸及其組合。我們發(fā)現(xiàn)琥珀酸鹽或乙酸鹽緩沖液對蘇金單抗液體組合物的穩(wěn)定性沒有有利影響。就sec、cex-酸性測得的降解產(chǎn)物和通過rp-hplc測得的聚集產(chǎn)物而言，檸檬酸鹽緩沖液被評價為在組合物中是有益的?？傮w上，組氨酸緩沖液在通過sec、cex酸性和rp-b測得的聚集和降解產(chǎn)物方面顯示出優(yōu)勢。因此，對于所公開的穩(wěn)定蘇金單抗液體組合物而言，組氨酸緩沖液是優(yōu)選的緩沖液。組氨酸緩沖液(例如濃度為約5mm至約50mm、例如約20mm至約50mm、約5mm、約10mm、約15mm、約20mm、約25mm、約30mm、約35mm、約40mm、約45mm、約50mm)是特別適用的。在一個實(shí)施方式中，穩(wěn)定的液體組合物包含約20mm至約50mm組氨酸緩沖液。液體組合物的ph可在4.0-8.0范圍內(nèi)，其中在約5.5-約7.4范圍內(nèi)的ph是典型的，例如約5.2至約6.2、約5.2至約5.8、例如約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6、約6.2、約6.4、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4。我們發(fā)現(xiàn)將ph從5.2升高到5.8觀察到穩(wěn)定性增大的趨勢(sec-ap、dls、sec-dp、alp-dp、cex堿性、rp-hplc)?？傮w測試表明本公開液體組合物的理想組合物ph為5.8。因此在一個實(shí)施方式中，穩(wěn)定的液體抗體組合物的ph為約5.8。表面活性劑適用于本公開液體組合物的表面活性劑包括但不限于非離子型表面活性劑、離子型表面活性劑、兩性離子表面活性劑及其組合。用于本發(fā)明的典型表面活性劑包括但不限于山梨聚糖脂肪酸酯(例如山梨聚糖單辛酸酯、山梨聚糖單月桂酸酯、山梨聚糖單棕櫚酸酯)，山梨聚糖三油酸酯，甘油脂肪酸酯(例如甘油單辛酸酯、甘油單肉豆蔻酸酯、甘油單硬脂酸酯)，聚甘油脂肪酸酯(例如十甘油基單硬脂酸酯、十甘油基二硬脂酸酯、十甘油基單亞油酸酯)，聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(例如聚氧乙烯山梨聚糖單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單棕櫚酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖三油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖三硬脂酸酯)，聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯山梨醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯)，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯(例如聚氧乙烯甘油基單硬脂酸酯)，聚乙烯乙二醇脂肪酸酯(例如聚乙烯乙二醇二硬脂酸酯)，聚氧乙烯烷基醚(例如聚氧乙烯月桂基醚)，聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚(例如聚氧乙烯聚氧丙烯乙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鯨蠟基醚)，聚氧乙烯烷基苯基醚(例如聚氧乙烯壬基苯基醚)，聚氧乙烯氫化蓖麻油(例如聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油)，聚氧乙烯蜂蠟衍生物(例如聚氧乙烯山梨醇蜂蠟)，聚氧乙烯羊毛脂衍生物(例如聚氧乙烯羊毛脂)，和聚氧乙烯脂肪酸酰胺(例如聚氧乙烯硬脂酸酰胺)；c10-c18烷基硫酸鹽(例如鯨蠟基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、油烯基硫酸鈉)，具有平均添加2至4摩爾環(huán)氧乙烷單元的聚氧乙烯c10-c18烷基醚硫酸鹽(例如聚氧乙烯月桂基硫酸鈉)，和c1-c18烷基磺基琥珀酸酯鹽(例如月桂基磺基琥珀酸酯鈉鹽)；和天然表面活性劑例如卵磷脂、甘油磷脂、鞘磷脂(例如神經(jīng)鞘磷脂)，和c12-c18脂肪酸的蔗糖酯。組合物可包含一或多種這些表面活性劑。優(yōu)選的表面活性劑是泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)或聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯，例如聚山梨醇酯20、40、60或80。聚山梨醇酯80(tween80)(例如濃度為約0.01％-約0.1％(w/v)、例如約0.01％至約0.04％(w/v)、例如約0.01％、約0.02％、約0.04％、約0.06％、約0.08％、約0.1％)是特別合適的。在一個實(shí)施方式中，穩(wěn)定的液體組合物包含約0.02％(w/v)聚山梨醇酯80。在一個實(shí)施方式中，穩(wěn)定的液體組合物包含約0.02％(w/v)聚山梨醇酯20。我們發(fā)現(xiàn)在缺少表面活性劑的液體組合物中，濁度會顯著增大，且可見顆粒數(shù)量會增大。但是與聚山梨醇酯20和80相比，除了alp-dp和rp增大以外，沒有檢測到泊洛沙姆188具有優(yōu)勢。在防止?jié)岫仍龃?、不溶性微粒和可見顆粒增多方面，聚山梨醇酯20和80顯示出可比的功效。因此，聚山梨醇酯20和80是優(yōu)選的用于本公開的穩(wěn)定液體組合物的表面活性劑。穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑有助于防止藥物組合物、尤其是液體藥物組合物中的蛋白質(zhì)氧化和聚集，這些藥物組合物因水性溶液中的蛋白質(zhì)容易氧化和/或聚集而具有較短貨架保存期?？墒褂酶鞣N分析方法來評估給定組合物的穩(wěn)定性，例如可使用rp-hplc來評估本公開液體組合物中的氧化產(chǎn)物(主峰之前)的含量，可使用sec評估本公開液體組合物中的聚集水平。適用于本公開液體組合物的穩(wěn)定劑包括離子型和非離子型穩(wěn)定劑(及其組合)，例如糖、甘氨酸、氯化鈉、精氨酸、edta、抗壞血酸鈉、半胱氨酸、硫酸氫鈉、檸檬酸鈉、甲硫氨酸和芐醇。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含至少一種來自第1組的穩(wěn)定劑(例如糖[例如海藻糖、甘露醇]、氨基酸[例如甘氨酸、精氨酸]和氯化鈉)。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含至少一種來自第2組的穩(wěn)定劑(edta、抗壞血酸鈉、半胱氨酸、硫酸氫鈉、檸檬酸鈉、甲硫氨酸和芐醇)。第2組穩(wěn)定劑傾向于具有抗氧化性質(zhì)，可減少il-17抗體中的殘基氧化。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含兩種穩(wěn)定劑——一種來自第1組，一種來自第2組。對于第1組穩(wěn)定劑，優(yōu)選非離子型穩(wěn)定劑。合適的非離子型穩(wěn)定劑包括單糖、二糖和三糖，例如海藻糖、棉籽糖、麥芽糖、山梨醇或甘露醇。糖可以是糖醇或氨基糖。第1組穩(wěn)定劑的濃度可為約175mm至約350mm、例如約200mm至約300mm、例如約250mm至約270mm、例如約180至約300mm、約200mm至約225mm、約175mm、約180mm、約185mm、約190mm、約195mm、約200mm、約225mm、約250mm、約270mm、275mm、約300mm。濃度為約200mm至約300mm(例如約250mm至約270mm)的甘露醇、濃度為約180mm至約300mm例如約200mm至約225mm的海藻糖、濃度為約130mm至約150mm的氯化鈉、濃度為約160mm的精氨酸、濃度為約270mm的甘氨酸尤其有用。我們發(fā)現(xiàn)使用甘氨酸作為穩(wěn)定劑(第1組)在sec-ap和dls方面略有優(yōu)勢，但是觀察到幾乎所有降解產(chǎn)物都增加。nacl作為穩(wěn)定劑(第1組)導(dǎo)致通過sec和cex堿性變體測定的降解和聚集產(chǎn)物增加。幾乎所有分析都驗(yàn)證海藻糖和甘露醇作為差不多的有益穩(wěn)定劑發(fā)揮作用，但是甘露醇顯示出略差的效果(sec-ap、dls)，而且水溶性低于海藻糖。因此，由于其對降解產(chǎn)物的正向效果，海藻糖是優(yōu)選的第1組穩(wěn)定劑。在一個實(shí)施方式中，液體組合物包含約200mm至約225mm海藻糖。在一個實(shí)施方式中，液體組合物包含約200mm海藻糖。在一個實(shí)施方式中，液體組合物包含約225mm海藻糖。我們發(fā)現(xiàn)第2組穩(wěn)定劑對蘇金單抗液體組合物的穩(wěn)定性產(chǎn)生顯著影響。實(shí)驗(yàn)顯示不使用第2組穩(wěn)定劑不如包含第2組穩(wěn)定劑的組合物(sec-ap、dls、濁度、rp-b)。edta四鈉和半胱氨酸在各分析方法中都顯示出聚集和降解產(chǎn)物增加。加入第2組穩(wěn)定劑半胱氨酸時，在凍融應(yīng)力之后得到渾濁的組合物，并在40℃儲存4周之后沉淀。但是我們發(fā)現(xiàn)考慮分析結(jié)果，甲硫氨酸在所有組合物中都是有利的。因此，對于第2組穩(wěn)定劑，優(yōu)選還具有抗氧化性質(zhì)的甲硫氨酸。第2組穩(wěn)定劑(例如甲硫氨酸)的濃度可為至少約2.5mm、例如約2.5至約20mm、例如至少約2.5mm、至少約5mm、至少約10mm或至少約20mm(例如約2.5mm、約5mm、約10mm或約20mm)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含至少一種來自第1組的穩(wěn)定劑和甲硫氨酸。在一些實(shí)施方式中，本公開液體組合物包含約5mm甲硫氨酸。其他賦形劑本公開的液體抗體組合物可包含其他賦形劑，例如其他緩沖劑、鹽(例如氯化鈉、琥珀酸鈉、硫酸鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂和氯化鈣)、其他穩(wěn)定劑、張度調(diào)節(jié)劑(例如鹽和氨基酸[例如脯氨酸、丙氨酸、l-精氨酸、天冬酰胺、l-天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、賴氨酸和組氨酸])、甘油、白蛋白、醇、防腐劑、其他表面活性劑、抗氧化劑等。關(guān)于這些其他藥物成分的詳細(xì)討論參見gennaro(2000)remington：thescienceandpracticeofpharmacy.第20版，isbn：0683306472。其他活性試劑il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗以外，本公開的藥物產(chǎn)品和穩(wěn)定液體組合物還可包含一或多種其他活性試劑(例如銀屑病試劑、銀屑病關(guān)節(jié)炎試劑、強(qiáng)直性脊柱炎試劑、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試劑)。藥物組合物中可包含這些其他因子和/或試劑，從而與il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，或者最大程度減小由il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗引起的副作用?？