專利名稱：作為cxc趨化因子受體拮抗劑的3.4－二－取代環丁烯－1,2－二酮類化合物的制作方法
背景技術：
本發明涉及新的取代環丁烯二酮類化合物，含有所述化合物的藥物組合物，所述化合物和組合物在治療CXC-趨化因子-介導的疾病中的應用。
趨化因子是由多種細胞釋放的趨化細胞因子，其用于把巨噬細胞、T-細胞、嗜酸性細胞、嗜堿細胞、嗜中性白細胞和內皮細胞吸引至炎癥和腫瘤生長的部位。趨化因子主要分為兩大類即CXC-趨化因子和CC-趨化因子。這種分類是根據開始的兩個半胱氨酸是被單個氨基酸隔開(CXC-趨化因子)還是這兩個半胱氨酸相鄰(CC-趨化因子)。CXC-趨化因子包括白介素-8(IL-8)、嗜中性白細胞-激活蛋白-1(NAP-1)、嗜中性白細胞-激活蛋白-2(NAP-2)GROα、GROβ、GROγ、ENA-78、IP-10、MIG和PF4。CC趨化因子包括RANTES、MIP-1α、MIP-2β、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、MCP-2、MCP-3、GCP-2和eotaxin。已知趨化因子家族的各個成員結合至少一種趨化因子受體，通常來說，CXC趨化因子結合CXCR類受體的成員，CC趨化因子結合CCR類受體的成員。例如，IL-8結合CXCR-1和CXCR-2受體。
由于CXC-趨化因子促進中性白細胞的蓄積和活化，因而這些趨化因子與許多急性和慢性炎癥疾病有關，包括牛皮癬和類風濕性關節炎，Baggiolini等.，FEBS Lett.307，97(1992)；Miller等.，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等.，Annu.Fev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等.，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等.，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等.，Lancet341，643(1993)。
ELRCXC趨化因子[包括IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA78(Strieter等.1995 JBC 270，第27348-57頁)]也與許多腫瘤血管生成(新血管生長)的誘導有關。據信所有這些趨化因子通過結合7跨膜G-蛋白質結合受體CXCR2(又名IL-8RB)發揮其作用，同時IL-8還結合CXCR1(又名IL-8RA)。因此，它們具有血管生成活性的原因是結合并活化CXCR2引起的，并且還可能是IL-8結合CXCR1引起的，它們表達于周圍血管的血管內皮細胞(ECs)表面。
已經表明許多不同類型的腫瘤產生ELRCXC趨化因子，并且這些趨化因子的生成與一種更具攻擊性的表型有關(Inoue等，2000 ClinCancer Res6第2104-2119頁)，并且預后不良(Yoneda等.1998 J NatCancer Inst90第447-454頁)。趨化因子是有效的趨化性因子，已經表明ELRCXC趨化因子能夠誘導EC趨藥性。因此，這些趨化因子可能誘導內皮細胞的趨藥性，使它們趨向腫瘤生成部位。這可能是腫瘤誘導血管生成的關鍵步驟。CXCR2抑制劑或者CXCR2和CXCR1的雙重抑制劑能夠抑制ELRCXC趨化因子的血管生成活性，因此抑制腫瘤的生長。已經顯示抗腫瘤活性的抗體包括IL-8抗體(Arenberg等.1996 JClin Invest97第2792-2802頁)、ENA-78抗體(Arenberg等.1998J Clin Invest102第465-72頁)和GROα抗體(Haghnegahdar等.J.Leukoc Biology 200067第53-62頁)。
許多腫瘤細胞也顯示能夠表達CXCR2，因此當腫瘤細胞分泌ELRCXC趨化因子時也能夠刺激它們自身的生長。因此，在降低血管生成的同時，CXCR2抑制劑可直接抑制腫瘤細胞的生長。
因此，對于開發新的抗炎劑和抗腫瘤試劑，CXC-趨化因子受體是非常有價值的靶子。
仍然需要能夠介導CXC-趨化因子受體活性的化合物。IL-8受體結合抑制劑有助于改善與IL-8生成增加(其涉及把嗜中性白細胞和T-細胞亞型趨化至炎癥部位和腫瘤生成部位)有關的病癥。
發明概述本發明提供下列式(I)結構所示的新型化合物，其前藥、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，
其中A為未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；B為 或R2為氫、OH、C(O)OH、SH、SO2NR7R8、NHC(O)R7、NHSO2NR7R8、NHSO2R7、C(O)NR7R8、C(O)NR7OR8、OR13或者未取代或取代的雜環酸性官能團；R3和R4可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、烷氧基、OH、CF3、OCF3、NO2、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)NR7R8、SO(t)NR7R8、SO(t)R7、C(O)NR7OR8、R8-C＝N-OR7、氰基、未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；R5和R6可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、烷基、烷氧基、CF3、OCF3、NO2、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)NR7R8、SO(t)NR7R8、C(O)NR7OR8、氰基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；
R7和R8可相同或不同，其獨立地為氫、未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的烷基芳基、未取代或取代的芳基烷基、未取代或取代的環烷基、羧烷基、氨基烷基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的雜芳基烷基或者未取代或取代的雜烷基芳基；或者R7、R8與所述NR7R8和NR7OR8上的氮原子一起可形成3-7元環，所述環還可在環上另外含有1-3個其它雜原子作為環原子；并且所述環可以是未取代環，也可以是被一個或者多個相同或不同基團取代的環，其中各個基團獨立地選自羥基、氰基、羧基、羥基烷基、烷氧基、COR7R8或氨基烷基；R9和R10可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、CF3、OCF3、NR7R8、NR7C(O)NR7R8、OH、C(O)OR7、SH、SO(t)NR7R8、SO2R7、NHC(O)R7、NHSO2NR7R8、NHSO2R7、C(O)NR7R8、C(O)NR7OR8、OR13或者未取代或取代的雜環酸性官能團；R13為COR7；R15為氫、OR13、或者未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的芳基烷基、未取代或取代的環烷基或者未取代或取代的烷基；以及t為1或2。
