專利名稱：一種藻類細胞中的生物油脂及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藻類細胞中的生物油脂及其在制備生物柴油方面的應用。
背景技術：
隨著世界范圍內化石燃料和石油能源的加速消耗以及由此帶來的各種污染和環境問題，可再生的生物能源日益得到人們的重視。在各項政策的鼓勵和支持下，全世界生物燃料(包括生物柴油和生物乙醇等)的年產量已經達到了約350億升。生物柴油是以生物油脂(通常包括植物脂肪，動物脂肪等)與醇類物質(通常為甲醇、乙醇)為原料，通過酯交換反應得到的長鏈脂肪酸甲酯。甲醇在一定溫度下，與生物油脂中的甘油三酯發生酯交換反應，產生甘油和脂肪酸甲酯，甘油被分離后，得到的脂肪酸甲酯就是生物柴油。酯交換反應中甘油三酯與甲醇的理論摩爾比例是1:3，但在工業生產時，通常加入過量的甲醇以確保反應向生成甲酯的方向進行。在酯交換反應中，可以用酸、堿或酶做催化劑進行催化。生物柴油可取代傳統的由石油提取的柴油應用于現有的柴油機中，其結構穩定，使用安全，在燃燒過程中要比傳統的柴油排放出更少的有害大氣污染物如硫氧化物，芳香烴化合物，碳氧化物，顆粒物等，并且由于其具備無毒無害，可生物降解性等優點，因此顯示出非常有潛力的應用前景。相關研究表明，等量的生物柴油在燃燒過程中平均要比傳統柴油少釋放53%-69%的顆粒物，79%-83%的飛灰，45%_67%的碳氫化合物以及4%-16%的一氧化碳。在自然環境之中，絕大部分生物柴油可在21-28天之內降解，其降解速度為傳統柴油的4倍。此外，生物柴油還具有良好的潤滑性能和更好的燃燒性能。以油料作物榨取的植物油脂，廢棄的烹飪用油和動物油脂為原料制取生物柴油的實踐已經有超過50年的歷史。在美國，生物柴油的主要原料是大豆油脂，但其生產規模和產量已經難以滿足巨大的需求。以微生物油脂為原料制取生物柴油的研究也有著近30年的歷史，然而直到近幾年才受到了越來越多的矚目。其中，藻類為微生物油脂的主要來源。藻類是一類低等的放氧自養型生物，其種類繁多、在地球上的分布極其廣泛，地球上的生物每年通過光合作用生產的生物質中的40%都應歸功于藻類的光合作用。微藻是指一些微觀的單細胞、群體或藻體呈絲狀的藻類，絕大部分微藻生長繁殖在水環境中，不會與農業用 地和牧業用地相競爭。微生物油脂是微生物如微藻類等利用碳水化合物合成的甘油酯，其脂肪酸組成與植物油相近，主要為甘油三酸酯。微生物細胞體內的油脂含量一般大于40%至50%，一些經過基因工程改良的微藻類細胞中油脂含量甚至可以達到80%以上。以微生物油脂為原料，經過精煉，酯交換，分離純化等過程，可生產出優質的生物柴油。從藻類中提取生物油脂須經歷一個對藻類細胞進行預處理的過程，該過程的目的為破壞其細胞壁和細胞膜，使細胞內的脂類流出并加以提取。預處理過程一般包括干燥，藻類細胞破碎和微生物油脂的提取等幾個步驟。藻類細胞的破碎方法主要有勻漿器破碎，玻珠研磨機研磨，超聲波破碎，微波破碎，高壓釜加溫加壓破碎，反復凍融法破碎，有機溶劑裂解，滲透壓沖擊破碎，酶裂解等。
目前全世界范圍內，能源緊缺，石化燃料即將耗盡，新能源的開發迫在眉睫。生物柴油是指以油料作物、野生油料植物和工程微藻等水生植物油脂以及動物油脂、餐飲垃圾油等為原料油，通過酯交換工藝制成的可代替石化柴油的再生性燃料。生物柴油具有優良的環保特性、低溫啟動性能、潤滑性能、良好的安全性能和燃燒性能等。藻類細胞體內提取出的生物油脂，將是一種優良的生物柴油原料。

發明內容
本發明的目的之一在于提供一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，該制備方法可快速破碎藻類細胞，以提取藻類細胞中的生物油脂。
本發明的目的之二在于提供上述的一種藻類細胞中的生物油脂在制備生物柴油中的應用。本發明的技術方案
一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，即首先將藻類細胞破碎，然后收集破碎的藻類細胞混合液并離心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合溶劑進行第一次液液萃取，收集水相和有機相；
將第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第二次液液萃取，收集水相和有機相；
將第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第三次液液萃取，收集水相和有機相；
合并三次萃取所得的有機相真空蒸發去除正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑后所得的產物即為藻類細胞中的生物油脂。上述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，具體包括如下步驟
(1)、將藻液于密閉的不銹鋼反應釜中，勻速攪拌，保持小球藻懸浮于溶液中；
(2)、利用臭氧發生器和空壓機將臭氧和空氣按體積比計算，即臭氧空氣為I:150的比例將臭氧和空氣組成的混合氣體通入密閉的反應釜中，直至反應釜中壓力達到O. 4 O. 8 Mpa，然后迅速打開反應釜的放氣閥，釋放壓力至大氣壓，這一過程稱為一個加壓-減壓循環；
(3)、多次重復步驟(2)的加壓-減壓循環40 80次，最終得到破碎的藻類細胞混合
液；
(4)、取出密閉反應釜中的破碎的藻類細胞混合液，離心后取上清液，按體積比計算，SP上清液正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為I :0. 3，在上清液中加入正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，進行第一次液液萃取，分層后分別收集水相I和有機相I ;