膳c本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的銀屑病試劑的示例包括環(huán)孢霉素、甲氨喋呤、嗎替麥考酚酯、霉酚酸、柳氮磺吡啶、6-硫鳥嘌呤、富馬酸酯(例如富馬酸二甲酯和富馬酸酯)、硫唑嘌呤、皮質(zhì)類固醇、來氟米特、他克莫司、t-細(xì)胞阻斷劑(例如(阿法賽特)和(依法珠單抗)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)阻斷劑(例如(依那西普)、(阿達(dá)木單抗)、(英夫利昔單抗)和(戈利木單抗))和白細(xì)胞介素12/23阻斷劑(例如(優(yōu)特克單抗)、托法替尼和布雷奴單抗。可與本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制用于治療銀屑病的其他銀屑病試劑包括阿普斯特、莫米松、伏環(huán)孢素、酮康唑、紐斯福特(neuroskinforte)、重組人白細(xì)胞介素-10、伏環(huán)孢素、mk-3222、托法替尼、vx-765、med-1545、氟非那嗪癸酸酯、撲熱息痛、比莫西糖乳膏、多西環(huán)素、萬古霉素、abgn168、維生素d3、ro5310074、氟達(dá)拉濱卡泊三醇和氫化可的松(leo80190)、弗西特瑞亞(單價mf59-佐劑疫苗、tgaac94基因療法載體、辣椒素、普賽克斯、abt-874(抗il-12)、idec-114、medi-522、le29102、bms587101、cd2027、crx-191、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素或5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、比西林l-a、ly2525623、incb018424、ly2439821、cep-701、cc-10004、賽妥珠單抗(czp)、gw786034(帕唑帕尼)、多西環(huán)素類姜黃素類c3復(fù)合物、nyc0462、rg3421、hokt3γ1(ala-ala)、bt061、特立珠單抗、硫酸軟骨素、cnto1275、il-12p40和il-23p40亞單元的單克隆抗體、bms-582949、mk0873、medi-507、m518101、abt-874、amg827、an2728、amg714、amg139、pth(1-34)、u0267foam、cnto1275、qrx-101、cnto1959、leo22811、咪喹莫特、ctla4ig、巴氏杜氏藻、吡格列酮、吡美莫司、蘭尼珠單抗、齊多夫定cdp870(賽妥珠單抗)、奧那西普(γ-htbp-1)、act-128800、4,4-二甲基-苯并異-2h-硒嗪、crx-191、crx-197、度骨化醇、las41004、wbi-1001、他克莫司、rad001、雷帕霉素、羅格列酮、吡格列酮、abt-874、氨基蝶呤、an2728、cd2027、act-128800、糠酸莫米松、ct327、氯倍他索+lcd、btt1023、e6201、局部維生素b12、ip10.c8、bfh772、leo22811、氟奮乃靜、mm-093、clobex、sch527123、cf101、srt2104、birt2584、cc10004、四硫鉬酸鹽、cp-690、550、u0267、asp015k、vb-201、阿曲汀a(也稱為u0279)、rwj-445380、丙酸氯倍他索、a型肉毒桿菌毒素、阿法賽特、厄洛替尼、bct194、羅氟司特、cnto1275、烏倍他索、ilv-094、cta018乳膏、col-121、medi-507、aeb071。可與本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的其他銀屑病試劑包括il-6拮抗劑、cd20拮抗劑、ctla4拮抗劑、il-17拮抗劑、il-8拮抗劑、il-21拮抗劑、il-22拮抗劑、vgef拮抗劑、cxcl拮抗劑、mmp拮抗劑、防御素拮抗劑、il-1β拮抗劑和il-23拮抗劑(例如受體誘餌、拮抗抗體等)。可與蘇金單抗共同配制的優(yōu)選銀屑病試劑是dmard(例如mtx和環(huán)孢霉素)、il-12/-23拮抗劑(例如優(yōu)特克單抗)，ctla-4拮抗劑(例如ctla4-ig)和tnf-α拮抗劑。寬泛地說，可與本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試劑、銀屑病關(guān)節(jié)炎試劑和強(qiáng)直性脊柱炎試劑可具體為免疫抑制劑、dmard、疼痛控制藥、類固醇、非甾體抗炎藥(nsaid)、細(xì)胞因子拮抗劑、骨合成代謝劑、骨抗再吸收劑，及其組合。代表性試劑包括環(huán)孢霉素、視黃醇、皮質(zhì)類固醇、丙酸衍生物、乙酸衍生物、烯醇酸衍生物、滅酸衍生物、cox-2抑制劑、羅美昔布、布洛芬、膽堿水楊酸鎂、非諾洛芬、雙水楊酯、二氟苯水楊酸、托美汀、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普嗪、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、萘丁美酮、萘普生、伐地考昔、艾托考昔、mk0966、羅非考昔、對乙酰氨基酚、塞來考昔、雙氯芬酸、曲馬多、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、哚昔康、氯諾昔康、伊索昔康、甲芬那酸、甲氯芬那酸、氯芬那酸、托芬那、伐地考昔、帕瑞昔布、依托度酸、吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬、非羅考昔、甲氨蝶呤(mtx)、抗瘧藥(例如羥氯喹和氯喹)、柳氮磺吡啶、來氟米特、硫唑嘌呤、環(huán)孢霉素、氯金酸鈉、米諾環(huán)素、環(huán)磷酰胺、d-青霉胺、米諾環(huán)素、金諾芬、他克莫司、硫代苯酸金鈉、苯丁酸氮芥、tnfα拮抗劑(例如tnfα拮抗劑或tnfα受體拮抗劑)、例如阿達(dá)木單抗依那西普英夫利昔單抗(ta-650)、賽妥珠單抗(cdp870)、戈利木單抗(cnto148)、阿那白滯素利妥昔單抗阿巴西普托珠單抗(roactemra/)、整合素拮抗劑((那他珠單抗))、il-1拮抗劑(acz885(ilaris))、阿那白滯素)、cd4拮抗劑、il-23拮抗劑、il-20拮抗劑、il-6拮抗劑、blys拮抗劑(例如阿塞西普，(貝利木單抗))、p38抑制劑、cd20拮抗劑(奧瑞珠單抗、奧法木單抗)，干擾素γ拮抗劑(芳妥珠單抗)、潑尼松龍、潑尼松、地塞米松、考的索、可的松、氫化可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、氟羥潑尼松龍、倍氯米松、氟氫可的松、去氧皮質(zhì)酮、醛固酮、sb-681323、rob803、azd5672、ad452、smp114、hzt-501、cp-195、543、多西環(huán)素、萬古霉素、crx-102、amg108、吡格列酮、sbi-087、scio-469、cura-100、oncoxin+viusid、twhf、pf-04171327、azd5672、甲氧沙林、arry-438162、維生素d-麥角鈣化醇、米那普侖、紫杉醇、gw406381、羅格列酮、sc12267(4sc-101)、ly2439821、btt-1023、erb-041、erb-041、kb003、cf101、adl5859、mp-435、ilv-094、gsk706769、gw856553、ask8007、mor103、he3286、cp-690、550(托法替尼)、regn88(sar153191)、tru-015、bms-582949、sbi-087、ly2127399、e-551s-551、h-551、gsk3152314a、rwj-445380、他克莫司rad001、西羅莫司、雷帕霉素、福他替尼、芬太尼、xoma052、cnto136、jnj38518168、伊馬替尼、atn-103、isis104838、葉酸、葉酸鹽、tnfαkinoid、mm-093、ii型膠原蛋白、vx-509、amg82770、馬賽替尼(ab1010)、ly2127399、環(huán)孢霉素、sb-681323、mk0663、nnc0151-0000-0000、atn-103、ccx354-c、cam3001、lx3305、西曲瑞克、mdx-1342、tmi-005、mk0873、cdp870、曲尼司特、cf101、霉酚酸(及其酯)、vx-702、glpg0259、sb-681323、bg9924、art621、lx3305、t-614、福他替尼二鈉(r935788)、cci-779、arry-371797、cdp6038、amg719、bms-582949、gw856553、羅格列酮、ch-4051、ce-224、535、gsk1827771、gw274150、bg9924、plx3397、tak-783、incb028050、ly2127399、ly3009104、r788、姜黃素(longvidatm)、瑞舒伐他汀、pro283698、amg714、mtrx1011a、馬拉維若、medi-522、mk0663、sta5326甲磺酸鹽、ce-224、535、amg108、bg00012(bg-12；biogen)、雷米普利、vx-702、crx-102、ly2189102、sbi-087、sb-681323、cdp870、米那普侖、pd0360324、ph-797804、ak106-001616、pg-760564、pla-695、mk0812、ald518、考前列酮、促生長激素、tgaac94基因療法載體、mk0359、gw856553、埃索美拉唑、依維莫司、曲妥珠單抗、骨合成代謝劑和骨抗再吸收劑(例如pth，二膦酸鹽(例如唑來膦酸)、jak1和jak2抑制劑、泛jak抑制劑例如四環(huán)吡啶酮6(p6)、325、pf-956980、硬骨素蛋白拮抗劑(例如在wo09047356、wo2000/32773、wo2006102070、us20080227138、us20100028335、us20030229041、wo2005003158、wo2009039175wo2009079471、wo03106657、wo2006119062、wo08115732、wo2005/014650、wo2005/003158、wo2006/119107、wo2008/061013、wo2008/133722、wo2008/115732、us7592429、us7879322、us7744874中公開的，它們的內(nèi)容通過引用全文納入本文[優(yōu)選用于本公開方法、藥物組合物、試劑盒和應(yīng)用的抗殼硬蛋白抗體及其抗原結(jié)合部分參見wo09047356(等同于us7879322)、wo06119107(等同于us7872106和us7592429)和wo08115732(等同于us7744874)])、地諾單抗、il-6拮抗劑、cd20拮抗劑、ctla4拮抗劑、il-8拮抗劑、il-21拮抗劑、il-22拮抗劑、整合素拮抗劑((那他珠單抗))、vgef拮抗劑、cxcl拮抗劑、mmp拮抗劑、防御素拮抗劑、il-1拮抗劑(包括il-1β拮抗劑)和il-23拮抗劑(例如受體誘餌、拮抗抗體等)?？膳c本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試劑是dmard(例如甲氨蝶呤)和tnfα拮抗劑。可與本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的優(yōu)選強(qiáng)直性脊柱炎試劑是nsaid、dmard(例如柳氮磺吡啶)和tnfα拮抗劑?？膳c本公開il-17抗體例如蘇金單抗共同配制的優(yōu)選銀屑病關(guān)節(jié)炎試劑是dmards(例如環(huán)孢霉素)、ctla-4阻斷劑(例如clta4-ig)、阿法塞特和tnfα拮抗劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠了解以上試劑與本公開il-17抗體例如蘇金單抗形成共組合物時的合適劑量。