本發明另一方面是含有式(I)化合物和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
本發明另一方面是治療哺乳動物α-趨化因子介導的疾病的方法，其包括對需要的患者給予治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽或其溶劑化物。
本發明另一方面是治療癌癥的方法，包括把治療有效量的(a)式(I)化合物和(b)影響微管的試劑或抗腫瘤劑或抗血管生成試劑或VEGF受體激酶抑制劑或抗VEGF受體的抗體或干擾素和/或(c)輻射線同時或順序地給予需要的患者。
在優選的實施方案中，式(I)化合物與下列抗腫瘤劑之一聯合吉西他賓、紫杉醇(Taxol)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、環磷酰胺(Cytoxan)、替莫唑銨、taxotere或長春新堿。
在另一個優選的實施方案中，本發明提供治療癌癥的方法，包括同時或者順序地給與有效量的(a)式(I)化合物和(b)影響微管的試劑(例如紫杉醇)。
優選實施方案的描述除非另有說明，本申請說明書和權利要求書應用下列定義。另外，此處應用的所有技術術語和科技術語具有本發明所屬技術領域技術人員通常理解的意義。無論一個術語獨自應用或者與其它術語組合應用均具有這些定義。因此，“烷基”的定義適用于“烷基”和“烷氧基”的“烷基”部分。
當任何變量(例如芳基、R2)在任何結構中出現一次以上時，其在各個情況下的定義獨立于其在所有其它情況下的定義。而且，如果取代基和/或變量的組合能夠導致穩定的化合物，則這樣的組合也是允許的。
在措辭“未取代或取代的”中的術語“取代”是指被一個或多個相同或不同的基團任選取代，所述基團獨立地選自鹵素、羥基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、芳基、環烷基、COO烷基、COO芳基、甲酰氨基、巰基、芳基烷基、烷基芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺?；?、芳基磺酰基、芳基亞磺酰氨基、烷基亞磺酰氨基、雜芳基、羧基、羧烷基、雜芳基烷基、雜烷基芳基和芳氧基。術語“取代”還指芳環上兩個相鄰的環碳原子被亞甲二氧基取代，或者芳環上兩個相鄰的碳原子稠合成碳環或雜環。
烷基表示具有指定碳原子數目的直鏈或支鏈飽和烴鏈。如果沒有指明碳原子數目，則意為1-6個碳原子。烷基的代表性例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基等。
術語“環烷基”指含有3-10個碳原子、優選5-10個碳原子的非芳香的單環和多環系統。通過用一個或多個相同或不同的取代基置換環上有效的氫原子，則環烷基可以在環上任選地被取代。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環戊基和環己基等。多環環烷基的非限制性實例包括1-萘烷基、降冰片烷基和金剛烷基(adamantyl)等。
術語鹵素或鹵指氟、氯、溴或碘。
芳基指具有一個或兩個芳環的單環或雙環系統，所述芳基包括但不限于苯基、萘基、茚基、四氫萘基、2，3-二氫化茚基、蒽基和芴基等。
術語雜環或雜環環指含有1-3個選自N、O和S的雜原子的有3-7個原子的非芳香雜環，例如環氧乙烷、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫吡喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪、四氫吡啶、四氫嘧啶、四氫噻吩、四氫噻喃、嗎啉、乙內酰脲、戊內酰胺和吡咯烷酮等。
雜芳基指含有1-3個雜原子的5元或10元單芳環或者苯并稠合的芳環，其中雜原子獨立地選自O-、-S和-N＝，條件是所述環不合有相鄰的氧和/或硫原子。雜芳基可以是未取代的，也可以被1、2或3個取代基取代，其中所述取代基獨立地選自低級烷基、鹵素、氰基、硝基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、羧基、羧烷基、甲酰氨基、巰基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基。
術語雜環酸性官能團包括吡咯、咪唑、三唑和四唑等。這樣的基團可以是未取代的，也可以被1、2或3個取代基取代，其中所述取代基獨立地選自低級烷基、烷基、環烷基、鹵素、氰基、硝基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、羧基、羧烷基、氨基甲?；榛?、COOH、COO烷基、COO芳基、甲酰氨基、巰基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基、氨基烷氧基、二烷基氨基、磺?；?、亞磺酰氨基、芳基、雜環烷基和雜芳基。
N-氧化物可以在R取代基的叔氮原子上形成，也可以在雜芳基環取代基的＝N-上形成，它們包含在式I化合物中。
此處所用的術語“組合物”包括含有特定量特定成分的產品，并且包括直接或間接來源于特定量特定成分組合得到的產品。
此處所用的術語“前藥”指在體內迅速轉變成上式的母化合物的化合物，例如通過在血液中水解進行轉變。關于“前藥”的充分論述可參見T.Higuchi和V.Stella，Prodrugs as Novel Delivery Systems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series；和Edward B.Roche，編.，Bioreversible Carriers in Drug Design，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987。這兩篇文獻在此引入作為參考。
對于具有至少一個不對稱碳原子的本發明化合物來說，所有異構體包括非對映體、旋光對映體和內旋異構體均被認為是本發明的一部分。本發明包括d和1異構體的純化形式及其混合物，包括外消旋混合物。可以應用常規技術，或者通過分離式I化合物的異構體來制備異構體。
式I化合物可以是非溶劑化形式，也可以是溶劑化形式，例如水合物形式。通常就本發明目的來說，與可藥用溶劑(例如水和乙醇等)形成的溶劑化物形式與非溶劑化形式是等價的。
式I化合物可以與有機和無機的酸或堿形成可藥用鹽。用于形成鹽的合適的酸的例子包括鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、檸檬酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸和本領域技術人員熟知的其它無機物和羧酸。把游離堿形式化合物與足夠量的用于產生鹽的合適酸按照常規方式反應制備鹽?？梢酝ㄟ^用合適堿的稀水溶液處理所述鹽使游離堿形式化合物再生，其中所述堿的例子包括氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸鉀、氨或碳酸氫鈉。中性形式在某些物理性質(例如在極性溶劑中的溶解度)上不同于其相應的鹽形式，但在其它方面就本發明的目的來說鹽與其相應的中性形式是等價的。
在優選的式I化合物中，A選自下列基團

