本發(fā)明公開了黃腐酚在防治急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

黃腐酚（Xanthohumol）是一種從工業(yè)釀造啤酒的重要原料之一的啤酒花中提取出的天然的異戊烯黃酮類化合物，具有抗癌、抗病毒、預(yù)防及治療糖尿病、動脈粥樣硬化的作用。但目前尚未見黃腐酚用于治療急性肺損傷的報道。

急性肺損傷（ALI）及其嚴(yán)重形式急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是指由創(chuàng)傷、輸血及感染等多種因素所導(dǎo)致的，以肺間質(zhì)中大量炎癥因子的釋放、炎癥細(xì)胞的聚集及肺水腫為病理生理特征的急性進(jìn)行性呼吸功能不全或者呼吸衰竭癥狀，是重癥監(jiān)護(hù)中的主要死亡原因。急性肺損傷的發(fā)病機(jī)制錯綜復(fù)雜，主要涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及炎癥小體等多種通路，而且各個通路之間是相互聯(lián)系、相互影響形成復(fù)雜的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)及信號通路網(wǎng)絡(luò)。正是由于其發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，盡管多個大型臨床試驗(yàn)已經(jīng)用于探測多種治療策略（包括使用糖皮質(zhì)激素、酮康唑、吸入NO或補(bǔ)充的表面活性劑的潛能等，迄今為止仍然沒有一個可行、有效的治療方法降低其死亡率。與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常規(guī)治療手段相比，中草藥治療優(yōu)勢在于可通過多途徑、多環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)，從而影響疾病發(fā)生的各個因素及全身作用機(jī)制。為了尋求更好的治療方法，已經(jīng)有很多學(xué)者從傳統(tǒng)中藥的多靶點(diǎn)作用的角度出發(fā)，研究中藥單體對內(nèi)毒素引起的急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制，雖然取得了一定的進(jìn)展，但仍處于起步階段，具有巨大的發(fā)展前景。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)黃腐酚通過激活A(yù)MPK/AKT/Nrf2信號通路發(fā)揮抗氧化、抗炎及抗炎癥小體作用，可用于治療急性肺損傷。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了黃腐酚在防治急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征中的用途。

本發(fā)明公開了黃腐酚在制備預(yù)防和治療急性肺損傷藥物中的用途。

本發(fā)明公開了黃腐酚制備治療急性呼吸窘迫綜合征藥物中的用途。

本發(fā)明公開了以黃腐酚為活性成分制備治療急性肺損傷或急性呼吸窘迫綜合征的藥物可以是藥物學(xué)上的任何藥物制劑。

本發(fā)明所述的黃腐酚的分子式為：C₂₁H₂₂O₅；分子量354.4

本發(fā)明所述的黃腐酚能夠?qū)?nèi)毒素急性肺損傷小鼠具有較好的治療作用；

本發(fā)明所述的黃腐酚能激活A(yù)MPK/AKT/Nrf2信號通路；

本發(fā)明所述的黃腐酚能夠增強(qiáng)Nrf2調(diào)控的抗氧化酶和代謝解毒酶的表達(dá)；

本發(fā)明所述的黃腐酚能夠抑制氧化應(yīng)激、炎癥和炎癥小體等相關(guān)蛋白的表達(dá)；

本發(fā)明所述的黃腐酚對急性肺損傷小鼠的治療作用是依賴于AMPK/AKT/Nrf2信號軸的激活作用；

本發(fā)明同時提供了黃腐酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用；

本發(fā)明技術(shù)方案優(yōu)選黃腐酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用；

本發(fā)明以黃腐酚為活性成分制備治療急性肺損傷或急性呼吸窘迫綜合征的藥物可以是藥物學(xué)上的任何藥物制劑；可將黃腐酚和藥學(xué)上可接受的輔料制備成各種劑型。

本發(fā)明優(yōu)選將黃腐酚制備成注射劑、膠囊、片劑、粉針劑等劑型。

本發(fā)明的積極效果在于：提供了黃腐酚新的醫(yī)用用途，可用于防治急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征。使用黃腐酚治療急性肺損傷或急性呼吸窘迫綜合征，具有毒副作用小，臨床癥狀明顯，治愈率高。

附圖說明

圖1為本發(fā)明黃腐酚對急性肺損傷小鼠肺組織病理學(xué)改變的保護(hù)作用；

圖2為本發(fā)明黃腐酚對急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液中（A）中性粒細(xì)胞及(B)炎性細(xì)胞因子的抑制作用；

圖3 為本發(fā)明黃腐酚對急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液中ROS產(chǎn)物的抑制作用；

圖4為本發(fā)明黃腐酚體外對LPS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)的抑制作用；

圖5 為本發(fā)明黃腐酚體外對LPS誘導(dǎo)的(A-C)炎癥因子和(D)ROS的抑制作用；

圖6 為本發(fā)明黃腐酚體外對抗氧化應(yīng)激信號通路及抗氧化酶的激活作用；

圖7為本發(fā)明黃腐酚對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織中Txinp激活和Trx-1消耗， NLRP3炎性小體和的NF-κB炎性信號通路的調(diào)節(jié)作用；

圖8為本發(fā)明黃腐酚對急性肺損傷小鼠肺組織中Nrf2、AMPK和GSK3β的蛋白表達(dá)的激活作用；

圖9為本發(fā)明黃腐酚對野生型及Nrf2 ^-/-急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液中(A-C)炎癥因子和(D)ROS的抑制作用；