本文公開了穩(wěn)定的液體藥物組合物，其包含約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)、約10mm至約30mm緩沖劑(例如組氨酸)ph5.2-約6.0、約200mm至約225mm穩(wěn)定劑(例如海藻糖)、約0.02％表面活性劑(例如聚山梨醇酯80)和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物的液體藥物組合物中的甲硫氨酸濃度為約2.5mm、約5mm、約10mm或約20mm，優(yōu)選約5mm。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物的ph為約5.8。在一些實(shí)施方式中，本公開組合物的蘇金單抗?jié)舛葹榧s25mg/ml或約150mg/ml。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含選自組氨酸緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液和琥珀酸鹽緩沖液的緩沖液。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物采用濃度為約20mm的組氨酸緩沖液。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含選自聚山梨醇酯和泊洛沙姆的表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物還包含選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和泊洛沙姆188的表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含濃度為約0.01％(w/v)至約0.04％(w/v)的聚山梨醇酯80，優(yōu)選為約0.02％(w/v)。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含濃度為約0.02％(w/v)的聚山梨醇酯20。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含選自甘露醇、氯化鈉、海藻糖、精氨酸hcl和甘氨酸的穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施方式中，液體藥物組合物包含濃度為約180mm至約300mm的海藻糖，優(yōu)選為約200mm或約225mm。本公開提供了藥物產(chǎn)品，其包括：具有頂部空間的容器，其中該頂部空間中的氧含量小于約12％，以及置于所述容器內(nèi)的ph為約5.2至約6.2的液體藥物組合物，所述組合物包含：約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)；和約2.5至約20mml-甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。在一些實(shí)施方式中，本公開藥品的液體藥物組合物中甲硫氨酸濃度為約2.5mm、約5mm、約10mm或約20mm，優(yōu)選約5mm。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品頂部空間中的氧含量小于約10％，例如小于約8％，優(yōu)選小于約6％。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物的ph為約5.8。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的蘇金單抗?jié)舛葹榧s25mg/ml或約150mg/ml。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含選自組氨酸緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液和琥珀酸鹽緩沖液的緩沖液。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物采用濃度為約10mm至約30mm的緩沖液。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物采用濃度為約20mm的組氨酸緩沖液。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含選自聚山梨醇酯和泊洛沙姆的表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和泊洛沙姆188的表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含濃度為約0.01％(w/v)至約0.04％(w/v)、優(yōu)選為約0.02％(w/v)的聚山梨醇酯80。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含濃度為約0.02％(w/v)的聚山梨醇酯20。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含選自甘露醇、氯化鈉、海藻糖、精氨酸hcl和甘氨酸的穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的液體藥物組合物還包含濃度為約180mm至約300mm、優(yōu)選為約200mm至約225mm的海藻糖。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的容器是藥匣、注射器、筆或小瓶。本公開提供了藥物產(chǎn)品，其包括：具有頂部空間的容器，其中該頂部空間中的氧含量小于約6％；和置于所述容器內(nèi)的液體藥物組合物，所述組合物包含約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)、約10mm至約30mmph5.8的組氨酸、約200mm至約225mm海藻糖、約0.02％聚山梨醇酯80和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。在一些實(shí)施方式中，藥物產(chǎn)品包含約25mg/ml蘇金單抗和約225mm海藻糖。在一些實(shí)施方式中，藥物產(chǎn)品包含約150mg/ml蘇金單抗和約200mm海藻糖。在一些實(shí)施方式中，本公開藥物產(chǎn)品的容器是藥匣、注射器、筆或小瓶。在一些實(shí)施方式中，藥物產(chǎn)品具有足夠量的il-17拮抗劑以能夠遞送每單位劑量至少約75mg-約300mg的il-17拮抗劑(例如il-17抗體，例如蘇金單抗)。在一些實(shí)施方式中，藥物產(chǎn)品具有足夠量的il-17拮抗劑(例如il-17抗體，例如蘇金單抗)以能夠遞送每單位劑量至少約10mg/kg。在一些實(shí)施方式中，將藥物產(chǎn)品配制成能夠靜脈內(nèi)遞送每單位劑量約10mg/kg的il-17拮抗劑(例如il-17抗體，例如蘇金單抗)的劑量。在一些實(shí)施方式中，將藥物產(chǎn)品配制成能夠皮下遞送每單位劑量約75mg-約300mg的il-17拮抗劑(例如il-17抗體，例如蘇金單抗)的劑量。制造液體組合物和藥物產(chǎn)品的工藝本文還描述了制造本公開藥物產(chǎn)品和液體組合物的工藝。這些工藝幫助減少本公開il-17抗體的氧化。簡言之，液體組合物如下制備：將所需賦形劑(例如第1組穩(wěn)定劑(例如海藻糖)、第2組穩(wěn)定劑(甲硫氨酸)、表面活性劑(例如ps80)、緩沖液(例如組氨酸))與il-17抗體或其抗原階段片段(例如蘇金單抗)組合至所需濃度(例如約25至約150mg/ml蘇金單抗、約20mmph5.8的組氨酸、約200mm至約225mm海藻糖、約0.02％聚山梨醇酯80和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸)和ph(例如約ph5.8)。然后將這種液體組合物置于所選容器中(例如小瓶、注射器、藥匣[例如與自我注射器一起使用])。將頂部空間中的氧含量調(diào)節(jié)至所需水平(例如小于約12％、小于10％、小于約8％、小于約6％等)，該調(diào)節(jié)可在用液體組合物填充容器之前、用液體組合物填充容器過程中、或在壓塞/密封容器過程中進(jìn)行。本公開提供了減少蘇金單抗氧化的工藝，包括：制備ph為約5.2至約6.2并包含約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)和約2.5mm至約20mm甲硫氨酸的液體組合物；將所述液體組合物置于具有頂部空間的容器中；將頂部空間中的氧含量調(diào)節(jié)至小于或等于約12％。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)步驟c)通過使用惰性氣體吹掃頂部空間來進(jìn)行。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，惰性氣體是氮或氬。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，液體組合物中甲硫氨酸濃度為約2.5mm、約5mm、約10mm或約20mm，優(yōu)選約5mm。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，將頂部空間中的氧含量調(diào)節(jié)至小于約10％，例如小于約8％，優(yōu)選小于約6％。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，液體組合物的ph為約5.8。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，液體組合物中蘇金單抗?jié)舛葹榧s25mg/ml或約150mg/ml。在本公開工藝的一些實(shí)施方式中，容器是藥匣、注射器、筆或小瓶。使用藥物產(chǎn)品和液體組合物的方法本公開藥物產(chǎn)品和液體組合物將被用于治療例如罹患自身免疫疾病(例如銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎等)的患者。當(dāng)然，合適劑量將根據(jù)例如要使用的特定il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗、宿主、施用模式以及待治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重性來變化，并取決于患者經(jīng)歷的先前治療的性質(zhì)。最終，主治的健康護(hù)理提供者將決定其治療的每個個體患者的il-17抗體量。在一些實(shí)施方式中，主治的健康護(hù)理提供者可施用低劑量的il-17抗體并觀察患者響應(yīng)。在其他實(shí)施方式中，施用于患者的il-17抗體初始劑量較高，然后逐漸向下滴定直至出現(xiàn)復(fù)發(fā)信號。可施用較大劑量的il-17抗體直至患者獲得最佳治療效果，一般不再增加劑量。通常從活性化合物(例如蘇金單抗)第一劑量那天(稱為“基線”)開始測量給藥時間。但是不同的健康護(hù)理提供者使用不同的命名規(guī)則，如下表2中所示。周o/11/22/33/44/55/66/77/88/9等第1天o/17/814/1521/2228/2935/3642/4349/5056/57等表2-常規(guī)的給藥方案命名規(guī)則。粗體項(xiàng)表示本文所用的命名規(guī)則。顯然，零周可能被一些健康護(hù)理提供者稱為第1周，而零天可能被一些健康護(hù)理提供者稱為第一天。因此，不同的醫(yī)師可以指定，例如在第3周期間/在第21天、在第3周期間/在第22天、在第4周期間/在第21天、在第4周期間/在第22天的劑量，都表示相同的給藥安排。出于一貫性，在本文中將給藥首周稱為第0周，而將給藥的首日稱為第1天。