本發明涉及中醫藥領域，具體是涉及一種利用動物腎臟的補腎藥及其制備方法。
背景技術：
面對我國老年人口急劇增加的現狀，如何提高老年人生活質量、防治老年病是目前我國要解決的一大問題。中醫基礎理論指出：腎位于腰部，脊柱兩側，左右各一，其主要功能是藏精，主人體生長、發育與生殖。人的一生隨腎精氣的盛衰而出現生、長、壯、老的變化過程。腎虛癥的老年患者，重點表現為對原發性骨質疏松癥、卵巢早衰、圍絕經期綜合征等這些情況。
雖然現有很多補腎藥，但不是療效不明顯，就是調理效果不全面。即使生活中也有以臟補臟的飲食措施，可其大多效果甚微。
技術實現要素：
為了解決上述問題，本發明的目的是：一種利用動物腎臟的補腎藥及其制備方法，主要針對中醫腎虛癥，該補腎藥能對老年性骨質疏松癥、生殖功能低下、卵巢早衰及延緩衰老起到不可替代的作用。特別動物腎臟采用胎腎，其制備出的補腎藥療效顯著。
本發明的技術方案是：一種利用動物腎臟的補腎藥，其特征是：該補腎藥以動物腎臟為原料藥材或主藥材。
所述的動物腎臟為胎腎。
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟30-50份、五味子10-20份、西洋參5-20份、生地10-20份、肉蓯蓉10-20份、鹿茸5-15份、海馬5-15份、當歸10-20份、紅景天10-15份、山芋肉10-25份、山藥6-12份、玉竹6-10份、覆盆子6-10份、枸杞子5-6份、胡桃5-9份、金櫻子2-3份。
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，其特征是：包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進行細胞分離；
3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細胞制作成口服制劑。
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，其特征是：包括如下步驟：
步驟1)將動物腎臟30-50份去除結締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的動物腎臟中進行細胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；備用；
步驟4)將五味子10-20份、西洋參5-20份、生地10-20份、肉蓯蓉10-20份、鹿茸5-15份、海馬5-15份、當歸10-20份、紅景天10-15份、山芋肉10-25份、山藥6-12份、玉竹6-10份、覆盆子6-10份、枸杞子5-6份、胡桃5-9份、金櫻子2-3份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊；其中，混懸液中含腎源細胞的含量為20-150毫克/毫升。
所述的細胞分離是采用納米技術進行細胞分離。
所述的納米技術進行細胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術，利用密度梯度原理，使腎源細胞分離出來。
本發明的優點是：本發明的補腎藥能夠用于防治因增齡腎虛而引起的原發性骨質疏松、卵巢早衰、更年期綜合征等病，其容易吸收，效果顯著。同時配以輔助的中藥藥材使其效果更為全面。本發明采用的胎腎，其腎源細胞中含有生物活性的蛋白成分能夠提高血鈣、降鈣素水平、降低了尿hop和甲狀旁腺素含量；對骨質疏松有一定的改善作用。本發明細胞分離是采用納米技術進行細胞分離易形成密度梯度；特別是納米包覆體尺寸在30nm，因而膠體溶液在離心作用下很容易產生密度梯度，并易實現納米sio2粒子與細胞的分離。這是因為納米sio2微粒是屬于無機玻璃的范疇性能穩定，一般不與膠體溶液和生物溶液反應，既不會沾污生物細胞，也容易把它們分開。本發明同時還采用了細胞破壁技術，使的本發明的藥物更容易人體吸收。
下面通過具體實施例對本發明做進一步詳細說明，但不作為對本發明的限定。
具體實施方式
實施例1
一種利用動物腎臟的補腎藥是以動物腎臟為原料藥材；
該利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進行細胞分離；
