本發(fā)明屬于口服肝靶向制劑，具體涉及一種負(fù)載五味子醇乙的口服肝靶向納米乳劑及其制備方法，且涉及所述納米乳劑促進(jìn)肝臟再生中的用途。

背景技術(shù)：

1、原發(fā)性肝癌包括三種病理類型：肝細(xì)胞癌(hcc)、肝內(nèi)膽管癌(icc)和混合型hcc-icc。hcc約占所有原發(fā)性肝臟惡性腫瘤的80％，是全球癌癥相關(guān)死亡率的第三大原因。肝癌的手術(shù)干預(yù)，包括部分肝切除術(shù)(phx)和肝移植，是患者獲得長期生存的最關(guān)鍵途徑。phx術(shù)后殘余肝臟的再生能力是患者生存和術(shù)后預(yù)后的關(guān)鍵決定因素。然而，由于對肝臟再生機(jī)制的了解不完全，目前臨床實踐中沒有最佳的藥物可以大幅提高phx術(shù)后肝臟的再生能力。中藥對術(shù)后患者的治療和康復(fù)安全有效。可以通過多種途徑、水平和時間階段恢復(fù)肝臟結(jié)構(gòu)和功能。但藥物往往在實際的臨床應(yīng)用中存在靶組織分布差以及療效低等問題。因此，通過構(gòu)建具有靶向能力的遞送系統(tǒng)，提高遞送至病灶部位的藥物濃度，從而有效發(fā)揮治療效果。因此，迫切需要發(fā)現(xiàn)和臨床推進(jìn)促進(jìn)肝臟再生的新藥。

2、五味子醇乙(schb)是從五味子中提取的主要木脂素類生物酚活性成分之一，具有促進(jìn)肝臟結(jié)構(gòu)重建、恢復(fù)肝功能的作用。研究表明，schb可以激活pxr信號通路中參與肝細(xì)胞增殖的關(guān)鍵調(diào)控因子，導(dǎo)致pxr下游蛋白上調(diào)。這種激活觸發(fā)激活的pxr和yap之間的相互作用，促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和肝組織結(jié)構(gòu)的重建。schb屬于五味子木脂素，其主要通過口服給藥途徑進(jìn)行治療，既往研究表明其水溶性差，口服生物利用度低，導(dǎo)致靶組織內(nèi)藥物濃度低。因此，開發(fā)靶向肝臟的口服藥物納米乳，確保載體被有效吸收并完整地被運輸?shù)襟w循環(huán)中，促進(jìn)靶部位的蓄積是至關(guān)重要的。

3、近年來，口服給藥和靶向治療結(jié)合的策略受到了越來越多的關(guān)注。口服靶向是借助納米傳遞系統(tǒng)，通過口服途徑實現(xiàn)系統(tǒng)或遠(yuǎn)程靶向的一種非侵入給藥策略，可以更精確高效的識別靶組織或靶細(xì)胞，并兼具給藥方便、順應(yīng)性高等優(yōu)點。

4、口服靶向需通過遞送系統(tǒng)的表面功能設(shè)計來克服胃腸道的阻滯和排斥，提高藥物遞送系統(tǒng)進(jìn)入體循環(huán)的幾率，最終完成其預(yù)設(shè)的靶向功能。納米乳液作為一種有前景的口服藥物遞送系統(tǒng)，已用于多種疾病的治療。納米乳液由于易于吸收的特性，可以顯著提高藥物的生物利用度和療效。許多蛋白質(zhì)營養(yǎng)豐富、無毒、成本低，具有良好的乳化能力，可作為納米乳液的乳化劑。但是，現(xiàn)有的納米乳也存在一些問題，如突破生物屏障困難等

5、因此，口服納米遞藥系統(tǒng)除了需要耐受胃腸道的消化，還要求它們能夠突破生物膜屏障，這也需要進(jìn)一步研究。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種負(fù)載五味子醇乙的口服肝靶向納米乳劑及其制備方法和應(yīng)用。

2、技術(shù)方案：為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種用于負(fù)載五味子醇乙的口服肝靶向納米乳劑，所述納米乳劑主要是由大豆卵磷脂、n-乙酰-d-半乳糖胺、牛血清白蛋白和二十二碳六烯酸作為載體，負(fù)載藥物為五味子醇乙；所述半乳糖基化蛋白偶聯(lián)物主要是由牛血清白蛋和n-乙酰-d-半乳糖胺采用美拉德反應(yīng)所合成。

4、作為具體實施方案，所述五味子醇乙包括五味子醇乙或其衍生物。

5、作為具體實施方案，所述牛血清白蛋和n-乙酰-d-半乳糖胺的質(zhì)量比是1:(1-4)；優(yōu)選1:3；所述美拉德反應(yīng)的反應(yīng)條件為：在ph?6-8，55-65℃、75-85％濕度下反應(yīng)12-48h。

6、更具體地，所述半乳糖基化蛋白偶聯(lián)物的合成方法，包括以下步驟：

7、將牛血清白蛋白和n-乙酰-d-半乳糖胺混合溶解，凍干，將凍干粉置于飽和kbr密閉空間內(nèi)，在ph?6-8，55-65℃、75-85％濕度下反應(yīng)12-48h，即得。優(yōu)選在ph為8，60℃、79％濕度下反應(yīng)24h。