但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，使用這種命名規(guī)則只是簡單地為了保持一貫性，不應(yīng)理解為限制性的，即周劑量是il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗的一周的劑量，不論醫(yī)師是否將特定周稱為“第1周”或“第2周”。作為采用本文指定規(guī)則的命名示例，可在第0周期間(例如在約第1天)、在第1周期間(例如在約第8天)、在第2周期間(例如在約第15天)、在第3周期間(例如在約第22天)和在第4周期間(例如在約第29天)提供每周施用的五個劑量蘇金單抗。應(yīng)理解，劑量不需在確切時間點(diǎn)提供，例如應(yīng)大約在第29天的劑量可以在例如第24天至第34天、例如第30天提供，只要在合適的那周內(nèi)提供。在一些實(shí)施方式中，本公開方法和應(yīng)用采用持續(xù)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16周的初始(有時候稱為“誘導(dǎo)”)方案。在一些實(shí)施方式中，初始方案在第0、1、2和3周期間使用劑量。在其他實(shí)施方式中，初始方案在第0、1、2、3、4、8和12周期間使用劑量。在一些實(shí)施方式中，初始方案包括施用若干(例如1、2、3、4、5、6、7，優(yōu)選4或5)個劑量的約150mg-300mg、例如約四或五個劑量的150mg或300mg(優(yōu)選五個劑量的約150mg-約300mg)的il-17抗體例如蘇金單抗。在其他實(shí)施方式中，初始劑量每周、每兩周、每隔一周或每月[每4周]遞送，優(yōu)選每周遞送。在一些實(shí)施方式中，在第0、1、2和3周以初始劑量通過皮下注射施用150mg或300mg的il-17抗體例如蘇金單抗。對于維持方案，可每個月(也稱為“每月”劑量)(即每4周，即約每28天)、每兩個月(即每8周，即約每56天)、或每三個月(即每12周，即約每84天)提供一個劑量。在一些實(shí)施方式中，維持方案在第12周后開始。在一些實(shí)施方式中，維持方案在第3周后開始。維持方案的第一個劑量通常在自誘導(dǎo)方案最終劑量起算的某個日期施用。因此舉例來說，若誘導(dǎo)方案的最終劑量在第12周期間給出，則作為每月[每4周]維持方案一部分的第一個劑量將在第16周期間遞送，作為每兩個月維持方案一部分的第一個劑量將在第20周期間遞送，作為每三個月維持方案一部分的第一個劑量將在第24周期間遞送等。在一些實(shí)施方式中，維持方案包括每周、每兩周、每月[每4周]、每隔一個月、每季度、每半年或每年施用一個劑量的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗。在一些實(shí)施方式中，維持方案采用每月劑量(每4周)。在一些實(shí)施方式中，維持方案的第一個劑量在第4周期間或第16周期間遞送。在一些實(shí)施方式中，維持方案包括施用一個劑量的約150mg-300mg(例如約150mg或約300mg)的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗。在加載方案、誘導(dǎo)方案和/或維持方案期間，il-17抗體例如蘇金單抗的遞送可經(jīng)由皮下途徑例如遞送約75mg-約300mg(例如約50mg、約75mg、約100mg、約125mg、約150mg、約175mg、約200mg、約225mg、約250mg、約275mg、約300mg、約325mg)的劑量，經(jīng)由靜脈內(nèi)途徑例如遞送約1mg/kg-約50mg/kg(例如約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg等)的劑量，或任意其他施用途徑(例如肌內(nèi)，i.m.)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，il-17抗體的劑量是皮下遞送的。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過皮下注射在第0、1、2和3周以初始劑量、然后在第4周開始以每月維持劑量向患者施用約150mg-約300mg(例如約150mg或約300mg)劑量的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗。在此方案中，給藥發(fā)生在第0、1、2、3、4、8、12、16、20周等各周。300mg劑量可以兩次150mg皮下注射提供。本公開提供了治療自身免疫疾病(例如銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎)的方法，包括向需要的患者通過皮下注射以第0、1、2和3周的初始劑量、以及隨后在第4周開始的每月維持劑量施用約150mg-約300mg(例如約150mg或約300mg)劑量的il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗，其中該il-17抗體或其抗原結(jié)合片段例如蘇金單抗作為藥物組合物的一部分提供，該藥物組合物包含以下組分：約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)、ph為約5.2至約6.2的緩沖液和約2.5至約20mm的甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。本公開提供了il-17抗體(例如蘇金單抗)用于制備治療患者自身免疫疾病(例如銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎)所用藥物的應(yīng)用，其中該藥物經(jīng)配制包括容器以及置于所述容器內(nèi)的液體藥物組合物，各容器具有氧含量小于約12％(例如小于約10％、小于約8％、小于約7％、小于約6％等)的頂部空間，所述組合物包含：約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)；ph為約5.2至約6.2的緩沖液；和約2.5至20mm的甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶。包含藥物產(chǎn)品和液體組合物的試劑盒本公開還涵蓋用于治療各種自身免疫疾病(例如銀屑病)的試劑盒。這些試劑盒大體包括至少一種本公開藥物產(chǎn)品或液體組合物以及使用說明。該說明公開了將穩(wěn)定的液體組合物提供給患者作為給藥方案一部分的合適技術(shù)。這些試劑盒還可包含用于治療自身免疫疾病例如銀屑病的其他試劑(如上所述)，用于與所含液體組合物聯(lián)合(即同時或按順序[之前或之后])遞送。本公開提供了用于治療罹患自身免疫疾病(例如銀屑病)的患者的試劑盒，其包括：a)具有頂部空間的容器，其中該頂部空間中的氧含量小于約12％(例如小于約10％、小于約8％、小于約7％、小于約6％等)，b)置于所述容器內(nèi)的液體藥物組合物，所述組合物包含：i)約20mg/ml至約175mg/ml(例如約25mg/ml至約150mg/ml)本公開il-17抗體或其抗原結(jié)合片段(例如蘇金單抗)；ii)ph為約5.2至約6.2的緩沖液；和iii)約2.5至20mm甲硫氨酸，其中該液體藥物組合物并非自凍干物復(fù)溶；和c)用于向患者施用該液體藥物組合物的說明。在一些實(shí)施方式中，該容器是筆、預(yù)充裝注射器、自我注射器或小瓶。概述在本公開的一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段選自：a)il-17抗體，其結(jié)合包含leu74、tyr85、his86、met87、asn88、val124、thr125、pro126、ile127、val128、his129的il-17表位；b)il-17抗體，其結(jié)合包含tyr43、tyr44、arg46、ala79、asp80的il-17表位；c)il-17抗體，其結(jié)合具有兩個成熟的il-17蛋白鏈的il-17同型二聚體的表位，所述表位在一條鏈上包含leu74、tyr85、his86、met87、asn88、val124、thr125、pro126、ile127、val128、his129且在另一條鏈上包含tyr43、tyr44、arg46、ala79、asp80；d)il-17抗體，其結(jié)合具有兩條成熟il-17蛋白鏈的il-17同型二聚體的表位，所述表位在一條鏈上包含leu74、tyr85、his86、met87、asn88、val124、thr125、pro126、ile127、val128、his129并在另一條鏈上包含tyr43、tyr44、arg46、ala79、asp80，其中該il-17結(jié)合分子具有(例如通過測得)約100-約200pm的kd，并且其中該il-17結(jié)合分子具有約23-約30天的體內(nèi)半衰期；和e)包含選自下組抗體的il-17抗體：i)免疫球蛋白重鏈可變域(vh)，包含如seqidno:8所示的氨基酸序列；ii)免疫球蛋白輕鏈可變域(vl)，包含如seqidno:10所示的氨基酸序列；iii)包含如seqidno:8所示氨基酸序列的免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和包含如seqidno:10所示氨基酸序列的免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域；iv)按順序包含如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示高變區(qū)的免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域；v)按順序包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示高變區(qū)的免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域；vi)按順序包含如seqidno:11、seqidno:12和seqidno:13所示高變區(qū)的免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域；vii)按順序包含如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示高變區(qū)的免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和按順序包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示高變區(qū)的免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域；和viii)按順序包含如seqidno:11、seqidno:12和seqidno:13所示高變區(qū)的免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域和按順序包含如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示高變區(qū)的免疫球蛋白vl結(jié)構(gòu)域；ix)包含如seqidno:15(具有或沒有c-端賴氨酸)所示氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈；x)包含如seqidno:14所示氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈；xi)包含如seqidno:15(具有或沒有c-端賴氨酸)所示氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈和包含如seqidno:14所示氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。