本申請涉及一種脫環氧埃坡霉素衍生物藥物制劑的制備方法及藥物制劑的在治療癌癥的藥物制劑中的應用，尤其涉及該等化合物藥物制劑的制備方法、單獨用藥或與其它腫瘤藥物進行聯合使用治療癌癥，特別是晚期乳腺癌的臨床應用。本申請的特征在于獨特的劑型和臨床給藥方法，充分體現了脫環氧埃坡霉素衍生物的療效以及具有較低不良反應，特別是基本沒有骨髓抑制毒性方面的優勢。
背景技術：
全球每年新診斷的癌癥患者為1400多萬，癌癥已成為對人類的危害非常嚴重的常見病、多發病。由于癌癥的早期診斷和治療還沒有達到令人滿意的程度，大多數癌癥患者經過手術或放療后，仍會復發或轉移到全身，需要接受全身治療。目前，用于全身治療、特別是治療中晚期癌癥患者的主要手段仍以化學藥物治療為主，對于既往接受過大劑量蒽環類抗生素和紫杉類治療的晚期乳腺癌患者而言，目前除已批準的卡培他濱和吉西他濱外，可以選擇的治療藥物很少，且吉西他濱在二線或三線背景下的應用不明確。其它藥物包括長春瑞濱、貝伐單抗+紫杉醇、順鉑、卡鉑、依托泊甙、長春堿以及很少應用的氟尿嘧啶注射液，但幾乎未有證據提示其產生了顯著療效。因此開發安全和有效的小分子抗癌藥物仍是各國積極尋找的癌癥治療方法和途徑。
埃坡霉素a(epoa)和埃坡霉素b(epob)為聚酮化合物衍生的16元大環內酯新型化合物，最初從土壤細菌sorangiumcellulosum菌株soce90中分離出來，其結構式如下所示。它們為最先被分離，合成并確證的埃坡霉素,(hofleetal.,1996,angew.chem.int.ed.engl.35(13/14):1567-1569；gerthetal.,1996.j.antibiotics49(6):560-563)。聚酮化合物在自然界存在于多種生物體中，由聚酮化合物合成酶pks(polyketidesynthase)合成。
埃坡霉素對治療癌癥有巨大的潛能。雖然在結構上不相似，但埃坡霉素的作用機理和主流化療藥物紫杉醇(paclitaxel)極為相似，即誘導微管蛋白聚合、穩定微管組裝。這些化合物表現出對不同癌細胞系的強大細胞殺傷力。特別是，它們對具有多藥耐藥性(mdr)的腫瘤細胞系，尤其是對耐紫杉的腫瘤細胞系，顯示出引人注目的效果(altmannetal.,2000.biochem.biophys.acta.1470(3):m79-91；bollagetal.,cancerres.55(11):2325-2333)。
雖然埃坡霉素化合物具有顯著的治療學性質，但由于某些性質方面的原因，他們對藥學配制和臨床應用現有技術中的技術人員而言還存在一些困難，本申請式i化合物可以安全的進行調劑并可以通過注射進行給藥。許多抗癌藥具有與毒性有關的作用，但用于毒性，許多有效的抗癌藥的治療局限很差，因此通過合適的制劑配方、給藥方法和給藥劑量以減少或避免與抗癌藥物相關的毒性，從而獲得可臨床使用的有效抗癌藥物。
技術實現要素：
本申請包含了一種用于治療實體癌癥的脫環氧埃坡霉素非腸道用藥的藥物制劑和應用。
本申請的方法和制劑描述了一種用于包含了脫環氧埃坡霉素式i的制劑及其制備方法。
脫環氧埃坡霉素衍生物在水性介質中具有非常低的溶解度，并在與水性介質接觸后會迅速析出或降解，難于進行制備。本申請的藥物制劑解決了這個問題。
根據一個方面，本申請提供了一種藥物制劑，其包含作為脫環氧埃坡霉素衍生物的式i化合物的晶體和賦形劑，所述賦形劑由醇(如乙醇)、非離子表面活性劑和增溶劑以一定比例混溶，其中醇(如乙醇)30-50％(v/v)，非離子表面活性劑為10-50％(v/v)，增溶劑為20-50％(v/v)：
