本發明涉及生物技術領域,具體指N15多肽在制備金黃色葡萄球菌抑制劑中的用途。
背景技術:
金黃色葡萄球菌致病力最強,主要產生溶血素、殺白細胞素和血漿凝固酶等,造成許多種感染,如癤、癰、膿腫和傷口感染等。金黃色葡萄球菌感染的特點是局限性組織壞死,膿液稠厚、黃色、不臭。也能引起全身性感染,影響人體健康,威脅人類生命安全。為了抑制和消滅病原真菌,人們一直致力于尋找有效的抗病原細菌藥物。
技術實現要素:
本發明的目的在于提供一種多肽,該多肽能夠抑制金黃色葡萄球菌的生長,具有在制備病原細菌抑制劑中的用途,它已被現有技術公開,名為N15多肽。
N15多肽是一個具有15個氨基酸的短肽,其序列為甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-絲氨酸-蘇氨酸-谷氨酸-亮氨酸-異亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天門冬氨酸-脯氨酸,它具有多種生物學功能,包括調節NF-κB轉錄因子結合目的基因的能力,影響NF-κB目的基因產物蛋白質的轉錄和表達;阻斷PCNA結合DNA聚合酶,從而阻止細胞DNA合成抑制細胞增殖;抑制上皮細胞增生,調節表皮增生及分化,使皮膚角化過程正常化等。
發明人發現在研究中發現N15多肽能夠對各種病原細菌的生長產生抑制作用。
前期研究表明,在金黃色葡萄球菌中加入N15會起到抑制金黃色葡萄球菌增殖的效果。通過檢測金黃色葡萄球菌內DNA含量發現,N15會引起金黃色葡萄球菌內的DNA含量的減少,因此N15抑制金黃色葡萄球菌的增殖可能是通過抑制基因組DNA復制而實現的。此外,實驗結果還表明N15可以抑制沙門氏菌的生長。
本發明還提供了一種N15多肽制備的抗真菌藥物,為N15多肽的水溶液,濃度大于等于500μg/mL。
本發明的有益效果:N15多肽是一種結構清晰,易于工業化生產的多肽,它可以抑制多種病原細菌的增殖,效果好且無毒副作用。
附圖說明
圖1為流式細胞儀檢測N15對金黃色葡萄球菌DNA含量的影響。
具體實施方式
下面結合附圖和具體實驗例對本發明作進一步的論證說明,以下實驗例僅是對本發明的解釋而本發明并不局限于以下實驗例。
實驗例1:N15對金黃色葡萄球菌的生長具有抑制作用
實驗方法:
取金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養基斜面上,37℃下活化培養,用接種環從斜面上挑菌到無菌水中制成菌懸液,接種培養無菌操作下,用取液器吸取100μL體積的菌液到滅菌小離心管中,充分混勻后,迅速注入到滅菌平皿中,在平板中加入N15多肽,以同體積的無菌水的混合液注入作空白,置于37℃恒溫培養箱中培養48小時,觀察菌落生長情況,并對菌落計數,結果見表1。
表1.N15對金黃色葡萄球菌生長抑制結果對照表
結果顯示,和對照相比,加入N15多肽的平板上金黃色葡萄球菌的菌落數明顯減少,N15對金黃色葡萄球菌的生長具有抑制效應。
實驗例2:N15對金黃色葡萄球菌的DNA復制具有抑制效應
實驗方法:
制備YEPD液體培養基,培養金黃色葡萄球菌,并加入N15到YEPD液體培養基中,同時設置不加N15多肽的金黃色葡萄球菌作為對照(control),加入N15多肽(終濃度500μg/mL),在處理2小時分別取樣2mL金黃色葡萄球菌菌體,加入Sytox-Green染料對金黃色葡萄球菌細胞DNA染色后,使用流式細胞儀進行金黃色葡萄球菌的DNA相對含量進行測定,結果見圖1。
如實驗結果所示,橫坐標表示單個金黃色葡萄球菌細胞內DNA的含量,縱坐標表示酵母細胞數量。在N15處理2小時內,N15處理細胞內的DNA含量和對照細胞相比沒有顯著性差異,而隨著時間的增加,在N15處理15小時以后,N15處理細胞內的DNA含量和對照細胞相比明顯減少。該結果表明N15會引起金黃色葡萄球菌細胞DNA含量的減少。