在本公開方法的一些實(shí)施方式中，il-17抗體或其抗原結(jié)合片段是人型抗體，優(yōu)選蘇金單抗。本公開一或多個實(shí)施方式的細(xì)節(jié)伴隨以上說明書中提出。雖然可使用與本文所述類似或相同的任何方法和材料來實(shí)施或測試本公開，但是以下描述優(yōu)選的方法和材料。通過說明書和權(quán)利要求書，本文公開的其他特點(diǎn)、目的和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。在說明書和所附權(quán)利要求書中，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指代物，除非上下文中清楚地另外指明。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有本公開所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。說明書中引用的所有專利和出版物都通過引用納入本文。為更全面說明本公開的優(yōu)選實(shí)施方式，呈現(xiàn)以下實(shí)施例。這些實(shí)施例決不應(yīng)理解為限制所公開主題的范圍，該范圍由所附權(quán)利要求書限定。實(shí)施例應(yīng)理解本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方式僅是為了說明目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能由此想到的各種修飾和變化都包括在申請書的精神和范圍以及權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。這些實(shí)施例描述了蘇金單抗的穩(wěn)定液體組合物的開發(fā)。數(shù)據(jù)顯示組合物ph和第2組穩(wěn)定劑的選擇對液體組合物的穩(wěn)定性有很大影響。數(shù)據(jù)還顯示頂部空間的氧含量對液體組合物的穩(wěn)定性的影響。抗體濃度、表面活性劑選擇、第1組穩(wěn)定劑的選擇以及緩沖體系的選擇對穩(wěn)定性的影響較小。因此，當(dāng)考慮對穩(wěn)定性具有較大影響的變量時，所公開的藥物產(chǎn)品包括具有頂部空間的容器(例如pfs或小瓶)，其中該頂部空間中的氧含量小于約12％，以及置于所述容器內(nèi)的液體藥物組合物，所述組合物的ph為約5.2至約6.2并包含濃度為約20mg/ml至175mg/ml的蘇金單抗和約2.5至約20mml-甲硫氨酸。當(dāng)既考慮對穩(wěn)定性具有大影響又考慮對穩(wěn)定具有小影響的變量時，所公開的藥物產(chǎn)品包括具有頂部空間的容器(例如pfs或小瓶)，其中該頂部空間中的氧含量小于約12％，以及置于所述容器內(nèi)的液體藥物組合物，所述組合物的ph為約5.2至約6.2，并且包含蘇金單抗、緩沖液、表面活性劑、穩(wěn)定劑和約2.5至約20mml-甲硫氨酸。根據(jù)下述數(shù)據(jù)，優(yōu)選的液體組合物包含約25mg/ml-約165mg/ml蘇金單抗、約185mm-約225mm海藻糖、約0.01％-約0.03％聚山梨醇酯80、約2.5mm-約20mml-甲硫氨酸和約ph為約5.8的10-30mm組氨酸緩沖液(例如約20mm組氨酸緩沖液)。一種優(yōu)選的液體組合物i包含約150mg/ml蘇金單抗、約200mm海藻糖、約0.02％聚山梨醇酯80、約5mml-甲硫氨酸和約20mmph為約5.8組氨酸緩沖液。一種優(yōu)選的藥物產(chǎn)品i包含置于預(yù)充裝注射器(pfs)中的上述液體組合物i。另一種優(yōu)選的液體組合物ii包含約25mg/ml蘇金單抗、約225mm海藻糖、約0.02％聚山梨醇酯80、約5mml-甲硫氨酸和約20mmph為約5.8組氨酸緩沖液。一種優(yōu)選的藥物產(chǎn)品ii包含置于小瓶中的上述液體組合物ii。表3：實(shí)施例中使用的縮寫表4：實(shí)施例中使用的分析1.1部分i-詳細(xì)分析對蘇金單抗液態(tài)穩(wěn)定性產(chǎn)生較大影響的變量(頂部空間氧、ph和l-甲硫氨酸)1.1.1實(shí)施例1：l-甲硫氨酸使用一大組分析技術(shù)表征了若干抗氧化穩(wěn)定劑對蘇金單抗穩(wěn)定性的影響。在早期研究中，對一定范圍的抗氧化穩(wěn)定劑進(jìn)行了評價，包括edta四鈉、抗壞血酸鈉、半胱氨酸、硫酸氫鈉和檸檬酸鈉。雖然這些穩(wěn)定劑中沒有一種穩(wěn)定劑充分地穩(wěn)定了該分子，但是與不含抗氧化穩(wěn)定劑的組合物相比，還是在sec測得的聚集產(chǎn)物上觀察到edta四鈉和檸檬酸鈉產(chǎn)生少量的穩(wěn)定影響(數(shù)據(jù)未顯示)。在進(jìn)一步研究中，使用150mg/ml的蘇金單抗?jié)舛炔捎胐oe方法，評價了10mm濃度的穩(wěn)定劑半胱氨酸、edta四鈉和l-甲硫氨酸并與無穩(wěn)定劑的情況比較。將組合物填充到pfs中并以長期(5℃)、加速(25℃)和應(yīng)力(40℃)條件進(jìn)行2個月的穩(wěn)定性研究，并就物理穩(wěn)定性(ap-sec、dls、濁度、通過光阻法測得的可見顆粒和不溶性微粒)、化學(xué)穩(wěn)定性(cex純度、rp-hplc純度、顏色)和生物活性指示子(cys-cex活性、游離sh基團(tuán))進(jìn)行評價。另外，向填充在2ml小瓶中的組合物施加了凍融(-20℃至室溫的5個循環(huán))和搖動應(yīng)力(150rpm保持一周)。發(fā)現(xiàn)l-甲硫氨酸是用于蘇金單抗的最好的第2組穩(wěn)定劑。這可通過cex純度和rp-hplc純度測得的較高純度水平、較低的濁度水平和可見顆粒計(jì)數(shù)來證明。與沒有穩(wěn)定劑的組合物相比，l-甲硫氨酸存在時顯示出明顯更好的穩(wěn)定性。在25℃和40℃加速條件下進(jìn)行8周穩(wěn)定性測試之后，具有l(wèi)-甲硫氨酸的組合物具有較低水平的ap-sec、更一致的dls數(shù)據(jù)、較低的濁度以及較少量的通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)。edta由于ap-sec、dls、通過cex測得的堿性變體、以及通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)增加而不利。各種分析方法都顯示半胱氨酸會導(dǎo)致幾乎所有的聚集和降解產(chǎn)物都增加。圖1列出在不同條件下儲存之后的選定性質(zhì)屬性。只有l(wèi)-甲硫氨酸觀察到對蘇金單抗具有一致的穩(wěn)定效果。特別在通過rp-hplc(圖1b)測得的主峰之前物質(zhì)和ap-sec(圖1d)觀察到穩(wěn)定效果。還在濁度和通過dlc測得的流體動力學(xué)半徑方面觀察到進(jìn)一步的效果。在后續(xù)研究中評價了不同l-甲硫氨酸濃度對蘇金單抗性質(zhì)屬性的影響。圖2顯示在25℃儲存期間，蘇金單抗?jié)舛葹?5mg/ml、海藻糖濃度為225mm、聚山梨醇酯80濃度為0.02％、ph5.8組氨酸緩沖液時在有和沒有l(wèi)-甲硫氨酸情況下通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)的變化。將組合物填充到2ml小瓶中并在應(yīng)力條件下儲存長達(dá)3個月。黑色虛線代表由包含0mml-甲硫氨酸的組合物獲得值的線性擬合，灰色虛線代表由包含10mml-甲硫氨酸的組合物獲得值的線性擬合。顯然，在包含l-甲硫氨酸的情況中觀察到降解動力學(xué)減小。對于包含150mg/ml蘇金單抗的組合物還觀察到濃度依賴性影響。對于海藻糖濃度在200mm和300mm之間、聚山梨醇酯80濃度在0.01％和0.04％之間以及l(fā)-甲硫氨酸濃度在0mm至10mm的組合物進(jìn)行了研究。將組合物填充到1mlpfs中并在長期、加速和應(yīng)力條件下儲存長達(dá)三個月。監(jiān)控蘇金單抗的物理(ap-sec、dls、通過光阻法測得的不溶性顆粒以及可見顆粒、濁度)和化學(xué)(cex純度、rp-hplc純度、顏色)穩(wěn)定性以及生物活性。圖3顯示在25℃儲存6個月之后通過rp-hplc測得的主峰之前的物質(zhì)。雖然海藻糖和聚山梨醇酯80對降解的影響可以忽略，但是在l-甲硫氨酸存在下觀察到明顯減小的降解水平。與有和沒有l(wèi)-甲硫氨酸時的蘇金單抗穩(wěn)定性相比，這種影響更為顯著，而且也觀察到在2.5-10mml-甲硫氨酸范圍中的濃度依賴性。在長期儲存(長達(dá)30個月)之后，在填充到1mlpfs的組合物中觀察到相同的l-甲硫氨酸穩(wěn)定效果，所述組合物包含在ph5.8組氨酸緩沖液中的150mg/ml蘇金單抗、200mm海藻糖、0.02％聚山梨醇酯80。圖4顯示在5℃儲存長達(dá)30個月期間的ap-sec(a)和通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)(b)。黑色虛線代表由包含5mll-甲硫氨酸的組合物獲得值的線性擬合，灰色虛線代表由包含0mml-甲硫氨酸的組合物獲得值的線性擬合。顯然，在l-甲硫氨酸存在時觀察到減小的降解動力學(xué)。在評價l-甲硫氨酸濃度(0-20mm)對蘇金單抗穩(wěn)定性(150mg/ml，海藻糖200mm，聚山梨醇酯800.02％，ph5.8組氨酸緩沖液)影響的研究中進(jìn)一步驗(yàn)證了濃度依賴性。將不同的組合物填充到pfs中并在長期和加速條件下儲存13個月和30個月(僅5℃)。通過在之前篩選中已觀察到指示穩(wěn)定性的一組選定的分析技術(shù)(rp-hplc純度、sec純度、濁度)來評估蘇金單抗穩(wěn)定性。無法從濁度測量得出清楚的趨勢結(jié)論。但是，ap-sec和通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)清楚顯示出對l-甲硫氨酸濃度的依賴性。該影響在實(shí)時儲存條件下較小，但是在25℃下觀察到明顯差異(圖5)。在25℃儲存13個月之后，沒有l(wèi)-甲硫氨酸的組合物中通過sec測得的聚集物水平從t0時＜1％的起始水平增加到4.5％。通過在組合物中加入l-甲硫氨酸，團(tuán)聚體形成的增加對于2.5mml-甲硫氨酸降至3.5％，對于5mm降至3.0％，對于20mm降至2.2％。在5℃時，無l-甲硫氨酸的組合物和包含20mml-甲硫氨酸的組合物之間的差別僅為0.3％。對于含0mml-甲硫氨酸的樣品，在25℃儲存13個月期間，通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)從9.1％增加至42.7％。該rp-hplc主峰之前物質(zhì)的增加對于包含2.5mml-甲硫氨酸的樣品降至39.4％，對于5.0mm降至37.8％，對于20mm降至34.5％。總的來說，在l-甲硫氨酸的存在下，在pfs中在5℃和25℃儲存期間，觀察到ap-sec和rp-hplc主峰之前物質(zhì)的水平降低。在25℃儲存之后觀察到的差異更為明顯，但是在5℃儲存之后觀察到的差異也是可檢測的。與沒有l(wèi)-甲硫氨酸的組合物相比，在2.5mml-甲硫氨酸水平的降解速率就有明顯減小。這也在0、2.5和5.0mml-甲硫氨酸存在下比較蘇金單抗穩(wěn)定性的進(jìn)一步研究中也得到驗(yàn)證。在預(yù)期儲存條件下儲存24個月之后，在rp-hplc純度、sec純度以及濁度方面，沒有在包含2.5mm和5.0mml-甲硫氨酸的組合物之間觀察到差異。向小瓶中的液體抗體組合物加入l-甲硫氨酸還使ap-sec和ce-sds雜質(zhì)(非還原性)減小(圖6)。有趣的是，對于小瓶中有25mg/ml蘇金單抗的液體抗體組合物觀察到減小的l-甲硫氨酸濃度依賴性(圖6)，表明較低濃度的l-甲硫氨酸就足以保持具有較低抗體濃度的組合物中的抗體完整性和穩(wěn)定性。