本發明屬于精細化工日用品技術領域，具體涉及的是一種具有祛痘美白功效的中藥組合提取物及應用。
背景技術：
皮膚是人類防御系統的第一道屏障，若人體自身的生理作用分泌的皮脂、汗液或者殘留在皮膚表面的化妝品以及灰塵得不到及時的清除，會導致毛囊或皮脂腺阻塞、發炎，進而在皮膚表面出現痤瘡等。若不及時處理，痤瘡不斷反復，加之黑色素的沉積，產生色斑，最終導致一系列皮膚病。
導致黑色素產生的原因有很多種，如紫外線廢氣、活性氧等環境問題和某些遺傳因素，其產生的原因相當復雜，普遍研究結果表明黑色素合成的過程如下，以細胞內的酪氨酸作為基質，在酪氨酸酶的作用下生成多巴醌，從多巴醌變成多巴色素之后進一步氧化成5，6-二羥基吲哚和5，6-二羥基-2-羥酸，這些生成物聚合最終生成聚體黑色素。在細胞代謝的層層推動下被轉移至肌膚表層，若不能及時被代謝排出體外，就會逐漸累積沉淀形成色斑，最終導致皮膚過黑。而痤瘡的產生是由于毛囊堵塞，油脂分泌受阻，加之細菌的作用，形成痤瘡，導致皮膚質感和活性下降。
目前研究中，皮膚美白劑通常都是以酪氨酸酶作為作用靶點，通過抑制酪氨酸酶的活性或是阻斷酪氨酸氧化生成黑色素的反應來減少皮膚黑色素的生成，從而達到皮膚美白的效果。大多數采用的是過氧化氫、氯化氨基汞和各種酚類衍生物作為皮膚美白劑，這些化合物可以迅速的瓦解黑色素組織達到快速美白的效果，但對皮膚具有腐蝕性、細胞毒性和過敏性等不良影響，安全性較差。對于祛痘，目前大多數還停留在涂抹藥膏、配合美容美白面膜使用等的階段，安全性較差、對皮膚刺激性較強，且實際效果也不太理想。
本發明將五種天然植物提取物組合使用，既能夠達到美白祛痘的作用，還能大大降低對皮膚的刺激，提升美白祛痘過程的安全性。
藏荊芥為唇形科植物藏荊芥Nepeta angustifolia C.Y.Wu的全草。其產于西藏(江孜、拉薩)，是西藏特有的藏藥材。藏荊芥在臨床上主要用于神昏痙厥、中風、癲癇、腦溢血、瘡傷及疼痛等癥的治療，具有良好的療效。《晶珠本草》指出：本品“治癲癇，腦溢血，瘡傷及疼痛等癥”，《藏藥志》、《藥名薈萃》也有藏荊芥治療中風、邪病、胸膜炎及皮膚病的記載。現代研究發現，藏荊芥能夠發揮消腫止痛、創傷愈合等作用。此外，藏荊芥揮發油的一些組分具有抗氧化、抗炎、鎮痛的作用。
變葉海棠葉也稱俄色葉，為甘孜藏族自治州藏族民間的藥食兩用的藥材,來源于薔薇科植物變葉海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes的干燥葉。最早記載于《藏藥晶鏡本草》和《藏漢大辭典》,據這兩本醫書記載,該藥具有攻堅化積、除膩漆滯、保肝利膽等功效,它的神奇藥用功效被錄入了最具權威的藏醫學著作《四部醫典》。對于變葉海棠葉的使用,傳統的藏醫用法為與酥油同煮口服。主要用于治療消化不良及一些肝疾,其療效確切,用法獨特。現代藥理研究表明，變葉海棠葉中含較高的總黃酮類化合物，其對DPPH自由基和羥基自由基有較好的清除活性，且變葉海棠葉中化學成分根皮苷、根皮素具有抗動脈粥樣硬化、抗炎等藥理作用。
黑果枸杞葉為茄科枸杞屬植物黑果枸杞Lycium Ruthenicum Murr.的莖葉。目前，黑果枸杞的研究多集中于其果實所含色素和多糖的提取和生物活性方面，而對其葉片提取物對美容美白未見報道。現代研究發現，黑果枸杞葉中總黃酮對清除小鼠血清羥基自由基的影響、對紅細胞溶血的保護作用以及抑制小鼠肝臟MDA產生方面都具有顯著功效，表現出明顯的抗氧化活性。本發明研究人員發現黑枸杞葉提取物對酪氨酸酶有抑制作用，表現出一定的美白功效。
三七葉為五加科人參屬植物三七PanaxNotoginseng(Burk.)F.H.Chen的莖葉。經研究報道，三七葉中富含大量的黃酮苷類、多糖類及三七葉總皂苷，具有抗炎、抗氧化、解痙、抗癌、抗動脈粥樣硬化等作用。動物實驗表明，三七葉總皂苷能夠抑制血液和腦組織過氧化脂質(LOP)生成和提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，對于增加皮膚活力和延緩衰老有較好的作用。此外，三七莖葉提取物能夠有效清除氧自由基，對皮膚有較好的抗氧化作用。