或 其中R11和R12可相同或不同，其獨立地為H、OH、鹵素、氰基、CF3、CF3O、NR7R8、NR7C(O)NR7R8、C(O)NR7R8、CO2R7、OR7、SO(t)NR7R8、NR7SO(t)R8、COR7、和取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的雜芳基、芳氧基、雜芳基烷基、雜芳基烷氧基、雜環烷基、羥基烷基、烷基氨基COO烷基、氨基烷氧基、烷氧基氨基烷基和氨基烷基；并且B為
其中R2選自OH、NHC(O)R7和NHSO2R7；R3選自SO2NR7R8、NO2、CN、C(O)NR7R8和SO2R7；R4選自H、NO2、CN和CF3；R5選自H、CF3、鹵素和CN；以及R6選自H和CF3。
可以在下列反應方案以及制備方法和實施例中按照本領域技術人員已知的方法制備式(I)化合物。
方案1
方案2
制備式I化合物的通常過程如下所述方案1在標準偶合條件下，讓胺與硝基水楊酸發生縮合反應(步驟A)，然后在合適的催化劑存在下，在氫氣環境下，還原得到的硝基苯甲酰胺(步驟B)。合成最終目標化合物需要的剩余部分制備如下用市售的方形酸二乙酯與芳胺發生縮合反應得到苯氨基乙氧基方形酸酯產物。然后讓此中間體與前面制得的氨基苯甲酰胺發生縮合反應制備得到需要的趨化因子拮抗劑(方案1)。
方案2或者，首先用市售的方形酸二乙酯與方案1的氨基苯甲酰胺發生縮合反應得到交替的單乙氧基中間體。然后讓該中間體與芳胺或雜芳胺發生縮合反應得到需要的趨化因子拮抗劑。
方案3 方案4
方案3式(I)的苯并三唑化合物制備如下60℃下，在乙酸中攪拌硝基苯二胺與亞硝酸鈉，得到硝基苯并三唑中間體(方案3)。在鈀催化劑和氫氣的存在下，還原硝基，得到胺化合物。再用前面制備的苯氨基乙氧基方形酸酯(方案1)與此中間體縮合得到需要的趨化因子拮抗劑。
方案4硝基苯二胺與酸酐或活性酸在回流狀態下發生縮合反應得到苯并咪唑中間體(方案4)，然后用氫氣和鈀催化劑還原，再與前面制備的苯氨基乙氧基方形酸酯(方案1)進行縮合得到苯并咪唑趨化因子拮抗劑。
方案5
方案6 方案5按照方案5，通過下列方法可以制備式(I)的吲唑結構把硝基吲唑A還原(J.Am.Chem Soc.1943，65，1804-1805)得到氨基吲唑B，然后與前面制備的苯氨基乙氧基方形酸酯(方案1)縮合。
方案6按照方案6，通過下列方法可以制備式(I)的吲哚結構把硝基吲哚A還原(J.Med.Chem.1995，38，1942-1954)得到氨基吲哚B，然后與前面制備的苯氨基乙氧基方形酸酯(方案1)縮合。
生物學實施例本發明的化合物能夠用于治療CXC趨化因子介導的疾病和病癥。用下列體外測試方法證明本發明化合物抑制IL-8和GRO-α趨化因子的能力，從而證明了實用性。
受體結合測試CXCR1 SPA測試在96孔板的各個孔中，在CXCR1測試緩沖液(25mM HEPES，pH7.8，2mM CaCl2，1mM MgCI2，125mM NaCl，0.1％BSA)(Sigma)中制備10μg hCXCR1-CHO超表達膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠粒(Amersham)的反應混合物100μl。在CXCR1測試緩沖液中制備0.4nM配體原液[125I]-IL-8(NEN)。在DMSO(Sigma)中制備20×測試化合物原液。在CXCR2測試緩沖液中制備6×IL-8(R&D)的原液。按下列用量把上述各種溶液加入到96孔測試板(PerkinElmer)10μl測試化合物或DMSO、40μlCXCR1測試緩沖液或IL-8原液、100μl反應混合物、50μl配體原液(最終[配體]＝0.1nM)。在板振蕩器上振蕩該測試板5分鐘，溫育8小時后用Microbeta Trilux計數器(PerkinElmer)測定每孔的cpm數量，測定總結合-NSB(250nM IL-8)的％抑制，計算出IC50值。
CXCR2 SPA測試在96孔板的各個孔中，在CXCR2測試緩沖液(25mM HEPES，pH7.4，2mM CaCl2，1mM MgCl2)中制備4μg hCXCR2-CHO超表達膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠粒(Amersham)的反應混合物100μl。在CXCR2測試緩沖液中制備0.4nM配體原液[125I]-IL-8(NEN)。在DMSO(Sigma)中制備20×測試化合物原液。在CXCR2測試緩沖液中制備6×GRO-α(R&D)的原液。按下列用量把上述各種溶液加入到96孔測試板(PerkinElmer或Corning)10μl測試化合物或DMSO、40μl CXCR2測試緩沖液或GRO-α原液、100μl反應混合物、50μl配體原液(最終[配體]＝0.1nM)。如果在DMSO中制備40×測試化合物的原液，則仍然應用上述方案，但應用5μl測試化合物或者DMSO和45μl CXCR2測試緩沖液。在板振蕩器上振蕩該測試板5分鐘，溫育2-8小時后，用Microbeta Trilux計數器(PerkinElmer)測定每孔的cpm數量，測定總結合減去非特異性結合的％抑制值(250nM Gro-α或50μM拮抗劑)，計算出IC50值。
鈣熒光測試(FLIPR)以10,000細胞/孔的濃度，在Poly-D-Lysine Black/Clear板(Becton Dickinson)上，接種用hCXCR2和Gα1/q穩定轉染的HEK 293細胞，在5％CO2和37℃下溫育48小時。然后在Dye LoadingBuffer(1％ FBS，HBSS w.Ca & Mg，20mM HEPES(Cellgro)，Probenicid(Sigma))中與4mM fluo-4，AM(分子探針)溫育該培養物1小時。用洗滌緩沖液(HBSS w Ca，& Mg，20mM HEPES，Probenicid(2.5mM))洗滌該培養物3次，然后加入100μl/孔洗滌緩沖液。
在溫育期間，在0.4％DMSO(Sigma)和洗滌緩沖液中制備化合物作為4×原液，然后加入到它們在第1個滴加板(addition plate)的相應孔中。在洗滌緩沖液+0.1％BSA中制備IL-8或GRO-α(R&D系統)濃縮物4×，將其加入到它們在第2個滴加板的相應孔中。
然后把培養物板和兩個滴加板放置到FLIPR成像系統中，測定加入化合物然后加入配體后的鈣熒光變化。簡單地說，把50μl化合物溶液或DMSO溶液加入到相應孔中，用FLIPR測定鈣熒光變化1分鐘。在該儀器中溫育3分鐘后，加入50μl配體，用FLIPR儀器測定鈣熒光變化1分鐘。測定各個刺激曲線下的面積，所得數值用于測定化合物(激動劑)的％刺激值和對配體(0.3nM IL-8或GRO-α)的總鈣應答的％抑制值，計算出測試化合物的IC50值。
293-CXCR2的趨化性測試應用Fluorblok inserts(Falcon)進行對293-CXCR2細胞(HEK-293細胞超表達的人CXCR2)的趨化性測試。此處所用的標準方法如下1.在37℃下，用膠原IV(2ug/ml)包敷插入片斷2小時。
2.除去膠原，空氣干燥插入片斷過夜。
3.用10μM鈣黃綠素AM(分子探針)標記細胞2小時，在含有2％FBS的完全培養基中進行標記。
4.用最小量的培養基(0.1％BSA)稀釋化合物，置于到插入片斷中，其中插入片斷放置到24孔板的孔中。在所述孔中，IL-8在最少量培養基中的濃度為0.25nM。洗滌細胞，將其重新懸浮于最少量培養基中，以50,000細胞/插入片斷的濃度放置到插入片斷中。
5.把板溫育2小時，除去插入片斷，放置到新的24孔中。在激發＝485nM和發射＝530nM處測定熒光。