根據(jù)來自以上實(shí)驗(yàn)的組合數(shù)據(jù)，對于蘇金單抗的液體組合物，理想的甲硫氨酸濃度為至少2.5mm(優(yōu)選約5mm)，且優(yōu)于其他的第2組穩(wěn)定劑。1.1.2實(shí)施例2：頂部空間氧含量1.1.2.1初級包裝-pfs：在150mg/ml蘇金單抗?jié)舛群驮诰哂?00mm海藻糖、5mml-甲硫氨酸、0.02％聚山梨醇酯80的ph5.8組氨酸緩沖液的組合物中評價頂部空間氧含量對蘇金單抗穩(wěn)定性的影響。將組合物填充到來自各pfs供應(yīng)商的1mlpfs中。測得的頂部空間氧含量分別為13％和15％之間(0.5ml填充體積)或3-4％之間(0.5ml填充體積)/7-8％之間(1.0ml填充體積)。將樣品在長期、加速和應(yīng)力條件下儲存長達(dá)六個月。將選定的組合物在長期條件下儲存長達(dá)24個月。通過以下監(jiān)控蘇金單抗穩(wěn)定性：sec純度、rp-hplc純度、cex純度、ce-sds純度(非還原性)、濁度、顏色、游離sh基團(tuán)、生物活性、通過光阻法測得的不溶性微粒和可見顆粒。在長期、加速和應(yīng)力條件通過rp-hplc主峰之前物質(zhì)和ap-sec觀察頂部空間氧含量的影響。圖7顯示在25℃儲存長達(dá)9個月期間的ap-sec。顯然頂部空間氧含量在13-15％之間的pfs顯示在25℃條件下聚集增多。但是在2-8℃儲存條件下，幾乎沒有與頂部空間氧含量相關(guān)的聚集水平絕對差異(6個月數(shù)據(jù))(數(shù)據(jù)未顯示)。在5℃儲存12個月期間、在加速條件下(25℃)儲存6個月期間以及在應(yīng)力條件下(40℃)儲存3個月期間，進(jìn)一步評價6％至21％范圍內(nèi)不同的頂部空間氧含量水平(即無吹掃)對蘇金單抗性質(zhì)屬性(濁度、sec純度、rp-hplc純度、ce-sds純度(非還原性)、游離sh基團(tuán)、生物活性、通過光阻法測定的不溶性微粒、可見顆粒、顏色)的影響。在150mg/ml蘇金單抗且包含200mm海藻糖、5ml的l-甲硫氨酸、0.02％聚山梨醇酯80的ph5.8組氨酸緩沖液的組合物中進(jìn)行研究。將樣品填充到pfs中并用經(jīng)檢定的氧混合物吹掃以獲得目標(biāo)頂部空間氧含量。經(jīng)過儲存時間在濁度方面沒有觀察到變化；沒有觀察到頂部空間氧含量對通過光阻法測得的不溶性微粒、顏色和游離sh基團(tuán)的明顯影響，而且不同頂部空間氧含量樣品之間的差異在方法的分散性之內(nèi)。在5℃或25℃的儲存期間，甲硫氨酸濃度沒有發(fā)生相關(guān)變化，且不考慮頂部空間氧含量，在5℃保持12個月之后觀察到為4.9mm(初始值為4.9-5.0mm)。不同于顯示頂部空間氧含量對sec聚集產(chǎn)物產(chǎn)生相對較大影響的前期發(fā)現(xiàn)，在這個實(shí)驗(yàn)中，在預(yù)期儲存條件下(5℃)儲存長達(dá)12個月期間僅觀察到較小的變化，甚至在未吹掃的參照樣品中也是如此。在具有不同的頂部空間氧含量的樣品之間，對于所測試的不同穩(wěn)定性點(diǎn)(在2-8℃儲存長達(dá)12個月以及在25℃儲存長達(dá)6個月)，沒有觀察到在純度和sec聚集物方面存在相關(guān)的差異(圖8)。相反，我們的確注意到隨著頂部空間氧含量增大，rp-hplc主要純度增加。在5℃(儲存12個月之后)(數(shù)據(jù)未顯示)和25℃(儲存6個月之后)觀察到這個現(xiàn)象(圖9)。沒有新峰出現(xiàn)。1.1.2.2初級包裝-小瓶：將組合物填充到2ml小瓶中并在冷凍條件下儲存12個月以及在加速和應(yīng)力條件下儲存長達(dá)3個月。表5-7總結(jié)了在有和沒有5mml-甲硫氨酸存在下，在5℃、25℃和40℃下儲存的ph5.8組氨酸緩沖液中的蘇金單抗?jié)舛葹?5mg/ml、海藻糖濃度為225mm、聚山梨醇酯80濃度為0.02％的組合物通過rp-hplc測得的主峰之前物質(zhì)的變化和sec-ap。表5：小瓶中在5℃儲存6和12個月之后的25mg/ml蘇金單抗液體的rp-hplc和sec結(jié)果。組合物含25mg/ml蘇金單抗、225mm海藻糖、5mml-甲硫氨酸、0.02％ps80。表6：小瓶中在25℃和40℃儲存3個月之后的25mg/ml蘇金單抗液體的rp-hplc和sec結(jié)果。組合物含25mg/ml蘇金單抗、225mm海藻糖、5mml-甲硫氨酸、0.02％ps80。表7：在小瓶中在5℃儲存6和12個月之后的25mg/ml蘇金單抗液體的rp-hplc和sec結(jié)果。組合物含25mg/ml蘇金單抗、225mm海藻糖、0mml-甲硫氨酸、0.02％ps80。表8：在小瓶中在25℃和40℃儲存3個月之后的25mg/ml蘇金單抗液體的rp-hplc和sec結(jié)果。組合物含25mg/ml蘇金單抗、225mm海藻糖、0mml-甲硫氨酸、0.02％ps80。頂部空間的氧含量對小瓶中的25mg/ml蘇金單抗液體穩(wěn)定性的影響可通過rp-hplc測定主峰之前的物質(zhì)看出：在5℃保持12個月之后(頂部空間氧含量為5％時為4.5％相比頂部空間氧含量為20％時為7.1％，參見表5)、在25℃保持3個月之后(頂部空間氧含量為5％時為17.9％相比頂部空間氧含量為20％時為20.6％，參見表6)、以及在40℃保持3個月之后(頂部空間氧含量為5％時為40.6％相比頂部空間氧含量為20％時為46.2％，參見表6)。在40℃保持3個月之后，ap-sec也推出相同的趨勢(頂部空間氧含量為5％時為1.8％相比頂部空間氧含量為20％時為2.5％，參見表6)。而且，當(dāng)與較低的頂部空間氧含量聯(lián)用時，l-甲硫氨酸的濃度具有進(jìn)一步的影響。例如，對頂部空間的氧含量為5％并在5℃儲存12個月之后的組合物的rp-hplc主峰之前物質(zhì)進(jìn)行比較，不含l-甲硫氨酸的組合物為6.1％(表7)，而含5mml-甲硫氨酸的組合物為4.5％(表5)。對于rp-hplc主峰之前物質(zhì)可見同樣的差異：在25℃保持3個月之后(5％-20％氧：沒有l(wèi)-甲硫氨酸時為20.9-25.5％(表8)，相比含5mml-甲硫氨酸時為17.9-25.5％(表6))以及在40℃保持3個月之后(5％-20％氧：沒有l(wèi)-甲硫氨酸時為44.6-50.9％(表8)相比含5mml-甲硫氨酸時為40.6-46.2％(表6))。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行氮吹掃以降低頂部空間氧含量至小于約12％被認(rèn)為對于加強(qiáng)pfs和小瓶中的液體組合物的穩(wěn)定性(通過rp-hplc主峰之前物質(zhì)進(jìn)行評估)是有益的。1.1.3實(shí)施例3：l-甲硫氨酸濃度和頂部空間氧含量之間的相互作用進(jìn)一步研究評價了l-甲硫氨酸濃度和頂部空間氧含量之間的相互作用。制備包含2.5-7.5mm范圍內(nèi)的l-甲硫氨酸并且頂部空間氧含量在3和9％之間的組合物。將組合物填充到pfs中并在長期和加速條件下儲存6個月。在3和6個月儲存之后監(jiān)控相關(guān)的蘇金單抗性質(zhì)屬性(sec純度、rp-hplc純度、cex純度、游離sh基團(tuán)、生物活性、通過光阻法測得的不溶性微粒和可見顆粒、溶液的濁度和顏色)。圖10顯示在25℃儲存6個月之后的ap-sec純度，其作為l-甲硫氨酸和頂部空間氧含量的應(yīng)變量。采用ap-sec純度進(jìn)行分析時，在所測試的范圍中沒有觀察到相互作用。在另一項(xiàng)研究中，在150mg/ml蘇金單抗?jié)舛仍u價頂部空間氧含量降低和l-甲硫氨酸濃度的影響。組合物包含270mm甘露醇、0.04％聚山梨醇酯80以及從0.15％至2％范圍內(nèi)的不同l-甲硫氨酸濃度。將組合物填充到2ml玻璃小瓶中，用氮吹掃或不吹掃并以長期、加速和應(yīng)力條件儲存長達(dá)6個月。圖11顯示包含0.15％(10mm)、1％(67mm)或2％(134mm)l-甲硫氨酸并具有氮?dú)饣蚩諝忭敳靠臻g的組合物在儲存長達(dá)36個月之后的rp-hplc主峰之前物質(zhì)。如之前觀察到的，包含較多量l-甲硫氨酸的組合物的rp-hplc主峰之前物質(zhì)處于較低水平。同樣組合物的頂部空間被氮吹掃的情形中，顯示出較低水平的rp-hplc主峰之前物質(zhì)。根據(jù)來自使用小瓶和pfs作為初級包裝的不同實(shí)驗(yàn)的組合數(shù)據(jù)，對于蘇金單抗的液體組合物，理想情況是頂部空間氧含量小于約12％并且l-甲硫氨酸濃度為至少約2.5mm。1.1.4實(shí)施例4：ph開始以ph為4.0和7.5之間范圍內(nèi)含90mm氯化鈉的100mm檸檬酸/磷酸鈉緩沖液中10mg/ml的濃度評價ph對蘇金單抗穩(wěn)定性的影響。將樣品在5℃和40℃儲存3周。平行監(jiān)控在從≤-60℃到室溫的五輪凍融循環(huán)之后的蘇金單抗穩(wěn)定性。蘇金單抗的最佳ph根據(jù)所分析的降解路徑而變化。通過sec純度、sds-page純度(還原性)和lls平均分子量確定的聚集和蛋白質(zhì)水解在ph5.7至6.2時為最小，而對于cex純度最佳的ph為5.3?；钚蕴K金單抗在每個輕鏈上包含一個游離半胱氨酸殘基，因此預(yù)計(jì)2摩爾硫醇基團(tuán)/摩爾蘇金單抗。由于游離sh基團(tuán)水平降低與蘇金單抗生物活性損失相關(guān)，所以使用基于ellman試劑的方法來量化游離sh基團(tuán)。只在ph4.3下才觀察到略微降低的1.94摩爾/摩爾值。通過sec純度和lls平均分子量監(jiān)控的蘇金單抗的凍融耐受性在ph5.3至5.7時最大。為了進(jìn)一步配制蘇金單抗選擇ph5.8。在pfs中用doe方法進(jìn)行ph對蘇金單抗穩(wěn)定性影響的進(jìn)一步研究。在150mg/ml的蘇金單抗?jié)舛仍u價5.2-5.8范圍內(nèi)的ph影響。將組合物以長期(5℃)、加速(25℃)和應(yīng)力(40℃)條件進(jìn)行2個月穩(wěn)定性研究，并就物理穩(wěn)定性(ap-sec、dls、濁度、通過光阻法測得的可見顆粒和不溶性微粒)、化學(xué)穩(wěn)定性(cex純度、rp-hplc純度、顏色)和生物活性指示子(cys-cex活性、游離sh基團(tuán))進(jìn)行評價。另外，對填充于2ml小瓶中的組合物施加凍融(-20℃至室溫的5個循環(huán))和搖動應(yīng)力(150rpm保持一周)。發(fā)現(xiàn)研究范圍內(nèi)的ph值會顯著影響蘇金單抗穩(wěn)定性(ap-sec、dp-sec、dls、cex堿性變體、rp-hplc純度)。來自之前研究的關(guān)于ph5.8為理想值(ap-sec、dp-sec和rp-hplc主峰之前物質(zhì))的結(jié)果得到了證實(shí)(圖12)。在含150mg/ml濃度蘇金單抗、海藻糖200mm、2.5-7.5mm范圍內(nèi)的l-甲硫氨酸且頂部空間氧含量在3和9％之間的組合物中進(jìn)一步評價ph的影響。組氨酸緩沖液的ph在5.4和6.2之間變化。將組合物填充到pfs中并以長期和加速條件儲存6個月。在儲存3和6個月之后監(jiān)控相關(guān)的蘇金單抗性質(zhì)屬性(sec純度、rp-hplc純度、cex純度、游離sh基團(tuán)、生物活性、通過光阻法測得的不溶性微粒、可見顆粒、溶液的濁度和顏色)。圖13顯示在5℃儲存之后ph對蘇金單抗性質(zhì)屬性的影響。在較高ph值下觀察到濁度、ap-sec和cex酸性變體增加以及sec純度降低，進(jìn)一步證實(shí)了初始篩選中觀察到的情況。根據(jù)來自各種實(shí)驗(yàn)的組合數(shù)據(jù)，對于蘇金單抗液體組合物，理想的ph范圍是從約5.2至約6.2。