本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，尤其涉及一種多肽藥物和保護劑的組合水針制劑。

背景技術(shù)：

f627蛋白是重組人集落刺激因子-fc融合蛋白，由健能隆醫(yī)藥技術(shù)公司開發(fā)，用于腫瘤患者放、化療粒細(xì)胞減少癥。與現(xiàn)有的重組人g-csf不同，f627含有2個g-scf分子，通過cho細(xì)胞表達(dá)，無血清培養(yǎng)生產(chǎn)。該藥物要求在運輸、儲存、使用過程中保持穩(wěn)定。

f627粉針制劑已經(jīng)申請了專利，但粉針制劑在實用中需要溶劑溶解粉末，不方便病人使用，為使病人能直接用藥，本專利提供一種水針制劑配方，在保證藥品性能穩(wěn)定性的前提下，方便病人使用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種f627蛋白的水針制劑，其特征在于蛋白損失減少，單聚體含量高，常溫下保存活性穩(wěn)定。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種含f627蛋白藥物的水針制劑。

其特征在于溶液中含有緩沖鹽，乳化劑，保護劑，金屬螯合物。

所述的f627蛋白濃度為1-100mg/ml，更優(yōu)選為1-30mg/ml。

所述的緩沖鹽選自磷酸緩沖液，tris緩沖液，乙酸緩沖液，檸檬酸緩沖液，氨基酸緩沖液，乳酸緩沖液，碳酸緩沖液，緩沖液濃度為0.5-50mm，更優(yōu)選為1-20mm，緩沖液的ph為4-8，更優(yōu)選地為4.5-7.5。

所述的乳化劑選自吐溫-20，吐溫-60，吐溫-80，peg-200，peg-400、peg-4000、peg-6000，其濃度為0.001-0.1％(w/v)，更優(yōu)選為0.005-0.05％(w/v)。

所述的保護劑為甘露醇，蔗糖，山梨醇，其濃度為0.1-5％(w/v)，更優(yōu)選為0.5-5％(w/v)。

所述的金屬螯合物為edta，其濃度為0.001-1mm，更優(yōu)選為0.01-1mm。

本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明提供的配方，使得f627蛋白損失減少，活性和蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，并以水溶液形式存在，方便給藥。

附圖說明

圖1示兩種配方中f627水針制劑蛋白活性比較。

圖2示f627水針制劑兩種配方中二聚體含量。

圖3示加速穩(wěn)定性實驗中f-627水針制劑蛋白濃度的變化。

圖4示分子排阻色譜實驗檢測f627蛋白加速穩(wěn)定性實驗中單聚體含量的變化。

圖5示f627水針制劑在加速穩(wěn)定實驗中活性的變化。

圖6示非變性毛細(xì)管電泳實驗檢測f627水針制劑在加速穩(wěn)定實驗中蛋白純度的變化。

具體實施方式

實施例一

生物學(xué)活性測定：收集m-nfs-60細(xì)胞，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸成70000個/ml，在96孔板中按2倍濃度梯度稀釋樣品，每孔加入50ul細(xì)胞懸液(細(xì)胞數(shù)35000個/孔)，培養(yǎng)46-48hrs，每孔加入mtt(5mg/ml)20μl，繼續(xù)培養(yǎng)5小時，加100ul/孔裂解液，37℃過夜，次日檢測od。以濃度作為橫坐標(biāo)，od值作為縱坐標(biāo)，按四參數(shù)方程擬合劑量反應(yīng)曲線，并按下式計算結(jié)果：

供試品的比活＝

測定結(jié)果a配方樣品比活為112％，b配方樣品比活為106％。如圖1所示。

實施例二

se-hplc測定方法：色譜柱為tskgelg3000swxl，流動相為50mmnaac/hac+0.3mna2so4ph5.0，檢測波長280nm。

將樣品稀釋至1.0mg/ml，取20μl注入高效液相色譜儀，按面積歸一法計算。

測定結(jié)果：a配方二聚體含量為1％，b配方二聚體含量為3％。如圖2所示。

實施例三

加速穩(wěn)定性實驗。

取a配方適量樣品放入25℃±2℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，分別在0個月，1個月，2個月，3個月取5支樣品進行蛋白含量，生物學(xué)活性，se-hplc，非還原ce-sds檢測。

加速穩(wěn)定性實驗中蛋白濃度測定。

將供試品用相應(yīng)的樣品緩沖液稀釋至濃度約為0.5mg/ml，終體積至少為400μl。用相應(yīng)樣品緩沖液作為空白對照，280nm測定吸光度值。

蛋白濃度計算公式：

蛋白濃度＝(a/ε)×稀釋倍數(shù)

a＝校正后吸光度值(abs280-abs230)

ε＝摩爾消光系數(shù)

加速穩(wěn)定性實驗中單聚體含量測定。

參考實施例二中蛋白純度的測定方法(se-hplc法)測定加速穩(wěn)定實驗中樣品單聚體含量。

加速穩(wěn)定性實驗中蛋白生物學(xué)活性測定。

采用實施例一中的方法測定加速穩(wěn)定實驗中樣品生物學(xué)活性。

加速穩(wěn)定性實驗中蛋白純度測定(非還原ce-sds法)。

根據(jù)beckmaniggpuritykit說明對樣品進行預(yù)處理后，用beckmanpa800plus對加速穩(wěn)定實驗中樣品進行純度分析。

檢測結(jié)果如下表所示：

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種水針制劑及其配方，涉及一種多肽藥物和保護劑的組合水針制劑，配方A組成為：10mM?HAc/NaAc，2％山梨醇，0.5mM?EDTA，0.001％Tween?20，pH?5.0。配方B組成為10mM?PB，2％蔗糖，0.005％吐溫80，5％甘露醇，0.05％PEG6000，pH7.5。本發(fā)明提供的配方，使得F627蛋白藥效損失減少，活性和蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，并以水溶液形式存在，方便病人給藥。

技術(shù)研發(fā)人員：黃予良;先宗樹;徐臨鳳;朱慶慶;周彬彬
受保護的技術(shù)使用者：浙江健能隆生物醫(yī)藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2016.03.04
技術(shù)公布日：2017.09.15