專利名稱：具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物、制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種松茸提取物，具體地說是一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物及其制備方法和應用。
背景技術：
松茸作為一種純天然的珍稀名貴藥食兩用菌類，含有多種活性成分，具有多種抗腫瘤、抗輻射、美白等功效。目前對松茸口服抗腫瘤等功效研究比較深入，對其外用護膚功效研究甚少。現有技術對松茸提取得到的提取液成分簡單導致最終功效單一，無法滿足現有護膚品復合功效的需求，尤其是作為基礎添加劑無法對護膚品中的其他成分起到增效和促進作用。·

發明內容
本發明的目的是提供一種具有抗衰老保濕促透多種功效的松茸提取物。本發明的再一目的在于提供上述提取物的制備方法。本發明的第三目的是提供上述提取物的新應用。為了實現本發明的目的，本發明采用如下具體技術手段一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物的制備方法，包括以下步驟( I)松茸烘干、粉碎后沸水提取2 5小時，離心取上清液，上清液過濾后濃縮得濃縮液，上清液濃縮前和濃縮后的質量比為10 25 :1 ;(2)濃縮液進行醇沉，離心，取沉淀物冷凍干燥得凍干粉；(3)將凍干粉溶解于去離子水中，加入體積百分比為90%以上的乙醇至乙醇的體積百分數為60%，2 6°C醇沉6 10小時后離心取沉淀，即得。優選的，所述步驟(I)中，松茸烘干粉碎至20 60目；沸水提取松茸和水的質量比為I :30 I 50o優選的，所述步驟(I)中，上清液過濾采用硅藻土抽濾至澄清。優選的，所述步驟(I)中，上清液濃縮前和濃縮后的質量比為20 :1。優選的，所述步驟(2)中濃縮液加入無水乙醇進行醇沉，濃縮液和無水乙醇的質量比為I :3 I :4，靜置4 8小時。優選的，所述步驟(3)中，4°C醇沉8小時后離心取沉淀。一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物，其特征在于，所述提取物由上述方法制備得到的。上述提取物在制備護膚品中的應用。所述護膚品為面霜、乳液、爽膚水、洗面奶、啫喱或精華素。一種具有抗衰保濕促透功效的護膚品，所述護膚品由上述提取物和護膚品領域常規輔料制備而成。
本發明的有益效果利用本發明方法得到的松茸提取物提取方法溫和，得到的提取物為松茸多糖，經發明人實驗驗證，其不僅具有優越的美白功效，同時兼具保濕、清除體內自由基、改善面部血瘀等功效，及良好的促進膠原蛋白、維生素C、海藻糖透皮的功效，可以作為護膚品添加劑使用。


圖I為松茸提取物安全性評價結果；圖2為松茸提取物對L-酪氨酸酶的活性抑制率實驗結果；圖3為松茸提取物清除DPPH自由基實驗結果； 圖4、5為松茸提取物保濕功效的檢測；圖6a和圖6b為松茸提取物減少皮膚粗糙度試驗，圖6a是使用前皮膚紋理，圖6b是使用后皮膚紋理圖；圖7為松茸提取物對Vc衍生物的促透效果圖；圖8為松茸提取物對膠原蛋白的促透效果圖；圖9為松茸提取物對海藻糖的促透效果圖。
具體實施例方式本發明所用松茸為市售產品，實施例中使用的松茸購買自云南昆明仁輝商貿有限公司。實施例I松茸提取物的制備(I)松茸烘干粉碎后過40目篩得松茸粉，按照松茸粉去離子水即料液比為I :40，沸水提取，提取時間3小時；提取液離心，離心的轉速為4000rpm，離心時間為10分鐘得上清液；上清液再過濾，采用助濾劑硅藻土進行抽濾至澄清透亮，過濾液進行濃縮，濃縮前過濾液濃縮后過濾液的質量比為20:1 ；(2)濃縮液進行醇沉濃縮液中加入無水乙醇，濃縮液和無水乙醇的質量比為I :3，靜置6小時后，對混合液(濃縮液和無水乙醇的混合液體)進行離心，離心的轉速為5000rpm，離心的時間10分鐘；取沉淀，加少許純水復溶后，冷凍干燥(冷凍干燥為現有技術，只要在低溫條件下干燥即可，推薦條件參數為冷阱溫度為_72°C，真空度小于lOkpa，真空時間為18小時)，得到松茸粗多糖凍干粉；(3)將凍干粉溶解在去離子水中(溶解濃度為20mg/ml)，加入無水乙醇至無水乙醇占整個體系的體積分數為60%，4°C醇沉8h ；5000r/min離心，離心的時間為15分鐘，取沉淀即為松茸提取物(松茸多糖TMSP-6)。