圖10為本發(fā)明黃腐酚對野生型及Nrf2 ^-/-急性肺損傷小鼠肺組織中Txinp、NLRP3炎性小體和NF-κB信號通路的抑制作用；

圖11為本發(fā)明黃腐酚在體外對AMPK、GSK3β以及Nrf2信號通路的激活作用；

圖12為本發(fā)明黃腐酚加入AMPK及Nrf2抑制劑后，對Nrf2激活作用。

具體實(shí)施方式

通過黃腐酚體內(nèi)對小鼠急性肺損傷的治療作用試驗(yàn)，體外抗炎、抗氧化活性和對信號通路調(diào)節(jié)作用試驗(yàn)以及體內(nèi)外抗炎和抗氧化的作用機(jī)制試驗(yàn)證實(shí)了黃腐酚可通過激活A(yù)MPK/AKT/Nrf2信號軸，發(fā)揮治療急性肺損傷的作用。

實(shí)驗(yàn)例1

黃腐酚體內(nèi)對急性肺損傷小鼠的治療作用

小鼠急性肺損傷模型建立：60只雄性C57/B小鼠（6～8 周齡，18-20g），隨機(jī)分6組，每組10只：空白組、LPS（0.5 mg/kg）組、黃腐酚給藥組（50 mg/kg），黃腐酚（10、50 mg/kg）+ LPS組、地塞米松（5 mg/kg）+ LPS 組作為陽性對照組。操作方法：首先，生理鹽水稀釋黃腐酚和地塞米松腹腔注射小鼠，空白組和LPS組腹腔注射等體積的生理鹽水。給藥1 h后， LPS鼻腔滴注造模，空白組和黃腐酚給藥組小鼠鼻腔滴注等體積的生理鹽水。在LPS滴注12 h后，處死小鼠，并收集小鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）和肺組織，進(jìn)行相應(yīng)的指標(biāo)檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

黃腐酚對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用參見圖1-3，黃腐酚能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織病理學(xué)改變；抑制體內(nèi)炎癥細(xì)胞侵潤和炎性細(xì)胞因子增多；抑制LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的過多的ROS，對小鼠急性肺損傷發(fā)揮保護(hù)作用。

實(shí)驗(yàn)例2

黃腐酚體外抗炎、抗氧化活性及對信號通路調(diào)節(jié)作用試驗(yàn)

細(xì)胞模型建立：將對數(shù)生長期的RAW 264.7細(xì)胞鋪于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24小時后，加入不同濃度的黃腐酚作用1小時，后給予LPS（1 μg/ml）作用24小時，MTT檢測細(xì)胞毒性；細(xì)胞鋪于24孔培養(yǎng)板中， 處理方法同上，（a）收集上清ELISA檢測細(xì)胞因子，收集細(xì)胞Western Bloting檢測iNOS、COX-2和HMGB1表達(dá)水平；(b)將已配好的DCFH-DA（終濃度：10 μM）加入到每個孔中，置于37 °C溫箱中反應(yīng)30 min后檢測ROS產(chǎn)物。

將細(xì)胞鋪于6孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h后，加入不同濃度黃腐酚處理18 h或黃腐酚（5 μM）處理細(xì)胞不同時間，收集細(xì)胞檢測GCLC、GCLM、HO-1、NQO1和Trx-1的蛋白表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖4-6，黃腐酚體外具有顯著的抗炎抗氧化活性：黃腐酚能顯著抑制LPS誘導(dǎo)炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)；顯著抑制炎癥介質(zhì)和ROS產(chǎn)物；顯著激活抗氧化信號通路及多種抗氧化酶的表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)例3

體內(nèi)外抗炎和抗氧化作用機(jī)制的研究

體內(nèi)小鼠急性肺損傷模型建立：為了進(jìn)一步探究黃腐酚對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷保護(hù)作用機(jī)制，野生型（WT）和Nrf2敲除（Nrf2^-/-）小鼠，構(gòu)建LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷模型（建模方法同上），取小鼠的肺組織和肺泡灌洗液（BALF），進(jìn)行以下相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：黃腐酚對急性肺損傷小鼠保護(hù)作用機(jī)制如圖7-10，黃腐酚顯著抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的Txinp激活和Trx-1消耗，抑制NLRP3炎性小體和的NF-κB炎性信號通路；顯著激活Nrf2、AMPK和GSK3β；顯著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β和ROS的產(chǎn)生，但在Nrf2 ^-/-小鼠中抑制作用減弱；Nrf2 ^-/-小鼠肺組織中，黃腐酚對LPS激活的Txinp、NLRP3炎性小體和NF-κB信號通路的抑制作用，明顯減弱。

體外細(xì)胞模型建立：相關(guān)蛋白檢測方法同上。此外，細(xì)胞鋪于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h后，待細(xì)胞密度長到70%左右，加入黃腐酚（5 μM）處理細(xì)胞（1、3或6小時）后，使用雙熒光素酶試劑盒檢測ARE活性。細(xì)胞鋪于6孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h后，加入CC（3 μM，AMPK的抑制劑）處理細(xì)胞18小時或加入BT（100 nM，Nrf2的抑制劑）處理細(xì)胞1小時后，然后加入黃腐酚（5 μM）處理細(xì)胞3小時，收集細(xì)胞檢測相關(guān)蛋白表達(dá)情況。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

黃腐酚體外抗氧化作用機(jī)制如圖11-12，黃腐酚體外抗氧化依賴于AMPK/GSK3β/Nrf2信號通路軸。黃腐酚在體外能顯著激活A(yù)MPK、GSK3β以及Nrf2信號通路；加入AMPK及Nrf2抑制劑后，黃腐酚對Nrf2激活作用消失。