1.一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于,該方法包括以下幾個步驟:
(1)將模板劑十六烷基三甲基溴化銨溶于去離子水中,依次加入氨水,乙醇,乙醚在室溫下劇烈攪拌至溶液澄清,快速滴加正硅酸四乙酯(TEOS),劇烈攪拌反應,得到白色固體沉淀;
(2)將步驟(1)中所得的沉淀進行抽濾,用乙醇和水洗滌,然后將沉淀物置于烘箱中干燥;
(3)將步驟(2)干燥后的固體粉末置于硝酸銨/乙醇溶液中加熱攪拌回流,除去介孔二氧化硅中的模板劑(CTAB);
(4)將模型藥物牛血清蛋白(BSA)溶于磷酸鹽緩沖液中,溶脹過夜;
(5)將BSA溶液與處理過的介孔二氧化硅按一定的質(zhì)量比例,置于磷酸鹽緩沖液中,在4度攪拌24小時,離心,凍干沉淀物;
(6)將殼聚糖(CS)溶于1%醋酸溶液中,磁力攪拌至其完全溶解,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)殼聚糖溶液PH至5.5左右;
(7)將載有BSA的介孔二氧化硅凍干粉加入到殼聚糖溶液中,在4度下攪拌10小時,離心,凍干沉淀物。
2.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(1)中模板劑十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量為0.2~0.5g,步驟(1)所述正硅酸四乙酯,水,氨水,乙醇,乙醚溶液的體積為2.5∶70∶0.8∶5~25∶20,氨水溶液的質(zhì)量分數(shù)為25~28%,步驟(1)中劇烈攪拌的時間為0.5h,劇烈攪拌反應的時間為4h。
3.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(2)烘箱溫度為60度,干燥時間為24h。
4.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(3)中,步驟(2)固體粉末質(zhì)量為0.5g,硝酸銨/乙醇的濃度為6g/L,體積為100mL,乙醇的質(zhì)量分數(shù)為95%,回流溫度為60度,回流時間為5h。
5.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(4)所選擇的藥物僅為模型藥物BSA,但不局限于此,藥物還可以是用于預防小兒麻痹癥、流感等疾病的蛋白疫苗,BSA的濃度在0.2~6mg/ml,優(yōu)先選擇2mg/ml。
6.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(5)中蛋白藥物BSA與介孔二氧化硅的質(zhì)量比在5∶1~1∶20,優(yōu)先選擇1∶1。
7.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(6)中殼聚糖的濃度為2~6mg/ml,優(yōu)先選擇2mg/ml。
8.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(7)中載有BSA的介孔二氧化硅凍干粉的質(zhì)量為10mg,殼聚糖溶液的體積為1mL。
9.根據(jù)權利要求1中一種用于口服蛋白疫苗載體的制備方法,其特征在于:步驟(4)、(5)中的磷酸鹽緩沖液的PH值為7.4。