本發明涉及藥品制造技術領域，具體涉及一種從無花果葉提取植物黃酮的方法。
背景技術：
無花果是一種開花植物，隸屬于?？崎艑?，主要生長于熱帶和溫帶的地方，屬亞熱帶落葉小喬木。果實呈球根狀，尾部有一小孔，無花果除鮮食、藥用外，還可加工制干、制果脯、果醬、果汁、果茶、果酒、飲料、罐頭等。無花果干無任何化學添加劑，味道濃厚、甘甜。無花果汁、飲料具有獨特的清香味，生津止渴，老幼皆宜。無花果樹枝繁葉茂，樹態優雅，具有較好的觀賞價值，是良好的園林及庭院綠化觀賞樹種。無花果具一定的藥用價值，健胃清腸，消腫解毒，用于食欲不振，脘腹脹痛，痔瘡便秘，消化不良，痔瘡，脫肛，腹瀉、乳汁不足，咽喉腫痛，熱痢，咳嗽多痰等癥。
無花果葉含香檸檬內酯、補骨脂素、維生素C等生物活性物質，另外還含有豐富的黃酮類化合物。自古以來，人們就應用無花果葉入藥治病，治療痔瘡、腹瀉、腸炎等疾病。近代醫學研究表明，無花果葉提取物具有抗腫瘤、抗菌、降血糖、降血脂等多項藥理作用，而黃酮是無花果葉中主要藥效成分之一。目前對無花果葉黃酮類化合物的研究主要集中在含量測定和提取工藝方面，純化工藝的研究未見報道。黃酮類化合物廣泛存在于植物界中，具有許多重要的生理效應和藥理作用，一直得到研究學者的關注。目前國內外主要從銀杏葉、沙棘葉、芝麻葉等材料中提取黃酮化合物，而對無花果葉黃酮的研究，尤其是采用堿提酸沉法從無花果葉中提取黃酮的研究還鮮有報道。近年利用大孔樹脂純化技術對藤茶總黃酮、山蠟梅葉總黃酮、千里光總黃酮進行分離純化，取得良好的純化效果，但未見應用于無花果葉中提取黃酮的研究。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種從無花果葉提取植物黃酮的方法，以無花果葉為原料，經閉環除濕-熱泵干燥、回流脫脂、堿提酸沉、大孔樹脂純化得黃酮類化合物蘆丁精品，產品中總黃酮含量高，而且工藝簡單、產率高、生產成本低，且適合于工業化生產。
為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：
一種從無花果葉提取植物黃酮的方法，以無花果葉為原料，包括如下步驟：
1)原料預處理：無花果葉采摘后，用清水洗去表面的灰塵和雜質，利用“閉環除濕-熱泵干燥”技術烘干至含水量8wt％以下；
2)回流脫脂：將干無花果葉與石油醚置于回流裝置提取器中，在60～90℃條件下，回流至樣品無色，冷卻至室溫，過濾，回收石油醚，濾渣于60℃下烘干，得到脫脂無花果葉，再經粉碎，過20目篩，獲得脫脂無花果葉粉；
3)堿提酸沉法提取總黃酮：向盛有脫脂無花果葉粉的容器中加入脫脂無花果葉粉質量8～12倍的水，煮沸，在攪拌下緩緩加入飽和石灰乳至pH值8～10，在此pH值條件下微沸20～30min，趁熱抽濾；然后向殘渣中再加入脫脂無花果葉粉質量3～5倍的水，再煮提一次，趁熱抽濾，合并濾液；在60～70℃的條件下，用體積濃度為15％的鹽酸溶液將合并后的濾液調至pH值4～6，攪勻后遮光靜置20～30h，抽濾，用蒸餾水將濾渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黃酮類化合物蘆丁粗品；蘆丁粗品再用沸水重結晶，在70～80℃下干燥后得蘆丁純品，并測定總黃酮含量；
4)大孔樹脂純化：將蘆丁純品配成2mg/mL的樣液，用大孔樹脂純化，充分吸附后，用去離子水沖洗，棄去洗脫液，然后再用體積濃度為75％～85％的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液旋轉蒸發，在60℃下干燥得蘆丁精品。