余甘子為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的果實，明《本草綱目》記載：“余甘子果，主補益氣，久服輕身，延年益壽”。可用于防治脂肪肝、糖尿病、高血脂、高血壓、肥胖、癌癥，可增強人體的免疫力，從根本上提高人體脂類的分解能力而達到平衡代謝的目的。動物實驗研究發現，余甘子提取液具有抗氧化作用和清除氧自由基能力，可提高紅細胞超氧化物歧化酶SOD活性、降低血清中過氧化脂質LOP含量。另外，有研究表明余甘子提取物對引起皮炎的真菌有較強的抑制作用，對祛痘有一定的療效。
技術實現要素：
本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種具有祛痘美白、天然安全、協同增效的中藥組合提取物以及應用。
為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：
一種具有祛痘美白功效的中藥組合提取物，該組合提取物由下述按重量份計的中藥原料制備而成：黑果枸杞葉10-40份、三七葉10-30份、余甘子10-40份、藏荊芥10-30份、變葉海棠葉10-30份。
優選地，該中藥復方提取物由下述按質量份數計的中藥原料制備而成：黑果枸杞葉20-40份、三七葉10-20份、余甘子20-40份、藏荊芥10-20份、變葉海棠葉10-20份。
所述具有祛痘美白功效的中藥組合提取物的制備方法，包括以下步驟：
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入5-8倍量(V/m)50％-80％乙醇，回流提取1-3次，每次提取1-3小時，濾過，濾液合并，在55-75℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上D101型或AB-8型大孔樹脂柱純化，收集40％-70％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，50-70℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
上述的一種具有祛痘美白功效的中藥組合提取物在制備護膚品中的應用。
所述具有祛痘美白功效的中藥組合提取物在祛痘美白護膚品中的質量百分含量為0.1-10％，優選質量百分含量為1-8％,其余為化妝品外用劑型的常用基質以及去離子水或純化水或蒸餾水。通過常規工藝，可制成祛痘美白洗面奶、祛痘美白洗面乳、祛痘美白洗面霜、祛痘美白膏、祛痘美白霜、祛痘美白乳液、祛痘美白水、祛痘美白面膜、祛痘美白凝膠或祛痘美白皂等化妝品外用劑型。
本發明的解決方案是基于相關的醫學傳統理論，結合現代醫藥學研究技術與手段，通過大量實驗優選與驗證，發現了黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉等五味藥材配合使用，可起到明顯的祛痘美白護膚作用。本發明所優選配方，通過國內外文獻檢索，未發現相關應用，加之通過大量實驗篩選，所得配方比例為最佳配方比例，配方科學，且安全性高，可用于日常皮膚護理。
本發明具有以下優點：
(1)發現了黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉配合使用的祛痘美白作用，擴大了上述原料的應用范圍，特別是在皮膚護理中的應用；
(2)通過大量的實驗篩選，確定了原料的最佳比例范圍，確保本發明產品使用的效果；
(3)本發明配方效果明確且穩定，有效克服了天然產物護膚品效果不穩定，也克服了單純化學成分安全系數較低等缺點。
具體實施方式
下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術方案的限制。
實施例1
黑果枸杞葉30份、三七葉10份、余甘子40份、藏荊芥10份、變葉海棠葉10份
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入8倍量(V/m)60％乙醇，回流提取2次，每次提取2小時，濾過，濾液合并，在65℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上AB-8型大孔樹脂柱純化，收集50％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，70℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
實施例2
黑果枸杞葉30份、三七葉20份、余甘子30份、藏荊芥10份、變葉海棠葉10份
