本揭露為一種透明質(zhì)酸納米顆粒在制備治療于一個(gè)體中的淋巴系統(tǒng)中的腫瘤的藥物的用途。納米顆粒包括透明質(zhì)酸衍生物與鉑化合物。透明質(zhì)酸衍生物可包括透明質(zhì)酸、經(jīng)修飾的組胺酸與視需要而定的聚合物或C4-C20烷基。透明質(zhì)酸衍生物可包括連接基團(tuán)，其連接聚合物或C4-C20烷基至透明質(zhì)酸。鉑化合物可包括(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)、順鉑與奧沙利鉑。
背景技術(shù)：
：：許多的轉(zhuǎn)移性腫瘤起先為經(jīng)由淋巴組織蔓延，且最終形成快速發(fā)展的淋巴腫瘤。考慮到手術(shù)切除的限制與放射治療與化學(xué)治療的低有效性，淋巴轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療仍是巨大挑戰(zhàn)(Zhang,X.,Lu,W."Recentadvancesinlymphatictargeteddrugdeliverysystem",CancerBiol.Med.,2014:247-254)。發(fā)展具淋巴傳輸能力的納米載體用于治療淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤為一熱門題目。包括脂質(zhì)體(liposomes)、納米顆粒(nanoparticles)，大分子(macromolecule)聚合物、聚合物膠束(micelle)、活性碳(activatedcarbons)、硅與納米乳劑(nano-emulsions)等均是以淋巴系統(tǒng)為目標(biāo)的納米藥物傳輸載體(Zhang,X.,Lu,W."Recentadvancesinlymphatictargeteddrugdeliverysystem",CancerBiol.Med.,2014:247-254)。以淋巴系統(tǒng)為目標(biāo)的一個(gè)例子為胸腔內(nèi)放置(intrapleuralplacement)的明膠海綿(gelatinsponge)，內(nèi)含PLGA–紫杉醇微球(paclitaxelmicrospheres)(Liu,J.等人"Anoveltrans-lymphaticdrugdeliverysystem:ImplantablegelatinspongeimpregnatedwithPLGA–paclitaxelmicrospheres",Biomaterials,2007:3236-3244；Liu,J.等人"TranslymphaticChemotherapybyIntrapleuralPlacementofGelatinSpongeContainingBiodegradablePaclitaxelColloidsControlsLymphaticMetastasisinLungCancer",CancerRes.,2009:1174-1181)。此外，利用LyP-1與納米載體連結(jié)以 及透明質(zhì)酸載體均為淋巴目標(biāo)藥物傳輸系統(tǒng)中的特定發(fā)展產(chǎn)物。LyP-1(CGNKRTRGC)為一環(huán)狀納米肽，其專一地辨認(rèn)于淋巴腫瘤中過(guò)度表現(xiàn)的p32/gC1q受體(Laakkonen,P.等人"Atumor-homingpeptidewithatargetingspecificityrelatedtolymphaticvessels",Nat.Med.,2002:751-755)。Yanetal.將Lyp-1與含有阿霉素(doxorubicin)的脂質(zhì)體連結(jié)并用以治療淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤(Yan,Z.等人"LyP-1-conjugateddoxorubicin-loadedliposomessuppresslymphaticmetastasisbyinhibitinglymphnodemetastasesanddestroyingtumorlymphatics",Nanotech.,2011:1-8；Yan,Z.等人"LyP-1-conjugatedPEGylatedliposomes:Acarriersystemfortargetedtherapyoflymphaticmetastatictumor",J.Control.Release,2012:118-125)。Luoetal.將Lyp-1與PEG-PLGA納米顆粒結(jié)合以治療淋巴腫瘤(Luo,G.等人"LyP-1-conjugatednanoparticlesfortargetingdrugdeliverytolymphaticmetastatictumors",Pharm.Nanotech.,2010:150-156)。透明質(zhì)酸(HA)為由D-葡糖醛酸(D-glucuronicacid)與N-乙酰-D-葡糖胺(N-acetylD-glucosamine)交替組成的一自然多醣，為于淋巴系統(tǒng)表現(xiàn)的LYVE-1受體的配體，亦為腫瘤中過(guò)度表現(xiàn)的CD44受體(receptor)的配體(ligand)(Cai,S.等人"PharmacokineticsandDispositionofaLocalizedLymphaticPolymericHyaluronanConjugateofCisplatininRodents",J.Pharm.Sci.,2010:2664-2671)。Caietal.提供了將順鉑與天然的透明質(zhì)酸復(fù)合并用以治療淋巴內(nèi)腫瘤的應(yīng)用揭示(Cai,S.等人"IntralymphaticChemotherapyUsingaHyaluronan–CisplatinConjugate",J.Surgical.Res.,2008:247-252；Cohen,M.等人"Anovelintralymphaticnanocarrierdeliverysystemforcisplatintherapyinbreastcancerwithimprovedtumorefficacyandlowersystemictoxicityinvivo",Am.J.Surg.,2009:781-786；Cai,S.等人"Carrier-basedintralymphaticcisplatinchemotherapyforthetreatmentofmetastaticsquamouscellcarcinomaofthehead&neck",Ther.Deliv.,2010:237-245；Cai,S.等人"PharmacokineticsandDispositionofaLocalizedLymphaticPolymericHyaluronanConjugateofCisplatininRodents",J.Pharm.Sci.,2010:2664-2671；Forrest,L.等人IntralymphaticChemotherapyDrugCarriers,USPatent8,088,412B2,January3,2012)。而在透明質(zhì)酸不以淋巴系統(tǒng)為目標(biāo)的另一替代應(yīng)用中，Hahnetal.