本發明涉及動物中藥領域，尤其涉及一種芪貞增免顆粒及制備工藝。
背景技術：
傳統方法中制備長效芪貞增免顆粒成本太高，主要在于芪貞增免顆粒本身的特性。
并且，傳統中藥提取工藝一般采用直接加水煎煮醇沉方法，中藥的有效成分被纖維素包裹，煎煮過程中有效成分不易被提取，提取效率低，提取時一般溫度是100℃，有效成分容易被破壞一部分。
傳統煎煮黃芪甲苷含量檢測結果6.41％，提取率偏低。
技術實現要素：
為了解決以上技術問題，本發明提供一種芪貞增免顆粒及制備工藝，有效成分更容易煎煮浸出，主要成分提取有效率比傳統提高48％，提高生物利用率，提高產品質量和臨床使用效果；工藝簡單，成本低，易操作。
解決以上技術問題的一種芪貞增免顆粒，其特征在于：所述顆粒配方由以下重量份的原料組成：黃芪175-185份，淫羊藿85-95份，女貞子85-95份，纖維素酶5000萬iu-15000萬iu，蔗糖2-4份、糊精0.7-1.4份，其余為水。
所述顆粒配方由以下重量份的原料組成：黃芪180份，淫羊藿90份，女貞子90份，纖維素酶適量12000萬iu，蔗糖3份、糊精1份，其余為水。
所述芪貞增免顆粒的水份含量<＝2％。
本發明中的一種芪貞增免顆粒的制備工藝，包括以下步驟：
(1)多功能提取罐中加水，加入纖維素酶攪拌均勻，將中藥組份粗粉后加入水剛好浸漬為準，加熱到35-40℃保溫11-13h，中藥組份軟化后煎煮三次，合并煎液；這里的中藥為黃芪、淫羊藿和女貞子的混合物。其中，煎煮為負壓煎煮1小時。
(2)用負壓過濾，濃縮至中藥組份與水質量濃度比1:1濃度，加入2.5-3.5倍乙醇靜置23-25h，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.3-1.35的浸膏，加蔗糖和糊精，混勻；
(3)低溫干燥，制成中藥組份與成品的質量濃度比為1:1的顆粒，成品即為最終產品。
所述中藥組份粗粉后顆粒大小為10-13目。
所述負壓為-10pa。
所述水為純化水。
所述步驟(1)中第一次往提取罐中加入的水為中藥組份重量的30％。
所述回收乙醇過程中為蒸餾收回乙醇，溫度為75-85℃；優化溫度為80℃.
所述步驟(3)中低溫干燥為溫度55-65℃條件下，蒸汽烘箱烘干11-13h；優化低溫干燥為溫度60℃條件下，蒸汽烘箱烘干12h。
本發明中的中藥組份的有效成分往往包裹在細胞壁里，傳統工藝直接煎煮，細胞壁未破壞，中藥組份有效成分提取收得率較低；采用加入纖維素酶的工藝后，能對中藥材細胞壁有分解作用，有效成分更容易煎煮浸出，主要成分提取有效率比傳統提高48％，這能很大提高產品質量和臨床使用效果。
本發明中的芪貞增免顆粒主要用于豬、雞滋補肝腎、益氣固表。主治豬、雞免疫力低下，每升水雞1g，豬0.5g。
附圖說明
圖1為本發明中的免疫后豬瘟抗體水平圖
具體實施方式
以下用具體實施例來對本發明作進一步的說明：
以下實施例中所用實驗器材：多功能提取罐(提取罐、負壓過濾器、藥液暫貯罐、酒精暫貯罐)、試管、濾紙、中性氧化鋁柱(100-120目)、層析缸、電子天平、容量瓶、紫外光燈、電吹風、硅膠gf254薄層板；
實驗試劑：甲醇、正丁醇、三氯甲烷、硫酸乙醇、乙醇、黃芪甲苷對照品、淫羊藿苷對照品、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、三氯化鋁。
實施例1
一種芪貞增免顆粒，顆粒配方由以下重量份的原料組成：黃芪175份，淫羊藿85份，女貞子85份，纖維素酶5000萬單位，蔗糖2份、糊精0.7份，含水量為2％。
具體制備方法如以下步驟：
(1)多功能提取罐中加為中藥重量的30％的純化水，加入纖維素酶攪拌均勻，再將中藥粗粉為10目后加入多功能提取罐中，又加入純化水以剛好浸漬為準，加熱到35℃保溫12小時，中藥材軟化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用負壓-10pa過濾煎液，濃縮至中藥與水質量濃度比為1:1，加入2.5倍乙醇靜置24小時，過慮，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.3的浸膏，加蔗糖3份、糊精1份、混勻；回收乙醇過程中為蒸餾收回乙醇，溫度為75℃。
