一種混合配方制劑在防治褐飛虱中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及微生物【技術領域】，特別是涉及一種混合配方制劑在防治褐飛虱中的應用。本發明所述的淀粉酶產色鏈霉菌(Streptomyces?diastatochromogenes)，定名為淀粉酶產色鏈霉菌D。該菌株在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏日期2007年5月25日，保藏登記號CGMCC?No.2060。本發明所述的淀粉酶產色鏈霉菌D，經發酵提取可獲得對褐飛虱類酵母共生菌具有抑制作用的代謝產物。本發明最顯著的特征是將淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉按照一定的比例混合制備成新的配方，用這混合配方防治褐飛虱可以明顯減少殺蟲劑的使用量，有效提高褐飛虱的防治效果，延緩褐飛虱抗藥性的發展。
【專利說明】一種混合配方制劑在防治褐飛虱中的應用
【技術領域】
[0001]本 發明涉及微生物【技術領域】，特別是涉及一種淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方制劑。
【背景技術】
[0002]褐飛風lugens StM)是水稻的重要害蟲之一，主要以刺吸韌皮部汁液
和傳播水稻病毒的方式為害水稻植株。蟲害大發生時會出現大面積的稻株枯死倒伏，造成糧食減產，甚至絕收。生產上，化學農藥是防治褐飛虱的主要手段。但是，由于化學殺蟲劑的大量頻繁使用，褐飛虱對許多化學殺蟲劑產生了抗藥性，導致防治效果明顯下降。因此，研究和應用減少水稻褐飛虱發生和為害的新手段已迫在眉睫。
[0003]昆蟲與微生物的共生是一種普遍存在的現象，在進化過程中兩者形成了密不可分的關系。昆蟲為共生菌提供了穩定的小生境和營養，而昆蟲依靠共生菌合成食物中缺乏的某些重要營養成分，同時共生菌對昆蟲的代謝解毒也有一定作用，如為昆蟲合成重要的營養成分，參與氮素循環，降解昆蟲體內外源物質等。缺失共生菌會直接造成昆蟲生長繁殖受阻、死亡率上升等。研究表明，褐飛虱體內腹部脂肪體中也存在多種類酵母共生菌，類酵母菌屬子囊菌亞門(Ascomycotina),核菌綱(Pyrenomycetes), Candida屬。褐飛風類酵母共生菌可為寄主合成提供必需氨基酸、固醇類物質以及蛋白質等多種營養成分，彌補了褐飛虱取食營養結構的不平衡，保證了褐飛虱的正常生長和繁殖；酵母類共生菌缺失會導致褐飛虱生長受阻、發育停滯、甚至死亡。既然褐飛虱與類酵母共生菌在生長繁殖中關系如此緊密，通過“抑制類酵母共生菌從而間接防治褐飛虱”的手段來控制褐飛虱發生以及減少其為害必將是今后防治褐飛虱的一種重要手段。因為抑制褐飛虱體內的共生菌不但可直接或間接的達到控制褐飛虱的目的，而且還可有效提高目前殺蟲劑的防治效果、延緩褐飛虱抗藥性的發展。
[0004]本發明將淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和常規殺蟲劑吡蟲啉按照一定的比例混合制備成新的配方，并研究了該配方對褐飛虱體內類酵母共生菌的抑制作用和對褐飛虱的殺蟲效果。該發明為水稻褐飛虱的防治提供了新的更為有效的方法。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是針對褐飛虱對常規化學殺蟲劑產生抗藥性，導致化學防治效果明顯下降的不足，提供一種利用淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物抑制褐飛虱體內類酵母共生菌生長，進而引起褐飛虱衰弱甚至死亡的新思路；本發明的另一目的是提供了一種防治褐飛虱的新方法和新藥劑。
[0006]本發明淀粉酶產色鏈霉菌(Streptomyces diastatochromogenes),定名為淀粉酶產色鏈霉菌D。該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏日期2007年5月25日，保藏登記號CGMCCN0.2060。本發明所述的淀粉酶產色鏈霉菌D，經發酵提取可獲得對褐飛虱類酵母共生菌具有抑制作用的代謝產物。
[0007]本發明目的通過以下技術方案來實現:
[0008]一種防治褐飛虱的混合配方制劑，按以下步驟進行:
[0009](I)菌種的活化培養:將分離保存的淀粉酶產色鏈霉菌D菌種移至試管內高氏一號斜面上，在28 °C ± I °C條件下，培養至試管斜面長滿孢子；
[0010](2)發酵培養:發酵培養液為每1000mL中含有黃豆餅粉20g，玉米粉15g，麩皮10g, NH4N033g, (NH4) 2S045g, CaC035g, MgSO4Ig,滅菌，待冷卻至40°C，在無菌條件下接種至發酵培養液中，在28°C ±1°C條件下，培養5天；