將天然的透明質(zhì)酸與一具有抗Flt1肽(GNQWFI、KGNQWFI或GGNQWFI) 且載有阿霉素或表阿霉素(epirubicin)的膠束(micelle)進(jìn)行結(jié)合，并用來(lái)治療非淋巴腫瘤，其中，抗-Flt1肽系以VEGF為目標(biāo)(Hahn,S.等人DrugDeliverySystemUsingHyaluronicAcid-PeptideConjugate,USPatent8,895,069B2,November25,2014)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本揭露為一種透明質(zhì)酸納米顆粒在制備治療淋巴系統(tǒng)中的腫瘤的藥物的用途。透明質(zhì)酸納米顆粒可包括透明質(zhì)酸衍生物與鉑化合物。透明質(zhì)酸衍生物本身可包括：透明質(zhì)酸；經(jīng)修飾的組胺酸；視需要而定的聚合物或C4-C20烷基；與視需要而定的介于聚合物或C4-C20烷基與透明質(zhì)酸之間的連接基團(tuán)，其中經(jīng)修飾的組胺酸與視需要而定的聚合物或C4-C20烷基，若存在的話，被接枝于透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基，以使透明質(zhì)酸形成透明質(zhì)酸衍生物。一實(shí)例包括，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，經(jīng)修飾的組胺酸的接枝率為在1-100％之內(nèi)，而根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，視需要而定的聚合物或C4-C20烷基的接枝率為在0-40％之內(nèi)。在另一實(shí)施例中，鉑化合物可包括，但不限于，(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)、順鉑與奧沙利鉑的一或多個(gè)。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示，各種BocHis接枝的(grafted)HA-納米顆粒于體外(invitro)37℃磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate-bufferedsaline,PBS)(pH7.4)中的鉑的釋放圖表。(其中，方形表示0％BocHis(PtHC16001)，圓形表示17％BocHis，三角形表示40％BocHis(PtHC604)，X表示70％BocHis)。圖2顯示，奧沙利鉑與PtHC604于B16-F10-luc2細(xì)胞株的體外(invitro)細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果。圖3A、圖3B與圖3C分別顯示，于RPMI2650(圖3A)、SCC9(圖3B)與GBM8401細(xì)胞株(圖3C)的CD44的表現(xiàn)。圖4顯示，各種具有CD44表現(xiàn)的細(xì)胞株經(jīng)PtHC604處理后其細(xì)胞Pt的測(cè)定結(jié)果。圖5顯示，經(jīng)以抗CD44抗體或HA競(jìng)爭(zhēng)物處理GBM8401細(xì)胞株后其細(xì)胞Pt的測(cè)定結(jié)果。圖6顯示，藥物經(jīng)由靜脈內(nèi)或皮下給藥后于淋巴結(jié)中Pt的濃度與時(shí)間 關(guān)系圖表。圖7顯示，PtHC604、PtHC16001與奧沙利鉑經(jīng)由皮下給藥后于淋巴結(jié)中Pt的濃度與時(shí)間關(guān)系圖表。圖8顯示，奧沙利鉑或PtHC604經(jīng)小鼠皮下注射入右后足墊之后于注射位置所殘留的Pt。圖9顯示，經(jīng)皮下給藥PtHC604或靜脈給藥奧沙利鉑的小鼠的存活率。圖10顯示，經(jīng)皮下注射PtHC604、靜脈內(nèi)注射奧沙利鉑或皮下注射奧沙利鉑后帶有黑色素瘤轉(zhuǎn)移的膝后窩(popliteal)淋巴結(jié)圖11顯示，經(jīng)由皮下注射PtHC604或奧沙利鉑后的局部皮膚毒性。圖12為圖10的量化結(jié)果，其顯示，經(jīng)皮下注射PtHC604、靜脈內(nèi)注射奧沙利鉑或皮下注射奧沙利鉑后帶有黑色素瘤轉(zhuǎn)移的膝后窩(popliteal)淋巴結(jié)大小。實(shí)施方式在下方詳細(xì)說(shuō)明中，為了解釋的目的，提及眾多特定細(xì)部?jī)?nèi)容以提供所揭露的實(shí)施例的完整理解。然而，一或多個(gè)實(shí)施例可不具這些細(xì)部而被實(shí)施。在其他例子中，圖解說(shuō)明結(jié)構(gòu)與裝置為示意性地顯示。在本揭露的一實(shí)施例中，提供一種包含透明質(zhì)酸衍生物與鉑化合物的透明質(zhì)酸納米顆粒在制備治療于一個(gè)體中的淋巴系統(tǒng)中的腫瘤的藥物的用途。天然的(native)透明質(zhì)酸如下方所呈現(xiàn)的式(I)：在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物可包括，但不限于，透明質(zhì)酸、經(jīng)修飾的組胺酸與視需要而定的聚合物或C4-C20烷基。在一實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組 胺酸與視需要而定的聚合物或C4-C20烷基，可視需要而定地經(jīng)由連接基團(tuán)被接枝于透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基。在此種實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸、聚合物或C4-C20烷基與透明質(zhì)酸可形成透明質(zhì)酸衍生物。在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸的分子量為約7,000-1,500,000道爾頓(Daltons)。在另一本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的實(shí)施例中，透明質(zhì)酸的分子量為約7,000-350,000道爾頓。在其他實(shí)施例中，透明質(zhì)酸的分子量可為約7,000、8,000、9,000、10,000、11,000、12,000、13,000、14,000、15,000、16,000、17,000、18,000、19,000、20,000、21,000、22,000、23,000、24,000、25,0000、26,000、27,000、28,000、29,000、30,000、31,000或32,000道爾頓。在另一實(shí)施例中，由經(jīng)修飾的組胺酸與透明質(zhì)酸，或由經(jīng)修飾的組胺酸、視需要而定的聚合物或C4-C20烷基與透明質(zhì)酸所形成的透明質(zhì)酸衍生物的分子量可為約7,000-1,500,000道爾頓。在另一實(shí)施例中，前述的透明質(zhì)酸衍生物的分子量可為約7,000-1,200,000道爾頓。在又另一實(shí)施例中，前述的透明質(zhì)酸衍生物的分子量可為約7,000-600,000道爾頓。在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，適合的經(jīng)修飾的組胺酸的例子可包括，Boc-組胺酸(Boc-histidine)、Cbz-組胺酸(Cbz-histidine)、Fmoc-組胺酸(Fmoc-histidine)、Ac-組胺酸(Ac-histidine)或Trt-組胺酸(Trt-histidine)等，但不限于此。