本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物的制備方法。

背景技術(shù)：

光動力治療又稱作光化學(xué)治療 (Photodynamic therapy, PDT) ，它是指利用特定波長的光照射事先局部或全身注入機(jī)體的藥物(光敏劑, PS)，光敏劑隨之活化并與氧分子作用產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性的活性氧 (ROS) ，經(jīng)過直接與間接作用對腫瘤組織產(chǎn)生不可逆的損傷。光動力學(xué)治療不同于傳統(tǒng)的治療腫瘤手段，它對靶組織及損傷程度都具有可選擇性，可減少對正常組織的損傷，在人體內(nèi)能較快代謝，避免對身體其它部位產(chǎn)生毒性，化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)。但是傳統(tǒng)的光動力療法仍存在一些不足，如光敏劑對腫瘤組織的靶向性不足，同時(shí)由于光敏劑吸收波長較短，其組織穿透能力有限，因此，對體積較大的腫瘤或深層腫瘤的治療效果不佳。現(xiàn)如今，納米技術(shù)的快速發(fā)展為解決光動力治療中光敏劑的腫瘤靶向性及治療深度等問題提供了新途徑。

分子靶向治療是指在細(xì)胞分子水平上通過已確定的致癌位點(diǎn)(即與腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織相關(guān)的特異性分子靶點(diǎn)，該靶點(diǎn)可能是腫瘤細(xì)胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)分子、某一核酸片段或者某一基因產(chǎn)物)，設(shè)計(jì)相應(yīng)配體或抗體與特異性位點(diǎn)相結(jié)合，從而有效的抑制基因癌變或者阻斷細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路以及腫瘤血管形成，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡而不會傷害正常細(xì)胞的一種全新的治療模式。與傳統(tǒng)的化療和放療治療方式相比，分子靶向治療有很高的選擇性，在對腫瘤細(xì)胞高效殺傷的同時(shí)還能保證較低損傷正常組織，達(dá)到理想的治療結(jié)果。吉非替尼（Gefitinib）在2003年被美國 FDA 批準(zhǔn)用于治療非小細(xì)胞肺癌，是首個獲得批準(zhǔn)上市的用于治療非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC) 的口服型小分子靶向藥物。吉非替尼是一種選擇性表皮生長因子受體 (EGFR) 酪氨酸激酶抑制劑，酪氨酸激酶通常表達(dá)于上皮來源的實(shí)體腫瘤之中，可通過對EGFR酪氨酸激酶活性的抑制來間接抑制腫瘤細(xì)胞的生長和血管生成，并增加腫瘤細(xì)胞的凋亡。臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，吉非替尼對結(jié)腸癌、前列腺癌、乳腺癌及頭頸部腫瘤等治療均證實(shí)有效。

稀土上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料 (upconversion luminescence nanoparticles,UCNPs) 是一種能被近紅外光 (NIR) 激發(fā)而發(fā)出可見光的發(fā)光材料，即上轉(zhuǎn)換納米材料可通過多光子機(jī)制把長波轉(zhuǎn)換成短波，因此被稱之為“上轉(zhuǎn)換”。由于上轉(zhuǎn)換材料的發(fā)光過程違背了斯托克斯 (Stokes) 定律，因此又被稱為反斯托克斯 (anti-Stokes) 定律發(fā)光材料。上轉(zhuǎn)換納米材料具有獨(dú)特的發(fā)光性質(zhì)，其光學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，對細(xì)胞的毒性低，激發(fā)波長在近紅外區(qū)(通常為980 nm，尤其重要的是這一波長的光正好位于生物組織的光透過窗口800-1200 nm之中)，對生物組織的穿透性能力強(qiáng)，且不會對組織、蛋白質(zhì)等造成光傷害，同時(shí)能有效的降低檢測的背景自熒光，提高熒光信噪比，因此在生物標(biāo)記、多模成像、藥物運(yùn)輸和光動力治療等方面有著廣闊的應(yīng)用前景。

在UCNP/二氧化硅/光敏劑納米系統(tǒng)引入分子靶點(diǎn)藥，通過制備分子靶向抗癌納米平臺系統(tǒng)，使腫瘤藥物治療的切入點(diǎn)由目前研究的細(xì)胞水平提高至分子水平。合成的UCNP/二氧化硅/光敏劑/吉非替尼化合物中，UCNP和光敏劑的FRET作用可解決腫瘤治療深度問題，光敏劑和吉非替尼分子靶點(diǎn)藥的協(xié)同作用可解決靶向性不強(qiáng)和藥物在腫瘤細(xì)胞的滯留時(shí)間短的問題。這些優(yōu)點(diǎn)為該設(shè)計(jì)體系成為新型分子靶向光動力載藥平臺提供了極大可能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物的制備及其應(yīng)用，解決了光動力治療中藥物靶向性不足及治療深度淺的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：