8、本發(fā)明還提供了所述的負(fù)載五味子醇乙的口服肝靶向納米乳劑的制備方法，包括以下步驟：

9、(1)取半乳糖基化蛋白偶聯(lián)物，加去離子水配制成溶液，作為水相；大豆卵磷脂、二十二碳六烯酸和五味子醇乙溶于油，作為油相；

10、(2)將上述油相和水相混合，制備所述納米乳劑。

11、作為具體實施方案，步驟(1)中，所述油選自中鏈甘油三酯、大豆油、玉米油、花生油、蓖麻油中的一種或幾種。優(yōu)選為中鏈甘油三酯。

12、作為具體實施方案，步驟(2)中，所述油相和水相混合，其中，半乳糖基化蛋白以其中牛血清白蛋白的質(zhì)量計，與大豆卵磷脂的質(zhì)量比為(0.25-0.75):1，優(yōu)選0.5:1，油相中二十二碳六烯酸的含量為10-80μm，優(yōu)選20μm，其中油相中二十二碳六烯酸、大豆卵磷脂與五味子醇乙的質(zhì)量比為(0.175-1.4):1:(1-2.56)，優(yōu)選0.35:1:1.28。

13、作為具體實施方案，步驟(2)中，制備所述納米乳劑的方法包括：將油相和水相混合后超聲，得初乳液；將初乳液進(jìn)行高壓均質(zhì)，即得所述納米乳劑。

14、優(yōu)選的，所述超聲是在60-70w條件下在冰水浴中超聲2.5-3.5min(脈沖2s，暫停2s)，進(jìn)一步優(yōu)選在65w條件下在冰水浴中超聲3min(脈沖2s，暫停2s)；所述高壓均質(zhì)是在5000-7000psi下進(jìn)行2-4次均質(zhì)，進(jìn)一步優(yōu)選6000psi下進(jìn)行3次均質(zhì)。

15、本發(fā)明最后提供了所述的負(fù)載五味子醇乙的口服肝靶向納米乳劑在制備促進(jìn)肝臟再生藥物中的應(yīng)用。

16、進(jìn)一步的，所述肝臟再生為肝癌原位phx術(shù)后的肝臟再生。

17、本發(fā)明首先通過綠色安全的美拉德反應(yīng)合成得到葡半乳糖基化蛋白(gal-bsa)偶聯(lián)物。口服肝靶向不同于常規(guī)的血液循環(huán)靶向，口服肝靶向要求不但要能突破胃腸道屏障，還需要有效靶向病灶。因此，本發(fā)明以大豆卵磷脂(spc)作為納米乳劑的基礎(chǔ)，不但生物相容性好，而且藥物包封效果好。利用具有親水性的n-乙酰-d-半乳糖胺(gal)可以在水相中形成伸展的空間網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生空間位阻，彌補(bǔ)蛋白乳液易受胃腸道(ph、離子強(qiáng)度和酶解等)內(nèi)環(huán)境因素影響的缺陷，用于提高遞送系統(tǒng)的穩(wěn)定性。因此，將牛血清白蛋白(bsa)與gal接枝合成半乳糖基化偶聯(lián)物(gal-bsa)作為助乳化劑來制備納米乳液能夠耐受胃腸道的消化，提高體系在胃腸道內(nèi)的穩(wěn)定性。此外，cis-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(dha)作為一種吸收促進(jìn)劑，可以改善納米乳的腸壁通透性，提高藥物的口服生物利用度。本發(fā)明利用gal-bsa進(jìn)行配體修飾，可以靶向肝細(xì)胞上表達(dá)的去唾液酸糖蛋白受體(asgpr)提高納米乳液對肝臟的靶向作用，從而更好的發(fā)揮藥物促進(jìn)phx后肝再生的治療效果。

18、其次，本發(fā)明采用微射流高壓均質(zhì)法制備負(fù)載schb的納米乳(schb@spc/gal-bsa/dha)，用于經(jīng)口服給藥促進(jìn)正常小鼠70％?phx后肝臟再生或肝癌小鼠原位phx后肝臟再生。結(jié)果表明dha修飾的spc/半乳糖基化蛋白納米乳能有效包封schb，改善小腸上皮細(xì)胞運輸，提高schb的口服生物利用度。此外，該納米乳延長了schb在胃腸道中的停留時間，并實現(xiàn)藥物在肝臟區(qū)域的靶向積累，導(dǎo)致schb可更高的發(fā)揮phx后的促肝再生作用。因此，本研究開發(fā)的schb@spc/gal-bsa/dha納米乳在用于口服靶向促進(jìn)phx后肝再生方面具有很大的潛力。

19、有益效果：本發(fā)明所制備的schb納米乳以spc作為基礎(chǔ)乳化劑，具有載藥量高，制備方法簡單的特點。利用表面修飾的dha促進(jìn)載藥納米乳的腸上皮滲透，gal-bsa提高納米乳的胃腸穩(wěn)定性，增加藥物在肝臟的蓄積，并最終靶向肝臟發(fā)揮促肝再生作用，使得schb能夠促進(jìn)正常70％?phx或者肝癌原位phx后的肝臟再生。本發(fā)明開發(fā)的@spc/gal-bsa/dha納米乳劑可作為促肝再生藥物schb的口服遞送平臺。