根據以上方案，所述石油醚與干無花果葉的質量比為3～8:1。
根據以上方案，所述黃酮類化合物的鑒定采用薄層色譜法：硅膠G板，用體積比為5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展開，3wt％三氯化鋁乙醇液檢驗，紫外燈365nm處觀察。
根據以上方案，所述總黃酮含量采用紫外分光光度法(UV)測定，于510nm處測定樣品溶液吸光度，從標準曲線所得到回歸方程中計算出樣品溶液中總黃酮的濃度。
采用堿提取酸沉淀法進行提取純化時，所用堿液濃度不宜過高，以免在強堿性下，尤其加熱時破壞黃酮母核；在加酸酸化時，酸性也不宜過強，以免生成鹽，致使析出的黃酮類化合物又重新溶解，降低產品收率。
采用UV法測定總黃酮含量的具體過程為：精密吸取蘆丁對照品溶液2、4、6、8、10、12mL于50mL容量瓶中，各加水至12mL，加入2mL 5wt％的NaNO2溶液，搖勻放置6min，然后加入2mL 10wt％的AL(NO3)3溶液，搖勻放置6min，再加入20mL 4.3wt％的NaOH溶液，再加水定容至刻度，搖勻，放置15min后，以相應試劑為空白，照UV法(藥典2005版附錄VA)，在510nm處測定吸光度，照上述方法處理，于510nm處測定樣品溶液吸光度，從標準曲線所得到回歸方程中計算出樣品溶液中總黃酮的濃度(mg/mL)。
本發明的有益效果是：
1)本發明采用堿提酸沉法提取總黃酮，并利用大孔樹脂進一步純化，獲得黃酮類化合物蘆丁精品，產品中總黃酮含量高，而且工藝簡單、產率高、生產成本低，且適合于工業化生產；2)本發明不僅節能高效，而且易于自動化操作，具有良好的應用前景。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明的技術方案進行說明。
實施例1：
本發明提供一種從無花果葉提取植物黃酮的方法，以無花果葉為原料，包括如下步驟：
1)原料預處理：無花果葉采摘后，用清水洗去表面的灰塵和雜質，利用“閉環除濕-熱泵干燥”技術烘干至含水量8wt％；
2)回流脫脂：將干無花果葉與石油醚(質量為干無花果葉的5倍)置于回流裝置提取器中，在70℃條件下，回流至樣品無色，冷卻至室溫，過濾，回收石油醚，濾渣于60℃下烘干，得到脫脂無花果葉，再經粉碎，過20目篩，獲得脫脂無花果葉粉；
3)堿提酸沉法提取總黃酮：向盛有脫脂無花果葉粉的容器中加入脫脂無花果葉粉質量11倍的水，煮沸，在攪拌下緩緩加入飽和石灰乳至pH值8，在此pH值條件下微沸25min，趁熱抽濾；然后向殘渣中再加入脫脂無花果葉粉質量3倍的水，再煮提一次，趁熱抽濾，合并濾液；在60℃的條件下，用體積濃度為15％的鹽酸溶液將合并后的濾液調至pH值4.5，攪勻后遮光靜置24h，抽濾，用蒸餾水將濾渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黃酮類化合物蘆丁粗品；蘆丁粗品再用沸水重結晶，在75℃下干燥后得蘆丁純品，并用UV法測定產品中總黃酮含量為401mg/g；
4)D140型大孔樹脂純化：將蘆丁純品配成2mg/mL的樣液，2BV/h流速上樣D140型大孔樹脂純化，充分吸附后，用2BV去離子水沖洗，棄去洗脫液，然后再用4BV 80v％乙醇以2BV/h流速洗脫，收集洗脫液，將洗脫液旋轉蒸發，在60℃下干燥得蘆丁精品。
采用薄層色譜法鑒定成品蘆丁精品中黃酮類化合物，精制蘆丁與標準品在相應的位置分別顯黃色斑點，UV法測定產品中總黃酮純度為89.6％。
實施例2：
本發明提供一種從無花果葉提取植物黃酮的方法，以無花果葉為原料，包括如下步驟：