式i中，r2＝ch3或h。
根據一些實施方式，所述賦形劑由醇：非離子表面活性劑：增溶劑混合后組成，例如，賦形劑可以是由無水乙醇：聚氧乙烯蓖麻油(cremorphoreel)：丙二醇(體積比)＝5：2：3組成。
根據一些實施方式，本申請的藥物制劑為施用于胃腸道外的溶液形式。
根據一些實施方式，本申請的藥物制劑中的式i化合物選自其中r2＝ch3的化合物。
根據一些實施方式，在本申請的藥物制劑中，所包含的非離子表面活性劑為聚氧乙烯蓖麻油和/或增溶劑是丙二醇。
根據一些實施方式，本申請的藥物制劑中式i化合物的濃度為5-20mg/ml，例如為10mg/ml。該藥物制劑可被裝在獨立的小瓶中為3ml或5ml。
根據本申請的另一方面，本申請涉及上述藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。
根據本申請的一些實施方式，所述抗腫瘤藥物為抗實體瘤藥物。具體地，所述實體瘤可選自乳腺癌、肺部腫瘤、淋巴腫瘤、結腸癌、前列腺癌、腦癌、卵巢癌、肝癌、頭頸腫瘤、胃癌。例如，乳腺癌、肺癌、肝癌。
根據本申請的一些實施方式，所述抗腫瘤藥物用于治療之前沒有接受過對實體癌治療的患者或之前已接受過實體癌治療的患者。
根據本申請的一些實施方式，所述抗腫瘤藥物用于治療紫衫烷類抗腫瘤藥物治療抗藥或復發的腫瘤或難以治療的腫瘤。
根據本申請的一些實施方式，本申請的藥物制劑在一定數量適宜的非腸道的稀釋 劑進行稀釋，從而使得其中所說衍生物的濃度為0.05mg/ml至0.5mg/ml。所用的稀釋劑是注射用5％葡萄糖注射液、無菌注射用水或無菌注射用生理鹽水，例如為無菌注射用生理鹽水。
根據本申請的一些實施方式，所述藥物制劑為靜脈內給藥。例如，在第1至第5天靜脈給藥，每天給藥一次，連續給藥5天，每3周一個治療周期，以靜脈輸注的形式給藥。所述式i化合物的給藥劑量是約10mg/m2/天至50mg/m2/天，例如約40mg/m2/天的劑量進行靜脈內給藥。
根據本申請的一些實施方式，其中所述式i化合物是在約30分鐘至約3小時的時間內給藥，例如在約1.5小時的時間內給藥。
根據本申請的一些實施方式，所述藥物制劑可與至少一種其它抗癌藥物聯合使用。
根據本申請的一些實施方式，所述其它抗癌藥物選自化療藥物5-氟尿嘧啶類如卡培他濱(capecitabine)、健澤(gemcitabine),或者選自烷化劑如卡鉑(carboplatin)和順鉑(cisplatin),或者選自靶向藥物如iressa、gleevec、凱美納、lapatinib或單克隆抗體藥物如曲妥珠單抗herceptin、貝伐珠、perjeta，或腫瘤免疫治療藥物pd-1等，或者選自激素類內分泌治療藥物諾雷德、來曲唑。
根據本申請的一些實施方式，所述化合物采用每3周一個治療周期的給藥，其中所述式i化合物在第1至第5天，每天給藥一次，連續給藥5天，以靜脈輸注的形式進行給藥；當其它抗癌藥物選自卡培他濱，即與卡培他濱聯合使用時，卡培他濱在第1天至第14天，連續給藥14天，每天給藥2次，口服。例如，式i的化合物是以約10mg/m2/day至50mg/m2/day的劑量進行靜脈內給藥的；其中卡培他濱是以約1000mg/m2/day至2500mg/m2/day的劑量進行口服給藥。再例如，式i的化合物是以約30mg/m2/day的劑量進行靜脈內給藥的,卡培他濱是以約2000mg/m2/day的劑量進行口服給藥。