3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細胞制作成口服制劑。
實施例2
一種利用動物腎臟的補腎藥是以動物腎臟為原料藥材；
該利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
1)將動物腎臟去除結締組織后，搗碎；
2)從搗碎后的動物腎臟中進行細胞分離；所述的細胞分離是采用納米技術進行細胞分離；
3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；
4)將步驟3)破壁后腎源細胞制作成口服制劑。
上述納米技術進行細胞分離和采用細胞破壁技術進行破壁均采用現有技術這里不做一一表述。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊；其中，混懸液中含腎源細胞的含量為20-150毫克/毫升。
實施例3
同實施例2基本相同，不同之處是，所述的納米技術進行細胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術，利用密度梯度原理，使腎源細胞分離出來。
所述動物腎臟為幼齡狗腎或幼齡羊腎。
實施例4
一種利用動物腎臟的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟30份、五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份；
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
步驟1)將動物腎臟30份去除結締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的動物腎臟中進行細胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；備用；
步驟4)將五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
實施例5
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟50份、五味子20份、西洋參20份、生地20份、肉蓯蓉20份、鹿茸15份、海馬15份、當歸20份、紅景天15份、山芋肉25份、山藥12份、玉竹10份、覆盆子10份、枸杞子6份、胡桃9份、金櫻子3份。
制備方法同實施例4。細胞分離是采用納米技術進行細胞分離，該納米技術和采用細胞破壁技術進行破壁均采用現有技術這里不做一一表述。所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例6
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：動物腎臟45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
制備方法同實施例5。所述的納米技術進行細胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后動物腎臟與聚乙烯吡咯烷酮按質量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術，利用密度梯度原理，使腎源細胞分離出來。
采用細胞破壁技術進行破壁為現有技術這里不做一一表述。所述動物腎臟為幼齡狗胎腎或幼齡羊胎腎。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例7
一種利用動物腎臟的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎30份、五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份；
所述的一種利用動物腎臟的補腎藥的制備方法，包括如下步驟：
步驟1)將胎腎30份去除結締組織后，搗碎；
步驟2)從搗碎后的胎腎中進行細胞分離；
步驟3)將分離出的腎源細胞采用細胞破壁技術進行破壁；備用；