細胞毒性試驗在293-CXCR2細胞上進行CXCR2化合物的細胞毒性試驗。在高濃度下測試毒性的化合物濃度，以確定它們是否能夠用于結合中的進一步評價和細胞基測試。方法如下1.在完全培養基中，以5000細胞/孔的濃度，把293-CXCR2細胞固定過夜。
2.用最少量培養基w/0.1％BSA稀釋化合物。傾掉完全培養基，加入化合物稀釋液。把板溫育4、24和48小時。用10uM鈣黃綠素AM標記細胞15分鐘，以測定細胞生存力。測定方法與上述相同。
軟瓊脂測試把10,000 SKMEL-5細胞/孔放置到含有各種稀釋化合物的完全培養基和1.2％瓊脂的混合物中。瓊脂的最終濃度為0.6％。21天后，用MTT溶液(1mg/ml，在PBS中)染色能存活的細胞集落。然后掃描板，測定集落數目和大小。比較總面積對化合物濃度，測定IC50值。
對于本發明化合物，CXCR2受體結合活性范圍為約1nM至約10,000nM。優選地，本發明化合物的結合活性范圍為約1nM至1,000nM，更優選約1-500nM，最優選約1nM至100nM。
含有該活性成分的藥物組合物可以是適于口服的形式，例如片劑，錠劑，糖錠，水懸浮液或油懸浮液，可分散粉劑或粒劑，乳劑，硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑?？梢园凑账幬锝M合物制備領域已知的任何方法制備口服組合物，為了提供口感好和藥物學優良的制劑，這種組合物可以含有一種或多種選自下列物質的試劑甜味劑、調味劑、著色劑和防腐劑。片劑含有活性成分和適合制備片劑的非毒性可藥用賦形劑。例如，這些賦形劑可以是惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，如玉米淀粉或藻酸；粘合劑，如淀粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以不包衣，也可以用已知技術包衣，以延遲其在胃腸道中的崩解和吸收，因此能夠在較長時間產生持久作用。例如，可以應用延時材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。還可以按照US4,256,108、US4,166,452和US4,265,874中記載的方法對其進行包衣，以形成控釋的滲透性治療片劑。
口服制劑還可以是硬明膠膠囊，其中活性成分和惰性固體稀釋劑混合，所述情性固體稀釋劑的例子為碳酸鈣、磷酸鈣或高齡土；也可以是軟明膠膠囊，其中活性成分與水或油基質(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
水懸浮液含有活性成分和適于制備水懸浮液的賦形劑。這種賦形劑為懸浮劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃芪膠和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可以是天然磷脂，如卵磷脂，也可以是氧化烯與脂肪酸的縮合產物，如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者是氧化乙烯與長鏈脂肪醇的縮合產物，如十七乙烯氧十六烷醇，或者是氧化乙烯與由脂肪酸和己糖醇形成的部分酯的縮合產物，如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或者是氧化乙烯與由脂肪酸和己糖醇脫水物形成的部分酯的縮合產物，如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。水懸浮液還可含有一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸的乙酯或正丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種調味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或天冬甜素。
油懸浮液可以通過把活性成分懸浮于植物油或礦物油中配制，所述植物油的例子包括花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，礦物油的例子為液體石蠟。油懸浮液可以含有增稠劑，例如峰蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。為了提供口感好的口服制劑，還可以加入甜味劑(例如上述甜味劑)和調味劑?？梢酝ㄟ^加入抗氧化劑(例如抗壞血酸)保存這些組合物。
適于通過加入水制備水懸浮液的可分散性粉末和顆粒提供與分散劑或濕潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混和的活性成分。合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑如上所述。還可以存在另外的賦形劑，例如甜味劑、調味劑和著色劑。
本發明的藥物組合物也可以是水包油型乳劑形式。其中油相可以是植物油(例如橄欖油或花生油)或礦物油(例如液體石蠟)或它們的混合物。合適的乳化劑可以是天然磷脂，例如大豆磷脂、卵磷脂和由脂肪酸與己糖醇脫水物形成的酯或部分酯，如脫水山梨醇單油酸酯，和所述部分酯與氧化乙烯形成的縮合產物，如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳劑還可以含有甜味劑和調味劑。
可以用甜味劑(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)配制糖漿劑和酏劑。這樣的制劑還可以含有緩和劑(demulcent)、防腐劑、調味劑和著色劑。
藥物組合物可以是無菌注射用水懸浮液或油懸浮液。可以按照本領域已知的方法，應用上述合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制該懸浮液。無菌注射用制劑還可以是在非腸道的非毒性稀釋劑或溶劑中的無菌注射用溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在這些可接受的賦形劑和溶劑中，可以應用水、Ringer′s溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，常常應用無菌的非揮發性油作為溶劑或懸浮基質。為此目的，可以應用任何溫和的非揮發性油，例如合成的甘油單酯或二酯。另外，在注射用制劑中可以應用脂肪酸，例如油酸。
本發明組合物也可以是經直腸給藥的栓劑。可以把藥物與合適的非刺激性賦形劑混合制備所述組合物，其中所述非刺激性賦形劑在常溫下是固體，但在直腸溫度環境中是液體，因此在直腸中會熔融，從而釋放出藥物。這樣的材料是可可脂和聚乙二醇。
就局部應用來說，可以應用含有本發明化合物的乳膏、軟膏、凝膠、溶液或懸浮液等。(就該應用目的來說，局部應用應該包括洗口劑和漱口劑)。
本發明化合物可通過局部應用合適的鼻內賦形劑通過鼻內給藥劑型給藥；或者應用本領域普通技術人員公知的透皮貼劑形式，以經皮方式給藥。以透皮傳遞系統的形式給藥，在整個劑量過程中，藥物劑量當然是連續的，而不是間斷的。本發明的化合物也可以是應用基質的栓劑，其中所述基質的例子為可可脂、甘油膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇脂肪酸酯。