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入5倍量(V/m)80％乙醇，回流提取3次，每次提取1小時，濾過，濾液合并，在55℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上D101型大孔樹脂柱純化，收集70％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，60℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
實施例3
黑果枸杞葉40份、三七葉20份、余甘子20份、藏荊芥10份、變葉海棠葉10份
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入8倍量(V/m)50％乙醇，回流提取1次，每次提取3小時，濾過，濾液合并，在75℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上AB-8型大孔樹脂柱純化，收集60％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，55℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
實施例4
黑果枸杞葉20份、三七葉10份、余甘子40份、藏荊芥20份、變葉海棠葉10份
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、余甘子、藏荊芥、變葉海棠葉藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入7倍量(V/m)70％乙醇，回流提取3次，每次提取1.5小時，濾過，濾液合并，在70℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上D101型大孔樹脂柱純化，收集40％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，65℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
實施例5
黑果枸杞葉25份、三七葉15份、余甘子35份、藏荊芥15份、變葉海棠葉10份
取干燥的黑果枸杞葉、三七葉、藏荊芥、變葉海棠葉、獨一味藥材，粉碎，過20目篩，按照體積質量比加入8倍量(V/m)60％乙醇，回流提取2次，每次提取2小時，濾過，濾液合并，在60℃條件下減壓回收乙醇至無醇味，再上AB-8型大孔樹脂柱純化，收集60％乙醇洗脫部分，60℃條件下減壓回收乙醇，得浸膏，70℃條件下真空干燥，粉碎，即為本發明具有祛痘美白功效的中藥組合提取物。
實施例6
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物對L-酪氨酸酶活性抑制實驗
1材料與方法：
1.1樣品
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物、熊果苷(陽性對照)。
1.2實驗方法
(1)磷酸緩沖液的配制：精密稱取Na2HPO4·12H2O 26.797g，NaH2PO4·2H2O 13.803g，分別用去離子水溶解后，定容至500mL容量瓶中。取磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉溶液各100mL至500mL容量瓶中，去離子水定容，搖勻，即為pH＝6.8的磷酸緩沖液。
(2)樣品溶液的配制：將上述四種樣品用DMSO分別配制成濃度0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL待測樣品溶液。
(3)底物L-酪氨酸溶液的配制：底物L-酪氨酸用磷酸緩沖液配制成質量濃度為0.05％的L-酪氨酸溶液。
(4)酪氨酸酶溶液的配制：酪氨酸酶用磷酸緩沖溶液配制成100U/mL的溶液。