步驟4)將五味子10份、西洋參5份、生地10份、肉蓯蓉10份、鹿茸5份、海馬5份、當歸10份、紅景天10份、山芋肉10份、山藥6份、玉竹6份、覆盆子6份、枸杞子5份、胡桃5份、金櫻子2份按上述的重量份之總重量加4-5倍量的水煎煮2小時，取渣再加3倍量的水煎煮1.5小時，分次過濾，合并濾液，加熱至50-70℃濃縮至相對密度1.10-1.30稠膏；
步驟5)當步驟4)的稠膏的溫度在40℃時，加入步驟3)破壁后的腎源細胞攪拌均勻；
步驟6)將步驟5)混合物制作成口服制劑。
實施例8
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎50份、五味子20份、西洋參20份、生地20份、肉蓯蓉20份、鹿茸15份、海馬15份、當歸20份、紅景天15份、山芋肉25份、山藥12份、玉竹10份、覆盆子10份、枸杞子6份、胡桃9份、金櫻子3份。
制備方法同實施例7。細胞分離是采用納米技術進行細胞分離，該納米技術和采用細胞破壁技術進行破壁均采用現有技術這里不做一一表述。所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
實施例9
所述的補腎藥是由下述原料按下述重量份組成：胎腎45份、五味子15份、西洋參10份、生地15份、肉蓯蓉15份、鹿茸10份、海馬10份、當歸15份、紅景天12份、山芋肉20份、山藥10份、玉竹8份、覆盆子8份、枸杞子5.5份、胡桃7份、金櫻子1.5份。
制備方法同實施例7。所述的納米技術進行細胞分離的過程是：第一步制備納米sio2包覆粒子，納米sio2粒子尺寸控制在15～20nm，包覆后的納米sio2包覆粒子的尺寸為30nm；第二步是制備含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液：將搗碎后胎腎與聚乙烯吡咯烷酮按質量比1：2混合形成膠體溶液；第三步是將納米sio2包覆粒子均勻分散到含有腎源細胞的聚乙烯吡咯烷酮膠體溶液中，再通過離心技術，利用密度梯度原理，使腎源細胞分離出來。
采用細胞破壁技術進行破壁為現有技術這里不做一一表述。所述動物腎臟為狗胎腎或羊胎腎。
所述的口服制劑為混懸液或膠囊。
藥理研究
1.胎腎對老齡大鼠性激素及骨密度的影響
以20月齡sd雌性老齡大鼠為實驗動物，將40只大鼠隨機分為實驗組和對照組，給實驗組從尾靜脈注入孕19-21天的胎鼠腎臟細胞懸液，每周2次，共2周，對照組注入等量生理鹽水，分別在注射后1個月、2個月分批處死大鼠，留取標本，用放免法檢測血清雌二醇(e2)含量，卵巢稱重，用多功能真彩色病理圖像分析系統進行骨病理形態學測量及形態觀察。其結果顯示：與對照組比較胎腎細胞組雌激素水平(表1.1)和卵巢指數(表1.2)顯著提高，卵巢萎縮程度明顯減輕；骨小梁寬度明顯增寬、骨小梁間距明顯變小、骨小梁面密度顯著升高、骨皮質厚度明顯增寬(表1.3)。提示：胎腎細胞對于延緩卵巢衰老、改善老齡骨質疏松有明顯的作用。
腎主藏精，主人體生長、發育與生殖，雌激素水平、卵巢指數能夠反映生殖功能，骨密度是骨強度的標志，其改變是腎精氣盛衰的表現，胎腎細胞對其的改善提示以腎能夠補腎。
表1.1細胞移植后血清雌二醇水平對照
*p＜0.01
表1.2細胞移植后卵巢指數對照
*p＜0.01
表1.3細胞移植后骨形態測量對照
*p＜0.001**p＜0.01***p＞0.05****p＜0.05
2.胎腎對骨質疏松模型大鼠鈣調節激素的影響
為了探討胎腎防治骨質疏松的作用機理，選用3-4月齡sd雌性大鼠為實驗動物，將24只大鼠隨機分為3組，即正常對照組、模型組、胎腎細胞組，除正常對照組外，其余2組采用維甲酸進行造模。造模后，給胎腎細胞組從尾靜脈注入孕19-21天的胎鼠腎臟細胞懸液，每周2次，正常對照組、模型組輸入等量生理鹽水，第30天，將所有動物放置代謝籠中，收集24小時尿液，眼眶采血，斷頭處死，取左側脛骨。采用放免法測定雌二醇(e2)、降鈣素(ct)、甲狀旁腺素(pth)、骨鈣素(bgp)含量，用多功能真彩色病理圖像分析系統進行骨病理形態學測量及形態觀察。其結果顯示：與正常對照組比較，模型組e2、ct、bgp水平明顯降低，pth明顯升高(p<0.05)；與模型組比較，胎腎細胞組ct、e2、bgp顯著增高，血清pth明顯下降(p<0.05)(表2.1)。與正常對照組比較，模型組骨小梁面積、厚度明顯降低，骨小梁間距增大(p<0.05)；與模型組比較，胎腎細胞組骨小梁面積、厚度、均顯著增加，骨小梁間距縮小(p<0.05)(表2.2)。其結果提示：胎腎能有效改善骨質疏松，其治療機理與升高血鈣、降鈣素含量，提高e2水平；降低甲狀旁腺素有關。說明胎腎能有效抑制破骨細胞的骨吸收；促進鈣在骨的沉積，有利于骨的礦化；降低膠原蛋白的分解。