在一通常的實(shí)施例中，組胺酸的α-氮(alpha-nitrogen)可被酰基(acyl)衍生物所保護(hù)。在另一實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸可與透明質(zhì)酸上的羥基形成酯(ester)。在又另一實(shí)施例中，組胺酸上的咪唑(imidazole)可為未被保護(hù)的。此外，在一實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，經(jīng)修飾的組胺酸的接枝率可為約1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。又，在透明質(zhì)酸衍生物的另一實(shí)施例中，適合的聚合物組成的示范例子包括聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)、聚己內(nèi)酯(polycaprolactone,PCL)、聚乳酸(polylacticacid,PLA)、聚乙醇酸(polyglycolicacido,PGA)、聚乳酸-乙醇酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA)與聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)等的一或多個(gè)，但不限于此。在另一實(shí)施例中，聚合物可為聚乙二醇(PEG)。再者，在透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，前述聚合物的分子量可為約300-10,000道爾頓。在另一實(shí)施例中，聚合物的分子量可為約1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、2,200、2,300、2,400、2,500、2,600、2,700、2,800、2,900、3,000、3,100、3,200、3,300、3,400、3,500、3,600、3,700或3,800道爾頓。又，在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物中，C4-C20烷基的例子可包括，但不限于，C4H9、C5H11、C6H13、C7H15、C8H17、C9H19、C10H21、C11H23等。此外，在一實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，視需要而定的聚合物或C4-C20烷基的接枝率可為約0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％。在另一實(shí)施例中，根據(jù)在透明質(zhì)酸上的總羥基，經(jīng)修飾的組胺酸對(duì)透明質(zhì)酸的接枝率可為在1-100％之內(nèi)，然而，需注意的是，視需要而定的聚合物或C4-C20烷基對(duì)透明質(zhì)酸的接枝率為在0-40％之內(nèi)。因此，在一實(shí)施例中，可以理解的是，透明質(zhì)酸衍生物為可具有或不具有視需要而定的聚合物或C4-C20烷基接枝于其上。換句話說(shuō)，本揭露的透明質(zhì)酸衍生物是否包括聚合物或C4-C20烷基系視需要而定。在一實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，經(jīng)修飾的組胺酸的接枝率可為在1-100％之內(nèi)，而視需要而定的聚合物或C4-C20烷基的接枝率為0，即透明質(zhì)酸衍生物不具有視需要而定的聚合物或C4-C20烷基接枝于其上。在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物的一示例的式子可顯示為下方的式(II)，但不限于此：式(II)在式(II)中，R1可為經(jīng)修飾的組胺酸，R可為經(jīng)修飾的組胺酸或H，而 a可為5-2000的一正整數(shù)，但不限于此。羧酸鈉(sodiumcarboxylate)鹽為其一實(shí)施例，而替代實(shí)施例可包括其他IA族元素，例如鉀。在其他實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物具有視需要而定的聚合物或C4-C20烷基接枝于其上，且于此實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，經(jīng)修飾的組胺酸的接枝率可為在1-99％之內(nèi)，而聚合物或C4-C20烷基的接枝率為在1-40％之內(nèi)。在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物的一示例的式子可顯示為下方的式(III)，但不限于此：式(III)在式(III)中，R1可為經(jīng)修飾的組胺酸，且R2可為聚合物或C4-C20烷基，視需要而定經(jīng)由連接基團(tuán)來(lái)連接，而R可為經(jīng)修飾的組胺酸、聚合物、C4-C20烷基或H。此外，p與q為為正整數(shù)，且p與q的比值可介于0.1-100之間，但不限于此。在一實(shí)施例中，p與q的比值可介于0.1-20之間。羧酸鈉鹽為其一實(shí)施例，而替代實(shí)施例可包括其他IA族元素，例如鉀。在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基可包括，羥基，其位于透明質(zhì)酸中的至少一個(gè)雙糖單位(disaccharideunit)的N-乙酰-D-葡糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)的第5個(gè)碳原子上，但不限于此。在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸為Boc-組胺酸。又，在一特定實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，Boc-組胺酸的接枝率為在1-99％之內(nèi)，而聚合物或C4-C20烷基的接枝率為在1-40％之內(nèi)。此外，在透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，前述聚合物可為聚乙二醇(PEG)，其中分子量可為約300-10,000道爾頓。又，于此實(shí)施例中，以本揭露的透明質(zhì)酸衍生物而言，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，聚合物的接枝率可為在1-40％之內(nèi)。在一特定實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸為Boc-組胺酸，且前 述聚合物可為聚乙二醇(PEG)，其中Boc-組胺酸的接枝率為在1-80％之內(nèi)，而聚乙二醇(PEG)的接枝率為在1-40％之內(nèi)。在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，C4-C20烷基可為C11H23，且于此實(shí)施例中，根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，C11H23的接枝率可為在1-40％之內(nèi)。