本申請還涉及一種治療腫瘤的方法，其包含將式i化合物施用于有此需求的患者。
本申請還涉及一種制備本申請的式i化合物的晶體的方法，其包括以下步驟：將加入化合物i在醇(如乙醇)與水40％-60％v/v,優選50％中混合后，以20-50ml/g,在 不高于室溫的條件下,使結晶析出，獲得的晶體通過真空干燥，在24小時至98小時，優選48小時，干燥后得到化合物的晶體。
發明詳述
本申請的藥物制劑可采用如下方法制得。將式i化合物通過一種醇如乙醇與水40％-60％v/v,優選50％，體積為20-50ml/g,進行結晶析出，獲得的晶體通過真空干燥，在24小時至98小時，優選48小時，可制得保存和制備制劑的原料藥物，可除去產品中的殘余溶劑和水。為了將制劑溶液中非離子表面活性劑的數量降到最低，干燥的式i化合物所述的衍生物用50％v/v無水乙醇(usp)，30％v/v丙二醇(usp)和20％v/v非離子表面活性劑的混合物為溶劑的賦形劑來進行制備制劑，其中所述的非離子表面活性劑優選的是聚氧乙烯蓖麻油(cremophorel)，提供足夠數量的賦形劑以形成一種具有約5mg/ml至約20mg/ml的式i化合物的溶液，優選約10mg/ml，可使式i化合物的初始制劑和稀釋后制劑表現出更好的穩定性。同時因使用丙二醇增溶劑，將蓖麻油的濃度降到最小的需要量，減少了該溶劑引發的過敏變態反應。用本申請制劑所觀測到的變態反應水平顯著低于某些其他抗腫瘤制劑(含50％蓖麻油)。
本申請提供的藥物制劑中的式i化合物可以多種光學異構體、立體異構體的形式存在，也可與各種有機酸和無機酸形成鹽。
本申請所制備的制劑可通過罐裝機組進行無菌罐裝至玻璃小管或小瓶，優選5ml西林瓶，可裝含約0.5ml至約5ml的制劑，加蓋藥用鍍聚四氟乙烯類膜丁基橡膠塞后密封可在至少2-8℃的溫度下保存超過12個月至24個月。
對本申請制劑中的化合物的最終稀釋可以用適宜的稀釋劑來完成，如可以用5％葡萄糖注射液、無菌注射用水或無菌注射用生理鹽水和乳酸鹽林格氏注射液，制得可注射液的體積約為50ml至300ml，優選約為100ml至250ml。稀釋后的溶液在進行給藥之前可以被存放不低于約24小時，從而使得其中所說衍生物的最終給藥濃度優選包含約為0.05mg/ml至0.5mg/ml的式i化合物。
本申請所制備的制劑通過上述方法稀釋后可用于靜脈滴注，靜脈滴注時間為30分鐘-3小時，優選1.5小時，每天給藥1次，連續5天給藥，每21天為一治療周期，可聯合口服卡培他濱1000mg/m2/次，每天2次，持續1～14天，21天為一治療周期。 所述式i化合物采用每3周一個治療周期的給藥；在第一至第五天，每天給藥一次，連續給藥5天，以靜脈輸注的形式進行給藥，所述的靜脈輸注是在約45分鐘至約3小時的時間內進行給藥的，優選在約1.5小時的時間內進行給藥。
本申請還涉及治療癌癥患者的方法，該方法包括給患者施用一種或多種治療有效量的由式i所示的化合物或其制劑，優選進行靜脈給藥的方法。在一個實施案中，描述了一種用于包含了脫環氧埃坡霉素式i的給藥方案和給藥劑量，采用各個分割劑量的形式來進行給藥，特定的患者其給藥劑量和給藥頻率是可變的，取決許多因素，如藥物的代謝、患者的一般情況以及癌癥疾病的嚴重程度和對藥物的不良反應的不同等。優選將本申請的藥物制劑每天給藥一次，連續為給藥5天，約3-4周(18-28天，優選3周，18-24天)為一個治療周期，每周靜脈輸注的藥物劑量范圍約5mg/m2/day至50mg/m2/day，并且更有選為20mg/m2/day至40mg/m2/day。一般給藥至患者出現了藥物相關的不良反應時需終止給藥或降低劑量，或延遲給藥。減低劑量按照起始劑量的20％-30％，優選20％繼續給藥。