[0011](3)發酵物提取:發酵完畢，離心收集發酵上清液，用常規有機溶劑萃取經真空濃縮后獲得浸膏；
[0012](4)藥液配制:將步驟(3)獲得的浸膏和常規殺蟲劑配比，用于褐飛虱的防治。
[0013]本發明的有益效果:本發明提供了一種利用淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方防治褐 飛虱的新方法。
【具體實施方式】
[0014]實施例1:(淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物的制備方法)
[0015]按以下步驟進行:
[0016](I)菌種的活化培養:將分離保存的淀粉酶產色鏈霉菌D菌種移至試管內高氏一號斜面上，在28 °C ± I °C條件下，培養至試管斜面長滿孢子；
[0017](2)發酵培養:發酵培養液為每1000mL中含有黃豆餅粉20g，玉米粉15g，麩皮10g, NH4N033g, (NH4) 2S045g, CaC035g, MgSO4Ig,滅菌，待冷卻至 40°C，在無菌條件下接種一金屬鉬絲環淀粉酶產色鏈霉菌D孢子至發酵培養液中，在28°C ±1°C條件下，培養5天；
[0018](3)發酵物提取:發酵完畢后離心收集發酵液，加入等體積乙酸乙酯萃取，取下層，再用等體積正丁醇萃取，取上層，在真空條件下濃縮至浸膏，該浸膏即為淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物，供防治褐飛虱用。
[0019]以下實施例2中所述的淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物均為實施例1所制產品。
[0020]實施例2:(淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方的制備)
[0021]吡蟲啉水分散粒劑(有效成分質量百分比為70% )由拜耳公司生產，將吡蟲啉水分散粒劑和淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物分別用自來水溶解，混合，配成終濃度為0.2g/L淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和0.01g / L吡蟲啉混合配方。
[0022]實施例3:(淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方在防治褐飛虱若蟲中的應用)
[0023]按以下步驟進行:
[0024](I)分蘗拔節期TNl水稻，清除部分根和基部葉鞘后洗凈，自然晾干；
[0025](2)以清水作對照，噴施終濃度為0.2g / L淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和
0.01g / L吡蟲啉混合藥劑，要求藥劑霧滴分布均勻，覆蓋率高，藥劑量適當，以濕潤目標物表面不產生流失為宜，自然晾干；
[0026](3)經步驟⑵處理后的稻苗放入事先注入20ml水稻培養液的大試管中，每管3根稻苗，接入3齡褐飛虱若蟲30頭，以噴施清水后的水稻苗處理作為陰性對照，噴施0.04g / L吡蟲啉藥液處理為陽性對照，每個處理3次重復；
[0027](4)分別在處理后I天、2天和4天測定褐飛虱體內共生菌數量,并統計褐飛虱死亡率。其中褐飛虱體內共生菌數量測定方法為:分別取各處理中存活的褐飛虱3頭，用75%的酒精消毒，無菌水漂洗，去掉翅膀、頭部和胸部，將腹部放入1.5ml離心管中，加入0.9%的生理鹽水50μ 1，勻漿，然后取2μ I勻漿液滴于血細胞計數板上，蓋上蓋破片，在顯微鏡(16X40)下統計共生菌數量。
[0028]實施例4:(淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方在防治褐飛虱雌成蟲中的應用)
[0029]按以下步驟進行:
[0030](I)分蘗拔節期TNl水稻，清除部分根和基部葉鞘后洗凈，自然晾干；
[0031](2)以清水作對照，噴施終濃度為0.2g / L淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和
0.01g / L吡蟲啉混合藥劑，要求藥劑霧滴分布均勻，覆蓋率高，藥劑量適當，以濕潤目標物表面不產生流失為宜，自然晾干；
[0032](3)經步驟(2)處理后的稻苗放入事先注入20ml培養液的大試管中，每管4根稻苗，接入剛羽化的短翅雌成蟲30頭，以噴施清后的水稻苗處理作為陰性對照，噴施0.04g /L吡蟲啉藥液處理為陽性對照，每個處理3次重復；
