本發(fā)明涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法。

背景技術(shù)：

獸用活疫苗通常是疫病防控的有力手段之一，但由于我國(guó)地區(qū)差異大，“冷鏈”的缺失往往會(huì)造成疫苗免疫失敗。目前國(guó)內(nèi)真空步凍干燥目前國(guó)內(nèi)減毒活疫苗主要采用真空冷凍干燥工藝制備，其在預(yù)凍階段形成的冰晶顆粒對(duì)病毒有一定的損傷，并且疫苗的保存與運(yùn)輸均需要冷鏈支持。

早在上世紀(jì)90年代，國(guó)外研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)用真空梯度干燥工藝制備的泡沫干燥疫苗可以顯著提高耐熱性能，此種方式的原理是將疫苗包埋于黏度較高的非還原糖中，隨著水分的失去而逐步固相化，形成一種固態(tài)的糖玻璃疫苗，由于非還原糖非常穩(wěn)定，因此包裹疫苗的糖玻璃不會(huì)參與化學(xué)反應(yīng)，也不會(huì)參與蛋白質(zhì)反應(yīng)，制備的疫苗呈現(xiàn)出致密的干燥泡沫狀。

1999年，英國(guó)Worrall選擇海藻糖作為保護(hù)劑分別對(duì)副粘病毒、支原體等進(jìn)行梯度真空干燥，通過(guò)測(cè)定病毒滴度下降1.0g，牛瘟病毒能夠在45℃保存3d、37℃保存14 d反芻獸疫疫苗也可以在37℃保存7 d、25℃保存14 d M12006年，美國(guó)Vu Truong—Le采用40％蔗糖溶液對(duì)流感病毒進(jìn)行了冷凍泡沫干燥，可在25℃保存2年、37℃保存146d。11年SatoshiOhtake用含25％海藻糖的保護(hù)劑溶液對(duì)重組腸炎沙門氏菌進(jìn)行了泡沫干燥，37℃和25℃保存12周，細(xì)菌CFU基本無(wú)損失；Worrall使用含2．5％海藻糖的保護(hù)劑制備牛反芻獸疫疫苗，在45℃下保存14d效價(jià)損失很小。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法。

一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）將PRRS病毒液與耐熱配方T28C-5等體積混勻后，分裝于西林瓶中，1ml/瓶，進(jìn)行梯度真空泡沫干燥；

（2）設(shè)置隔板15-35℃，冷確至零下20-60℃；

（3）樣品入艙后溫度平衡至25℃后開啟真空，初始真空60 000 Pa，之后每2 min調(diào)節(jié)次真空，最終調(diào)至300 Pa維持約1 h，

（4）待樣品溫度升至25℃后，真空度再降至10 Pa，維持12～18 h，之后真空降至0．1 Pa，維持12～18 h整個(gè)干燥過(guò)程共計(jì)30～42 h；

（5）干燥結(jié)束，樣品出艙軋蓋、保存。

所述隔板溫度為25℃，冷卻至零下40℃。

所述真空度維持16h。

所述真空降至0．1 Pa后維持18h。

本發(fā)明所述方法制備的豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗，活性強(qiáng)，玻璃態(tài)的疫苗水分含量低，分子運(yùn)動(dòng)受限制，大大減緩了病毒的衰變。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1。

一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）將PRRS病毒液與耐熱配方T28C-5等體積混勻后，分裝于西林瓶中，1ml/瓶，進(jìn)行梯度真空泡沫干燥；

（2）設(shè)置隔板15-35℃，冷確至零下20-60℃；

（3）樣品入艙后溫度平衡至25℃后開啟真空，初始真空60 000 Pa，之后每2 min調(diào)節(jié)次真空，最終調(diào)至300 Pa維持約1 h，

（4）待樣品溫度升至25℃后，真空度再降至10 Pa，維持12～18 h，之后真空降至0．1 Pa，維持12～18 h整個(gè)干燥過(guò)程共計(jì)30～42 h；

（5）干燥結(jié)束，樣品出艙軋蓋、保存。

實(shí)施例2。

一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）將PRRS病毒液與耐熱配方T28C-5等體積混勻后，分裝于西林瓶中，1ml/瓶，進(jìn)行梯度真空泡沫干燥；

（2）設(shè)置隔板15-35℃，冷確至零下20-60℃；

（3）樣品入艙后溫度平衡至25℃后開啟真空，初始真空60 000 Pa，之后每2 min調(diào)節(jié)次真空，最終調(diào)至300 Pa維持約1 h，

（4）待樣品溫度升至25℃后，真空度再降至10 Pa，維持12～18 h，之后真空降至0．1 Pa，維持12～18 h整個(gè)干燥過(guò)程共計(jì)30～42 h；

（5）干燥結(jié)束，樣品出艙軋蓋、保存；

（6）所述隔板溫度為25℃，冷卻至零下40℃。

實(shí)施例3。

一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）將PRRS病毒液與耐熱配方T28C-5等體積混勻后，分裝于西林瓶中，1ml/瓶，進(jìn)行梯度真空泡沫干燥；

（2）設(shè)置隔板15-35℃，冷確至零下20-60℃；

（3）樣品入艙后溫度平衡至25℃后開啟真空，初始真空60 000 Pa，之后每2 min調(diào)節(jié)次真空，最終調(diào)至300 Pa維持約1 h，

（4）待樣品溫度升至25℃后，真空度再降至10 Pa，維持12～18 h，之后真空降至0．1 Pa，維持12～18 h整個(gè)干燥過(guò)程共計(jì)30～42 h；

（5）干燥結(jié)束，樣品出艙軋蓋、保存；

（6）所述隔板溫度為25℃，冷卻至零下40℃；

（7）所述真空度維持16h。

實(shí)施例4。

一種豬繁殖與呼吸綜合征糖玻璃活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）將PRRS病毒液與耐熱配方T28C-5等體積混勻后，分裝于西林瓶中，1ml/瓶，進(jìn)行梯度真空泡沫干燥；

（2）設(shè)置隔板15-35℃，冷確至零下20-60℃；

（3）樣品入艙后溫度平衡至25℃后開啟真空，初始真空60 000 Pa，之后每2 min調(diào)節(jié)次真空，最終調(diào)至300 Pa維持約1 h，

（4）待樣品溫度升至25℃后，真空度再降至10 Pa，維持12～18 h，之后真空降至0．1 Pa，維持12～18 h整個(gè)干燥過(guò)程共計(jì)30～42 h；

（5）干燥結(jié)束，樣品出艙軋蓋、保存；

（6）所述隔板溫度為25℃，冷卻至零下40℃；

（7）所述真空度維持16h；

（8）所述真空降至0．1 Pa后維持18h。