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成；
(5)、在步驟(4)收集的水相I中按體積比計算，即水相I:正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為I :0. 2的比例加入正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，進行第二次液液萃取，分層后分別收集水相2和有機相2 ；
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成；(6)、在步驟(5)收集的水相2中按體積比計算，即水相2:正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為I :0. I的比例加入正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，進行第三次液液萃取，分層后分別收集水相3和有機相3 ；
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成；
(7)、合并步驟(4)、(5)和(6)三次萃取收集的有機相I、有機相2和有機相3后置入真空旋轉蒸發儀中，常溫下蒸發至正己烷和乙酸乙酯混合有機溶液蒸發完全，得到藻類細胞中的生物油脂。上述的一種藻類細胞中的生物油脂在制備生物柴油中的應用，即在藻類細胞中的生物油脂中加入濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液，劇烈攪拌進行酯化反應，反應過程中攪拌轉速為2800 rpm，時間為2 min，酯化反應將脂肪酸轉化為脂肪酸甲酯，靜置分層，上層所得產物即為生物柴油； 所述的濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液的加入量按其占藻類細胞中的生物油脂質量比計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液為I : 10-20。本發明的有益效果
本發明的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其制備過程中利用壓力輔助臭氧法對藻類細胞破壁，即以臭氧為媒介，通過氣-液反應，作用于藻液，在攪拌器作用下使臭氧與藻液混合均勻進而破碎藻類細胞，因此具有設備流程簡單，破壁效果好，易于實現自動化控制等優勢，是一種有效的藻類細胞破碎方法。進一步，本發明的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，由于利用臭氧的氧化性能氧化藻類的細胞壁與細胞膜，輔助以壓力來破壞藻類的細胞，使得藻類細胞中的脂肪酸等成分外流，并使用有機溶劑以液液萃取的方式獲得脂肪酸和烷烴。實驗證明，在系統壓力為O. 8 MPa,加壓-減壓循環數為80的條件下，小球藻的生物油脂萃取率可達16. 7-26.7%，并且產物的飽和程度有所提高。所以，本發明提供的以藻類細胞內的生物油脂制備生物柴油的流程，具備操作簡單、原料來源廣泛、產量高、價格便宜、易于規模化等優勢，是一種有效的生物柴油制備新方法。最終所得的生物柴油，其主要成分為C16:0與C18 O分別為27. 8%-45. 9%及34. 7%_48. 6%，符合國家GB/T 20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油(BD100)》標準。


圖I、是本發明的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法的工藝流程圖。
具體實施例方式下面通過具體的實施例并結合附圖和對本發明進一步詳細描述，但并不限制本發明。一種藻類細胞中的生物油脂，通過包括如下步驟的制備方法進行制備，其制備過程的工藝流程示意圖如圖I所示，即首先是藻種培養與藻液獲取，然后將收獲的藻液放入高壓反應釜中攪拌均勻，通入按體積比即臭氧空氣為I : 150的臭氧和空氣的混合氣體并攪拌均勻，加壓至O. 4 O. 8 Mpa，維持I 2 s時間，打開反應釜排氣閥釋放壓力至常壓，這時過飽和的氣體從藻液中釋放出來；
重復上述的攪拌均勻，通入臭氧和空氣的混合氣體、加壓，釋壓，過飽和的氣體從藻液中釋放的過程40 80個循環，即完成了藻類細胞的破碎；
收集破碎的藻類細胞混合液，離心后取上清液，用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第一次液液萃取，分層后分別收集水相和有機相；
將第一次液液萃取得到的水相再用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第二次液液萃取，分層后分別收集水相和有機相；
將第二次萃取所得的水相再次用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第三次液液萃·取，分層后分別收集水相和有機相；
合并三次萃取所得的有機相置入真空旋轉蒸發儀中，常溫下蒸發至正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑蒸發完全，即得到藻類細胞中的生物油脂。在藻類細胞中的生物油脂中加入KOH的甲醇溶液，劇烈攪拌進行酯化反應，所得產物即為生物柴油。實施例I
