本發明涉及一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑，屬于抗人乳頭瘤病毒緩釋給藥技術領域。

背景技術：
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人乳頭瘤病毒以人體的皮膚和粘膜的復層鱗狀上皮為唯一宿主，可引起惡性增生，極易造成口腔、男女生殖器官的感染及病變。據權威機構發布的數據，女性一生中對人乳頭瘤病毒的感染率高達80％-90％，其中超過10％的女性感染者發生病變，嚴重者導致宮頸癌的發生。感染人乳頭瘤病毒的女性大多數患有陰道炎、宮頸炎等常見疾病，使得陰道微環境更加復雜，導致目前現有的凝膠劑和栓塞劑的給藥效果降低且因其無緩釋作用，易造成病情反復且機體易于產生耐藥性，影響了藥效的發揮和治療的效果。因此，臨床上急需一種既能控制人乳頭瘤病毒感染又具有高效穩定的多重殺菌性能的緩釋給藥制劑。

技術實現要素：
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針對上述問題，本發明要解決的技術問題是提供一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

本發明的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑以重量份計由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5-10份，致孔劑80-90份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白2-5份，所述的殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在50℃-80℃反應所得。

優選的，所述致孔劑為N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六環或二甲基亞砜。

進一步優選，所述的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑以重量份計由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔劑85份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白5份；所述的殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在65℃反應所得，所述的致孔劑為二甲基亞砜。

本發明的一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑的制備方法為：步驟一、將原料中的殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應8-12小時，旋蒸法除去丙酮；其中所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為25-68∶10-35∶0.02-0.5；

步驟二、將步驟一所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過濾；

步驟三、將步驟二所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為5-10∶80-100∶2-5∶20-25；

步驟四：將步驟三所得的水相緩慢滴加到有機相中，以8000-10000r/min的轉速剪切10-15分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

進一步優選，所述步驟二中所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為65∶35∶0.5；

進一步優選，所述的步驟三中聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為10∶100∶5∶25。

本發明的有益效果：采用聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯，致孔劑和含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白組成多孔緩釋制劑，其中殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白采用殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白聚合的方法得到，該聚合物既保留了殼聚糖季銨鹽的多重殺菌性能，又保留了乳球蛋白的特異性，抑制人乳頭瘤病毒的DNA復制活性，提高了給藥的有效性。本發明采用聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸嵌段共聚物為基質，該材料具有一定親水性且降解時間適中，降解產物可完全被吸收，在人體內無殘留；本發明采用冷凍干燥工藝，最大限度的保留了殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的生物特異性，致孔劑在冷凍干燥過程中被除掉而留下孔徑適中的多孔結構，該結構利于殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的緩慢釋放。

附圖說明：

為了易于說明，本發明由下述的具體實施及附圖作以詳細描述。

圖1為本發明實施例1-4中制備的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑臨床使用結果分析圖；

圖2為多孔緩釋制劑的溶出曲線。

具體實施方式：

本具體實施方式采用以下技術方案：所述的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑以重量份計由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5-10份，致孔劑80-90份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白2-5份，所述的殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在50℃-80℃反應所得。

優選的，所述致孔劑為N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六環或二甲基亞砜。

進一步優選，所述的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑以重量份計，由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔劑85份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白5份；所述的殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在65℃反應所得，所述的致孔劑為二甲基亞砜。

本具體實施方式的一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑的制備方法為：步驟一、將原料中的殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應8-12小時，旋蒸法除去丙酮；其中所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為25-68∶10-35∶0.02-0.5；

步驟二、將步驟一所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過濾；

步驟三、將步驟二所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為5-10∶80-100∶2-5∶20-25；

步驟四：將步驟三所得的水相緩慢滴加到有機相中，以8000-10000r/min的轉速剪切10-15分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

進一步優選，所述步驟二中所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為65∶35∶0.5；

進一步優選，所述的步驟三中聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為10∶100∶5∶25。

本具體實施方式含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑的用途，在于抗人乳頭瘤病毒感染且多重殺菌的緩釋給藥。