利用本發明化合物的劑量的選擇取決于許多因素，包括患者的類型、種類、重量、性別和醫學狀況；要治療疾病的嚴重程度；給藥途徑；患者的肝腎功能；和應用的具體化合物。普通技術的醫務工作者或者獸醫工作者能夠容易地決定和規定用于預防、抵抗、抑制或逆轉病癥進展所需要的藥物有效量。獲得效果而又不產生毒性范圍內的藥物濃度最佳方式要求基于藥物對靶向部位有效性的動力學方案。這需要考慮藥物的分布、平衡和消除。優選地，用于本發明方法的本發明化合物的劑量為0.01-1000mg/成人/天。最優選地，劑量范圍是0.1-500mg/天。就口服給藥來說，對治療患者的用于癥狀的劑量，優選組合物為含有0.01-1000mg活性成分的片劑，特別優選含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100和500mg活性成分。有效量藥物的通常劑量為約0.0002mg/kg體重/天-約50mg/kg體重/天，更優選約0.001mg/kg體重/天-1mg/kg體重/天。
有利地是，本發明活性成分的每日劑量可以一次性給藥，也可以把每日總劑量分成每日兩次、三次或四次的劑量給藥。
與載體物質組合以制備單個劑型的活性成分用量也可發生變化，這取決于要治療的宿主和具體給藥方式。
然而，應該理解任何具體患者的具體劑量會取決于許多因素，包括年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄速率、藥物聯合應用和所治療的具體疾病的嚴重程度。
本發明另一方面是治療癌癥的方法，包括把治療有效量的(a)式(I)化合物和(b)抗癌劑同時或順序地給藥至需要的患者，其中所述抗癌劑的例子為抗腫瘤劑、影響微管的試劑或者抗血管生成試劑。另外，本發明的化合物還可以與放療聯合應用。
可以用作抗癌化療劑(抗腫瘤試劑)的化合物的類型包括烷基化試劑、抗代謝劑、天然產物及其衍生物、激素、抗激素、抗血管生成試劑和甾體(包括合成類似物)和合成物。這些類型化合物的例子如下所述。
烷基化試劑(包括氮芥、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷基酯、亞硝基脲類和三氮烯)尿嘧啶芥子、氮芥、環磷酰胺(Cytoxan)、異環磷酰胺、美法侖、苯丁酸氮芥、溴丙哌嗪、曲他胺、三亞乙基硫代磷酰胺、白消安、卡氮芥、環己亞硝脲、鏈脲霉素、達卡巴嗪和替莫唑銨。
抗代謝劑(包括葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物和腺嘌呤脫氨基酶抑制劑)甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖孢苷、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、磷酸氟達拉濱、戊制菌素和吉西他賓。
天然產物及其衍生物(包括長春花生物堿、抗腫瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)長春花堿、長春新堿、長春地辛、博萊霉素、放線菌素D、柔紅霉素、阿霉素、表柔比星、伊達比星、紫杉醇(紫杉醇的商品名為Taxol，在下面“影響微管的試劑”部分將作更詳細地描述)、普卡霉素、脫氧考福霉素、絲裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、干擾素(特別是IFN-α)、依托泊甙和替尼泊苷。
激素和甾體(包括合成類似物)17α-乙炔雌二醇、二乙基己烯雌酚、睪酮、強的松、氟甲睪酮、丙酸屈他雄酮、睪內酯、乙酸甲地孕酮、他莫昔芬、甲潑尼龍、甲基睪酮、強的松龍、去炎松、三對甲氧苯氯乙烯、羥孕酮、氨魯米特、雌莫司汀、乙酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、脫瑞米芬、Zoladex。
合成物(包括無機絡合物例如鉑配位絡合物)順鉑、Carboplatin、羥基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑和六甲蜜胺。
抗血管生成試劑包括Marimastat、AG3340、Co1-3、Neovastat、BMS275291、酞咪哌啶酮、Squalamine、內皮抑素、SU-5416、SU-6668、干擾素-α、抗-VEGF抗體、EMD121974、CAI、白細胞間介素-12、IM862、血小板因子-4、Vitaxin、制管張素、蘇拉明、TNP-470、PTK-787、ZD-6474、ZD-101、Bay 129566、CGS27023A、泰索蒂(taxotere)和紫杉醇。
本領域技術人員知道安全有效地給與大部分這些化療試劑的方法。另外，它們的給藥方法也記載于標準文獻中。例如，許多化療試劑的給藥方法記載于“Physicians’Desk Reference”(PDR)，如1996年版(Medical Economics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其公開內容在此引入作為參考。
此處所用的“影響微管的試劑”是干擾細胞有絲分裂的化合物，即具有抗有絲分裂活性，通過影響微管形成和/或微管的作用。這樣的試劑可以是例如微管穩定劑或者破壞微管形成的試劑。
用于本發明的影響微管的試劑是本領域技術人員公知的，其包括但不限于allocolchicine(NSC 406042)、Halichondrin B(NSC609395)、秋水仙堿(NSC 757)，秋水仙堿衍生物(例如NSC 33410)、dolastatin 10(NSC 376128)、美坦素(NSC 153858)、rhizoxin(NSC332598)、紫杉醇(Taxol，NSC 125973)、紫杉醇衍生物(例如NSC608832)、thiocolchicine(NSC 361792)、三苯甲基半胱氨酸(NSC83265)、硫酸長春花堿(NSC 49842)、硫酸長春新堿NSC 67574)、環氧噻唑酮A(epothiloneA)、環氧噻唑酮和discodermolide(參見Service，(1996)Science，2742009)雌二醇氮芥、nocodazole和MAP4等。這些試劑的例子還記載于科技和專利文獻中，例如參見Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055-3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410560-10564；Muhlradt(1997)CancerRes.573344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem.27129807-29812。
特別優選的試劑是具有類紫杉醇活性的化合物。它們包括但不限于紫杉醇和紫杉醇衍生物(類紫杉醇化合物)和類似物。紫杉醇及其衍生物可以市售得到。另外，制備紫杉醇和紫杉醇衍生物和類似物的方法是本領域技術人員公知的，(參見，例如，美國專利號5,569,729；5,565,478；5,530,020；5,527,924；5,508,447；5,489,589；5,488,116；5,484,809；5,478,854；5,478,736；5,475,120；5,468,769；5,461,169；5,440,057；5,422,364；5,411,984；5,405,972和5,296,506)。