（1）上轉(zhuǎn)換粒子NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺（UCNPs）的制備：稱取0.4 g NaOH于100 mL 反應(yīng)釜中，再分別加入20 mL去離子水，30 mL乙醇，7.5 mL的油酸和4 mL的正己烷，攪拌混勻?yàn)槿芤孩瘢粚?.8 mmol稀土硝酸鹽溶解在5 mL 去離子水中，然后20滴/min滴加到溶液Ⅰ中得到溶液Ⅱ；再稱取3.2 mmol NaF溶解在5 mL去離子水中，加入到溶液Ⅱ，混合后置于180 ℃下反應(yīng)6 h；反應(yīng)后自然冷卻至室溫，用30 mL環(huán)己烷分三次萃取，收集環(huán)己烷層，加入過量乙醇離心；再用去離子水和乙醇交替洗3次，得到NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺（UCNPs）粒子，將其分散在環(huán)己烷中待用；

（2）UCNP@SiO₂-NH₂的制備：量取步驟（1）中UCNPs的環(huán)己烷溶液1.5 mL，加入8.5 mL的環(huán)己烷和0.15 mL聚氧代乙烯(5)壬基苯基攪拌10 min；再加入100 μL質(zhì)量分?jǐn)?shù)28%的NH₃·H₂O水溶液和0.5 mL的聚氧代乙烯(5)壬基苯基，超聲20 min；再向其中緩慢滴入160 μL正硅酸四乙酯，室溫下攪拌6 h；加入30 μL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，繼續(xù)攪拌48 h；用乙醇離心洗滌3次，將產(chǎn)物分散在去離子水中-60℃冷凍干燥，得到納米粒子UCNP@SiO₂-NH₂，將其分散在10mL DMF溶液中，待用；

（3）ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-COOH的制備：稱取3 mg β-ZnPc-COOH和10 mg HOOC-PEG-COOH置于25 mL反應(yīng)瓶中，依次加入5 mL N,N-二甲基甲酰胺，5 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和3 mg 1-羥基苯并三唑，在冰浴攪拌下加入50 μL三乙胺，攪拌30 min后撤冰浴，室溫下加入步驟（2）含有UCNP@SiO₂-NH₂的DMF溶液繼續(xù)攪拌12 h，反應(yīng)結(jié)束后，離心收集，用DMF和DMSO各洗3次，最后將產(chǎn)物ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-COOH分散在12mLDMSO中，待用；

（4）ZnPc-UCNP@ SiO₂-PEG -G的制備：稱取7 mgN,N-二環(huán)己基碳二亞胺和5 mg 4-二甲氨基吡啶分別溶在0.5 mL DMSO中，然后依次加入到步驟（3）產(chǎn)物溶液中攪拌1 h為混合液Ⅰ；將化合物G溶解在0.5 mL DMSO中，加入混合液Ⅰ中，室溫下反應(yīng)48 h；反應(yīng)結(jié)束后，離心收集，產(chǎn)物用DMSO洗3次，-60℃凍干得到ZnPc-UCNP@ SiO₂-PEG -G。

所述稀土硝酸鹽為Y(NO₃)·6H₂O和 Yb(NO₃) ·5H₂O和Er(NO₃) ·5H₂O以質(zhì)量比68:30:2混合。

步驟（1）中UCNPs與環(huán)己烷以料液比20：1混合，料液比單位為mg/mL。

步驟（4）中化合物G的加入量為反應(yīng)產(chǎn)物總質(zhì)量的5%~20%。

所述的化合物G為8-羥基-3,6烷氧雜辛基-吉非替尼。

本發(fā)明的有益效果在于：

1）本發(fā)明合成ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物，解決光動力治療中藥物靶向性不足，治療深度淺的問題；

2）合成的ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物粒徑均勻，熒光共振能量轉(zhuǎn)移效率高，在980nm激發(fā)下單線態(tài)氧產(chǎn)率高，解決了治療深度淺的問題；