在本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的一特定實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸為Boc-組胺酸，而C4-C20烷基可為C11H23，其中Boc-組胺酸的接枝率為在1-80％之內(nèi)，而C11H23的接枝率則在1-40％之內(nèi)。在一實(shí)施例中，聚合物或C4-C20烷基可經(jīng)由連接基團(tuán)連接至透明質(zhì)酸。在另一實(shí)施例中，連接基團(tuán)與透明質(zhì)酸形成酯(ester)。在另一實(shí)施例中，連接基團(tuán)與聚合物或C4-C20烷基形成酯。在一特定實(shí)施例中，連接基團(tuán)為源自琥珀酸酐(succinicanhydride)，但連接基團(tuán)的種類不限于此。透明質(zhì)酸衍生物的一較佳實(shí)施例為如下于式(IV)中所呈現(xiàn)的HA16k-g-(BocHis-co-SAmPEG1.9K)聚合物。式(IV)在式(IV)的一透明質(zhì)酸衍生物的一實(shí)施例中，分子量為約16千道爾頓(kDa)(Dalton:Da；D)，而根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，BocHis的接枝率可為在30％至80％的范圍中，SAmPEG的接枝率可為在5％至20％的范圍中，且n對(duì)應(yīng)于PEG1900的n。羧酸鈉鹽為其一實(shí)施例，而替代實(shí)施例可包括其他IA族元素，例如鉀。鉑化合物的示范例子可包括，但不限于，(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)、順鉑、奧沙利鉑、卡鉑(carboplatin)、奈達(dá)鉑(nedaplatin)、 phenanthriplatin與吡鉑(picoplatin)的一或多個(gè)。透明質(zhì)酸納米顆粒的結(jié)構(gòu)可能為，鉑化合物與透明質(zhì)酸衍生物的羧酸基團(tuán)(carboxylategroup)由于不同電荷而可彼此連結(jié)，甚而，可藉由至少部分來(lái)自經(jīng)修飾的組胺酸的咪唑(imidazole)接枝于透明質(zhì)酸與被用來(lái)修飾透明質(zhì)酸的效果，鉑化合物可被聚集，并使鉑化合物被包裝于前述透明質(zhì)酸衍生物中以形成透明質(zhì)酸納米顆粒。在本揭露的透明質(zhì)酸納米顆粒的一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約1.25：1-50：1。在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約1.25：1-25：1。在另一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約2：1-25：1。在又另一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約2：1-10：1。在透明質(zhì)酸納米顆粒的一實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸可為Boc-組胺酸，且根據(jù)透明質(zhì)酸的羥基的總數(shù)，聚合物或C4-C20烷基的接枝率為0(即，透明質(zhì)酸衍生物僅具有Boc-組胺酸接枝于其上)，且鉑化合物可為(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)。于此實(shí)施例中，具有經(jīng)修飾的組胺酸接枝于其上的透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基可包括羥基，其位于透明質(zhì)酸中的至少一個(gè)雙糖單位的N-乙酰-D-葡糖胺的第5個(gè)碳原子上，但不限于此。此外，于此實(shí)施例中，Boc-組胺酸的接枝率可為在1-80％之內(nèi)，透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約1.25：1-25：1。在另一本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸可為Boc-組胺酸，且聚合物可為聚乙二醇(PEG)，而鉑化合物可為(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)。于此實(shí)施例中，具有經(jīng)修飾的組胺酸接枝于其上的透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基可包括羥基，其位于透明質(zhì)酸中的至少一個(gè)雙糖單位的N-乙酰-D-葡糖胺的第5個(gè)碳原子上，但不限于此。此外，于此實(shí)施例中，Boc-組胺酸的接枝率可為1-80％，聚乙二醇(PEG)的接枝率可為1-40％，且透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約3：1-50：1。在另一本揭露的透明質(zhì)酸衍生物的實(shí)施例中，經(jīng)修飾的組胺酸可為Boc-組胺酸，且C4-C20烷基可為C11H23，而鉑化合物可為(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(DACHPt)。于此實(shí)施例中，具有經(jīng)修飾的組胺酸接枝于其上的透明質(zhì)酸的至少一個(gè)伯羥基可包括羥基，其位于透明質(zhì)酸中的至少一個(gè)雙糖單位的N-乙酰-D-葡糖胺的第5個(gè)碳原子上，但不限于此。此外，于此實(shí)施例中， Boc-組胺酸的接枝率可為約1-80％，C11H23的接枝率可為1-40％，而透明質(zhì)酸衍生物對(duì)鉑化合物的重量比為約2.5：1-4：1。在一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸納米顆粒的平均顆粒尺寸可為約100-1000nm。在另一實(shí)施例中，透明質(zhì)酸納米顆粒的平均顆粒尺寸可為約100-800nm。在另一實(shí)施例中，平均顆粒尺寸可為約100-500nm。在更進(jìn)一步的另一實(shí)施例中，平均顆粒尺寸可為約100-300nm。在甚至更進(jìn)一步的實(shí)施例中，平均顆粒尺寸可為約100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300nm。透明質(zhì)酸衍生物中的活性成分的包覆效率(encapsulationefficiency)可為至少50％、至少55％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。使用下方公式來(lái)計(jì)算包覆效率(EE％)：包覆效率(EE％)＝(WP/WT)×100％WP為在經(jīng)由0.22μm過(guò)濾(filtration)純化后的Pt的總量(amount)(加入的藥物-自由"未被包埋(unentrapped)的藥物")，而WT為在純化之前所測(cè)定的Pt的總量(quantity)(加入的藥物)。