更具體地說，此處所用的術語“紫杉醇”指市售藥物Taxol(NSC號125973)。紫杉醇抑制真核細胞復制，其機理是通過增強微管蛋白部分的聚合，使其形成穩定的微管束，從而不能改組成有絲分裂的正常結構。在許多可用的化療藥物中，紫杉醇已經引起了廣泛的興趣，因為其在臨床上能夠有效地抵抗通常藥物難以治療的腫瘤，包括卵巢癌和乳腺癌(Hawkins(1992)Oncology，617-23，Horwitz(1992)Trends Pharmacol.Sci.13134-146，Rowinsky(1990)J.Natl.Canc.Inst.821247-1259)。
可以應用本領域已知的多種評估測試方法之一來評估影響微管的其它試劑，例如，應用半自動化評估方法測定紫杉醇類似物的微管蛋白聚合活性，并聯合細胞評估方法以測定這些化合物抑制細胞有絲分裂的能力(參見Lopes(1997)Cancer Chemother.Pharmacol.4137-47)。
通常來說，確定測試化合物的活性的方法為讓細胞與該化合物接觸，確定細胞周期是否被中斷，特別是，是否通過抑制有絲分裂而中斷。這種抑制可以通過破壞有絲分裂器官來介導，例如破壞紡錘體的正常形成。有絲分裂中斷的細胞可以用改變的形態(例如，微管壓縮、染色體數目增加等)來表征。
在優選的方案中，體外篩選可能具有微管蛋白聚合活性的化合物。在優選的實施方案中，篩選抗培養的WR21細胞(來自line 69-2wap-ras小鼠)的化合物，用于抑制增生和/或細胞形態的改變，特別是微管壓縮。然后可以應用荷有WR21腫瘤細胞的裸鼠進行體內陽性測試化合物的篩選。此篩選方法的詳細描述記載于Porter(1995)Lab.Anim.Sci.，45(2)145-150中。
篩選所需活性的化合物的其它方法是本領域技術人員公知的。通常地，這樣的測試包括抑制微管集合和/或分解的測試。微管集合的測試記載于例如Gaskin等.(1974)J.Molec.Biol.，89737-758。U.S.5,569,720也提供了體外和體內測試具有類紫杉醇活性的化合物的方法。
上述影響微管的試劑的安全有效給藥方法是本領域技術人員已知的。另外，它們的給藥方法也記載于標準文獻中。例如，許多化療試劑的給藥方法記載于“Physicians’Desk Reference”(PDR)，例如1996年版(Medical Economics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其公開內容在此引入作為參考。
式(I)化合物和化療劑和/或放療的給予劑量和頻率可根據參加的臨床人員(醫師)的判斷進行調節，所需要考慮的因素包括患者的年齡、狀況和大小以及所需治療的疾病的嚴重程度。式(I)化合物的口服劑量可以是10mg-2000mg/天，優選10-1000mg/天，更優選50-600mg/天，分2-4次給藥(優選2次)，以抑制腫瘤生長。也可以應用間歇治療(例如每3周治療1周，或每4周治療3周)。
可以按照本領域公知的治療方案給予化療劑和/或放療。本領域技術人員顯然知道化療劑和/或放療的給予也可以變化，這取決于要治療的疾病和化療劑和/或放療對疾病的已知效果。另外，根據熟練的臨床人員的知識，治療方案(例如給藥劑量和給藥時間)可以根據給與的治療試劑(即抗腫瘤劑或放射線)對患者的觀察效果以及疾病對給予的治療試劑的觀察反應而變化。
在本發明的方法中，式I化合物與化療劑和/或放療同時或順序給與。因此，不需要例如化療試劑和式(I)化合物，或輻射和式(I)化合物同時或基本上同時給予。熟練的臨床人員完全可以確定同時給予或者基本上同時給予的優點。
另外，通常來說，式(I)化合物和化療試劑不必在同一藥物組合物中給藥，由于它們理化性質不同，它們可能必須以不同途徑給藥。例如，式(I)化合物可以通過口服產生和維持良好的血液含量，而化療試劑可能要靜脈注射。在可能的情況下，熟練的臨床人員完全能夠確定在同一藥物組合物中的給藥方式和給藥建議?？梢园凑毡绢I域公知的方法進行初始給藥，然后熟練的臨床人員可以基于觀察的效果改變給藥劑量、給藥方式和給藥時間。
根據參與醫師的診斷及其對患者狀況的判斷以及合適的治療方案來具體選擇式(I)化合物、化療試劑和/或輻射。
式(I)化合物、和化療試劑和/或輻射可以同時給與(例如同時或基本上同時或在同一治療方案中)，也可順序給與，取決于增生性疾病的性質、患者的狀況以及與式(I)化合物聯合給藥(例如在一個治療方案中)所實際選擇的化療試劑和/或輻射。
如果式(I)化合物、和化療試劑和/或輻射不同時給藥，或者基本上不同時給藥，那么式(I)化合物、和化療試劑和/或輻射的起始給藥順序并不重要。因此，可以首先給與式(I)化合物，然后給與化療試劑和/或輻射；或者，可以首先給與化療試劑和/或輻射，然后給與式(I)化合物。在一個治療期間，該交替給藥方案可以重復。在考慮所治療的疾病和患者狀況后，熟練的醫務人員完全能夠確定各個治療試劑在治療期間的給藥順序和重復給藥次數。例如，化療試劑和/或輻射可以首先給與，特別是如果其為細胞毒性試劑時，然后給與式(I)化合物持續治療，當確定有益時，又繼續給與化療試劑和/或輻射等等，直至治療方案完成。
因此，根據各個患者的需要，參與的醫務人員憑經驗和知識可以修正治療成分(治療試劑，即式(I)化合物，化療試劑或輻射)的各個給藥方案，作為治療結果。
在判斷給藥劑量是否有效時，參與的臨床人員會考慮患者的總體健康狀況、多種明確指征，例如疾病相關性癥狀的減輕、腫瘤生長的抑制、腫瘤的實際收縮或轉移的抑制?？梢园凑諛藴史椒ɡ鐁adio-logical研究，例如CAT或MRI掃描測定腫瘤的大小，可以應用連續的測定判斷腫瘤生長是否被抑制，甚至被逆轉。疾病相關性癥狀例如疼痛的減輕以及總體狀況的改善也可以幫助判斷治療的效果。
下列實施例舉例說明某些本發明化合物的制備方法，不能將其理解為限定本發明?？纱娴臋C械途徑和類似結構對本領域技術人員是顯而易見的。
制備實施例1 步驟A把3-硝基水楊酸(500mg，2.7mmol)、1，3-二環己基碳二亞胺(DCC)(563mg)和乙酸乙酯(10mL)混合，并攪拌10分鐘。加入(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇(0.27mL)，將所得懸浮液在室溫下攪拌過夜。濾除固體，將濾液濃縮，直接純化，或者用1N NaOH洗滌。酸化水相后用EtOAc提取。得到的有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后真空濃縮。用制備性薄層色譜(硅膠，被AcOH飽和的5％MeOH/CH2Cl2)純化殘余物，得到所要的化合物(338mg，46％，MH+＝267)。
步驟B在氫氣環境下，將上述步驟A的產物與10％Pd/C一起攪拌過夜。用硅藻土過濾反應混合物，真空濃縮濾液，用柱色譜(硅膠，被NH4OH飽和的4％MeOH/CH2Cl2)純化得到的殘余物，得到產物(129mg，43％，MH+＝237)。