一種藻類細胞中的生物油脂，通過包括如下步驟的方法制備
(1)、量取200ml收獲的藻液于I L的高壓反應爸中,在120 r/min條件下攪拌5 min ；
(2)、打開臭氧發生器和空壓機，按體積比即臭氧空氣為I:150的比例控制臭氧和空氣的總流量為2 L/min，將臭氧和空氣組成的混合氣體通入到高壓反應釜中，繼續以120r/min勻速攪動藻液,使通入的臭氧、空氣和藻液均勻混合；
(3)、控制高壓反應釜壓力為0.6MPa，當達到O. 6 Mpa時，打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，然后再升壓至O. 6 10^，當達到0.6 Mpa時，再次打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，循環升壓、降壓過程40次即得到破碎的藻類細胞；
(4)、打開反應釜，取出藻液，離心后取上清液，利用25mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第一次液液萃取、分液，分別收集水相I與有機相I ;
(5)、取出步驟(4)得到的水相1，利用15mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第二次液液萃取、分液，分別收集水相2與有機相3。(6)、取出步驟(5)得到的水相2，利用10 ml體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第三次液液萃取、分液，收集有機相3 ；。(7)、合并步驟(4)、(5)、(6)三步所得的有機相I、有機相2和有機相3并置入真空旋轉蒸發儀器中，旋轉蒸發30 min,即得藻類細胞中的生物油脂，其產率為17.6g/100g干藻。向上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻類細胞中的生物油脂的質量比計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2mol/L的KOH的甲醇溶液約為1:17，劇烈攪拌進行酯化反應，酯化反應過程中控制攪拌轉速為2800 rpm，時間為2 min，反應完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后進行氣相色譜-質譜檢測發現，其主要成分為C16:0與C18 :0，按照國家標準分析方法(GB/T 22223-2008)確定其相對百分含量分別為27. 8%與34. 7%，符合國家GB/T 20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油(BD100)》標準。
實施例2
一種藻類細胞中的生物油脂，通過包括如下步驟的方法制備
(1)、量取200mL收獲的藻液于I L的高壓反應釜中，在120 r/min條件下攪拌5 min ；
(2)、打開臭氧發生器和空壓機，按體積比即臭氧空氣為I:150的比例控制臭氧和空氣的總流量為2 L/min，將臭氧和空氣組成的混合氣體通入到高壓反應釜中，繼續以120r/min勻速攪動藻液,使通入的臭氧、空氣和藻液均勻混合；
(3)、控制高壓反應釜壓力為0.6MPa，當達到O. 6 Mpa時，打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，然后再升壓至O. 6 10^，當達到0.6 Mpa時，再次打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，循環升壓、降壓過程80次即得到破碎的藻類細胞；
(4)、打開反應釜，取出藻液，離心后取上清液，利用25mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第一次液液萃取、分液，分別收集水相I與有機相I ;
(5)、取出步驟(4)得到的水相1，利用15mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第二次液液萃取、分液，分別收集水相2與有機相3。(6)、取出步驟(5)得到的水相2，利用10 ml體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第三次液液萃取、分液，收集有機相3 ；。(7)、合并步驟(4)、(5)、(6)三步所得的有機相I、有機相2和有機相3并置入真空旋轉蒸發儀器中，旋轉蒸發30 min,即得藻類細胞中的生物油脂，其產率為26. 7g/100g干藻。將上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻類細胞中的生物油脂質量比計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2mol/L的KOH的甲醇溶液約為1:10，劇烈攪拌進行酯化反應，酯化反應過程中控制攪拌轉速為2800 rpm，時間為2 min，反應完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后進行氣相色譜-質譜檢測發現，其主要成分為C16:0與C18 :0，按照國家標準分析方法(GB/T 22223-2008)確定其相對百分含量分別為45. 9%與46. 3%，符合國家GB/T 20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油(BD100)》標準。實施例3