3）合成的ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物表現(xiàn)出優(yōu)越的光動力活性，在體外光動力治療過程對細(xì)胞的殺傷能力具有一定的劑量依賴性，隨著濃度的增加，殺傷能力增強(qiáng)，而在無光照條件下對細(xì)胞未表現(xiàn)出明顯的殺傷作用；

4) 合成的ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物對癌細(xì)胞具有明顯的靶向性，而在正常細(xì)胞中分布較少，降低了癌癥治療過程中的副作用。

附圖說明

圖1是 (a)上轉(zhuǎn)換納米粒子NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺ (UCNPs)與 (b) 包裹二氧化硅后UCNP@SiO₂納米粒子的X射線衍射圖；

圖2是 (a)上轉(zhuǎn)換納米粒子NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺ (UCNPs)與 (b) UCNP@SiO₂的TEM圖；

圖3是UCNPs上轉(zhuǎn)換納米粒子UCNP@SiO₂和UCNP@SiO₂-NH₂的紅外光譜圖；

圖4是 NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺ (UCNPs)上轉(zhuǎn)換發(fā)光圖；

圖5中Ⅰ和Ⅱ?yàn)閁CNPs對應(yīng)的熒光發(fā)射光，Ⅲ和Ⅳ為ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG對應(yīng)的熒光發(fā)射光圖；

圖6a為DPBF, UCNPs, UCNP@SiO₂, β-ZnPc-COOH, ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG, ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G的Ф_?比較；圖 6b為加組織前后ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G在980nm和670nm光照射下的Ф_?比較圖；

圖7是HepG2細(xì)胞 (圓形) 和HELF細(xì)胞 (條形) 對ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G競爭攝取24 h激光共聚焦成像圖；

圖8是目標(biāo)物ZnPc-UCNP@SiO2-PEG-G和對照物ZnPc-UCNP@SiO2-PEG對HepG2細(xì)胞孵育24 h后的熒光統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)柱狀圖；

圖9a和圖9b是ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G在癌細(xì)胞HepG2中的定位圖；

圖10是無光照下不同濃度ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G和ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG孵育下HepG2細(xì)胞存活率圖；

圖11是有光照下不同濃度ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G和ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG孵育下HepG2細(xì)胞存活率圖。

具體實(shí)施方式

下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此:

實(shí)施例1

一種ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物的制備方法，具體步驟為：

1) 稱取0.4 g NaOH于100 mL 反應(yīng)釜中，再分別量取20 mL去離子水，30 mL乙醇，7.5 mL的油酸和4 mL的正己烷，攪拌讓其形成均勻的溶液；稱取0.8 mmol稀土硝酸鹽（0.2390 g Y(NO₃)·6H₂O，0.1065 g Yb(NO₃) ·5H₂O，0.0069 g Er(NO₃) ·5H₂O）溶解在5 mL 去離子水中以20滴/min緩慢滴加到上述反應(yīng)液中，再稱取0.1314 g (3.2 mmol) NaF溶解在5 mL 去離子水中加入到反應(yīng)液中，取出攪拌磁子封裝置于烘箱中180 ℃下反應(yīng)6 h；反應(yīng)結(jié)束后自然冷卻至室溫，用30 mL 環(huán)己烷分三次萃取，收集環(huán)己烷層，加入過量乙醇離心收集；再用去離子水和乙醇交替洗3次，最后分散在10 mL 環(huán)己烷中待用；

2) 量取20 mg/mL的UCNPs的環(huán)己烷溶液1.5 mL，再加入8.5 mL的環(huán)己烷，加入0.15 mL聚氧代乙烯(5)壬基苯基(IGEPAL CO-520) 攪拌10 min，再加入100 μL NH₃·H₂O (28%)和0.5 mL的IGEPAL CO-520，超聲20 min，緩慢滴加160 μL正硅酸四乙酯 (TEOS)，室溫下攪拌6 h后加入30 μL 3-氨丙基三乙氧基硅烷 (APTES)，繼續(xù)攪拌48 h；加入乙醇離心3次，將產(chǎn)物分散在去離子水中于-60℃凍干，得到在SiO₂表面修飾氨基的納米粒子UCNP@SiO₂-NH₂，將其分散在10mL DMF溶液中，待用；