制備實施例2 步驟A在攪拌和室溫下，在氮氣環境中，把環己基甲胺(0.7mL，5.35mmol，2.0當量)一次性加入到3-羥基-4-硝基苯甲酸(500mg，2.68mmol，1.0當量)、二異丙基乙基胺(DIEA)(1.4mL，8.03mmol，3.0當量)和溴三吡咯烷基 六氟磷酸鹽(PyBroP)(1.30g，2.68mmol，1.0當量)的無水二氯甲烷(25mL)溶液中。室溫下攪拌該混合物12小時，然后用1.0M氫氧化鈉水溶液(50mL)稀釋。用二氯甲烷(4×25mL)提取混合物，棄去有機提取物。用6.0M HCl水溶液把水相酸化至約pH2，然后用乙酸乙酯(4×25mL)提取。合并有機提取物后用鹽水(50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾，然后在30℃和室壓(house-vacuum)下濃縮。得到的固體產物(588mg，2.11mmol，79％，MH+＝279)可直接應用而不需進一步純化。
步驟B在氫氣環境下，將上述步驟A的酸水溶液與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，然后用柱色譜(硅膠，被NH4OH飽和的4％MeOH/CH2Cl2)純化所得的殘余物，得到產物(319mg，62％，MH+＝249)。
按照制備實施例1和2所述的過程，但應用下列表1中列出的羧酸、胺和偶聯劑[DCC(制備實施例1)或PyBrop(制備實施例2)]，得到指定的酰胺產物，其可直接應用無需進一步純化。
表1

制備實施例20 步驟A把3-硝基水楊酸(500mg，2.7mmol)、DCC(563mg)和乙酸乙酯(10mL)混合后攪拌10分鐘。加入N，N-二甲基-1，3-丙二胺(0.34mL)，室溫下攪拌所得懸浮液過夜。過濾固體，與1N HCl攪拌。過濾得到的混合物，然后在下一步反應中直接應用該水濾液。
步驟B在氫氣環境中，把步驟A的酸水溶液與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，然后用柱色譜(硅膠，被NH4OH飽和的4％MeOH/CH2Cl2)純化所得的殘余物，得到所需產物(183mg，29％，MH+＝238)。
按照制備實施例20記載的兩步反應法，應用下列表II中列出的羧酸和胺，得到所述產物。
表II 制備實施例25 步驟A按照制備實施例2所述的方法，讓2，2-二乙氧基-乙胺(4.2mL)和3-羥基-4-硝基苯甲酸(5g)反應，步驟A(40％收率，MH+＝299)。
步驟B把步驟A的產物(806mg)和P4S10(1.5g)加熱至130℃，然后立即冷卻至室溫。加入水，過濾該得到的混合物。用乙酸乙酯提取濾液，用無水硫酸鎂干燥有機相，過濾后真空濃縮。用制備性薄層色譜(硅膠，2％MeOH/CH2Cl2)純化殘余物，得到產物(90mg，15％)。
制備實施例26 把文獻(Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinenii 1986，328-330[Chemistry of heterocyclic Compounds 1986，22，265-267])中記載的羧酸與二甲胺偶合，按照制備實施例2記載的方法還原硝基取代基，得到所示的吡唑產物。
制備實施例27 按照本領域已知的方法，用HCl的二氧六環溶液或三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷溶液處理BOC氨基噻吩化合物(按文獻[J.Org.Chem.1985，50，2730-2736]制備)，得到所示的噻吩產物。
制備實施例28 步驟A按照本領域公知的方法，在合適的溶劑中，用氫氧化鋰處理制備實施例27的標題化合物，得到所示的羧基鋰中間體。
步驟B按照制備實施例2記載的方法，使二甲胺與上述步驟A制備的羧基鋰偶合，得到所示的噻吩產物。
制備實施例29 步驟A把3-羥基-4-溴-2-噻吩甲酸甲酯(10.0g，42.2mmol)溶解于250mL丙酮中，加入碳酸鉀(30.0g，217.4mmol)，然后加入碘甲烷溶液(14.5mL，233.0mmol)。加熱混合物至回流，持續6小時。冷卻至室溫后，過濾混合物，用丙酮(約200mL)洗滌固體物質。把濾液和洗滌液減壓濃縮至固體，再在高真空下干燥，得到13.7g(100％)3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酸甲酯(MH+＝251.0)。
步驟B把步驟A獲得的3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酸甲酯(13.7g)溶解于75mL THF中，加入1.0M氫氧化鈉水溶液(65mL，65.0mmol)。室溫下攪拌該混合物24小時。把1.0M鹽酸水溶液滴加到該混合物中直至pH約為2。用CH2Cl2(100mL×2，50mL)提取該酸性混合物。用鹽水(40mL)洗滌合并的有機提取物，用Na2SO4干燥，然后減壓濃縮至固體，得到10.0g(100％，兩步反應)3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酸(MH+＝237.0)。
步驟C在攪拌下，往步驟B得到的3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酸(6.5g，27.4mmol)的140mL CH2Cl2溶液中添加溴三吡咯烷 六氟磷酸鹽(PyBrop，12.8g，27.5mmol)、2.0M二甲胺的THF(34.5mL，69.0mmol)溶液和二異丙基乙胺(12.0mL，68.7mmol)。3天后，用100mLCH2Cl2稀釋混合物，用1.0M氫氧化鈉水溶液(30mL×3)和鹽水(30mL)洗滌。用Na2SO4干燥有機溶液，過濾，濃縮至油狀。用閃蒸塔色譜純化該粗制油狀產物，用CH2Cl2-己烷(1∶1，v/v)洗脫。除去溶劑得到固體，再在高真空下干燥，得到6.76g(93％)N，N′-二甲基-3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酰胺(MH+＝265.0，M+2＝266.1)。
步驟D向烘箱干燥的裝有回流冷凝器的三頸圓底燒瓶中，依次加入乙酸鈀(95mg，0.42mmol)、(R)-2，2′-雙(二苯基膦)-1，1′-聯萘(BINAP)(353mg，0.57mmol)、碳酸銫(9.2g，28.33mmol)和N，N′-二甲基-3-甲氧基-4-溴-2-噻吩甲酰胺(3.74g，14.2mmol，步驟C得到)。往該固體混合物中充入氮氣(“室壓脫氣/再裝滿氮氣”，三個循環)。把甲苯(95mL)加入到上述固體混合物中，然后加入二苯甲酮亞胺(3.6mL，21.5mmol)。加熱混合物至回流并持續10小時。加入第二批乙酸鈀(95mg，0.42mmol)和(R)-BINAP(353mg，0.57mmol)的5mL甲苯溶液。持續回流14小時。加入第三批乙酸鈀(30mg，0.13mmol)和(R)-BINAP(88mg，0.14mmol)，在110℃下持續反應24小時。將混合物冷卻至室溫，用乙醚(50mL)稀釋，用一層硅藻土過濾，用乙醚洗滌。把濾液和洗滌液減壓濃縮至油狀，用閃蒸塔色譜純化兩次，洗脫劑為CH2Cl2和CH2Cl2-MeOH(200∶1)。除去溶劑，得到4.1g(79％)固體產物酰氨基噻吩二苯基亞胺(MH+＝365.1)。