(5)酪氨酸酶抑制率的測定：按表1準確吸取除酪氨酸酶溶液的C1、C2、T1、T2四組反應樣液，在37℃水浴恒溫10分鐘后，再加入酪氨酸酶溶液，反應10分鐘，以C2為C1的參比，測出體系在475nm處吸光度A1，以T2為T1的參比，測出體系吸光度A2。為平行樣品帶來的系統誤差，在C1和C2中分別加入了ImL的DMSO。為消除樣品在475nm處吸光度誤差，在T2中也加入了lmL樣品溶液。按下列公式計算酪氨酸酶的抑制率，結果見表2。
其中A1為未加樣品的反應液的吸光度值的改變，A2為加入樣品后反應液的吸光度值的改變。
表1 酪氨酸酶活性抑制實驗試劑用量表
2實驗結果
表2 本發明提取物對酪氨酸酶活性抑制率的影響(％)
結果表明，本發明三種實施例提取物對酪氨酸酶活性均有較好的抑制作用，其中，實施例2提取物的抑制效果最好，濃度在0.3mg/mL時，其抑制率達到55.08％，實施例1提取物的濃度在0.4mg/mL時，其抑制率為53.73％，實施例3提取物的濃度在0.4mg/mL時，其抑制率為57.11％，三種實施例提取物隨著濃度的增加，酪氨酸酶的抑制率也相應增加，其中，實施例2的酪氨酸酶抑制率總體高于實施例1和實施例3。結果說明三種實施例提取物對酪氨酸酶的抑制效果明顯，三種實施例提取物均具有良好的美白效果。
實施例7
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物抗氧化實驗
1實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物清除DPPH自由基實驗
1.1材料與方法
1.1.1樣品
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物、維生素C(陽性對照)。
1.1.2實驗方法
將上述四種樣品用無水乙醇分別配制成濃度0.05mg/mL、0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL待測樣品溶液。取2.5mL樣品溶液，加入2.5mL濃度為50mg/L的DPPH標準溶液，立即混勻，在室溫下放入暗室反應30min，同時，取2.5mL樣品溶液，加入95％的乙醇溶液2.5ml混合均勻，在517nm處測定吸光度。按下列公式計算DPPH自由基清除率，結果見表3。
As：2.5mlLDPPH溶液與2.5mL不同濃度的樣品溶液組成的混合液的吸光度；
A：為2.5mL不同濃度的測試液與2.5mL無水乙醇組成的混合液的吸光度；
A0：為2.5mL DPPH溶液與2.5mL無水乙醇組成的混合溶液的吸光度。
1.2實驗結果
表3 本發明提取物對DPPH自由基清除率的影響(％)
2實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物清除ABTS自由基實驗
2.1材料與方法
2.1.1樣品
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物、維生素C(陽性對照)。
2.1.2實驗方法
將上述四種樣品用95％乙醇分別配制成濃度0.05mg/mL、0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL待測樣品溶液。精密量取7mmol/L的ABTS溶液(由蒸餾水配制)0.20ml，與0.20ml的2.6mmol/L的過硫酸鉀溶液混合，稀釋40-50倍，使溶液754nm處的吸光度值保持在0.7±0.02，既得ABTS自由基工作液，室溫下避光保存。分別吸取4mlABTS與1ml茶葉樣品充分混合均勻，靜置6min，以95％乙醇作為空白照，754nm處測定吸光度值。按照下列公式計算清除率：
其中，A0為ABTS自由基本身的吸光度值，A為樣品對ABTS自由基作用后的吸光度值。結果見表4。
2.2實驗結果
表4 本發明提取物對ABTS自由基清除率的影響(％)
上述抗氧化實驗結果表明，本發明三種實施例提取物均有良好的抗氧化作用，其中，實施例2提取物的抗氧化作用優于實施例1和實施例3提取物。現代研究表明，黑色素形成與氧自由基有關，故通過清除氧自由基，可有效減少黑色素的生成，起到美白作用。上述抗氧化實驗表明，實施例2提取物的抗氧化活性強于其他實施例，結果與L-酪氨酸酶活性抑制實驗一致。
實施例8
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物抑菌實驗
