本發明屬于醫藥領域，涉及白藜蘆醇的一種藥物新用途，具體涉及白藜蘆醇在制備治療腸易激綜合征藥物中的應用。
背景技術：
：：腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome，IBS)是常見的胃腸道功能性疾病，以腹痛或腹部不適、伴排便習慣和大便性狀異常為特征，人群患病率約為11％。由于疾病呈慢性和反復發作性，IBS患者生活質量普遍下降，其高患病率和漫長的病程造成了極大的社會和經濟負擔。然其發病機制尚未完全闡明。腸道動力異常和內臟高敏感是兩大主要的病理生理基礎。白藜蘆醇(Resveratrol)是一種存在于天然植物中的多酚類物質，主要來源于葡萄(紅葡萄酒)、虎杖、花生、桑椹等植物。白藜蘆醇具有脂溶性，易通過血腦屏障等特點。本發明通過白藜蘆醇對IBS動物模型進行實驗，結合腸道動力和內臟敏感性等檢測，發現白藜蘆醇可作為有效成分用于制備治療腸易激綜合征的藥物中。技術實現要素：本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供白藜蘆醇的一種藥物新用途，即：白藜蘆醇在制備治療腸易激綜合征藥物中的應用。通過白藜蘆醇在制備治療腸易激綜合征藥物中的應用，可有效降低IBS患者的腸道高敏感性并可顯著逆轉腸道動力的減弱，白藜蘆醇可應用于腦腸雙靶點作用的治療IBS的安全有效的藥物。附圖說明圖1是白藜蘆醇對IBS模型小鼠體重的影響。圖2是白藜蘆醇對IBS模型小鼠內臟敏感性的影響。圖3是白藜蘆醇對IBS模型小鼠食用色素推進百分率的影響。具體實施方式下面結合具體的藥理實驗及結果，對本發明做進一步說明。一、材料與方法(一)實驗材料1.實驗動物雄性ICR小鼠，體重26-33g。小鼠飼養于美國紐約州立大學布法羅校區動物房。飼養條件如下：溫度23～25℃,濕度40％～50％,自然光照,自由進食、進水。所有小鼠先于飼養環境中適應3天,然后再開始動物實驗。動物實驗按要求獲得相關醫學倫理委員會同意。2.實驗藥品白藜蘆醇(resveratrol)、咯利普蘭(rolipram)、去甲丙咪嗪(despramin)和地西泮(diazepam)均購自美國Sigma公司。所有試劑均溶于5％DMSO的生理水溶液中。其中，抑郁相關的陽性對照藥是丙咪嗪，焦慮相關的陽性對照藥是地西泮，咯利普蘭是磷酸二酯酶4(PDE4)的抑制劑，后者將進一步作為機理靶點進行初步對照研究。3.實驗器材導尿管。(二)實驗方法A.動物選擇與分組ICR小鼠隨機分成8組，每組12只。正常對照組、慢急性聯合應激模型組、白藜蘆醇作用組(分低、中、高三個不同劑量，分別為2.5、5、10mg/kg，灌胃)以及陽性對照組(咯利普蘭，1.25mg/kg，腹腔注射、去甲丙咪嗪，10mg/kg，腹腔注射、地西泮，0.5mg/kg，腹腔注射)。除正常對照組外，其余組別均進行慢急性聯合應激，即建立經典的慢急性聯合應激小鼠模擬IBS模型。B.實驗步驟1.建立慢急性聯合應激腸易激綜合征模型(chronicacutecombiningstress,CACS)IBS大鼠模型采用錢家鳴團隊建立的慢急性聯合應激模型(chronicacutecombiningstress,CACS)，該模型是在慢性不可預知性應激模型基礎上予以急性束縛應激，模擬IBS患者在長期慢性的應激下因個別突發事件加劇的情形，相比于母嬰分離等其他動物模型，能更好地模擬腸道動力和心理行為等多方面IBS病癥。建立經典的慢急性聯合應激IBS模型(CACS)：給予慢性不可預知性溫和應激共21天，下述每7項為一周期。在第13天和21天慢性不可預知性溫和應激結束后的第2天,再予束縛應激6h。慢性不可預知性溫和應激程序:(1)4℃冰屋15分鐘；(2)食物剝奪4小時；(3)傾斜籠子4小時；(4)水剝奪4小時；(5)潮濕墊料2小時；(6)12℃水溫游泳5分鐘；(7)束縛應激2小時；(8)壓尾5分鐘；(9)食物和水剝奪6小時；(10)電擊3分鐘；(11)12℃水溫游泳10分鐘；(12)光照過夜；(13)潮濕墊料4小時；(14)壓尾10分鐘；(15)束縛應激3小時；(16)潮濕墊料6小時；(17)電擊6分鐘；(18)束縛應激4小時；(19)潮濕墊料過夜。造模期間，正常對照組和模型組給予5％DMSO的生理水溶液，其他組按照分組給予相應的藥物，連續26天。2.內臟敏感性實驗內臟敏感性檢測：擴張動物結直腸，會引起其腹壁收縮，稱為腹壁撤退反射(abdominalwithdrawalreflex,AWR)。AWR是和內臟運動反射相似的不自主運動反射，可反映內臟敏感程度，由于其無創性被廣泛用來進行動物內臟敏感性評分。也有采取腹壁包埋電極的方法進行檢測，然而這種檢測雖然可以獲得客觀數據，但由于是侵入性、有創性檢測，對于功能性疾病研究來說，我們還是傾向于采取AWR進行評分。小鼠實驗前禁食不禁水12h，使其排出殘余糞便。小鼠用乙醚淺麻醉后，自肛門內置入誘發刺激直腸擴張(CRD)擴張導尿管(6Fr,2毫米外徑)。小鼠蘇醒適應一小時后，通過注射器注氣增加球囊壓力，分別通過注射器給予0.25ml,0.35ml,0.5ml，0.65ml的空氣進入導尿管的氣囊，每個不同壓力分別重復三次，觀察并記錄小鼠的腹壁撤退反射，見表1。表1：小鼠腹部撤退反射評分表3.腸道動力學實驗腸道動力檢測：由于IBS往往表現出腸道動力異常，我們采用碳末法檢測腸道動力情況。所有小鼠檢測前，禁食24小時。小鼠以食用色素灌胃，30分鐘后處死小鼠。