透明質(zhì)酸納米顆粒可與藥學(xué)上可接受的成分，如載體與賦形劑來(lái)一起配制。藥學(xué)上的賦形劑的例子包括稀釋劑(diluents)、分解劑(disintegrants)、結(jié)合劑(binders)、潤(rùn)滑劑(lubricants)與滑動(dòng)劑(glidants)的一或多個(gè)。透明質(zhì)酸納米顆粒可為口服式(orally)、非口服式(parenterally)藉由噴霧吸入(inhalationspray)、或經(jīng)由植入式貯存器(implantedreservoir)給藥至一個(gè)體。個(gè)體可為人類或具有淋巴系統(tǒng)的任何動(dòng)物，如，哺乳動(dòng)物。非口服式方法可包括皮下(subcutaneous)、皮內(nèi)(intracutaneous)、靜脈內(nèi)(intravenous)、肌肉內(nèi)(intramuscular)、關(guān)節(jié)內(nèi)(intra-articular)、動(dòng)脈內(nèi)(intra-arterial)、滑囊(腔)內(nèi)(intrasynovial)、胸骨內(nèi)(intrasternal)、蜘蛛膜下腔(intrathecal)與疾病部位內(nèi)(intralesional)注射以及灌注技術(shù)。對(duì)于不同的給藥方式，可利用一般方法將透明質(zhì)酸納米顆粒配制成劑型(dosageform)。口服成分的形式可包括，但不限定于，藥錠、膠囊、乳劑(emulsions)，與水性懸浮液(aqueoussuspensions)、分散液(dispersions)以及溶液。在一實(shí)施例中，給藥方法為靜脈內(nèi)或皮下注射(subcutaneousinjection)，較佳為皮下注射。在皮下注射中，較佳為，PDII不大于2.5(表2)。甚至更佳為，PDII于皮下注射中不大于0.5。在一實(shí)施例中，給藥劑量可為在0.01至10mgPt/kg之內(nèi)，較佳劑量范圍為在0.05至5mgPt/kg之內(nèi)，更佳為在0.1至5mg/kg之內(nèi)，且甚至更佳在0.1至3mg/kg之內(nèi)。特定劑量可為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0mgPt/kg。在一實(shí)施例中，腫瘤為轉(zhuǎn)移性的(metastatic)。在另一實(shí)施例中，轉(zhuǎn)移性的腫瘤可為黑色素細(xì)胞瘤(melanoma)、頭頸癌(headandneckcancer)、乳癌、前列腺癌(prostatecancer)、淋巴瘤(lymphoma)、胃癌(gastriccancer)、結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)、卵巢癌(ovariancancer)、子宮癌(uterinecancer)或肺癌(lungcancer)，但不限于此。在另一實(shí)施例中，藉由透明質(zhì)酸納米顆粒所治療的腫瘤的體積為未經(jīng)治療的腫瘤的體積的30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、或5％或更少。在又另一實(shí)施例中，藉由透明質(zhì)酸納米顆粒所治療的腫瘤的體積為腫瘤的原始體積的30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、或5％或更少。實(shí)施例材料材料的來(lái)源透明質(zhì)酸鈉(sodiumhyaluronate)(MW：16千道爾頓(kDa))與HA16k-g-(BocHis-co-SAmPEG1.9K)聚合物為由工業(yè)技術(shù)研究，材料與化工研究所提供。(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(II)(dichloro(1,2diamminocyclohexane)platinum(II))(DACHPt)、AgNO3與鉑(Pt)標(biāo)準(zhǔn)品為購(gòu)自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。順鉑(CDDP)為購(gòu)自SpectrumChemicalManufacturingCorp。Oxalip注射劑(奧沙利鉑(oxaliplatin))為購(gòu)自TTYBiopharm。鼠源黑色素瘤細(xì)胞株(Murinemelanomacellline)B16-F10-luc2為購(gòu)自CaliperLifeSciences(Hopkinton,MA)。人類頭頸癌細(xì)胞株SAS-LN來(lái)自國(guó)立陽(yáng)明大學(xué)楊慕華博士實(shí)驗(yàn)室。RPMI1640、DMEM培養(yǎng)基，與胎牛血清為購(gòu)自GIBCOBRL(GrandIsland,NY)。C57BL/6(C57BL/6NCrlBltw)與BALB/c裸鼠(nudemice)(CAnN。Cg-Foxnlnu/CrlBltw)為購(gòu)自BioLASCOLtd(Ilan，Taiwan)。CD44抗體(Cat.MA4400)為購(gòu)自ThermoScientific。方法PtHC604的制備將(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(II)(DACHPt)懸浮于蒸餾水中，且在黑暗中于25℃與硝酸銀(silvernitrate)混合([AgNO3]/[DACHPt]＝2)24小時(shí)以形成含水復(fù)合物(aqueouscomplex)。藉由離心來(lái)移除氯化銀(silverchloride)(AgCl)沉淀，接著經(jīng)由一0.22μm過(guò)濾器來(lái)過(guò)濾。藉由將DACHPt與HA16k-g-(BocHis-co-SAmPEG1.9K)聚合物(式(IV))，以1/3(藥物比聚合物)的摩爾比混合于蒸餾水中，來(lái)制備PtHC604配制物(formulation)。藉由尺寸排除色譜法(size-exclusionchromatography,SEC)與多角度激光光散射(multi-anglelaserlightscattering,MALS)來(lái)測(cè)定HA的分子量。HA16k具有16千道爾頓(kDa)的平均分子量。“接枝率(graftratio)”為取代基(substituent)接枝在HA的全部重復(fù)單位中的羥基的總數(shù)的平均百分比。BocHis的接枝率為落于40％至60％的范圍中，而SAmPEG的接枝率為落于6％至13％的范圍中。PtHC16001的制備將(1,2-二氨基環(huán)己烷)二氯化鉑(II)(DACHPt)懸浮于蒸餾水中，且在黑暗中于25℃與硝酸銀混合([AgNO3]/[DACHPt]＝2)24小時(shí)以形成含水復(fù)合物。藉由離心來(lái)移除氯化銀(AgCl)沉淀，接著經(jīng)由一0.22μm過(guò)濾器來(lái)過(guò)濾。PtHC16001配制物為對(duì)照組，其藉由將DACHPt與天然的HA16k聚合物，以1/3(藥物比聚合物)的摩爾比，混合于蒸餾水中來(lái)制備。CPHC008的制備藉由將順鉑(CDDP)粉末與HA16k-g-(BocHis-co-SAmPEG1.9K)聚合物，以1/3(藥物比聚合物)的摩爾比混合于蒸餾水中，來(lái)制備CPHC008配制物。