本發明屬于生物醫學領域，特別是涉及一種用于抗衰老的干細胞嫩膚液的制備方法。
背景技術：
衰老是指隨年齡增長機體發生的功能性和器質性衰退的漸進過程。衰老一方面受機體的基因程序調控，另一方面由內外“磨損”和“消耗”所引起，二者同時作用于細胞和分子水平。皮膚位于體表，是最早顯現機體衰老的組織，易于觀察，已成為衰老的重要靶器官。
由于皮膚是直接與外界環境接觸并長期受到不同外界因素的作用，皮膚與身體的其他器官不同，它不僅隨著自然的老化其生物功能發生一系列的變化，而且，老年皮膚生物功能的改變與其他器官不同之處在于，其變化主要體現在生物和物理兩方面特性的變化，與青年狀態的皮膚相比，老年性皮膚的共振傳導速度加快、ph值升高、彈性下降、皮脂分泌明顯減少、角質層含水量減少以及表皮通透屏障功能降低。
間充質干細胞是來源于中胚層的一種多能干細胞，最初在骨髓中發現，因其具有多向分化潛能、造血支持和免疫調控等特點而日益受到人們的關注。間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下可分化為多種組織細胞，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種用于抗衰老的干細胞嫩膚液的制備方法，臍帶間充質干細胞相具有無腫瘤污染、增殖能力強、采集方便、免疫活性低、無需配型等許多優點，所制備的細胞制劑具有延緩衰老的功效。
本發明是通過以下技術方案實現的：
一種用于抗衰老的干細胞嫩膚液制備方法，該方法包括如下步驟：
s1、將獲取的臍帶組織清洗后剪碎成1mm3臍帶組織塊；
s2、用ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液和胰蛋白酶對臍帶組織塊進行消化處理，離心后加入dmem培養液重懸；
s3、將間充質干細胞培養液接種于培養皿中進行原代培養，當細胞密度達到80％后進行傳代培養；
s4、將傳代培養后的臍帶間充質干細胞與二甲基氨基乙醇及黃芪混合后制備細胞制劑。
進一步地，s1中所述臍帶組織的清洗步驟為：將獲取的臍帶組織塊用含有雙抗的磷酸緩沖溶液清洗2-3次后，剪碎成為1-1.5mm3的臍帶組織塊，所述含有雙抗的磷酸緩沖溶液中青霉素濃度為100u/ml，鏈霉素濃度為100u/ml。
進一步地，s2中所述消化處理的步驟為：將s1中得到的臍帶組織塊加入ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液中，置于37℃培養箱中消化60-80min，取出臍帶組織塊用磷酸緩沖溶液清洗2-3次后加入1.25g/l胰蛋白酶溶液中，置于37℃培養箱中消化20min，取出后加入含有10％胎牛血清的dmem培養基終止消化。
進一步地，所述ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液為2.4mg/mlⅰ型膠原酶和1mg/ml透明質酸酶以體積比1：1混合。
進一步地，s2中離心后重懸的步驟為：取消化后的臍帶組織塊用200目細胞濾網過濾后，收集濾液于1000-1500r/min離心10min后棄去上清液，收集沉淀加入dmem培養液制成間充質干細胞懸液。
進一步地，所述dmem培養液中含有體積分數10％的胎牛血清，100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素。
進一步地，s3中所述原代培養及傳代培養的步驟為：將s2中得到的間充質干細胞懸液接種于無菌培養皿中，置于37℃，5％co2培養箱中培養，培養24h后第一次換液并去除貼壁細胞，之后每隔2d換液一次，當細胞密度達到80％后以1：2比例進行傳代培養。
進一步地，s4中所述制備細胞制劑的步驟為：將s3中傳代培養的臍帶間充質干細胞與生理鹽水混合后加入二甲基氨基乙醇和黃芪制備細胞制劑，其中，臍帶間充質干細胞的濃度為1x105個/ml，二甲基氨基乙醇濃度為0.2％-0.3％，黃芪濃度0.15％-0.2％。
本發明具有以下有益效果：
本發明通過將臍帶間充質干細胞體外分離培養，并將培養的干細胞與二甲基氨基乙醇和黃芪混合后制備細胞制劑，臍帶間充質干細胞相具有無腫瘤污染、增殖能力強、采集方便、免疫活性低、無需配型等許多優點，并且臍帶作為醫療廢棄物，對供者無不利影響，不受倫理問題的限制，所制備的細胞制劑具有延緩衰老的功效。
當然，實施本發明的任一產品并不一定需要同時達到以上所述的所有優點。
具體實施方式
本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發明保護的范圍。
本發明為一種用于抗衰老的干細胞嫩膚液的制備方法，該方法具體步驟如下：
實施例1
s1、將獲取的臍帶組織清洗后剪碎成1mm3臍帶組織塊；
具體的，將獲取的臍帶組織塊用含有雙抗的磷酸緩沖溶液清洗2次后，剪碎成為1mm3的臍帶組織塊，所述含有雙抗的磷酸緩沖溶液中青霉素濃度為100u/ml，鏈霉素濃度為100u/ml；
s2、用ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液和胰蛋白酶對臍帶組織塊進行消化處理，離心后加入dmem培養液重懸；
具體的，將s1中得到的臍帶組織塊加入ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液中，置于37℃培養箱中消化60min，取出臍帶組織塊用磷酸緩沖溶液清洗2次后加入1.25g/l胰蛋白酶溶液中，置于37℃培養箱中消化20min，取出后加入含有10％胎牛血清的dmem培養基終止消化；
其中，所述ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液為2.4mg/mlⅰ型膠原酶和1mg/ml透明質酸酶以體積比1：1混合；