1)原料預處理：無花果葉采摘后，用清水洗去表面的灰塵和雜質，利用“閉環除濕-熱泵干燥”技術烘干至含水量7wt％；
2)回流脫脂：將干無花果葉與石油醚(質量為干無花果葉的6倍)置于回流裝置提取器中，在60℃條件下，回流至樣品無色，冷卻至室溫，過濾，回收石油醚，濾渣于60℃下烘干，得到脫脂無花果葉，再經粉碎，過20目篩，獲得脫脂無花果葉粉；
3)堿提酸沉法提取總黃酮：向盛有脫脂無花果葉粉的容器中加入脫脂無花果葉粉質量9倍的水，煮沸，在攪拌下緩緩加入飽和石灰乳至pH值10，在此pH值條件下微沸20min，趁熱抽濾；然后向殘渣中再加入脫脂無花果葉粉質量3倍的水，再煮提一次，趁熱抽濾，合并濾液；在65℃的條件下，用體積濃度為15％的鹽酸溶液將合并后的濾液調至pH值5，攪勻后遮光靜置22h，抽濾，用蒸餾水將濾渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黃酮類化合物蘆丁粗品；蘆丁粗品再用沸水重結晶，在70℃下干燥后得蘆丁純品，并用UV法測定產品中總黃酮含量為366mg/g；
4)D140型大孔樹脂純化：將蘆丁純品配成2mg/mL的樣液，2BV/h流速上樣D140型大孔樹脂純化，充分吸附后，用2BV去離子水沖洗，棄去洗脫液，然后再用4BV 75v％的乙醇以2BV/h流速洗脫，收集洗脫液，將洗脫液旋轉蒸發，在60℃下干燥得蘆丁精品。
采用薄層色譜法鑒定成品蘆丁精品中黃酮類化合物，精制蘆丁與標準品在相應的位置分別顯黃色斑點，UV法測定產品中總黃酮純度為94.8％。
實施例3：
本發明提供一種從無花果葉提取植物黃酮的方法，以無花果葉為原料，包括如下步驟：
1)原料預處理：無花果葉采摘后，用清水洗去表面的灰塵和雜質，利用“閉環除濕-熱泵干燥”技術烘干至含水量6.5wt％；
2)回流脫脂：將干無花果葉與石油醚(質量為干無花果葉的7倍)置于回流裝置提取器中，在60℃條件下，回流至樣品無色，冷卻至室溫，過濾，回收石油醚，濾渣于60℃下烘干，得到脫脂無花果葉，再經粉碎，過20目篩，獲得脫脂無花果葉粉；
3)堿提酸沉法提取總黃酮：向盛有脫脂無花果葉粉的容器中加入脫脂無花果葉粉質量10倍的水，煮沸，在攪拌下緩緩加入飽和石灰乳至pH值9，在此pH值條件下微沸30min，趁熱抽濾；然后向殘渣中再加入脫脂無花果葉粉質量4倍的水，再煮提一次，趁熱抽濾，合并濾液；在70℃的條件下，用體積濃度為15％的鹽酸溶液將合并后的濾液調至pH值5.5，攪勻后遮光靜置30h，抽濾，用蒸餾水將濾渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黃酮類化合物蘆丁粗品；蘆丁粗品再用沸水重結晶，在70℃下干燥后得蘆丁純品，并用UV法測定產品中總黃酮含量為387mg/g；
4)D140型大孔樹脂純化：將蘆丁純品配成2mg/mL的樣液，2BV/h流速上樣D140型大孔樹脂純化，充分吸附后，用2BV去離子水沖洗，棄去洗脫液，然后再用4BV 85v％的乙醇以2BV/h流速洗脫，收集洗脫液，將洗脫液旋轉蒸發，在60℃下干燥得蘆丁精品。
采用薄層色譜法鑒定成品蘆丁精品中黃酮類化合物，精制蘆丁與標準品在相應的位置分別顯黃色斑點，UV法測定產品中總黃酮純度為92.1％。
以上實施例僅用以說明而非限制本發明的技術方案，盡管上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的相關技術人員應當理解：可以對本發明進行修改或者同等替換，但不脫離本發明精神和范圍的任何修改和局部替換均應涵蓋在本發明的權利要求范圍內。