本發(fā)明屬于酶發(fā)酵工程技術(shù)和制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種具有高抗腫瘤活性的酵素復(fù)合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：利用中藥材或者天然植物制取抗癌藥物是現(xiàn)代藥學(xué)研究中的熱點(diǎn)。許多中藥材中的成分已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有良好的抗腫瘤效果。最近，對于蜘蛛香的研究已經(jīng)從其揮發(fā)性成分分析，拓展到了抗癌成分的分析。閆志勇等通過對蜘蛛香進(jìn)行醇提，分離獲得了多種具有抗腫瘤效果的成分。沙棘也具有一定的抗腫瘤作用，《沙棘抗腫瘤及相關(guān)免疫研究進(jìn)展》總結(jié)了其產(chǎn)生抗腫瘤效果的原因及其研究進(jìn)展。傳統(tǒng)意義上的中藥制藥思路多為對藥材進(jìn)行提取（水提或醇提）獲得具有某種藥用效果的純化物，或者根據(jù)中藥配伍原理組成方劑。對于利用現(xiàn)代發(fā)酵工程技術(shù)從中藥中獲取藥用成分的研究相對較少。傳統(tǒng)的中藥發(fā)酵方法目的是為了改變藥材的藥性，以更好的進(jìn)行方劑的配伍，采用的是固體發(fā)酵方法。如何利用現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)使得具有抗腫瘤成分的中藥材更大程度的發(fā)揮抗腫瘤效果，是本領(lǐng)域中非常有價值的研究方向，也是難題之一。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的之一在于提供一種一種具有高抗腫瘤活性的酵素復(fù)合物的制備方法，該方法包括如下步驟：（1）按重量份計，準(zhǔn)備如下原料：2-4份雷公藤、5-8份沉香、4-5份蜘蛛香和1-2份沙棘；（2）將步驟（1）所得物混合，并向混合物加入重量為混合物重量3-4倍的水，加入砂糖，控制糖度為18%，然后按3-6%的接種量，接種保加利亞乳桿菌；（3）設(shè)置發(fā)酵溫度為37-40℃，發(fā)酵至體系pH為4.8-5.0時至終，得到所述酵素復(fù)合物。雖然蜘蛛香、沙棘、雷公藤和沉香中均有抗癌成分，但其提取方法各異，是否可以用同一種處理方法使其抗癌效果同時發(fā)揮出來，是發(fā)明人在研究前十分關(guān)注的問題。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)利用蜘蛛香進(jìn)行發(fā)酵時，所得發(fā)酵產(chǎn)物具有較低的抗腫瘤效果，而利用蜘蛛香和具有抗腫瘤成分的人參混合，進(jìn)行發(fā)酵時，人參的加入并不能提高發(fā)酵產(chǎn)物的抗腫瘤效果。加入沉香后，抗腫瘤效果有所提高，但不明顯，而同時加入沙棘、雷公藤和沉香后，抗腫瘤效果得到了顯著的提升。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)利用酵母菌對本發(fā)明原料進(jìn)行發(fā)酵時，發(fā)酵難以啟動。優(yōu)選的，步驟（1）中，按重量份計，準(zhǔn)備如下原料：3份雷公藤、7份沉香、4.5份蜘蛛香和1.5份沙棘。優(yōu)選的，步驟（2）中，接種量為5%。優(yōu)選的，步驟（3）中，發(fā)酵溫度為38-39℃。本發(fā)明的另一個目的在于提供由上述制備方法制備得到的具有高抗腫瘤活性的酵素復(fù)合物。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所得酵素復(fù)合物對于腫瘤具有非常明顯的抑制效果。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，有必要在此指出的是以下實(shí)施例只是用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容所做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1（1）按重量份計，準(zhǔn)備如下原料：2份雷公藤、5份沉香、4份蜘蛛香和1份沙棘；（2）將步驟（1）所得物混合，并向混合物加入重量為混合物重量3倍的水，加入砂糖，控制糖度為18%，然后按3%的接種量，接種保加利亞乳桿菌；（3）設(shè)置發(fā)酵溫度為37-38℃，發(fā)酵至體系pH為4.8-5.0時至終，得到所述酵素復(fù)合物。實(shí)施例2（1）按重量份計，準(zhǔn)備如下原料：4份雷公藤、8份沉香、5份蜘蛛香和2份沙棘；（2）將步驟（1）所得物混合，并向混合物加入重量為混合物重量3-4倍的水，加入砂糖，控制糖度為18%，然后按6%的接種量，接種保加利亞乳桿菌；（3）設(shè)置發(fā)酵溫度為39-40℃，發(fā)酵至體系pH為4.8-5.0時至終，得到所述酵素復(fù)合物。實(shí)施例3（1）按重量份計，準(zhǔn)備如下原料：3份雷公藤、7份沉香、4.5份蜘蛛香和1.5份沙棘；（2）將步驟（1）所得物混合，并向混合物加入重量為混合物重量3.5倍的水，加入砂糖，控制糖度為18%，然后按5%的接種量，接種保加利亞乳桿菌；（3）設(shè)置發(fā)酵溫度為38-39℃，發(fā)酵至體系pH為4.8-5.0時至終，得到所述酵素復(fù)合物。對比實(shí)施例1除原料僅有蜘蛛香之外，其余與實(shí)施例3一致。對比實(shí)施例2除原料為蜘蛛香和人參按照重量比1:1加入之外，其余與實(shí)施例3一致。對比實(shí)施例3除原料不含雷公藤和沙棘之外，其余與實(shí)施例3一致。對比實(shí)施例4除發(fā)酵菌為酵母菌之外，其余與實(shí)施例3一致。發(fā)酵過程無法正常啟動。實(shí)驗例對實(shí)施例1-3和對比實(shí)施例1-3所得發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤活性方面的檢測。實(shí)驗動物：昆明小鼠（35只，雌性）；細(xì)胞系：肝癌細(xì)胞H22。于小鼠左腋下接種細(xì)胞懸液，至腫瘤生長至400mm3后，用對實(shí)施例1-3和對比實(shí)施例1-3所得發(fā)酵產(chǎn)物和生理鹽水（對照組）對小鼠進(jìn)行灌胃處理，每日一次，一次5ml，持續(xù)28天，記錄腫瘤體積并計算體積增長率。結(jié)果如表1所示。表1組別腫瘤體積增長率（%）實(shí)施例152實(shí)施例256實(shí)施例349對比實(shí)施例1385對比實(shí)施例2364對比實(shí)施例3276對照組430由表1可知，本發(fā)明所得酵素復(fù)合物對于腫瘤具有十分明顯的抑制效果。當(dāng)前第1頁1 2 3