(3)低溫干燥，制成中藥與成品的質量濃度比1:1的顆粒，即可。低溫干燥為溫度55℃條件下，蒸汽烘箱烘干13h。
煎煮黃芪甲苷含量9.38％。提取效率提高約46％。
實施例2
配方由以下重量份的原料組成：黃芪185份，淫羊藿95份，女貞子95份，纖維素酶15000萬iu，蔗糖4份、糊精1.4份，含水量為1.5％。
具體制備方法包括以下步驟：
(1)多功能提取罐中加30％的純化水，加入適量纖維素酶攪拌均勻，將中藥粗粉為13目后加入純化水剛好浸漬為準，加熱到40℃保溫11小時，中藥材軟化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用負壓-10pa過濾，濃縮至中藥與水質量濃度1:1濃度，加入3.5倍乙醇靜置23小時，過慮，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.35的浸膏，加蔗糖和糊精、混勻；回收乙醇過程中為蒸餾收回乙醇，溫度為85℃。
(3)低溫干燥，制成中藥與成品的質量濃度比1:1的顆粒，即可。低溫干燥為溫度65℃條件下，蒸汽烘箱烘干11h。
煎煮黃芪甲苷含量9.41％。提取效率提高約47％。
實施例3
配方由以下重量份的原料組成：
黃芪180份，淫羊藿90份，女貞子90份，纖維素酶12000萬iu，蔗糖3份、糊精1份，含水量為1.8％。
具體制備方法包括以下步驟：
(1)多功能提取罐中加30％的純化水，加入適量纖維素酶攪拌均勻，將中藥粗粉為13目后加入純化水剛好浸漬為準，加熱到38℃保溫12小時，中藥材軟化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用負壓-10pa過濾，濃縮至中藥與水質量濃度1:1濃度，加入3倍乙醇靜置24小時，過慮，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.32的浸膏，加蔗糖和糊精、混勻；回收乙醇過程中為蒸餾收回乙醇，溫度為80℃。
(3)低溫干燥，制成中藥與成品的質量濃度比1:1的顆粒，即可。低溫干燥為溫度60℃條件下，蒸汽烘箱烘干12h。
煎煮黃芪甲苷含量9.43％，提取效率提高48％。
實施例4
制備方法如實施例3中的內容，其配方由以下重量份的原料組成：
黃芪178份，淫羊藿88份，女貞子88份，纖維素酶8000萬iu，蔗糖2.5份、糊精0.9份，含水量為2％。
煎煮黃芪甲苷含量9.4％。提取效率提高約47％。
實施例5
制備方法如實施例1中的內容，其配方由以下重量份的原料組成：
黃芪182份，淫羊藿92份，女貞子92份，纖維素酶10000萬iu，蔗糖3.5份、糊精1.2份，含水量為2％。
煎煮黃芪甲苷含量9.41％。提取效率提高約47％。
實施例6
制備方法如實施例1中的內容，其配方由以下重量份的原料組成：
黃芪181份，淫羊藿93份，女貞子89份，纖維素酶13000萬iu，蔗糖3.2份、糊精1.3份，含水量為1.9％。
煎煮黃芪甲苷含量9.36％。提取效率提高約46％。
本發明中的中藥的有效成分往往包裹在植物細胞壁里，傳統工藝直接煎煮，細胞壁未破壞，中藥有效成分提取收得率較低；采用加入纖維素酶的工藝后，能對中藥材細胞壁有分解作用，有效成分更容易煎煮浸出，在負壓煎煮情況下，溫度更低，有效成分不易受到破壞。有效提取效率更高，提高了生物利用度。
試驗一
芪貞增免顆粒對豬瘟抗體水平影響
試驗用藥物與試驗用儀器設備
試驗用中藥：黃芪、淫羊藿、女貞子為飲片(安徽中藥飲片廠生產，批號2011120807)。黃芪、淫羊藿、女貞子采用生物發酵提取工藝提取為i號。
具體步驟如以下：(1)多功能提取罐中加30％的純化水，加入適量纖維素酶攪拌均勻，將中藥粗粉為13目后加入純化水剛好浸漬為準，加熱到38℃保溫12小時，中藥材軟化后煎煮三次，合并煎液；
(2)用負壓-10pa過濾，濃縮至中藥與水質量濃度1:1濃度，加入3倍乙醇靜置24小時，過慮，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.32的浸膏，加蔗糖和糊精、混勻；回收乙醇過程中為蒸餾收回乙醇，溫度為80℃。