3) 稱取3 mg β-ZnPc-COOH和10 mg HOOC-PEG-COOH置于25 mL反應(yīng)瓶中，依次加入5 mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，5 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI) 和3 mg 1-羥基苯并三唑 (HOBt) ，在冰浴下攪拌再加入50 μL三乙胺，攪拌30 min后撤冰浴，室溫下加入上一步的反應(yīng)產(chǎn)物UCNP@SiO₂-NH₂的DMF溶液繼續(xù)攪拌12 h，反應(yīng)結(jié)束后，離心收集，用DMF和DMSO各洗3次，最后將產(chǎn)物分散在DMSO中得到ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-COOH，待用；

4) 將上一步的產(chǎn)物ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-COOH溶在12 mL DMSO中，稱取7 mg將N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和5 mg 4-二甲氨基吡啶(DMAP)分別溶在0.5 mL DMSO中，將該溶液加入到產(chǎn)物的DMSO溶液中，攪拌1 h后，再稱取8 mg 化合物G溶解在0.5 mL DMSO中加入反應(yīng)液，室溫下反應(yīng)48 h。反應(yīng)結(jié)束后，離心收集，產(chǎn)物用DMSO洗3次，-60℃凍干得到ZnPc-UCNP@ SiO₂-PEG -G。

步驟（1）中UCNPs與環(huán)己烷以料液比20：1混合，料液比單位為mg/mL。

步驟（4）中化合物G的加入量為反應(yīng)產(chǎn)物總質(zhì)量的5%~20%。

所述的化合物G為8-羥基-3,6烷氧雜辛基-吉非替尼。

應(yīng)用實(shí)施例1

通過ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG -G納米復(fù)合物單線態(tài)氧產(chǎn)率的研究，研究其光的組織穿透能力，為研究治療深度提供參考，具有較重要的意義。

采用化學(xué)探針1,3二苯基異苯并呋喃(DPBF) 對ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米體系在980 nm激光照射下單線態(tài)氧的產(chǎn)生能力進(jìn)行檢測。具體實(shí)驗(yàn)操作方法為：稱取少量的DPBF用DMSO充分溶解，然后調(diào)整其在420 nm處的吸光度值為1，同時(shí)調(diào)整ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G的DMSO溶液在670 nm處的吸光度值也為1。取1 mL的DMSO溶劑和1 mL的ZnPc-UCNP@ SiO₂- PEG-G溶液于比色皿中充分混合，作為參比已消除系統(tǒng)誤差，再取DPBF溶液和ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G溶液各1 mL混合均勻，測定在420nm處的吸光度值，此時(shí)為0s時(shí)DPBF的吸光度值，然后在用功率密度為1W/cm²的980 nm的激光器照射比色皿中的混合溶液，每照射30 s測一下吸光度，測10個時(shí)間點(diǎn)。DPBF在420nm處具有很強(qiáng)的吸收，當(dāng)與¹O₂發(fā)生反應(yīng)后生成DBB，而DBB在420nm處沒有吸收表現(xiàn)為在420 nm處的吸光度值降低。因此，通過測量不同光照時(shí)間下DPBF的熒光強(qiáng)度可以比較不同條件下產(chǎn)生的總¹O₂的量。

由圖6a和圖6b實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，當(dāng)加了1 cm的組織覆蓋后，用980 nm光照射的單線態(tài)氧產(chǎn)率僅下降了40.68 %，而用670 nm光照射的單線態(tài)氧產(chǎn)率下降了88.9 %。因此，與用670 nm的光直接激發(fā)β-ZnPc-COOH相比，用980 nm的光間接激發(fā)β-ZnPc-COOH具有穿透厚組織的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)一步凸顯了ZnPc-UCNP-PEG-G在實(shí)體或深層腫瘤治療的適用性。

應(yīng)用實(shí)施例2

藥物能否有效的殺死腫瘤細(xì)胞或者對腫瘤細(xì)胞造成一定的損傷跟腫瘤細(xì)胞對藥物的攝取量有很大的關(guān)系，因此，研究細(xì)胞對藥物的攝取量很有必要。

選取處于對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞，經(jīng)過PBS洗滌后加胰酶消化處理，再加入培養(yǎng)基將細(xì)胞吹打均勻，離心后加入新的培養(yǎng)基將細(xì)胞再次吹打均勻，對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至30萬cell/mL，在96孔板中每孔加入以100 μL，每個藥物設(shè)6個復(fù)孔，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜生長。貼壁后棄去舊的培養(yǎng)基，每孔加入100 μL藥物-培養(yǎng)基溶液(藥物母液為64 mg/ mL，溶劑是DMSO；為了保證培養(yǎng)基中DMSO量≤ 1%故最終加藥濃度為640 μg/ mL)，置于培養(yǎng)箱中孵育24 h。棄去上層培養(yǎng)基，用PBS洗滌三遍，以徹底除去未攝取的藥物，然后向每孔中加入120 μL濃度為1%的SDS裂解液，將其置于37 ^oC搖床搖晃裂解30 min，以相應(yīng)藥物的激發(fā)波長的光激發(fā)，用多功能酶標(biāo)儀檢測其在最大發(fā)射波長處的熒光強(qiáng)度。