1.2部分2-詳細(xì)分析對蘇金單抗液態(tài)穩(wěn)定性具有較小影響的賦形劑(穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖液)1.2.1實(shí)施例5：對穩(wěn)定性幾乎沒有影響的穩(wěn)定劑的選擇為液體劑型進(jìn)行的初步組合物開發(fā)致力于評價不同穩(wěn)定劑在長期儲存條件下以及加速和應(yīng)力條件下儲存期間對蘇金單抗可溶性和不溶性團(tuán)聚體形成(ap-sec、sds-page純度、光散射技術(shù))、化學(xué)穩(wěn)定性(rp-hplc純度、cex純度、顏色)和生物活性(cys-cex活性、游離sh基團(tuán)、生物活性)的影響。將穩(wěn)定劑分成三個不同的組：第i組包括非離子型(甘露醇、海藻糖二水合物)和離子型(氯化鈉和精氨酸鹽酸鹽)穩(wěn)定劑。所有第i組穩(wěn)定劑相比沒有穩(wěn)定劑都提供了益處。但是通過較低的聚集物水平和較高的cys-cex活性觀察到，非離子型穩(wěn)定劑(海藻糖和甘露醇)能更好地穩(wěn)定分子。根據(jù)來自初始組合物開發(fā)研究的結(jié)論，在pfs中使用doe方法進(jìn)行進(jìn)一步研究。評價了第i組穩(wěn)定劑(甘氨酸、甘露醇、海藻糖二水合物、氯化鈉)的效果。將組合物填充到預(yù)充裝注射器中并在長期、加速和應(yīng)力條件進(jìn)行2個月穩(wěn)定性研究，就物理穩(wěn)定性(ap-sec、dls、濁度、通過光阻法測得的可見顆粒和不溶性微粒)、化學(xué)穩(wěn)定性(cex純度、rp-hplc純度、顏色)和生物活性指示子(cys-cex活性、游離sh基團(tuán))進(jìn)行評價。另外，向填充到2ml小瓶中的組合物施加凍融(-20℃至室溫的5個循環(huán))和搖動應(yīng)力(150rpm保持一周)。關(guān)于第i組穩(wěn)定劑，證實(shí)了之前篩選觀察到的情況：1)所有第i組穩(wěn)定劑相比沒有穩(wěn)定劑都提供了益處；和2)發(fā)現(xiàn)對于蘇金單抗蛋白質(zhì)而言非離子型穩(wěn)定劑是更好的穩(wěn)定劑(圖14)。這在sec純度、rp-hplc純度和dls多分散性方面尤為顯著。比較不同的非離子型穩(wěn)定劑，沒有觀察到相關(guān)的效果。其次我們確定了第i組穩(wěn)定劑的理想濃度(海藻糖二水合物200-300mm)。將樣品填充到pfs中并以長期、加速和應(yīng)力條件儲存長達(dá)三個月。監(jiān)控蘇金單抗的物理(ap-sec、dls、通過光阻法測得的不溶性微粒、可見顆粒、濁度)和化學(xué)(cex純度、rp-hplc純度、顏色)穩(wěn)定性以及生物活性。用變化的海藻糖濃度并沒有觀察到蘇金單抗的性質(zhì)屬性發(fā)生相關(guān)的變化(圖3)。1.2.2實(shí)施例6：對穩(wěn)定性幾乎沒有影響的表面活性劑的選擇150mg/ml液體組合物的初始組合物開發(fā)致力于評價不同賦形劑(例如穩(wěn)定劑和表面活性劑)在長期儲存條件以及加速和應(yīng)力條件下儲存期間對蘇金單抗可溶性和不溶性團(tuán)聚體形成(ap-sec、sds-page純度、光散射技術(shù))、化學(xué)穩(wěn)定性(rp-hplc純度、cex純度、顏色)和生物活性(cys-cex活性、游離sh基團(tuán)、生物活性)方面的影響。將賦形劑分成三個不同的組：第iii組包括表面活性劑聚山梨醇酯20和80。與沒有表面活性劑的情況相比，靜態(tài)儲存期間在濃度為0.04％的聚山梨醇酯20和80之間沒有觀察到差異。根據(jù)初始組合物開發(fā)研究的結(jié)論，在pfs中使用doe方法進(jìn)行進(jìn)一步研究。評價了表面活性劑(聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆188、無表面活性劑)的影響。將組合物填充到pfs中并在長期、加速和應(yīng)力條件進(jìn)行2個月穩(wěn)定性研究，評價物理穩(wěn)定性(ap-sec、dls、濁度、通過光阻法測得的可見顆粒和不溶性微粒)、化學(xué)穩(wěn)定性(cex純度、rp-hplc純度、顏色)和生物活性指示子(cys-cex活性、游離sh基團(tuán))。另外，對填充在2ml小瓶中的組合物施加凍融(-20℃至室溫的5個循環(huán))和搖動應(yīng)力(150rpm保持一周)。通過較低的濁度水平以及通過光阻法計(jì)數(shù)測得的可見顆粒和不溶性微粒，觀察到存在表面活性劑是有利的。但是，表面活性劑種類僅有弱影響(圖15)。我們接下來確定了第iii組表面活性劑的理想濃度(聚山梨醇酯800.01-0.04(w/v)％)。將樣品填充到pfs中并在長期、加速和應(yīng)力條件儲存長達(dá)三個月。監(jiān)控蘇金單抗的物理(ap-sec、dls、通過光阻法測定的不溶性微粒、可見顆粒、濁度)和化學(xué)(cex純度、rp-hplc純度、顏色)穩(wěn)定性以及生物活性。在靜態(tài)儲存(圖3)期間以及以150rpm搖動1周之后，沒有觀察到聚山梨醇酯80濃度對蘇金單抗性質(zhì)屬性產(chǎn)生明顯影響。在表面活性劑濃度較高時，dls多分散性和通過光阻法測得的不溶性微粒略微增加；因此確定聚山梨醇酯80的濃度為0.02％，從而保持最低評價濃度的安全邊界。1.2.3實(shí)施例5：對穩(wěn)定性幾乎沒有影響的緩沖液的選擇在pfs中使用doe方法評價緩沖液種類(檸檬酸鹽、組氨酸、琥珀酸鹽、乙酸鹽)的影響。將組合物填充到pfs中并在長期、加速和應(yīng)力條件進(jìn)行2個月穩(wěn)定性研究，評價物理穩(wěn)定性(ap-sec、dls、濁度、通過光阻法測得的可見顆粒和不溶性微粒)、化學(xué)穩(wěn)定性(cex純度、rp-hplc純度、顏色)和生物活性指示子(cys-cex活性、游離sh基團(tuán))。另外，對填充在2ml小瓶中的組合物施加凍融(-20℃至室溫的5個循環(huán))和搖動應(yīng)力(150rpm保持一周)。沒有觀察到緩沖液種類的相關(guān)影響。圖16顯示選擇的性質(zhì)屬性。1.2.4實(shí)施例6：測試范圍內(nèi)的抗體濃度對穩(wěn)定性幾乎沒有影響在124.5-175.5mg/ml范圍內(nèi)評價蘇金單抗?jié)舛葘σ后w組合物性質(zhì)屬性的影響。組合物還包含在ph5.8組氨酸緩沖液中的200mm海藻糖、5mml-甲硫氨酸和0.02％聚山梨醇酯。將組合物填充到pfs中并以長期和加速條件儲存6個月。在3和6個月儲存之后監(jiān)控相關(guān)的蘇金單抗性質(zhì)屬性(sec純度、rp-hplc純度；cex純度、游離sh基團(tuán)、生物活性、通過光阻法測得的不溶性微粒、可見顆粒、溶液的濁度和顏色)。在25mg/ml至150mg/ml范圍內(nèi)沒有觀察到蘇金單抗?jié)舛葘σ后w組合物性質(zhì)屬性產(chǎn)生相關(guān)的影響(數(shù)據(jù)未顯示)。1.3部分3-優(yōu)選的最終市售組合物的性質(zhì)優(yōu)選的蘇金單抗藥物產(chǎn)品包括在pfs中提供的液體組合物，該組合物包含ph5.8的20mm組氨酸緩沖液中的150mg/ml蘇金單抗、200mm海藻糖、0.02％聚山梨醇酯80和5mml-甲硫氨酸。在初始填充和完成時，pfs中的頂部空間氧含量小于12％。這些藥物產(chǎn)品具有優(yōu)越的保存期和整體穩(wěn)定性。對pfs中的各批次蘇金單抗藥物產(chǎn)品(150mg/ml蘇金單抗、200mm海藻糖二水合物、20mml-組氨酸/l組氨酸鹽酸鹽一水合物、5mml-甲硫氨酸、0.02％聚山梨醇酯80(％w/v)、ph5.8)進(jìn)行穩(wěn)定性測試。在以下的表9-11中示出在長期儲存條件(2-8℃)下儲存長達(dá)24個月之后、在加速儲存條件(25℃)下儲存長達(dá)6個月之后以及在溫度應(yīng)力條件(30℃)下儲存長達(dá)6個月之后的測試結(jié)果。根據(jù)呈現(xiàn)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)、預(yù)充裝注射器(pfs)中150mg/1ml液體的蘇金單抗的長達(dá)24個月的實(shí)時數(shù)據(jù)以及在開發(fā)過程中產(chǎn)生的長達(dá)36個月的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)(批量注射器)，對于pfs商用產(chǎn)品中150mg/1ml液體的蘇金單抗，當(dāng)以5℃±3℃的長期條件、避光并防止冷凍進(jìn)行儲存時，建議保存期為24個月。表9sec、cex和rp-hplc純度。*此較高值與正好在主峰之前出現(xiàn)的小峰有關(guān)。由于這個新峰獨(dú)立于主峰進(jìn)行積分，所以主峰之前的變體之和變得更高。表10ce-sds純度(非還原性)和sds-page雜質(zhì)(還原性)。表11效力和量。*樣品在取出日之后>30天進(jìn)行測試，此偏差對效力檢測結(jié)果沒有影響。序列表<110>諾華股份有限公司(novartisag)k·瑟爾諾-朔爾施(serno-schersch,kathrin)s·喬戈(joerg,susanne)<120>il-17抗體的藥物產(chǎn)品和穩(wěn)定液體組合物<130>56417ff<140>在此附隨<141>在此附隨<150>62/095,210<151>2014-12-22<160>15<170>patentin3.5版<210>1<211>5<212>prt<213>人工<220><223>cdr1=ain457重鏈的高變區(qū)1<400>1asntyrtrpmetasn15<210>2<211>17<212>prt<213>人工<220><223>cdr2=ain457重鏈的高變區(qū)2<400>2alaileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalglyservallys151015gly<210>3<211>18<212>prt<213>人工<220><223>cdr3=ain457重鏈的高變區(qū)3<400>3asptyrtyraspileleuthrasptyrtyrilehistyrtrptyrphe151015aspleu<210>4<211>12<212>prt<213>人工<220><223>cdr1'=ain457輕鏈的高變區(qū)1<400>4argalaserglnservalsersersertyrleuala1510<210>5<211>7<212>prt<213>人工<220><223>cdr2'=ain457輕鏈的高變區(qū)2<400>5glyalaserserargalathr15<210>6<211>9<212>prt<213>人工<220><223>cdr3'=ain457輕鏈的高變區(qū)3<400>6glnglntyrglyserserprocysthr15<210>7<211>381<212>dna<213>智人<220><221>cds<222>(1)..