實施例2松茸提取物的制備(I)松茸烘干粉碎后過20目篩得松茸粉，按照松茸粉去離子水即料液比為I :30，沸水提取，提取時間5小時；提取液離心，離心的轉速為4000rpm，離心時間為15分鐘得上清液；上清液再過濾，采用助濾劑硅藻土進行抽濾至澄清透亮，過濾液進行濃縮，濃縮前過濾液濃縮后過濾液的質量比為25:1 ；(2)濃縮液進行醇沉濃縮液中加入無水乙醇，濃縮液和無水乙醇的質量比為I :4，靜置4小時后，對混合液(濃縮液和無水乙醇的混合液體)進行離心，離心的轉速為5000rpm，離心的時間15分鐘；取沉淀，加少許純水復溶后，冷凍干燥(冷凍干燥為現有技術，只要在低溫條件下干燥即可，推薦條件參數為冷阱溫度為_72°C，真空度小于lOkpa，真空時間為18小時)，得到松茸粗多糖凍干粉；(3)將凍干粉溶解在去離子水中(溶解濃度為30mg/ml)，加入無水乙醇至無水乙醇占整個體系的體積分數為70%，2°C醇沉5h ；5000r/min離心，離心的時間為10分鐘，取沉淀即為松茸提取物(松茸多糖TMSP-6)。實施例3松茸提取物的制備(I)松茸烘干粉碎后過60目篩得松茸粉，按照松茸粉去離子水即料液比為I :50，沸水提取，提取時間2小時；提取液離心，離心的轉速為4000rpm，離心時間為10分鐘得上清液；上清液再過濾，采用助濾劑硅藻土進行抽濾至澄清透亮，過濾液進行濃縮，濃縮前過濾液濃縮后過濾液的質量比為10:1 ；
(2)濃縮液進行醇沉濃縮液中加入無水乙醇，濃縮液和無水乙醇的質量比為I :3，靜置8小時后，對混合液(濃縮液和無水乙醇的混合液體)進行離心，離心的轉速為5000rpm，離心的時間20分鐘；取沉淀，加少許純水復溶后，冷凍干燥(冷凍干燥為現有技術，只要在低溫條件下干燥即可，推薦條件參數為冷阱溫度為_72°C，真空度小于lOkpa，真空時間為16小時)，得到松茸粗多糖凍干粉；(3)將凍干粉溶解在去離子水中(溶解濃度為25mg/ml)，加入無水乙醇至無水乙醇占整個體系的體積分數為50%，6°C醇沉6h ；5000r/min離心，離心的時間為20分鐘，取沉淀即為松茸提取物(松茸多糖TMSP-6)。實施例4本發明乳液的制備I、原料及用量A相鯨蠟硬脂醇5wt%山俞醇 2wt%季戊四醇雙硬脂酸酯2wt%單硬脂酸甘油酯2wt%乳木果油5wt%二甲基硅油3wt%B相鯨蠟硬脂基葡萄糖苷3wt%卡波姆 O. lwt%乙二胺四乙酸二鈉鹽O. 15wt%實施例I制備的松茸提取物O. 5wt%C 相防腐劑 0.5wt%香精 O. 2wt%膠原蛋白3wt%10%Na0H O. 5wt%余量為去離子水。2、制備方法( I)按上述的組分及用量稱取各原料；
(2)將A相和B相分別加熱至80°C攪拌使原料溶解完全；(3)將A相加入乳化鍋中攪拌，攪拌速率為80轉/分鐘，邊攪拌邊將B相加入乳化鍋中，加入的速度以乳化鍋中B相原料全部乳化為準，當B相原料全部加入后抽真空(真空度為-O. I個大氣壓)、攪拌均質4分鐘，攪拌速率為80轉/分鐘，加熱至80°C保溫，20分鐘后開始降溫，當溫度降到30°C時加入C相原料，攪拌均勻繼續降溫，當溫度在40°C時均質I 2分鐘出料即可。本發明松茸提取物功效實驗及安全性測試一、本發明松茸提取物安全性測試I、采用紅細胞溶血實驗測定其刺激性，該實驗為歐盟認證的安全性動物替代實·驗。檸檬酸緩沖液的配制按照檸檬酸三鈉梓檬酸=66 44mmol/L,超純水配制。磷酸鹽緩沖液(PBS)的配制磷酸鹽緩沖液ρΗ=7· 4，超純水配制。SDS標準溶液的配制將十二烷基硫酸鈉用PBS緩沖液溶解，濃度為I. Og/L,即質量分數為O. 1%。測試樣品的配置將實施例I制備的松茸提取物配制成O. 1%與1%的溶液。具體實驗步驟與方法取新鮮雞血50mL，盛裝于聚乙烯塑料容器中，與IOmL檸檬酸緩沖液混勻。用IOmL聚乙烯無菌離心管分裝采集的血液樣本，室溫下，4000r/min,離心5min。取上清液,棄之。實驗前，將RBC放置，使其溫度穩定于室溫，整個過程無菌操作。用PBS配制I. Omg/mL (即O. 1%)的 SDS 溶液。向 I. 5mL EP 管中依次加入 0、5、10、15、20、25、30、35、40 μ L 的 SDS 溶液，分別加入PBS補齊至960 μ L。快速加入40 μ L RBC懸液，37°C下150r/min振蕩孵育lOmin。8000r/min離心Imin終止反應，取上清液于Icm比色皿中于530nm波長處測吸光度。同時在顯微鏡下觀察血紅細胞的形態和細胞膜的完整性。紅細胞溶血率的計算公式
溶血率(%) =~ I自上容XI oo%