BocHis的接枝率為落于40％至60％的范圍中，而SAmPEG為落于6％至13％的范圍中。前述制備過(guò)程于25℃黑暗中執(zhí)行，其間伴隨持續(xù)攪拌達(dá)72小時(shí)。之后將混合物進(jìn)行超音波震蕩(sonication)，并藉由超過(guò)濾(ultrafiltration)與0.22μm過(guò)濾進(jìn)行純化。顆粒尺寸測(cè)量利用動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering,DLS)測(cè)量?jī)x(ZetaPlus,BROOKHAVEN)來(lái)測(cè)量HA-納米顆粒的顆粒尺寸。包覆效率于制備制程中，藉由感應(yīng)耦合等離子體發(fā)射光譜儀(InductivelyCoupled PlasmaOpticalEmissionSpectrometry，ICP-OES)來(lái)定量Pt的量，并使用下方公式來(lái)計(jì)算包覆效率(EE％)：包覆效率(EE％)＝(WP/WT)×100％WP為在經(jīng)由0.22μm過(guò)濾(filtration)純化后的Pt的總量(加入的藥物-自由"未被包埋的藥物")，而WT為在純化之前所測(cè)定的Pt的總量(加入的藥物)。體外釋放分析在37℃，于生理食鹽水(physiologicalsaline,PBS，pH7.4，150mMNaCl)中，藉由透析(dialysis)方法(分子量截留大小(cutoffsize)：3500，SpectrumLaboratories,Inc.)來(lái)評(píng)估HA-納米顆粒的鉑藥物的釋放。透析物(dialysate)中的Pt含量采樣于所定義的時(shí)段(timeperiod)，并藉由ICP-OES(ThermoIcap6000SERIES)來(lái)測(cè)量。體外細(xì)胞毒性分析將B16-F10-luc2細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基中，其中添加10％熱去活化(heat-inactivated)的胎牛血清，并保持于一潮濕，37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中。將B16-F10-luc2細(xì)胞以每孔2x103個(gè)細(xì)胞種于96孔盤上，并于37℃隔夜培養(yǎng)。之后將細(xì)胞以磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate-bufferedsaline,PBS)、奧沙利鉑或PtHC604于37℃處理48小時(shí)，并藉由MTT分析來(lái)測(cè)定細(xì)胞存活率(cellviability)。CD44受體的表現(xiàn)使用流式細(xì)胞方法(flowcytometricmethod)來(lái)測(cè)定不同細(xì)胞(RPMI2650、SCC9與GBM8401)的CD44受體的表現(xiàn)。先將細(xì)胞以一抗CD44抗體(anti-CD44antibody)來(lái)處理，并以一熒光結(jié)合的二次抗體來(lái)染色。其后藉由限制(gating)于子集特定區(qū)域(subset-specificregion)的方式來(lái)分別地分析各個(gè)平均熒光強(qiáng)度。CD44靶向識(shí)別(targetingcharacterization)為了確認(rèn)PtHC604的CD44靶向能力，以三種不同CD44表現(xiàn)的細(xì)胞(RPMI2650、SCC9與GBM8401)來(lái)進(jìn)行細(xì)胞結(jié)合/攝入(binding/uptake)的研究。將2×105/mL細(xì)胞種于12孔盤上，并于37℃隔夜培養(yǎng)。接著，將PtHC604(50μMPt)施加于三種不同細(xì)胞，并以無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)于37℃中2小時(shí)。而在競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中，GBM8401細(xì)胞先以CD44抗體(5μg/mL)或HA(12mg/mL) 前處理1小時(shí)后再添加PtHC604，經(jīng)PtHC604培養(yǎng)2小時(shí)后，將細(xì)胞以培養(yǎng)基清洗三次并收集，其后藉由ICP-MS進(jìn)行細(xì)胞的鉑分析(cellularplatinumanalysis)。經(jīng)由不同注射途徑的PtHC604的淋巴傳輸為了研究于不同的注射途徑中的淋巴傳輸，斯普拉-道來(lái)(SpragueDawley,SD)大鼠分別以4mgPt/kgPtHC604或9mgPt/kg奧沙利鉑進(jìn)行靜脈內(nèi)注射將SD大鼠以異氟烷(isoflurane)麻醉，再以將PtHC604(1mgPt/kg)皮下注射至右側(cè)乳腺脂肪墊(mammaryfatpad，MFP)。在注射后(post-injection)4、24、48、72與96小時(shí)，將動(dòng)物以CO2安樂(lè)死。接著采集右側(cè)腋窩(axillary)淋巴結(jié)，并保存于-80℃直至分析。其后藉由ICP-MS(THERMOXSERIESII)來(lái)分析于淋巴結(jié)中的鉑濃度。于正常大鼠中經(jīng)由皮下注射的PtHC604的淋巴傳輸為了評(píng)估淋巴傳輸，SD大鼠以異氟烷進(jìn)行麻醉，分別在皮下注射PtHC604、PtHC16001或奧沙利鉑(1mgPt/kg)至右側(cè)乳腺脂肪墊。在注射后(post-injection)4、24、48、72與96小時(shí)，將動(dòng)物以CO2安樂(lè)死。接著采集右側(cè)腋窩淋巴結(jié)、坐骨神經(jīng)(sciaticnerves)與血漿(plasma)，并保存于-80℃直至分析。其后藉由ICP-MS來(lái)分析于淋巴結(jié)與坐骨神經(jīng)中的鉑濃度，及ICP-OES來(lái)分析于血漿中的鉑濃度。注射位置的藥物殘留評(píng)估為了評(píng)估于注射位置中的殘留藥物，BALB/c小鼠皮下注射PtHC604或奧沙利鉑(1mgPt/kg)至左后足墊(footpad)中。在注射后4、24、48與96小時(shí)，將動(dòng)物以CO2安樂(lè)死。接著采集注射側(cè)腳并保存于-80℃直至分析。其后藉由ICP-MS來(lái)分析于注射側(cè)腳中的鉑濃度。于B16-F10-luc2的自發(fā)性(spontaneous)淋巴轉(zhuǎn)移活體動(dòng)物模式中的存活率與抗淋巴轉(zhuǎn)移藥效試驗(yàn)在接種細(xì)胞前，于指數(shù)生長(zhǎng)期(exponentialgrowthperiod)期間收集B16-F10-luc2細(xì)胞，并以無(wú)菌的PBS清洗兩次，之后將其懸浮于具有50％Matrigel(BDBiosciences)的PBS中。將3x105個(gè)B16-F10-luc2細(xì)胞，皮下植入雌性C57BL/6小鼠(6至8周大)之右后腳掌。