打開腹腔，剪開腸系膜，拉直腸管，測量幽門至直腸的長度及食用色素移動距離。食用色素推進百分率(％)＝(食用色素前端與幽門的距離/小腸全長)×100％。統計學分析采用GraphPadPrism6.0統計軟件包進行統計學處理，數據以mean±SEM表示。正常對照組與應激組間采用t檢驗分析，藥物作用及其組間差異采用One-wayANOVA中的Dunnett’st檢驗進行分析。二、結果1.白藜蘆醇對IBS模型小鼠體重的影響與正常對照組相比，IBS模型小鼠體重無顯著性差異(P＞0.05)。給予白藜蘆醇(2.5、5和10mg/kg)后，用藥組小鼠體重與應激組相比，無顯著性差異，見表1和圖1。表1白藜蘆醇對IBS模型小鼠體重的影響ControlStressREV2.5REV5REV10RolDespraminDiazepam33±0.797730.4±1.06731.45±0.679132.45±0.593432.18±0.961232.27±0.675432.82±0.87232.09±0.8029圖1為白藜蘆醇對IBS模型小鼠體重的影響，與正常對照組相比，IBS模型小鼠體重無顯著性差異。IBS小鼠經白藜蘆醇處理后，體重得到改善，但無統計學差異。咯利普蘭、去甲丙咪嗪和地西泮處理的應激小鼠給藥后，其體重相對IBS模型鼠無顯著性差異(P＞0.05)。n＝12,Mean±SEM.2.白藜蘆醇對IBS模型小鼠內臟敏感性的影響結果表明，與正常對照組相比，IBS模型小鼠的腸道敏感性在給予0.5ml和0.65ml空氣時顯著升高(P＜0.0001，P＜0.0001)。而在給予IBS模型小鼠白藜蘆醇(2.5、5和10mg/kg)后，小鼠的內臟敏感性降低。并且在給予0.35m、0.5ml、0.65ml空氣檢測時，白藜蘆醇各組的作用顯著降低IBS模型小鼠的內臟敏感性。表2.白藜蘆醇對IBS模型小鼠內臟敏感性的影響gasvol(ml)ControlStressREV2.5REV5REV100.250.3333±0.12310.6061±0.16090.3889±0.069010.3889±0.09020.3889±0.22030.351.083±0.01311.455±0.13690.9444±0.0803*0.9722±0.06431±0.19250.51.722±0.09912.545±0.1293####1.722±0.135***1.833±0.0962**1.889±0.1319*0.652.389±0.09023.818±0.0525####3.417±0.10953±0.1589***3.056±0.0803**表2.白藜蘆醇對IBS模型小鼠內臟敏感性的影響(續)gasvol(ml)RolDespraminDiazepam0.250.5278±0.17140.1667±0.06490.3333±0.071070.351.139±0.2150.75±0.1015**0.8611±0.0643*0.52.472±0.23011.889±0.1553*1.778±0.06268**0.653.194±0.207*2.667±0.1692****2.75±0.117****圖2為白藜蘆醇對IBS模型小鼠內臟敏感性的影響，A、B、C、D分別表示給予0.25ml、0.35ml、0.5ml、0.65ml空氣時，小鼠的腸道敏感性。n＝12,Mean±SEM.***P＜0.001vsnon-stressedvehiclegroup；#P＜0.05，###P＜0.001vsvehicle-treatedstressedgroup.3.白藜蘆醇對IBS模型小鼠腸道動力學的影響結果表明，與正常對照組相比，IBS模型中食用色食用色素推進百分率明顯減少(##P＜0.01)。在給予白藜蘆醇23天后，5和10mg/kg白藜蘆醇處理的IBS模型小鼠相比IBS模型小鼠，其食用色素推進百分率顯著增加(P＜0.01，P＜0.001)。經咯利普蘭、去甲丙咪嗪、地西泮處理后，其使用色素推進百分率顯著增加(P＜0.001，P＜0.05，P＜0.0001)。表3.白藜蘆醇對IBS模型小鼠食用色素推進百分率的影響ControlStressREV2.5REV5REV10RolDespraminDiazepam62.95±3.68147.31±3.101##52.6±5.97968.04±3.919**72.72±3.963***70.38±1.233***65.46±3.823*71.55±4.29****圖3為白藜蘆醇對IBS模型小鼠食用色素推進百分率的影響，n＝12,Mean±SEM.##P＜0.01vsnon-stressedvehiclegroup；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001vsvehicle-treatedstressedgroup.三、研究小結上述研究表明，在內臟敏感性方面，在腸道給予稍大量空氣后顯著升高，高中低三個劑量的白藜蘆醇均可降低IBS模型小鼠的腸道高敏感性。在腸道動力方面，IBS模型小鼠表現出腸道動力的減弱，中高劑量白藜蘆醇顯著逆轉腸道動力的減弱。說明IBS小鼠存在腸道高敏感性和腸道動力減慢，而白藜蘆醇可以逆轉上述這些變化。本研究為白藜蘆醇作為治療IBS的安全有效的藥物提供了實驗依據。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3