本申請進一步提供了具有式i所示的脫環氧埃坡霉素衍生物在抗腫瘤中的應用。在治療時，包括給癌癥患者非腸道給藥有效治療量的本申請藥物制劑，如果必要的話，可以重復給藥，以防止癌擴散或者是根治癌癥。另一方面，本申請的藥物制劑可以單獨使用,也可以與其它抗癌藥物或療法共同使用。例如,可以和本申請的化合物一起用于聯合治療的其它化療藥可選自抗代謝物,如5-氟尿嘧啶和健澤(gemcitabine),或者選自烷化劑如卡鉑(carboplatin)和順鉑(cisplatin),或者選自靶向藥物如iressa、gleevec、凱美納、lapatinib或單克隆抗體藥物如曲妥珠單抗herceptin，貝伐珠、perjeta或腫瘤免疫治療藥物pd-1等，或者選自激素類內分泌治療藥物諾雷德，來曲唑。聯合療法可以采用順次給藥的方式,即先后分別給予本申請的藥物制劑和其它化療藥，也可以采用同時給藥的方式。
本申請的藥物制劑可用于治療和/或預防轉移性腫瘤以及原發瘤。本申請也包含以前單獨或同時接受了實體瘤的放療和化療的患者的治療，也可用于天然對紫衫類藥物不敏感或后來變得對其不敏感的腫瘤。
在一個實施案中，本申請的藥物制劑的給藥劑量包含每天給藥一次，連續為給藥5天，約三周為一個治療周期，每天靜脈輸注的劑量范圍約5mg/m2/天至50mg/m2/天， 并且更有選為20mg/m2/天至40mg/m2/天。
本申請的式i化合物可與其它的抗癌藥物聯合給藥，其它的抗癌藥物包括烷化劑、抗代謝類、抗生素類、激素類、植物產品、單克隆抗體藥物或腫瘤免疫治療藥物。
本申請還包含了含式i化合物的藥物制劑，如注射液，與卡培他濱聯合使用用于治療晚期轉移性乳腺癌的用途。
本申請還提供了式i化合物(或稱為“脫環氧埃坡霉素衍生物”)與免疫治療藥物聯合使用用于治療實體瘤，包括晚期轉移性乳腺癌或肺癌的用途。
本申請的脫環氧埃坡霉素衍生物與卡培他濱聯合用于治療晚期轉移性乳腺癌時，治療有效量的脫環氧埃坡霉素衍生物與固定劑量卡培他濱聯合使用。
具體實施方式
以下實施例僅為示例目的,不應構成對本申請的限定。
制備實施例
實施例1.制劑的制備
制劑制備工藝包括：結晶體的制備、制劑配制、過濾、裝填、加塞、密封等步驟
1)、將干燥的式i化合物(其中r2＝ch3(或稱utd1))75克固體用100％乙醇20ml/g濃度溶解后，采用0.2um膜無菌過濾，濾液在攪拌下，緩慢加入40％水后，加入少量晶種后繼續攪拌30分鐘。然后將其余的水加入到溶液中至乙醇濃度為50％。在攪拌過程中，利用冷卻水浴，使結晶溶液溫度至4℃，繼續攪拌2-12小時。將晶體真空抽濾，隨后迅速用4℃的冷卻30％乙醇水溶液進行洗滌。將晶體放在真空干燥箱中干燥48小時。獲得產品60g，可置于清潔干燥的玻璃瓶中保存。
2)由步驟1)獲得的產品，每克化合物用20g無水乙醇(藥典級)溶解形成一種溶液，在攪拌條件下，加入21.0g的聚氧乙烯蓖麻油(藥典級)，攪拌混勻10-15min，然后將31.1g的丙二醇(藥典)加入到混合溶液中繼續攪拌10-15min，最后加入19.45g的無水乙醇(藥典級)，繼續攪拌直至溶液澄清(5～10min)，制得10mg/ml含式i化合物的制劑溶液，其中賦形劑無水乙醇：聚氧乙烯蓖麻油：丙二醇的體積比為5：2：3。