待B16-F10-luc2腫瘤生長(zhǎng)5周，且腫瘤細(xì)胞自發(fā)性地轉(zhuǎn)移至鄰近的膝后窩(popliteal)淋巴結(jié)，此時(shí)使用IVIS(InVivoImagingSystemSpectrum)藉由生物冷光影像來(lái)確認(rèn)淋巴轉(zhuǎn)移的 情況，確認(rèn)淋巴轉(zhuǎn)移后開始分組投藥。在腳掌皮下注射3mgPt/kg的PtHC604或奧沙利鉑，或是靜脈注射3mgPt/kg的奧沙利鉑。所有測(cè)試物皆一周給藥兩次并持續(xù)2周(一獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中n＝6-8/組)。之后藉由卡尺(calipers)來(lái)測(cè)量腫瘤尺寸，并使用下方公式轉(zhuǎn)換成腫瘤體積：V＝LS2/2(其中L為最長(zhǎng)直徑，而S為最短直徑)。當(dāng)小鼠死亡或腫瘤體積為>3000mm3時(shí)，定義為死亡。在研究結(jié)束時(shí)，犧牲小鼠，并收集膝后窩淋巴結(jié)進(jìn)行測(cè)量。藉由上方的相同公式：V＝LS2/2來(lái)計(jì)算淋巴結(jié)的體積。于SAS-LN的自發(fā)性淋巴轉(zhuǎn)移模型中的體內(nèi)(invivo)抗淋巴轉(zhuǎn)移將具冷光表現(xiàn)的SAS-LN細(xì)胞懸浮于PBS中，以每只小鼠2x105個(gè)細(xì)胞的數(shù)量，原位植入(orthotropicimplant)至雌性BALB/c裸鼠(6至8周大)的舌中，待SAS-LN腫瘤生長(zhǎng)1周。以靜脈內(nèi)注射3mgPt/kg的劑量來(lái)給藥順鉑，而經(jīng)由皮下注射3mgPt/kg至頰窩(buccalsite)來(lái)給藥CPHC008(n＝10/組)。所有測(cè)試物皆于一周給藥一次達(dá)5周。在小鼠犧牲后，收集其頸部(cervical)淋巴結(jié)，此時(shí)使用IVIS光譜(spectrum)并藉由生物冷光影像來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)移的情況。PtHC604的局部毒性(localtoxicity)評(píng)估為了評(píng)估局部毒性，將雌性BALB/c小鼠秤重并分組，分別在皮下注射PtHC604與奧沙利鉑至左后足墊。(1)載劑(vehicle)；(2)0.3mgPt/kg奧沙利鉑；(3)1mgPt/kg奧沙利鉑；(4)3mgPt/kg奧沙利鉑；(5)0.3mgPt/kgPtHC604；(6)1mgPt/kgPtHC604；(7)3mgPt/kgPtHC604，n＝6/群組。每只小鼠皆于一周注射一次達(dá)4周。皮膚毒性評(píng)估是藉由紅斑(erythema)與水腫(oedema)等級(jí)來(lái)衡量藥物對(duì)于注射位置所造成的皮膚刺激反應(yīng)(表1)。透過(guò)結(jié)合紅斑與水腫的評(píng)分，且使用一級(jí)皮膚刺激指數(shù)(PrimaryDermalIrritationIndexindex)(PDII)來(lái)評(píng)估皮膚的潛在毒性，并將其分級(jí)為無(wú)刺激、可忽視的刺激、輕度刺激、中度刺激與重度刺激(表2)。表1、皮膚反應(yīng)的等級(jí)–急性(acute)皮膚(dermal)刺激表2、皮膚的潛在刺激性分級(jí)PDII分級(jí)0.0無(wú)刺激>0.0-0.5可忽略的刺激>0.5-2.5輕度刺激>2.5-5.0中度刺激>5.0-8.0重度刺激結(jié)果不同配制物的組成物如不受理論束縛，此系統(tǒng)中的金屬-聚合物離子復(fù)合物形成的驅(qū)動(dòng)力(drivingforce)不僅可通過(guò)離子力(ionicforce)也可藉由Boc-His。DACHPt或順鉑可以70±10％的效率被包覆進(jìn)HA-納米顆粒。PtHC16001可合并天然的HA聚合物以形成為對(duì)照組的配制物。不同的HA-納米顆粒的組成于表3中概述。表3、不同的HA-納米顆粒的組成體外釋放分析藉由于PBS中的透析來(lái)研究HA-納米顆粒的鉑藥物的釋放行為(releasebehavior)(圖1)。從HA-納米顆粒釋放的鉑與BocHis比例成反比，顯示HA上的BocHis在顆粒穩(wěn)定化(particlestabilization)方面具有一重要角色。在培養(yǎng)于PBS中達(dá)24小時(shí)之后，約30-40％的鉑會(huì)從PtHC604釋放，而約85％的鉑會(huì)從PtHC16001釋放。奧沙利鉑與PtHC604于B16-F10-luc2細(xì)胞的體外(invitro)細(xì)胞毒性測(cè)試于B16-F10-luc2細(xì)胞中以與奧沙利鉑比較的方式來(lái)評(píng)估PtHC604處理48小時(shí)的細(xì)胞毒性。其中，從濃度-存活曲線(concentration-survivalcurves)來(lái)計(jì)算IC50值，而濃度-存活曲線為藥物處理后48小時(shí)從MTT分析獲得。PtHC604呈現(xiàn)低于奧沙利鉑的生長(zhǎng)抑制效價(jià)(potency)(表4與圖2)。表4、于B16-F10-luc2細(xì)胞中奧沙利鉑與PtHC604的IC50IC50(μM)奧沙利鉑0.65PtHC6042.28PtHC604靶向(target)CD44陽(yáng)性細(xì)胞CD44靶向測(cè)試結(jié)果顯示，相較于CD44陰性細(xì)胞(RPMI2650)與中等程度表現(xiàn)細(xì)胞(SCC9)，GBM細(xì)胞具有最高的Pt含量。而此結(jié)果表示，在PtHC604處理后，細(xì)胞的Pt含量與CD44的表現(xiàn)呈正相關(guān)(圖3與圖4)。又，GBM8401細(xì)胞(高度CD44表現(xiàn))中的細(xì)胞的Pt，可于PtHC604處理組中被偵測(cè)到。另，相較于未處理的細(xì)胞，經(jīng)CD44抗體或天然的HA進(jìn)行前處理的細(xì)胞，在相對(duì)Pt濃度方面，分別顯示減少有79％與72％(圖5)。再者，細(xì)胞攝入測(cè)試顯示，PtHC604對(duì)于CD44表現(xiàn)細(xì)胞具有靶向能力(targetingability)。此競(jìng)爭(zhēng)研究顯示，PtHC604至少保有透明質(zhì)酸與CD44作用的能力。經(jīng)由不同注射途徑的PtHC604的淋巴傳輸相較靜脈內(nèi)注射PtHC604與奧沙利鉑，皮下注射PtHC604的小鼠腋下淋巴結(jié)具有最高的曲線下面積(areaundercurve,AUC)(圖6)。值得注意的 是，相較于PtHC604經(jīng)由皮下注射，奧沙利鉑為以9mgPt/kg的量經(jīng)由靜脈內(nèi)注射給藥，而PtHC604為以4mgPt/kg的量經(jīng)由靜脈內(nèi)注射給藥。經(jīng)將劑量標(biāo)準(zhǔn)化(normalization)后顯示，經(jīng)皮下注射PtHC604的淋巴結(jié)曝藥量(thelymphaticexposure)，分別為4.6倍高于PtHC604經(jīng)由靜脈內(nèi)注射給藥與15.6倍高于奧沙利鉑經(jīng)由靜脈內(nèi)注射給藥(表5)。此結(jié)果表示，相較于靜脈內(nèi)奧沙利鉑投藥，皮下注射PtHC604的淋巴傳輸能力改善了淋巴結(jié)中的藥物程度。