[0033](4)分別在處 理后I天、2天和4天測定短翅雌蟲褐飛虱體內共生菌數量,并統計褐飛虱死亡率。其中褐飛虱體內共生菌數量測定方法為:分別取各處理中存活的短翅雌蟲3頭，用75%的酒精消毒，無菌水漂洗，去掉翅膀、頭部和胸部，將腹部放入1.5ml離心管中，加入0.9%的生理鹽水50μ 1，勻漿，然后取2μ I勻漿液滴于血細胞計數板上，蓋上蓋破片，在顯微鏡(16X40)下統計共生菌數量。
[0034]試驗例:(本發明的淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合配方與常規化學農藥防治效果對比試驗)
[0035]試驗結果見表1和表2。從表1和表2看出，利用淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲琳混合配方明顯抑制了褐飛虱體內共生菌的數量，從而引起褐飛虱死亡率上升。
[0036]表1淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉混合藥劑對褐飛虱若蟲的防治效果
[0037]
【權利要求】
1.一種混合配方制劑在防治褐飛虱中的應用，這種混合配方制劑包含淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉。
2.權利要求1所述的混合配方制劑，其中所述的淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物由菌種活化培養、發酵培養、發酵物提取方法制得。
3.權利要求1所述的混合配方制劑，其中所述的淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和吡蟲啉的重量百分比為10: 1-20: 1。
4.權利要求1所述的混合配方制劑，由以下方法獲得: (1)菌種的活化培養:將分離保存的淀粉酶產色鏈霉菌D菌種移至試管內培養至試管斜面長滿孢子，所述的淀粉酶產色鏈霉菌D已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏登記號為CGMCC N0.2060 ； (2)發酵培養:發酵培養基為黃豆餅粉，玉米粉，麩皮，NH4N033g,(NH4)2SO4, CaCO3,MgSO4，滅菌，待冷，在無菌條件下接種淀粉酶產色鏈霉菌D孢子至發酵培養基中，培養； (3)發酵物提取:發酵完畢，離心收集發酵上清液，萃取，取下層，再萃取，取上層，在真空條件下濃縮至浸膏，此浸膏即為淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物； (4)混合配方配制:將吡蟲啉水分散粒劑和淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物分別用自來水溶解，混合。
5.權利要求4所述的混合配方制劑，由以下方法獲得: (1)菌種的活化培養:將分離保存的淀粉酶產色鏈霉菌D菌種移至試管內高氏一號斜面上，在28°C ±1°C條件下，培養至試管斜面長滿孢子，所述的淀粉酶產色鏈霉菌D已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏登記號為CGMCC N0.2060 ； (2)發酵培養:發酵培養液為每1000mL中含有黃豆餅粉20g，玉米粉15g，麩皮10g，NH4N033g, (NH4) 2S045g, CaC035g, MgSO4Ig,滅菌，待冷卻至40°C，在無菌條件下接種一金屬鉬絲環淀粉酶產色鏈霉菌D孢子至發酵培養液中，在28°C ±1°C條件下，培養5天； (3)發酵物提取:發酵完畢，離心收集發酵上清液，加入等體積乙酸乙酯萃取，取下層，再用等體積正丁醇萃取，取上層，在真空條件下濃縮至浸膏，此浸膏即為淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物； (4)混合配方配制:吡蟲啉水分散粒劑(有效成分質量百分比為70%)由拜耳公司生產，將吡蟲啉水分散粒劑和淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物分別用自來水溶解，混合，配成終濃度為0.2g / L淀粉酶產色鏈霉菌D代謝產物和0.01g / L吡蟲啉混合配方。
【文檔編號】A01N63/02GK103960288SQ201410128645
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年3月31日 優先權日:2014年3月31日
【發明者】申屠旭萍, 俞曉平, 李丹婷 申請人:中國計量學院