(381)<400>7gaggtgcagttggtggagtctgggggaggcttggtccagcctgggggg48gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015tccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagtaactat96serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasntyr202530tggatgaactgggtccgccaggctccagggaaagggctggagtgggtg144trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045gccgccataaaccaagatggaagtgagaaatactatgtgggctctgtg192alaalaileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalglyserval505560aagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat240lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr65707580ctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgtgtattactgt288leuglnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcys859095gtgagggactattacgatattttgaccgattattacatccactattgg336valargasptyrtyraspileleuthrasptyrtyrilehistyrtrp100105110tacttcgatctctggggccgtggcaccctggtcactgtctcctca381tyrpheaspleutrpglyargglythrleuvalthrvalserser115120125<210>8<211>127<212>prt<213>智人<400>8gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasntyr202530trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alaalaileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalglyserval505560lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr65707580leuglnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcys859095valargasptyrtyraspileleuthrasptyrtyrilehistyrtrp100105110tyrpheaspleutrpglyargglythrleuvalthrvalserser115120125<210>9<211>327<212>dna<213>智人<220><221>cds<222>(1)..(327)<400>9gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggg48gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcagc96gluargalathrleusercysargalaserglnservalserserser202530tacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctc144tyrleualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleu354045atctatggtgcatccagcagggccactggcatcccagacaggttcagt192iletyrglyalaserserargalathrglyileproaspargpheser505560ggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggag240glyserglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglu65707580cctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcaccg288progluaspphealavaltyrtyrcysglnglntyrglyserserpro859095tgcaccttcggccaagggacacgactggagattaaacga327cysthrpheglyglnglythrargleugluilelysarg100105<210>10<211>109<212>prt<213>智人<400>10gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnservalserserser202530tyrleualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleu354045iletyrglyalaserserargalathrglyileproaspargpheser505560glyserglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglu65707580progluaspphealavaltyrtyrcysglnglntyrglyserserpro859095cysthrpheglyglnglythrargleugluilelysarg100105<210>11<211>10<212>prt<213>人工<220><223>cdr1-x=ain457重鏈的高變區(qū)x<400>11glyphethrpheserasntyrtrpmetasn1510<210>12<211>11<212>prt<213>人工<220><223>cdr2-x=ain457重鏈的高變區(qū)x<400>12alaileasnglnaspglyserglulystyrtyr1510<210>13<211>23<212>prt<213>人工<220><223>cdr3-x=ain457重鏈x的高變區(qū)<400>13cysvalargasptyrtyraspileleuthrasptyrtyrilehistyr151015trptyrpheaspleutrpgly20<210>14<211>215<212>prt<213>智人<400>14gluilevalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnservalserserser202530tyrleualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleu354045iletyrglyalaserserargalathrglyileproaspargpheser505560glyserglyserglythraspphethrleuthrileserargleuglu65707580progluaspphealavaltyrtyrcysglnglntyrglyserserpro859095cysthrpheglyglnglythrargleugluilelysargthrvalala100105110alaproservalpheilepheproproseraspgluglnleulysser115120125glythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproargglu130135140alalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnser145150155160glngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleu165170175serserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysval180185190tyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlys195200205serpheasnargglyglucys210215<210>15<211>457<212>prt<213>智人<400>15gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasntyr202530trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alaalaileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalglyserval505560lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr65707580leuglnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcys859095valargasptyrtyraspileleuthrasptyrtyrilehistyrtrp100105110tyrpheaspleutrpglyargglythrleuvalthrvalserserala115120125serthrlysglyproservalpheproleualaproserserlysser130135140thrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphe145150155160progluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrsergly165170175valhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleu180185190serservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyr195200205ilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysarg210215220valgluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocyspro225230235240alaprogluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolys245250255prolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysval260265270valvalaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyr275280285valaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglu290295300glntyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhis305310315320glnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlys325330335alaleuproalaproileglulysthrileserlysalalysglygln340345350proarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumet355360365thrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrpro370375380seraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasn385390395400tyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleu405410415tyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnval420425430phesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrgln435440445lysserleuserleuserproglylys450455當(dāng)前第1頁12