j全溶自溶其中SDS組在53Onm處吸光度。A自溶=RBC自溶對照組在530nm處吸光度。k魏陽性對照組在530nm處吸光度。設960 μ L PBS中加入40 μ L RBC溶血率為0，960 μ L超純水中加入40 μ L RBC發生溶血率為100%。實驗分為2組①陽性對照組向I. 5mL EP管中加入40 μ L RBC懸液，920 μ L PBS和40 μ L質量濃度為I. Omg/mL的SDS溶液，37°C下150r/min振蕩孵育IOmin ;②測試樣品組向I. 5mL EP管加入320 μ L的測試樣品(PBS配制)，加入PBS至960 μ L混勻。快速加Λ 40 μ L RBC輕緩混勻，37°C下3500r/min振蕩孵育lOmin。8000r/min離心Imin終止各組反應，取上清液于Icm比色皿中于530nm波長處測吸光度，計算溶血率。實驗設三次重復。實驗結果見圖1，0. 1%與1%的松茸提取物均沒有發生明顯的血紅細胞溶血現象，說明該物質對細胞無刺激，具有較高的安全性。實施例2和實施例3的提取物重復上述實驗，結果同實施例I。二、功效實驗I、松茸提取物對L-酪氨酸酶的活性抑制率實驗酪氨酸酶是黑素形成過程中主要的限速酶，該酶的活性大小決定著黑素形成的數量，當前化妝品市場上的美白產品絕大多數以酪氨酸酶抑制劑為主。L-酪氨酸酶與其底物L-酪氨酸可以發生催化反應，當在反應體系中添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的試劑后，對催化反應可以產生抑制作用，通過測定添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的試劑前后475nm處吸光度值的變化，來評價該有L-酪氨酸酶活性抑制作用的試劑對L-酪氨酸酶活性的抑制率。具體實驗過程如下稱取17. 91g十二水磷酸氫二鈉溶于500mL蒸餾水中，得到溶液a ;稱取7. 8g 二水磷酸二氫鈉溶于500mL蒸餾水中，得到溶液b ;將92. 6mL溶液a和107. 4mL溶液b混合，得 到200mL pH為6. 8的PBS緩沖溶液。稱取0.05g L-酪氨酸，先用少量O. lmol/L的鹽酸溶解，待其溶解后用上述配制的pH為6. 8的PBS緩沖液定容至100mL。實驗過程中，各組中各物質的加入量如表I所示。表I松茸提取物對L-酪氨酸酶的活性抑制實驗中各物質的加入量
權利要求
1.一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (O松茸烘干、粉碎后沸水提取2 5小時，離心取上清液，上清液過濾后濃縮得濃縮液，上清液濃縮前和濃縮后的質量比為10 25 :1 ; (2)濃縮液進行醇沉，離心，取沉淀物冷凍干燥得凍干粉； (3)將凍干粉溶解于去離子水中，加入體積百分比為90%以上的乙醇至乙醇的體積百分數為60%，2 6°C醇沉6 10小時后離心取沉淀，即得。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，松茸烘干粉碎至20 60目；沸水提取松茸和水的質量比為I :30 I :50。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，上清液過濾采用硅藻土抽濾至澄清。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，上清液濃縮前和濃縮后的質量比為20 :1。
5.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中濃縮液加入無水乙醇進行醇沉，濃縮液和無水乙醇的質量比為I :3 I :4，靜置4 8小時。
6.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，4°C醇沉8小時后離心取沉淀。
7.一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物，其特征在于，所述提取物由權利要求I至6中任意一項所述方法制備得到的。
8.權利要求7所述提取物在制備護膚品中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述護膚品為面霜、乳液、爽膚水、洗面奶、啫喱或精華素。
10.一種具有抗衰保濕促透功效的護膚品，其特征在于，所述護膚品由權利要求7所述提取物和護膚品領域常規輔料制備而成。
全文摘要
本發明公開了一種具有抗衰保濕促透功效的松茸提取物的制備方法，包括以下步驟松茸烘干、粉碎后沸水提取2～5小時，離心取上清液，上清液過濾后濃縮得濃縮液，上清液濃縮前和濃縮后的質量比為10～25∶1；濃縮液進行醇沉，離心，取沉淀物冷凍干燥得凍干粉；將凍干粉溶解于去離子水中，加入體積百分比為90%以上的乙醇至乙醇的體積百分數為60%，4℃醇沉6～10小時后離心取沉淀，即得。本發明提取條件溫和，活性物質提取相對完全，提取物具有很好的美白功效、且可以清除體內自由基、改善面部血瘀減少色斑生成，具有良好的保濕、延緩衰老、促透等美容功效，具有廣泛應用價值。
文檔編號A61Q19/00GK102895172SQ20121040608
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月22日 優先權日2012年10月22日
發明者劉曉英, 劉光榮, 何聰芬, 程華, 李麗, 董銀卯 申請人:無限極(中國)有限公司