3)由步驟2)所得的制劑通過0.2um的過濾器(millipore)過濾除菌，除菌后將制劑灌裝到5ml的西林瓶中，每個西林瓶罐裝3ml+0.25ml或5ml+0.4ml，之后加塞、密封，于2～8℃下保存備用。保存時間大于24個月。在這些過程中沒有觀察到藥物降解的現象。
生物活性實驗
本生物活性實驗使用的本申請的藥物制劑均為實施例1所制備的制劑。
實施例2.本申請的藥物制劑在體內采用靜脈推注給藥對人體腫瘤細胞異種移值模型的抗腫瘤實驗
1)動物數：試驗組及陽性對照組每組6只裸小鼠，體重：20-21克，陰性對照各為兩組。
2)劑量設置及給藥方案：根據約定劑量進行(見實驗結果中的描述)。注射體積0.2ml/鼠。
3)試驗對照：陰性對照為相應的溶媒，陽性對照為臨床廣泛應用的抗腫瘤藥物taxol(紫杉醇)。
4)試驗主要步驟：
無菌條件下取生長旺盛的瘤源，以勻漿法制備成約1-3×107/ml細胞懸液，于相應宿主腋皮下接種0.2ml/每鼠，待種瘤觸及后開始給藥，按實驗設計方案給藥，三至四周左右處死各組動物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率：
腫瘤抑制率％＝[(陰性對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重)/陰性對照組平均瘤重)×100％
5)試驗結果：
將本申請的制劑以2.5、1.0、0.4mg/kg/d，iv×10bid方案給藥，對人體腫瘤腸癌hct-15異種移植于腋皮下實體瘤模型的抑瘤率分別為：87.74％、77.42％、60.19％，紫杉醇對照組10mg/kg/次iv×7qd給藥方案的療效抑瘤率52.2％
式i化合物按將本申請的制劑以劑量2.5、1.0、0.4mg/kg/次iv×10bid方案給藥， 對人體腫瘤肝癌hep-g2異種移植于腋皮下實體瘤模型的抑瘤率分別為：81.26％、69.41％、58.67％，紫杉醇對照組10mg/kg/次iv×7qd給藥方案的療效抑瘤率52.2％。
式i化合物按將本申請的制劑以劑量2.5、1.0、0.4mg/kg/次iv×10bid方案給藥，對人體腫瘤前列腺癌pc-3異種移植于腋皮下實體瘤模型的抑瘤率分別為：70.00％、61.15％、49.08％，紫杉醇對照組10mg/kg/次iv×7qd給藥方案的療效抑瘤率41.31％。
本實施例充分說明式i化合物可以用于制備治療抗腸癌、肝癌、前列腺癌等實體瘤的藥物，療效較對照組優。
實施例3.式i化合物與其它化療藥物聯合使用對人體腫瘤異種移植于腋皮下實體瘤模型腸癌的療效
試驗方法同實施例1，式i化合物以0.4mg/kg/d，iv×10bid劑量、或該式i化合物以該劑量方案合并吉西他濱(gemcitabine)ed50劑量50mg/kg/d，iv×3,q3d、或單獨吉西他濱50mg/kg/d，iv×3,q3d分別給藥，對人體腫瘤肺癌a549異種移植于腋皮下實體瘤模型的抑瘤率分別為：51.28％、82.18％、39.23％。
式i化合物以0.4mg/kg/d，iv×10bid，或該式i化合物以該劑量方案合并順鉑(ddp)ed50劑量1mg/kg/d，iv×7,qd及單獨ddp1mg/kg/d，iv×7,qd分別給藥，對人體腫瘤肝癌hep-g2異種移植于腋皮下實體瘤模型兩次實驗結果的抑瘤率分別為：58.67％、85.33％、45.33％。