水煮工藝提取為ii號。水煮工藝用常見的水煮工藝即可。
試驗用疫苗：豬瘟細胞苗為成都中牧股份有限公司生產(批號：20120103)。
試驗用儀器設備：
冷凍高速離心機(beckman)，medol550型酶標儀(美國bio-rad公司)，rt-3000全自動洗板機(雷杜公司)
試驗動物：
四川犍為榮興豬場三元雜交(d×l×y)同品種、同日齡斷奶仔豬50頭，隨機平均分成五組，每組10頭。
試驗用日糧：四川巨星飼料有限公司提供，飼料營養水平詳見表1。
表1營養水平
試驗試劑
冷凍高速離心機(beckman)，medol550型酶標儀(美國bio-rad公司)，rt-3000全自動洗板機(雷杜公司)
試驗設計
試驗采用單因素完全隨機試驗設計，分為5個組，將分好組的試驗用豬分別用豬瘟細胞疫苗按5頭份/頭進行肌肉注射免疫，同時按以下試驗：i組在飼料中添加0.1％i號；ii組在飼料中添加0.2％i號；iii組在飼料中添加0.3％i號，iv組在飼料中直接添加0.2％ii號，v組為對照組ii號。試驗共30天。具體如下表2：
表2試驗設計
試驗時間及飼養環境
試驗時間從2014年3月-2014年4月在四川犍為榮興豬場。試驗在同一條件下進行，全部飼養在同一棟同一朝向豬舍內。環境溫度、環境濕度等按常規飼養管理方式進行，試驗前對豬舍進行統一清洗、消毒，嚴格按照“全進全出”的原則。自由采食和飲水，專人飼養管理。
樣品的制備
試驗后的7天、14天、21天、28天每組隨機抽取5頭豬從前腔靜脈采血1-2ml,置37℃恒溫箱中1-5h后,在4℃冰箱中放置2h，經1500r/min離心5min，取出血清置-20℃保存備用。檢測指標
豬瘟抗體檢測
稀釋
待檢血清將100μl稀釋液(1倍pbs)加入反應孔中，然后向相應的孔中加入待檢測血清、標準陽性血清和標準陰性血清各2μl，標準陽性血清和陰性血清各加2孔，37℃濕盒作用2h。
洗滌
將孔中的液體用力甩凈，每孔加入300μl洗液(pbst),室溫震蕩洗滌3min,如此洗滌3次,最后一次拍打干凈。
加入豬igg酶標抗體
將試劑盒配備的辣根過氧化氫酶標記的兔抗豬igg用稀釋液(1倍pbs)以1:5000稀釋,充分混合均勻。用多道移液器加入到各反應孔中,100μl/孔。37℃濕盒作用45min。
洗滌
重復操作上一次洗滌步驟，洗滌3次,最后一次拍干。
加入tmb底物和0.75％過氧化氫尿素
臨用前將底物作用液a:b以1:50稀釋,混勻后加入0.75％過氧化氫尿素(按1.8μl/mlab混合液),用多道移液器加入到各反應孔中,100μl/孔。避光作用5min。
4.3.6加入終止液
用多道移液器將終止液(2mol/lh2so4)加入到各反應孔中,50μl/孔。注意要按加酶標二抗的順序加終止液。應用酶標儀，在490nm波長處測定樣本的od值。
統計分析
本試驗數據采用spss13.0統計軟件進行單因素方差分析，試驗結果用平均數±標準誤差表示，采用duncan多重比較進行顯著性分析。
試驗結果如表3和圖1：
表3免疫后不同時期csf抗體值
注：表中數據為每組5個樣品的平均值±標準差，同一列是同一時間不同組別間抗體水平的比較，肩標字母相同者表示差異不顯著(p＞0.05)，字母不相同者表示差異顯著(p＜0.05)。
結果分析
從圖1可知，在免疫后7d，豬瘟抗體水平開始逐漸上升，在免疫后21d達到最高水平，然后緩慢下降，且添加0.1％i號、添加0.2％i號、添加0.3％i號以及添加0.2％ii號組豬瘟抗體水平均顯著高于對照組(p＜0.05)；添加0.1％i號組、添加0.2％i號組、添加0.3％i號組豬瘟抗體水平顯著高于添加0.2％水ii號組(p＜0.05)；添加0.1％、0.2％、0.3％i號組抗體水平高于添加0.2％ii號組，但差異不顯著(p＞0.05)。
不同劑量的芪貞增免顆粒均可顯著提高豬瘟抗體水平，但添加0.1％i號組效果好于添加0.2％ii號組。
本發明中的生物發酵提取芪貞增免顆粒和水煮法提取芪貞增免顆粒均可顯著增強豬群免疫功能，提高豬群免疫水平。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。