表2.1各組大鼠部分鈣調節激素的測定結果
注：與正常對照組比較*p＜0.05，″p＜0.01；與模型組比較δp＜0.05，
表2.2各組大鼠松質骨形態計量結果
注：與正常對照組比較*p＜0.05，″p＜0.01；與模型組比較δp＜0.05，
3.胎腎防治骨質疏松的有效物質研究
為了探討胎腎防治骨質疏松的有效物質，課題組通過給雌性sd大鼠去卵巢造成骨質疏松模型，將造模大鼠隨機分為模型對照組(b組)，雌激素陽性對照組(c組)，胎腎活細胞組(d組)和胎腎死細胞組(e組)，并設假手術對照組(a組)。實驗組分別給從尾靜脈注射胎腎活細胞和死細胞懸液，雌激素陽性對照組給尼爾雌醇灌胃，假手術組和模型對照組尾靜脈注射等量生理鹽水，每周2次，共4周。用藥結束后，禁食24小時，采血，留取骨標本，觀察其對造模大鼠骨病理形態、干重、灰重、骨代謝指標及雌激素水平的影響，探討胎腎防治骨質疏松的有效物質，其結果顯示：胎腎細胞各組均明顯改變了去卵巢大鼠骨質疏松病理形態，使其骨小梁的密度、厚度增加，骨小梁的間隙縮小，對骨小梁形態計量學靜態參數指標有顯著的改善作用；使去卵巢骨質疏松大鼠骨干重、骨灰重、和骨長度均有所升高，對脛骨物理量指標有一定的改善作用。胎腎細胞各組顯著提高了去卵巢大鼠血清e2、bgp水平升高，使血清ntx含量降低；顯著升高血清鈣、磷水平；使骨鈣、骨磷含量增高。其作用與雌激素陽性對照組無顯著性差異。
胎腎細胞各組間比較，胎腎死細胞組在提高去卵巢大鼠血清磷、鈣、e2、bgp水平、增加其骨小梁密度、縮小骨小梁間隙、增加骨干重、骨灰重、骨長度及骨基質含量及降低血清ntx水平的作用均優于胎腎活細胞組，但兩者差異無統計學意義(p＞0.05)；胎腎活細胞組對去卵巢大鼠骨小梁面積百分比、骨鈣及骨磷含量的增加，優于胎腎死細胞組，且兩者差異亦無統計學意義(p＞0.05)。說明胎腎防治骨質疏松的有效物質與胎腎細胞活、死性關系不大，可能與其中的某種蛋白成分有關。
臨床試驗
本發明所述的利用動物腎臟的補腎藥的臨床試驗如下：
表3：分別采用本發明實施例4-實施例9的補腎藥，年齡40-50歲患者均為50例，年齡60-70歲患者均50例，每組男女各25名(依次稱為治療組1-6)。病程3月-8月，平均病程5.5個月。患者在服用本發明補腎藥前都沒有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進行癥狀評分。
采用龜鹿補腎片：國藥準字z20080217，年齡40-50歲患者50例，年齡60-70歲患者50例，每組男女各25名(稱為對照a組)。病程3月-8月，平均病程5.5個月?；颊咴诜迷撍幥岸紱]有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進行癥狀評分。
采用六味地黃丸，年齡40-50歲患者50例，年齡60-70歲患者50例，每組男女各25名(稱為對照b組)。病程3月-8月，平均病程5.5個月?；颊咴诜迷撍幥岸紱]有接受過其他治療。十日為一療程，20天后進行癥狀評分。
上述患者的癥狀為：老年性骨質疏松癥或卵巢早衰。
老年性骨質疏松癥以骨密度作為骨強度的標志來判定，卵巢早衰以雌激素水平或卵巢指數來判定。
觀察結果：
服用20天后，效果比較見表3。
表3本發明補腎藥服用20天后效果比較
由表3可見，采用本發明所制的補腎藥的有效率明顯高于對照a組和對照b組的有效率，本發明所制補腎藥的副作用例數則為1例，明顯低于對照a組和對照b組，結果表明本發明所制補腎藥療效顯著。特別是本發明采用胎腎為主藥的補腎藥效果更為顯著。
本發明在不添加輔助中藥藥材時，給藥途徑簡便，具有藥源充足，安全無副作用的特點，同時再添加一些輔助中藥藥材，其療效更為顯著，有廣闊的應用前景。
實施例沒有詳細敘述工藝步驟屬本行業的公知部件和常用手段，這里不一一敘述。