式i化合物以0.4iv×10bid方案給藥，或該式i化合物以該劑量方案合并5fued50劑量15mg/kg/d，iv×7qd，或單獨5fu15mg/kg/d，iv×7qd分別給藥，對人體腫瘤腸癌hct-15異種移植于腋皮下實體瘤模型的抑瘤率分別為：60.19％；73.68％；42.71％。
體內低劑量合并幾種常用的抗腫瘤化療藥(ed50的劑量)顯示協同或增效的效果：合并gemcitabine對肺癌a549、合并ddp對肝癌hepg2均顯示有協同效果；utd1合并5fu對腸癌hct-15也顯示增效的趨勢。
實施例4化合物的靜脈給藥
符合入選標準的21例轉移性晚期實體瘤患者接受了6個劑量組(25–225mg/m2)的式i化合物的治療，從而對mtd(最大耐受劑量)，dlt(限制性毒性)、 藥代動力學和藥效學進行了抗腫瘤藥物的評估，
受試者中男性患者5名，女性患者16名，年齡為25-64歲，其中乳腺癌患者10名，非小細胞肺癌患者4名，惡性黑色素瘤患者2名，乙狀結腸癌、口底頜下腺癌、肩胛小細胞惡性腫瘤及葉狀囊肉瘤患者各1名，其中19例患者既往接受過其他化療藥物的治療。
將按照實施例1制備的式i化合物制劑，保存在單個的小西林瓶中，規格為50mg:5ml,按照患者體表面積取適當的制劑，用100ml注射用生理鹽水稀釋后，用定量輸液泵勻速靜脈點滴，在3小時滴完。采用每3周第一天給藥一次，3周為一個治療療程的給藥方法。在治療期間對患者進行dlt的監測。結果表明式i化合物可以以已高至170mg/m2的劑量每3周給藥而不會出現嚴重的毒性，也未發生過敏變態反應。
在第2個研究中，符合入選標準的15名晚期實體瘤患者接受了3個劑量組(35，40，45mg/m2/d)式i化合物的治療，男性患者3名，女性患者12名，其中乳腺癌患者8名，直腸癌患者2名，非小細胞肺癌、胃癌、左肩胛惡性腫瘤各1名，全部患者都既往接受過其他化療藥物的治療。；采用每天靜脈滴注1.5小時，連續注射5天，每3周為1個治療療程。結果表明式i化合物可以以高至40mg/m2/day的劑量(mtd)每天給藥，連續給藥5天，每3周一個治療，至少可用藥6個治療周期以上，而不會出現嚴重的毒性，尤其是沒有其他常規化療藥物和其他給藥方式所發生的嚴重骨髓抑制的不良反應。該研究進一步表明既然接受過化療治療的乳腺癌和結腸癌、肺癌等對于式i化合物的治療有反應。
實施例5式i化合物聯合卡培他濱治療晚期乳腺癌患者的靜脈給藥
符合入選標準的33例轉移性乳腺癌患者(年齡在28-71歲)接受了3個劑量組(25，30，35mg/m2/d)式i化合物，每天靜脈滴注1.5小時，連續給藥1-5天，分別與卡培他濱(2000mg/m2/d，每天2次,持續14天)聯合治療，每3周一個治療周期。全部受試患者均接受過其它化療藥物的治療，有30例患者既往接受過轉移性化療方案的治療，27例既往接受過紫杉烷類和蒽環類用于轉移性化療的治療，接受過紫杉類、蒽環類和卡培他濱3種以上藥物治療的有11例。結果表明，32位受試者可以療效評價，其中1名cr，13名pr，15名sd，3例pd，客觀緩解率orr(完全緩解cr和部分緩解pr)為43.8％。緩解的中位出現時間為6周。中位治療周期數為6(也是方 案要求的試驗終止治療周期數)。中位緩解持續時間為7.8個月。中位pfs為7.9個月，治療期間沒有發生患者死亡，也未發生sae，手足麻木疼痛(pn)和掌足紅腫疼痛(手足綜合癥)為較常見的不良事件，也沒有發生嚴重的骨髓抑制。采用本申請的聯合用藥方案沒有增加卡培他濱的相關毒副作用，尤其是手足綜合癥。由此證明采用本申請的制劑和給藥方案式i化合物的療效顯著，毒性可控較低。