痤瘡丙酸桿菌、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌是導致痤瘡的主要三種病原菌，通過對本發明三種實施例的抑菌實驗，可評價本發明的祛痘效果。
1材料與方法
1.1樣品
實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物、甲硝唑(陽性對照)。
1.2實驗方法
稱取實施例提取物和甲硝唑各1.0g，加入去離子水50mL，溶解，過濾，取濾液備用(現配現用)，將滅菌后的直徑6mm的濾紙片，用無菌鑷子夾取浸泡在樣品液中，取出，晾干，置于無菌培養皿中，以滅菌后的生理鹽水作陰性對照。移取200μL痤瘡丙酸桿菌、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌菌懸液至固體培養皿上，涂布均勻，將準備好的濾紙片貼于培養皿上，37℃培養18-24h，觀察結果，測定抑菌圈大小，每個樣品設三個平行，結果取平均值。結果見表5。
表5 本發明提取物抑菌實驗結果
表5結果表明，本發明三個實施例提取物對痤瘡丙酸桿菌、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌等三種細菌具有很好的抑制作用，其抑菌圈的直徑均在20cm以上，抑菌效果優良。說明本發明的實施例均有很好的抑菌作用，可用于祛痘美容。其中，實施例2提取物的抑菌效果最為顯著，對痤瘡丙酸桿菌、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用均顯著優于其他兩種實施例提取物。
實施例9
本發明實施例1產品、實施例2產品、實施例3產品人體試用評價實驗
1祛痘美白霜的制備
本發明取上述復方中藥提取物配制成祛痘美白霜，配方如下(按質量百分比計)：
A相：硬脂酸 3.0％
凡士林 8.0％
單硬脂酸甘油酯 3.0％
液狀石蠟 10.0％
十六醇 2.0％
苯甲酸 0.2％
B相：純化水 55.0％
丙二醇 5.0％
聚乙二醇1500 5.0％
吐溫-40 3.0％
三乙醇胺 0.5％
亞硫酸鈉 0.1％
C相：復方中藥提取物 5.0％
D相：香精 0.2％
制備工藝如下：
將A相和B相分別加熱至80℃，充分攪拌混合均勻，在80℃條件下，將B相攪拌加入A相中，再加入C相，繼續攪拌，至溫度降至45℃時，加入D相，攪拌至室溫，即得祛痘美白霜。
將實施例1提取物、實施例2提取物、實施例3提取物按照上述方法制成相應的祛痘美白霜，進行相應的人體實驗。
2材料與方法
2.1樣品
實施例1提取物祛痘美白霜、實施例2提取物祛痘美白霜、實施例3提取物祛痘美白霜、市售祛痘美白霜(主要成分：金銀花、蘆薈、靈芝等)。
2.2實驗方法
選取自愿試用者160人(男性80人，女性80人，年齡18-25歲)，臉部均有丘疹、膿包、痘痕，身體狀況正常，無化妝品過敏史。將志愿者分成4組，每組40人，男女比例各半。第一組，試用實施例1產品；第二組，試用實施例2產品；第三組，試用實施例3產品，第四組，試用市售祛痘美白霜。
使用方法：早晚清潔面部后，取適量試用產品均勻涂抹于面部，輕輕拍打吸收，并輕輕按摩3-5分鐘，讓肌膚充分吸收，連續試用8周。通過問卷形式，調查試用者對所使用產品的主觀評價，包括美白效果以及產品干澀、刺激感等指標。結果見表6。同時，觀察與統計志愿者臉部皮膚改善情況，結果見表7。
顯效：臉部丘疹、膿包、痘痕消退60％～90％；
有效：臉部丘疹、膿包、痘痕消退20％～60％；
無效：臉部丘疹、膿包、痘痕消退<20％。
3實驗結果
表6 試用者對產品評價調查表
表7 本發明實施例產品祛痘效果評價表
上述兩表為試用者對試用產品的評價表，表中結果顯示，本發明實施例1、實施例2和實施例3祛痘美白霜產品具有較好的祛痘和美白作用。其中，表6結果表明，本發明三個實施例產品的美白作用明顯，試用者對美白效果的評價明顯優于市售祛痘美白霜，其中實施例2產品的美白效果最佳；表7結果顯示，本發明實施例三個產品均能明顯改善受試志愿者臉部皮膚的狀態，丘疹、膿包、痘痕等癥狀得到明顯改善，有效率均在85.0％以上，說明本發明產品具有明顯的祛痘效果，其中，實施例2產品的效果最為明顯，其有效率達到95.0％，優于其他兩個實施例產品，也顯著優于市售祛痘美白霜。此外，三個實施例產品均無過敏和刺激感，產品安全性高。
上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。