取消化后的臍帶組織塊用200目細胞濾網過濾后，收集濾液于1000r/min離心10min后棄去上清液，收集沉淀加入dmem培養液制成間充質干細胞懸液；
具體的，所述dmem培養液中含有體積分數10％的胎牛血清，100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素；
s3、將間充質干細胞培養液接種于培養皿中進行原代培養，當細胞密度達到80％后進行傳代培養；
具體的，將s2中得到的間充質干細胞懸液接種于無菌培養皿中，置于37℃，5％co2培養箱中培養，培養24h后第一次換液并去除貼壁細胞，之后每隔2d換液一次，當細胞密度達到80％后以1：2比例進行傳代培養；
s4、將傳代培養后的臍帶間充質干細胞與二甲基氨基乙醇及黃芪混合后制備細胞制劑；
具體的，將s3中傳代培養的臍帶間充質干細胞與生理鹽水混合后加入二甲基氨基乙醇和黃芪制備細胞制劑，其中，臍帶間充質干細胞的濃度為1x105個/ml，二甲基氨基乙醇濃度為0.2％，黃芪濃度0.15％。
實施例2
s1、將獲取的臍帶組織清洗后剪碎成1mm3臍帶組織塊；
具體的，將獲取的臍帶組織塊用含有雙抗的磷酸緩沖溶液清洗3次后，剪碎成為1.5mm3的臍帶組織塊，所述含有雙抗的磷酸緩沖溶液中青霉素濃度為100u/ml，鏈霉素濃度為100u/ml；
s2、用ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液和胰蛋白酶對臍帶組織塊進行消化處理，離心后加入dmem培養液重懸；
具體的，將s1中得到的臍帶組織塊加入ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液中，置于37℃培養箱中消化80min，取出臍帶組織塊用磷酸緩沖溶液清洗3次后加入1.25g/l胰蛋白酶溶液中，置于37℃培養箱中消化20min，取出后加入含有10％胎牛血清的dmem培養基終止消化；
其中，所述ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液為2.4mg/mlⅰ型膠原酶和1mg/ml透明質酸酶以體積比1：1混合；
取消化后的臍帶組織塊用200目細胞濾網過濾后，收集濾液于1500r/min離心10min后棄去上清液，收集沉淀加入dmem培養液制成間充質干細胞懸液；
具體的，所述dmem培養液中含有體積分數10％的胎牛血清，100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素；
s3、將間充質干細胞培養液接種于培養皿中進行原代培養，當細胞密度達到80％后進行傳代培養；
具體的，將s2中得到的間充質干細胞懸液接種于無菌培養皿中，置于37℃，5％co2培養箱中培養，培養24h后第一次換液并去除貼壁細胞，之后每隔2d換液一次，當細胞密度達到80％后以1：2比例進行傳代培養；
s4、將傳代培養后的臍帶間充質干細胞與二甲基氨基乙醇及黃芪混合后制備細胞制劑；
具體的，將s3中傳代培養的臍帶間充質干細胞與生理鹽水混合后加入二甲基氨基乙醇和黃芪制備細胞制劑，其中，臍帶間充質干細胞的濃度為1x105個/ml，二甲基氨基乙醇濃度為0.3％，黃芪濃度0.2％。
實施例3
s1、將獲取的臍帶組織清洗后剪碎成1mm3臍帶組織塊；
具體的，將獲取的臍帶組織塊用含有雙抗的磷酸緩沖溶液清洗2-3次后，剪碎成為1.25mm3的臍帶組織塊，所述含有雙抗的磷酸緩沖溶液中青霉素濃度為100u/ml，鏈霉素濃度為100u/ml；
s2、用ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液和胰蛋白酶對臍帶組織塊進行消化處理，離心后加入dmem培養液重懸；
具體的，將s1中得到的臍帶組織塊加入ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液中，置于37℃培養箱中消化70min，取出臍帶組織塊用磷酸緩沖溶液清洗2次后加入1.25g/l胰蛋白酶溶液中，置于37℃培養箱中消化20min，取出后加入含有10％胎牛血清的dmem培養基終止消化；
其中，所述ⅰ型膠原酶/透明質酸酶混合溶液為2.4mg/mlⅰ型膠原酶和1mg/ml透明質酸酶以體積比1：1混合；
取消化后的臍帶組織塊用200目細胞濾網過濾后，收集濾液于1200r/min離心10min后棄去上清液，收集沉淀加入dmem培養液制成間充質干細胞懸液；
具體的，所述dmem培養液中含有體積分數10％的胎牛血清，100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素；
s3、將間充質干細胞培養液接種于培養皿中進行原代培養，當細胞密度達到80％后進行傳代培養；
具體的，將s2中得到的間充質干細胞懸液接種于無菌培養皿中，置于37℃，5％co2培養箱中培養，培養24h后第一次換液并去除貼壁細胞，之后每隔2d換液一次，當細胞密度達到80％后以1：2比例進行傳代培養；
s4、將傳代培養后的臍帶間充質干細胞與二甲基氨基乙醇及黃芪混合后制備細胞制劑；
具體的，將s3中傳代培養的臍帶間充質干細胞與生理鹽水混合后加入二甲基氨基乙醇和黃芪制備細胞制劑，其中，臍帶間充質干細胞的濃度為1x105個/ml，二甲基氨基乙醇濃度為0.25％，黃芪濃度0.18％。
以上內容僅僅是對本發明所作的舉例和說明，所屬本技術領域的技術人員對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，只要不偏離發明或者超越本權利要求書所定義的范圍，均應屬于本發明的保護范圍。