一種藻類細胞中的生物油脂，通過包括如下步驟的方法制備
(1)、量取200mL收獲的藻液于I L的高壓反應釜中，在120 r/min條件下攪拌5 min ；
(2)、打開臭氧發生器和空壓機，按體積比即臭氧空氣為I:150的比例控制臭氧和空氣的總流量為2 L/min，將臭氧和空氣組成的混合氣體通入到高壓反應釜中，繼續以120r/min勻速攪動藻液,使通入的臭氧、空氣和藻液均勻混合；
(3)、控制高壓反應釜壓力為0.8MPa，當達到O. 8 Mpa時，打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，然后再升壓至O. 8吧&，當達到0.8 Mpa時，再次打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，循環升壓、降壓過程80次即得到破碎的藻類細胞；
(4)、打開反應釜，取出藻液，離心后取上清液，利用25mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第一次液液萃取、分液，分別收集水相I與有機相I ;
(5)、取出步驟(4)得到的水相1，利用15mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第二次液液萃取、分液，分別收集水相2與有機相3。
(6)、取出步驟(5)得到的水相2，利用10 ml體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第三次液液萃取、分液，收集有機相3 ；。(7)、合并步驟(4)、(5)、(6)三步所得的有機相I、有機相2和有機相3并置入真空旋轉蒸發儀器中，旋轉蒸發30 min,即得藻類細胞中的生物油脂，其產率為24.3g/100g干藻。向上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入濃度為2 mo I/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻類細胞中的生物油脂的質量比計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2mol/L的KOH的甲醇溶液約為1:13，劇烈攪拌進行酯化反應，酯化反應過程中控制攪拌轉速為2800 rpm，時間為2 min，反應完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后進行氣相色譜-質譜檢測發現，其主要成分為C16:0與C18 :0，按照國家標準分析方法(GB/T 22223-2008)確定其相對百分含量分別為40. 4%與48. 6%，符合國家GB/T 20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油 (BD100)》標準。實施例4
一種藻類細胞中的生物油脂，通過包括如下步驟的方法制備
(1)、量取200ml收獲的藻液于I L的高壓反應爸中,在120 r/min條件下攪拌5 min ；
(2)、打開臭氧發生器和空壓機，按體積比即臭氧空氣為I:150的比例控制臭氧和空氣的總流量為2 L/min，將臭氧和空氣組成的混合氣體通入到高壓反應釜中，繼續以120r/min勻速攪動藻液,使通入的臭氧、空氣和藻液均勻混合；
(3)、控制高壓反應釜壓力為O.4 MPa，當達到O. 4 Mpa時，打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，然后再升壓至O. 4 10^，當達到0.4 Mpa時，再次打開高壓反應釜的排氣閥使壓力降至常壓，循環升壓、降壓過程80次即得到破碎的藻類細胞；
(4)、打開反應釜，取出藻液，離心后取上清液，利用25mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第一次液液萃取、分液，分別收集水相I與有機相I ;
(5)、取出步驟(4)得到的水相1，利用15mL體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第二次液液萃取、分液，分別收集水相2與有機相3。(6)、取出步驟(5)得到的水相2，利用10 ml體積比為I :1的由正己烷與乙酸乙酯組成的混合有機溶劑進行第三次液液萃取、分液，收集有機相3 ；。(7)、合并步驟(4)、(5)、(6)三步所得的有機相I、有機相2和有機相3并置入真空旋轉蒸發儀器中，旋轉蒸發30 min,即得藻類細胞中的生物油脂，其產率為22. 5 g/100g干藻。向上述所得的生物油脂中加入濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻類細胞中的生物油脂的質量比計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2 mol/L的KOH的甲醇溶液約為1:20，劇烈攪拌進行酯化反應，酯化反應過程中控制攪拌轉速為2800 rpm,時間為2 min，反應完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后進行氣相色譜-質譜檢測(生產廠家美國Agilent公司，型號7890)發現，其主要成分為C16:0與C18 :0，按照國家標準分析方法(GB/T 22223-2008)確定其相對百分含量分別為40. 8%與39. 2%，符合國家GB/T20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油(BD100)》標準。