同時(shí)，做相應(yīng)藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(8個濃度，2個復(fù)孔)：將藥物均用SDS為溶劑從325 μg/ mL依次兩倍稀釋得到八個不同濃度，以相同條件測定各自的熒光強(qiáng)度，用Origin 8.5軟件處理，做熒光強(qiáng)度-濃度直線圖，即得各自藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由實(shí)驗(yàn)組各孔的熒光強(qiáng)度經(jīng)藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到各孔細(xì)胞攝取藥物濃度。

利用BCA蛋白定量檢測法，計(jì)算出各孔的蛋白含量(直接計(jì)算結(jié)果需擴(kuò)大6倍，即為各實(shí)驗(yàn)組的值)。再以各孔的藥物濃度值除以各孔蛋白總量，其比值則為單位蛋白中所含的光敏劑的量。用Graph Pad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對個比值做柱狀圖(圖8)，結(jié)果以Mean±SEM表示，相同條件下重復(fù)三次平行實(shí)驗(yàn)。

連接了聚乙二醇修飾后的靶向分子吉非替尼 (G) 得到的ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G在HepG2細(xì)胞中的攝取量遠(yuǎn)高于沒有連接吉非替尼的ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG，說明ZnPc-UCNP-PEG-G對肝癌細(xì)胞HepG2具有很好的靶向性。

應(yīng)用實(shí)施例3

細(xì)胞毒性測試主要是研究光動力治療中光的安全性，以及藥物對細(xì)胞的毒性作用。

取生長狀態(tài)良好的處在對數(shù)期的HepG2細(xì)胞，經(jīng)過洗滌、消化處理后，對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，將計(jì)數(shù)好的細(xì)胞稀釋至濃度為10萬cell/mL，然后于96孔板中每孔接種100 μL，將細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。將ZnPc-UCNP-PEG-G和ZnPc-UCNP -PEG用DMSO溶液配制7個濃度梯度的母液，再用培養(yǎng)基將各個濃度稀釋100倍。經(jīng)PBS洗滌3遍后，取100 μL稀釋后的藥物溶液加入至96孔板中的每個孔中，實(shí)驗(yàn)組設(shè)6個復(fù)孔。設(shè)置空白對照組和細(xì)胞對照組和實(shí)驗(yàn)組，加藥完畢后置于放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24 h。

暗毒實(shí)驗(yàn)：將之前加藥處理過的細(xì)胞孵育24 h后，棄去之前舊的培養(yǎng)基，用PBS洗3遍，再向每孔中加入100 μL培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中孵育24 h。

光毒實(shí)驗(yàn)：孵育24 h后，棄去之前舊的培養(yǎng)基，用PBS洗3遍，再向每孔中加入100 μL新培養(yǎng)基，用980 nm LED燈照射20 min (功率密度為1.0 W/cm²)后，再將96孔板置于37 °C 恒溫以及 5% CO₂培養(yǎng)基中繼續(xù)孵育24 h。

OD值檢測：將上述孵育完的細(xì)胞每孔加入10 μL已配好的MTT溶液(5 mg/mL)，置于培養(yǎng)箱中孵育4 h，棄去孔板中原來的液體，再在每孔加入100 μL DMSO，置于搖床中震蕩半小時(shí)左右，待甲瓚完全溶解后，測定96孔板中每孔在570 nm處的OD值。將所得結(jié)果用 Graph Pad Prism 5.0 處理，結(jié)果以 Mean±SEM 表示。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ZnPc-UCNP@SiO₂-PEG-G納米復(fù)合物對肝癌細(xì)胞HepG2具有明顯的殺傷作用，并且殺傷能力具有一定的劑量依賴性，從圖10-11也可知隨著濃度的增加，殺傷能力增強(qiáng)，而在無光照條件下對HepG2細(xì)胞均未表現(xiàn)出明顯的殺傷作用。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。