且藉由皮下注射給藥PtHC604，顯著地提升了其在淋巴結(jié)流域(lymphnodebasin)的濃度，顯示相較于靜脈內(nèi)投藥的途徑，此載體經(jīng)由淋巴管(lymphatics)傳輸鉑至淋巴結(jié)更為有效得多。表5、使用靜脈內(nèi)(intravenous,iv)與皮下(subcutaneous,sc)投藥的PtHC604的淋巴暴露*動(dòng)物經(jīng)由靜脈內(nèi)投藥途徑接受最大容忍劑量經(jīng)由皮下注射的PtHC604的淋巴傳輸經(jīng)乳腺脂肪墊注射之后，于腋窩淋巴結(jié)中的鉑含量，在PtHC604群組中高于奧沙利鉑與PtHC16001群組(表6與圖7)。且在注射PtHC604之后，于腋窩淋巴結(jié)中的鉑的曲線下面積，相較于奧沙利鉑與PtHC16001分別增加11與2倍。因此，于淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤中，PtHC604相較于奧沙利鉑具備增加鉑在淋巴結(jié)積聚的特性。并且，PtHC604在釋放其結(jié)合藥物之前，因可維持較佳的的體內(nèi)(invivo)穩(wěn)定性而足以通行或集中于淋巴管。又，相較于PtHC16001與PtHC604，于血漿中，奧沙利鉑具有最低的Pt暴露。包覆于HA-載體中的Pt是以保護(hù)Pt藥物的狀態(tài)離開血管。相較于奧沙利鉑與PtHC16001，于坐骨神經(jīng)中，PtHC604顯示較低的鉑暴露。這些結(jié)果指出，PtHC604所造成全身性毒性(systemictoxicity)的疑慮相較于奧沙利鉑為低，卻比奧沙利鉑更為有效。表6、PtHC604、PtHC16001與奧沙利鉑經(jīng)由皮下投藥的淋巴結(jié)組織曝 藥量殘留藥物評(píng)估在以PtHC604與奧沙利鉑注射于左后足墊之后，足中的鉑含量會(huì)隨著時(shí)間而減少。經(jīng)注射PtHC604與奧沙利鉑24小時(shí)后，于足中分別偵測(cè)到12％與29％的殘留的鉑(圖8)。且在PtHC604與奧沙利鉑注射之后，于足中的Pt暴露(AUC)分別為2212與4089h*ug/mL。其中PtHC604呈現(xiàn)較低的鉑殘留可能示意有較低的局部毒性。PtHC604于B16-F10-luc2的自發(fā)性淋巴轉(zhuǎn)移活體動(dòng)物模式中的存活率與抗淋巴轉(zhuǎn)移藥效試驗(yàn)：將小鼠黑色素瘤細(xì)胞株B16-F10-luc2，接種于同源的免疫健全(immunocompetentsyngeneic)C57BL/6小鼠的后腳掌中，且自發(fā)性地轉(zhuǎn)移至鄰近的膝后窩(popliteal)淋巴結(jié)。將奧沙利鉑以靜脈內(nèi)或皮下注射，或?qū)tHC604局部皮下注射于腳掌中以進(jìn)行局部淋巴傳輸。經(jīng)處理后的存活率與存活天數(shù)中位數(shù)(median)顯示于圖9與表7中。經(jīng)載劑、奧沙利鉑的靜脈內(nèi)注射、與PtHC604的皮下注射處理后的小鼠的中位數(shù)存活天數(shù)分別為9、7與14天。顯示皮下給藥PtHC604可延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間。經(jīng)給藥藥物達(dá)2周后，犧牲小鼠并收集膝后窩淋巴結(jié)(圖10)。相較于靜脈內(nèi)或皮下給藥奧沙利鉑，經(jīng)由皮下注射PtHC604可減少轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)的體積。經(jīng)量化，以載劑、奧沙利鉑的靜脈內(nèi)注射、奧沙利鉑的皮下注射與PtHC604的皮下注射處理的腘窩淋巴結(jié)的體積，分別為183.2±71.7、72.7±46.2、129.2±103.9、34.3±20.3mm3(平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差)(圖12)。因此，雖然體外測(cè)試結(jié)果PtHC604相較于奧沙利鉑顯示較低的生長(zhǎng)抑制效力，但依據(jù)淋巴傳輸?shù)男б妫琍tHC604展現(xiàn)了活體抗淋巴轉(zhuǎn)移上明顯的優(yōu)勢(shì)。表7、帶有黑色素瘤淋巴轉(zhuǎn)移的小鼠經(jīng)給藥奧沙利鉑或PtHC604的存活天數(shù)中位數(shù)中位數(shù)存活天數(shù)載劑，n＝139奧沙利鉑iv.，3mgPt/kg，biw，n＝157PtHC604sc.，3mgPt/kg，biw.，n＝1414CPHC008于SAS-LN的自發(fā)性淋巴轉(zhuǎn)移活體動(dòng)物模式中抗淋巴轉(zhuǎn)移藥效試驗(yàn)：順鉑對(duì)于頭頸癌而言為標(biāo)準(zhǔn)療法，因此使用CPHC008與順鉑評(píng)估于頭頸癌中抗轉(zhuǎn)移性。在SAS-LN接種于BALB/c裸(nude)小鼠的舌中7天后，每周一次共5周以皮下注射CPHC008或靜脈內(nèi)注射順鉑至小鼠。于研究結(jié)束時(shí)，收集頸部淋巴結(jié)，并藉由IVIS體外(exvivo)測(cè)定轉(zhuǎn)移。結(jié)果顯示，載劑、順鉑與CPHC008的轉(zhuǎn)移率分別為90％、78％、10％(表8)。相較于標(biāo)準(zhǔn)治療法，經(jīng)由皮下注射的CPHC008顯示較佳的淋巴轉(zhuǎn)移抑制率。表示CHPC008可傳輸較高量的鉑于淋巴結(jié)中，而展現(xiàn)有較佳的轉(zhuǎn)移抑制效果。這些結(jié)果表示，在治療淋巴轉(zhuǎn)移方面，CPHC008可視為比頭頸癌的標(biāo)準(zhǔn)療法具有更佳潛力的候選藥物。表8、帶有頭頸癌的小鼠經(jīng)給藥CPHC008或順鉑的淋巴轉(zhuǎn)移率淋巴轉(zhuǎn)移載劑，n＝1090％順鉑iv.，3mgPt/kg，qw.，n＝978％CPHC008sc.，3mgPt/kg，qw.，n＝1010％PtHC604的局部毒性評(píng)估由PDII評(píng)分系統(tǒng)顯示，PtHC604與奧沙利鉑-處理組所觀察到的皮膚毒性呈現(xiàn)劑量相關(guān)性(dose-dependent)(表9與圖11)。其中，奧沙利鉑在3mgPt/kg的劑量組觀察到具有重度的皮膚毒性。而PtHC604在3mgPt/kg的劑量則顯示輕度的刺激性。較低劑量的PtHC604并不存在有意義的局部毒性(localtoxicities)。小鼠對(duì)于PtHC604的耐受性良好，不會(huì)在有注射位置呈現(xiàn)病態(tài)(morbidity)或全身性毒性的跡象。且在皮下注射之后，相較于奧沙利鉑，PtHC604具有較低的局部毒性，而較低的局部毒性可能起因于在PtHC604處理后較低的殘留的鉑程度。表9、PtHC604相較于奧沙利鉑的較低的局部毒性雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟習(xí)此技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作些許的更動(dòng)與潤(rùn)飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視后附的權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3