本發明屬于組織修復材料制備技術領域，尤其涉及一種羅非魚皮膠原蛋白復合再生纖維修復材料的制備方法。
背景技術：
纖維素作為天然的生物高聚物，具有生物可降解性、生物相容性以及獨特的物理、化學和機械性能，已成為新型生物醫學材料領域的研究熱點。而現有技術多是采用再生纖維素與其他材料共混，冷凍干燥制備復合膜，采用此方法制得的復合膜均勻性、穩定性較差，且組織修復能力及藥物附著性有待進一步的提高。
技術實現要素：
為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種具有良好的組織修復能力及藥物附著性的羅非魚皮膠原蛋白復合再生纖維修復材料的制備方法。
本發明采用以下技術方案：
一種羅非魚皮膠原蛋白復合再生纖維修復材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：羅非魚皮去鱗，去離子水反復沖洗干凈后用濾紙吸干表面水分，脂肪酶脫脂處理羅非魚皮，脫脂后的魚皮用0.1mol/lnaoh浸泡，除去雜蛋白，再用去離子水反復清洗魚皮，直至洗液呈中性；
步驟二：將經步驟一處理后的魚皮加入到4℃、ph2.3、質量濃度80％的乳酸溶液中，料液比為1:20，充分提取12h后，4℃、5000r/min離心處理40min，取上清液，加入nacl至0.9mol/l，鹽析10h，待膠原蛋白沉淀析出后，4℃、5000r/min離心處理20min，取沉淀，棄去上清液；
步驟三：將沉淀復溶于0.1mol/l乳酸溶液中，料液比為1:10，4℃、5000r/min離心處理20min，棄去沉淀，取上清液進行透析，先用0.1mol/l乳酸溶液透析2d，每4h換一次透析液，再用蒸餾水透析，每4h換一次蒸餾水，直到透析液中不存在氯離子且透析液為中性時，停止透析，最后經冷凍干燥后得羅非魚皮膠原蛋白；
步驟四：稱取20g竹纖維，投入到400g、質量分數為17.5％的naoh溶液中，并放置到溫度為100℃的恒溫水浴鍋中，沸煮60min，再用去離子水對竹纖維反復清洗至中性；
步驟五：取16glicl投入到裝有40℃、184g二甲基乙酰胺的容器中，在恒溫磁力攪拌器的作用下使licl充分溶解，配制成質量分數為8％的溶劑，取溶劑100g、竹纖維15g，60℃恒溫水浴鍋中、混合攪拌8h，過濾得竹纖維溶液；
步驟六：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復上述操作一次后，用去離子水洗凈，風干后得到脫膠絲素；
步驟七：將cacl2在室溫狀態下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；
步驟八：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質量濃度4％的纖維素溶液；
步驟九：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；
步驟十：將羅非魚皮膠原蛋白、竹纖維溶液、再生纖維素紡絲液按質量比2:4:19混合均勻，使用超聲波震蕩對其進行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫用針管中，通過靜電紡絲制得修復材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
優選的，步驟十中所述的醫用針管的容量為30ml。
優選的，步驟十中所述的醫用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板30cm處。
優選的，步驟十中所述的醫用針管的針頭內徑為0.41mm。
本發明的有益效果在于：
1)羅非魚皮膠原蛋白中含有促細胞生長因子和表皮生長因子，對修復機體和護養皮膚大有好處。
2)絲素蛋白及竹纖維具有良好的抗菌性及生物相容性。
3)纖維素具有良好的生物相容性、可降解性及優良的機械性能。
4)纖維素可以改善材料的機械性能，絲素蛋白可以改善材料的組織修復能力。
5)采用靜電紡絲技術制備的材料，進一步提高了材料的孔隙率，有利于藥物的附著。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明做進一步的描述。
實施例1
一種羅非魚皮膠原蛋白復合再生纖維修復材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：羅非魚皮去鱗，去離子水反復沖洗干凈后用濾紙吸干表面水分，脂肪酶脫脂處理羅非魚皮，脫脂后的魚皮用0.1mol/lnaoh浸泡，除去雜蛋白，再用去離子水反復清洗魚皮，直至洗液呈中性；
步驟二：將經步驟一處理后的魚皮加入到4℃、ph2.3、質量濃度80％的乳酸溶液中，料液比為1:20，充分提取12h后，4℃、5000r/min離心處理40min，取上清液，加入nacl至0.9mol/l，鹽析10h，待膠原蛋白沉淀析出后，4℃、5000r/min離心處理20min，取沉淀，棄去上清液；
步驟三：將沉淀復溶于0.1mol/l乳酸溶液中，料液比為1:10，4℃、5000r/min離心處理20min，棄去沉淀，取上清液進行透析，先用0.1mol/l乳酸溶液透析2d，每4h換一次透析液，再用蒸餾水透析，每4h換一次蒸餾水，直到透析液中不存在氯離子且透析液為中性時，停止透析，最后經冷凍干燥后得羅非魚皮膠原蛋白；
步驟四：稱取20g竹纖維，投入到400g、質量分數為17.5％的naoh溶液中，并放置到溫度為100℃的恒溫水浴鍋中，沸煮60min，再用去離子水對竹纖維反復清洗至中性；
步驟五：取16glicl投入到裝有40℃、184g二甲基乙酰胺的容器中，在恒溫磁力攪拌器的作用下使licl充分溶解，配制成質量分數為8％的溶劑，取溶劑100g、竹纖維15g，60℃恒溫水浴鍋中、混合攪拌8h，過濾得竹纖維溶液；
步驟六：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復上述操作一次后，用去離子水洗凈，風干后得到脫膠絲素；
步驟七：將cacl2在室溫狀態下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；
步驟八：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質量濃度4％的纖維素溶液；
步驟九：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；
步驟十：將羅非魚皮膠原蛋白、竹纖維溶液、再生纖維素紡絲液按質量比2:4:19混合均勻，使用超聲波震蕩對其進行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫用針管中，通過靜電紡絲制得修復材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
步驟十中所述的醫用針管的容量為30ml，所述的醫用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板30cm處，針頭內徑為0.41mm。