以上所述僅是本發明的實施方式的舉例，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和變型，這些改進和變型也應視為本發明的保護范圍。·
權利要求
1.一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于首先將藻類細胞破碎，然后收集破碎的藻類細胞混合液并離心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第一次液液萃取，收集水相和有機相； 將第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第二次液液萃取，收集水相和有機相； 將第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第三次液液萃取，收集水相和有機相； 合并三次萃取所得的有機相真空蒸發去除正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑后所得的產物即為藻類細胞中的生物油脂。
2.如權利要求I所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于所述的藻類細胞破碎即首先是藻種培養與藻液獲取，然后將收獲的藻液放入高壓反應釜中攪拌均勻，通入臭氧和空氣的混合氣體并攪拌均勻，加壓至O. 4 O. 8Mpa,維持I 2s時間，打開反應釜排氣閥釋放壓力至常壓，這時過飽和的氣體從藻液中釋放出來； 重復上述的攪拌均勻，通入臭氧和空氣的混合氣體、加壓，釋壓，過飽和的氣體從藻液中釋放的過程40 80個循環，即得到破碎的藻類細胞。
3.如權利要求2所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于所述的臭氧和空氣混合氣體按體積比即臭氧空氣為I :150，總流量為2 L/min。
4.如權利要求3所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于第一次液液萃取時，按體積比計算，即上清液正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為I :0. 3 ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成。
5.如權利要求4所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于第二次液液萃取時，按體積比計算，即第一次液液萃取所得的水相正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為 I :0· 2 ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成。
6.如權利要求5所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，其特征在于第三次液液萃取時，按體積比計算，即第二次液液萃取所得的水相正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑為 I :0· I ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑，即由正己烷和乙酸乙酯按體積比計算，即正己烷乙酸乙酯為I :1的比例混合而成。
7.如權利要求1、2、3、4、5或6所述的一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法所得的藻類細胞中的生物油脂。
8.如權利要求7所述的藻類細胞中的生物油脂在制備生物柴油中的應用，其特征在于步驟如下 在藻類細胞中的生物油脂中加入濃度為2 mo I/L的KOH的甲醇溶液，劇烈攪拌進行酯化反應，反應過程中攪拌轉速為2800 rpm，時間為2 min，酯化反應完成后，靜置分層，上層所得產物即為生物柴油； 所述的濃度為2mol/L的KOH的甲醇溶液的加入量按其占藻類細胞中的生物油脂質量比 計算，即藻類細胞中的生物油脂濃度為2mol/L的KOH的甲醇溶液約為I : 10-20。
全文摘要
本發明公開了一種藻類細胞中的生物油脂的制備方法，即首先將藻類細胞破碎，收集破碎的藻類細胞混合液離心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第一次液液萃取，收集水相和有機相；將第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第二次液液萃取，收集水相和有機相；將第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有機溶劑進行第三次液液萃取，收集水相和有機相；合并三次萃取所得的有機相真空蒸發即得到藻類細胞中的生物油脂，在藻類細胞中的生物油脂中加入KOH的甲醇溶液，劇烈攪拌進行酯化反應，即得符合國家GB/T20828-2007《柴油機燃料調和用生物柴油(BD100)》標準的生物柴油。
文檔編號C11B3/12GK102899166SQ201210431210
公開日2013年1月30日 申請日期2012年11月2日 優先權日2012年11月2日
發明者李亮, 黃遠星, 許智華, 金小穎, 李洋洋, 方學友, 宋翠紅, 崔晨晨 申請人:上海理工大學