本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術：

腎纖維化(包括腎間質纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階段的主要病理基礎，腎纖維化發生機制較為復雜，與多種因素有關，其中主要與細胞外基質細胞產生細胞的增殖和活化，血管活性物質、細胞因子以及細胞外基質轉換失衡有關，腎間質纖維化幾乎是所以原發或繼發腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同途徑。急需研發高效低毒的抗腎纖維化藥物。

腎纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價值。

本發明涉及的化合物I是一個2011年發表(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗腎纖維化活性進行了評價，其具有抗腎纖維化活性。

技術實現要素：

本發明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為85％和15％。

本發明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。

藥效學實驗表明，本發明的組合物具有較好的抗腎纖維化作用。本發明的藥學上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。

具體實施方式

實施例1 化合物Psiguadial A的制備

化合物Psiguadial A(I)的制備方法參照Meng Shao等人發表的文獻(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的方法。

實施例2 Psiguadial A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(474mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.16g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和12mL的50％氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏度攪拌8h。8h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(502mg，73％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.44(s,2H),7.24(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.31(s,4H),3.89(s,1H),3.74(s,4H),2.30(s,1H),2.12(s,1H),2.02(s,1H),1.92(s,1H),1.79(s,1H),1.73(s,1H),1.51(d,J＝19.8Hz,3H),0.99(s,3H),0.95(d,J＝4.7Hz,7H),0.85(s,3H),0.53(s,1H),0.43(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.69(s),170.54(s),165.42(s),163.38(s),142.72(s),129.71(s),127.96(s),127.08(s),118.00(s),116.82(s),114.82(s),72.73(s),40.19(s),34.75(s),34.32(s),31.75(s),30.93(s),28.09(s),26.43(s),24.48(s),23.74(s),21.18(s),20.77(s),19.99(s),14.39(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₃₄H₄₁Br₂O₅:689.1300；found 689.1303.

實施例3 Psiguadial A的O-(哌嗪基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和無水哌嗪(3446mg，40mmol)，混合物加熱回流4h。反應結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集黃色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末(254.8mg,73％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,2H),7.23(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.02(s,4H),3.96(s,1H),2.62(d,J＝8.0Hz,12H),2.31(s,8H),2.10(s,1H),2.01–1.85(m,3H),1.79(s,1H),1.66(s,1H),1.44(s,2H),1.38(s,1H),1.27(s,1H),1.05(s,2H),1.03(d,J＝45.8Hz,3H),0.93–0.70(m,9H),0.52(s,1H),0.23(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.62(s),170.44(s),165.27(s),163.22(s),142.59(s),129.52(s),127.80(s),126.91(s),117.86(s),116.67(s),114.65(s),69.34(s),54.61(s),54.05(s),45.17(s),40.02(s),34.61(s),34.17(s),30.77(s),27.92(s),26.29(s),24.33(s),23.57(s),21.00(s),20.62(s),19.84(s),14.21(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₅₉N₄O₅:699.4485；found:699.4480。

實施例4 Psiguadial A的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物(IV)的合成

將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和1H-四氮唑(1401mg，20mmol)，混合物加熱回流2h。反應結束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。因為互變異構作用，在反應條件下會生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產物。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1，v/v)，收集黃色集中洗脫帶，再將洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，依次收集兩個淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物IV的淡黃色固體(89.9mg,27％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,2H),10.40(s,1H),10.26(s,1H),7.24(s,2H),7.21(d,J＝10.0Hz,3H),4.65(s,1H),4.60(s,1H),4.45(d,J＝2.6Hz,5H),4.42(s,1H),4.07(s,1H),2.20(s,1H),1.93–1.84(m,4H),1.72(s,1H),1.60–1.21(m,4H),0.99(s,3H),0.92–0.71(m,9H),0.55(s,1H),0.25(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.53(s),170.35(s),165.18(s),163.13(s),144.94(s),142.48(s),129.45(s),127.69(s),126.84(s),117.75(s),116.60(s),114.54(s),67.03(s),47.04(s),39.95(s),34.52(s),34.10(s),30.66(s),27.85(s),26.18(s),24.26(s),23.46(s),20.93(s),20.51(s),19.77(s),14.10(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₃₆H₄₃N₈O₅:667.3356；found:667.3352。

實施例5 組合物對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響

1.1材料

貝那普利，北京諾華制藥有限公司生產；羥脯氨酸(HYP)試劑盒，南京建成生物公司；纖維連結蛋白(FN)試劑盒購自上海生物制品所。

組合物的制備：將研磨之后過200目網的85mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網的15mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

實驗動物：普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠。

1.2試驗方法與結果

大鼠60只，隨機分6組，即假手術組、模型組、苯那普利灌胃10mg/kg組、組合物灌胃10mg/kg組、化合物III灌胃10mg/kg組、化合物IV灌胃10mg/kg組，動物喂養1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側臥位固定與手術臺上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術區，行左側腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側輸尿管，假手術組僅切開腹腔并游離左側輸尿管，但不結扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結扎兩道，上一道結扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結扎點剪斷輸尿管，逐層縫合，術后10天10％水合氯醛麻醉后處死各組動物，取血，按纖維連結蛋白測定說明測定說明纖維聯接蛋白(FN)。生理鹽水反復灌洗后留取左側腎臟，腎組織經4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。

常規病理學檢①肉眼觀察：假手術組腎臟顏色鮮紅，表明光滑，包膜光澤，無粘連。模型對照組腎臟體積增大，顏色蒼白，表明呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數區域腎包膜粘連。②光鏡檢查：假手術組腎單位結果清晰，腎小球囊無擴張或炎細胞浸潤。模型對照組大片腎小管壞死，腎間質纖維細胞增生，腎小管擴張，內有大量棕黃色遮光物質或壞死脫落的上皮細胞，腎小球數目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。組合物給藥組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態學改善，與模型對照組比較有明顯差異。而化合物III給藥組和化合物IV給藥組與模型對照組無顯著性差異。

表1組合物對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響

*p<0.05，與模型組相比較

對各組FN、HYP進行T檢驗。結果見表1，組合物灌胃10mg/kg顯著降低FN、HYP水平(與模型對照組比較，P<0.05)；而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能顯著降低FN、HYP水平。

結論：組合物能夠顯著降低腎間質纖維化FN、HYP水平的升高，抑制腎間質纖維化，可以用來制備抗腎纖維化藥物?；衔颕II和化合物IV不能夠顯著降低腎間質纖維化FN、HYP水平的升高，不能抑制腎間質纖維化，不可以用來制備抗腎纖維化藥物。

實施例6本發明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規輔料18克，混勻，常規壓片機制成100片。

實施例7本發明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。