以下結合具體實施例來對本發明作進一步的描述。

實施例1

一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑，由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5份，致孔劑80份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白2份；所述殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在56℃反應所得，所述多孔緩釋制劑的孔徑為40微米，所述致孔劑為二甲基亞砜。實施例1的制備方法，包括以下步驟：

①將殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應10小時，旋蒸法除去丙酮；所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為60∶35∶0.02；

②將步驟①所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過夜；

③將步驟②所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為5g∶80g∶2g∶20g；

④將步驟③所得的水相緩慢滴加到有機相中，以10000r/min的轉速剪切10分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

實施例2

一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑，由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯8份，致孔劑90份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白2份；所述殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在56℃反應所得，所述多孔緩釋制劑的孔徑為120微米，所述致孔劑為二甲基亞砜。實施例2的制備方法包括以下步驟：

①將殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應8小時，旋蒸法除去丙酮；所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為70∶30∶0.5；

②將步驟①所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過夜；

③將步驟②所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為10g∶80g∶2g∶25g；

④將步驟③所得的水相緩慢滴加到有機相中，以10000r/min的轉速剪切10分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

實施例3

一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑，由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔劑85份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白5份；所述殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在56℃反應所得，所述多孔緩釋制劑的孔徑為80微米，所述致孔劑為二甲基亞砜。

實施例3的制備方法包括以下步驟：

①將殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應10小時，旋蒸法除去丙酮；所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為65∶35∶0.5；

②將步驟①所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過夜；

③將步驟②所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為10g∶100g∶5g∶25g；

④將步驟③所得的水相緩慢滴加到有機相中，以10000r/min的轉速剪切10分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

實施例4

一種含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑，由以下原料組成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯8份，致孔劑85份和殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白5份；所述殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白是由殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白在56℃反應所得，所述多孔緩釋制劑的孔徑為60微米，所述致孔劑為二甲基亞砜。

實施例4的制備方法，包括以下步驟：

①將殼聚糖季銨鹽與乳球蛋白加入反應瓶中，以丙酮為溶劑，在催化劑存在條件下回流反應12小時，旋蒸法除去丙酮；所述殼聚糖季銨鹽、乳球蛋白和催化劑的質量比為75∶25∶0.05；

②將步驟①所得反應物加入PBS緩沖溶液中溶解，使用1000D透析袋透析過夜；

③將步驟②所得殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白溶于蒸餾水中，得到水相，將聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔劑中，得到有機相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔劑、殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白和蒸餾水的質量比為8g∶80g∶5g∶25g；

④將步驟③所得的水相緩慢滴加到有機相中，以10000r/min的轉速剪切10分鐘，經冷凍干燥工藝制備得到含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑。

將實施例1-4所得的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑進行臨床應用試驗，過程和結果如下：

選用150名既感染人乳頭瘤病毒且有宮頸炎的婦女作為試驗對象，實施例1-4每組隨機分配30患者，隨機分配30患者使用上市婦科凝膠。使用方法均為每晚睡前將含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑放入陰道深處，每晚一支，連續使用7天為一個療程，一個療程后復查，結果如圖1所示。圖1為臨床使用結果分析圖；

將實施例1-4所得的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑進行體外溶出實驗，溶出曲線如圖2所示，圖2為多孔緩釋制劑的溶出曲線。

體外溶出實驗表明，本發明的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑具有優良的緩釋給藥效果，給藥速度均勻、可控。臨床統計結果表明，本發明的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑對人乳頭瘤病毒和宮頸炎癥具有良好的治愈效果，給藥兩天，病情得到有效控制且無不良反應。給藥一個療程后，治愈率高達90％以上，一個月后復查，未發生復發和藥物依賴性。本發明的含殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的多孔緩釋制劑既保留了殼聚糖季銨鹽的多重殺菌性能，又保留了乳球蛋白的特異性，抑制人乳頭瘤病毒的DNA復制活性，提高了給藥的有效性。本發明制備的基質材料具有特殊的多孔結構，有利于殼聚糖季銨鹽修飾的乳球蛋白的緩慢釋放。

以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特征和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。