步驟E在-78℃和攪拌下，向步驟D得到的噻吩亞胺(5.09g，13.97mmol)的140mL CH2Cl2溶液中滴加1.0M三溴化硼的CH2Cl2溶液。攪拌該混合物3小時，同時將冷卻浴溫度從-78℃緩緩升高至-15℃。加入100mLH2O，室溫下攪拌該混合物30分鐘，然后分開兩層。用水(30mL×2)提取有機層(作為A)。合并水層和水提取物，用CH2Cl2(30mL)洗滌，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至約8。用CH2Cl2(100mL×3)提取中和后的水溶液，用鹽水洗滌提取物，用Na2SO4干燥，減壓濃縮至固體，得到1.49g N，N′-二甲基-3-羥基-4-氨基-2-噻吩甲酰胺(第一次收獲)。合并前述分離的有機層A和有機洗滌液，與30mL 1.0M鹽酸水溶液攪拌1小時。把兩層分離，水層用CH2Cl2(30mL)洗滌，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至約8，合并分離的有機層和有機洗滌液作為有機層B。用CH2Cl2(30mL×4)提取中和后的水溶液，提取物用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮，得到0.48g固體，作為第二次收獲的標題產物。上述有機層B用鹽水洗滌，濃縮至油狀，用制備性TLC(CH2Cl2-MeOH＝50∶1)分離，得到0.45g固體，作為第三次收獲的標題產物。產物N，N′-二甲基-3-羥基-4-氨基-2-噻吩甲酰胺的總產量為2.32g(89％)(MH+＝187.0)。
制備實施例30 在0℃和攪拌下，用6小時的時間把溶解于純乙醇(150mL)中的苯胺(12mL)滴加到方形酸二乙酯(20g)的乙醇(150mL)溶液中。室溫攪拌過夜后，過濾反應混合物，真空濃縮濾液。用冷乙醇和乙醚洗滌得到的殘余物，得到上述產物(23.5g，92％，MH+＝218)。
制備實施例31 在攪拌下，用4小時的時間把溶解于純乙醇(100mL)中的制備實施例19所得化合物(14.6g)滴加到方形酸二乙酯(19mL，128mmol)的乙醇(100mL)溶液中。5天后，真空濃縮反應混合物，用柱色譜(硅膠，0-5％MeOH/CH2Cl2)純化得到的殘余物，得到產物(65％，MH+＝305，mp＝178.6℃)。
制備實施例32步驟A 把3-硝基水楊酸(1.0g，5.5mmol)溶解于乙酸乙酯(20mL)中，加入1，3-二環己基碳二亞胺(0.568g，2.8mmol)，攪拌該混合物約10分鐘，冷卻至0℃，期間產生沉淀。加入氮雜環丁烷(0.39mL，5.8mmol)，將該反應混合物攪拌過夜，溫熱至室溫。然后把反應物冷卻至0℃，過濾。用冷乙酸乙酯洗滌收集的固體。濃縮濾液，用柱色譜(80％EtOAc/Hex)純化，得到產物(476mg，39.0％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.40(m，2H)、4.38(m，4H)、6.97(m，1H)、7.62(d，1H)、8.12(d，1H)、12.88(m，1H)ppm。
步驟B 把制備實施例32步驟A中得到的硝基化合物(0.48g，2.1mmol)溶解于甲醇(25ml)中，在氫氣環境下，與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，得到產物(344mg，90％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.52(m，2H)、4.57(bs，4H)、6.75(m，1H)、6.90(m，2H)、12.71(bs，1H)ppm。
制備實施例33 按照制備實施例32的兩步法，應用下列表III中列出的羧酸和胺，得到所示產物。
表III

制備實施例48步驟A 把3-硝基苯甲酸(1.004g，6.0mmol)與N，N-二異丙基乙基胺(6.25mL，36.0mmol)在二氯甲烷(60mL)中混合。往該溶液中加入溴-三吡咯烷-六氟磷酸鹽(PyBrOP)(2.80g，6.0mmol)，攪拌該混合物10分鐘，往其中加入吡啶甲酸甲酯鹽酸鹽(1.08g，6.0mmol)，攪拌反應過夜。然后濃縮反應物，用柱色譜(1∶9 EtOAc/DCM)分離產物。分離得到黃色固體狀產物，應用該產物不需進一步純化(1.66g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.46(m，2H)、1.65(m，1H)、1.90(m，2H)、2.39(m，1)、3.32(m，1H)、3.53(m，1H)、3.81(s，3H)、5.50(m，1H)、7.62(m，1H)、7.78(m，1H)、8.31(m，2H)ppm。
步驟B
室溫下，把所述甲酯(1.79g，6.1mmol)溶解于二氧六環/水(20mL/15mL)中。往該溶液中加入氫氧化鋰(0.258g，6.2mmol)。若干小時后，再加入氫氧化鋰(0.128g，3.0mmol)，繼續攪拌反應1小時。然后濃縮反應物，將其注入水中。用乙醚提取該溶液兩次。將水相酸化，用乙酸乙酯提取3次。有機相用硫酸鈉干燥，過濾后濃縮，用柱色譜(95％ EtOAc/己烷0.05％HOAc)分離產物，得到產物(1.66g，98％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.49(m，2H)、1.68(m，1H)、1.82(m，2H)、2.44(m，1H)、3.32(m，1H)、3.58(m，1H)、5.57(m，1H)、7.65(m，1H)、7.80(m，1H)、8.32(m，2H)、10.04(bs，1Hppm)。
步驟C 把上述硝基化合物溶解于過量甲醇(20mL)中，用氬氣保護，加入5％鈀-碳(催化量)，把氫氣球系于該燒瓶上。真空下清除系統的氣體，以氫氣代替。重復上述步驟共3次。然后在氫氣下攪拌反應過夜，然后移開氣球，用硅藻土過濾溶液，然后用甲醇洗滌數次。濃縮濾液，真空干燥，得到所需要的苯胺產物(1.33g，90％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.40(m，2H)、1.50(m，1H)、1.68(m，2H)、2.33(m，1H)、3.18(m，1H)、3.62(m，1H)、5.39(m，1H)、6.12(bs，2H)、6.75(m，2H)、7.12(m，1H)ppm。
質譜計算值248；實測值249.1(M+1)+制備實施例49-51 按照制備實施例48所述的三步法，應用下列表IV中列出的羧酸和胺，得到下列產物。
表IV 制備實施例52 步驟A把3-硝基水楊酸(2.00g，10.9mmol)與1，3-二異丙基碳二亞胺(1.71mL，10.9mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(催化量)在二氨甲烷(150mL)中混合，攪拌數分鐘。往其中同時加入2，4，6-三甲氧基芐胺鹽酸鹽(0.664g，2.8mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.88mL，10.8mmol)。攪拌反應物過夜，然后濃縮反應物，用柱色譜(1/1己烷/EtOAc)純化，得到產物(1.62g，41％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.83(m，9H)、4.72(d，2H)、6.17(s，2H)、7.01(m，1H)、7.88(m，1H)、8.18(dd，1H)、8.25(dd，1H)ppm。
質譜計算值362.11，實測值36 2.9(M+1)+步驟B把上述步驟A制備的3-硝基水楊酸-2，4，6-三甲氧基芐基酰胺(0.146g，0.4mmol)與三氟乙酸/二氯甲烷(1∶1，5mL)溶液混合。攪拌反應物45分鐘。然后，TLC(30％E/H)顯示不再存在起始物質。濃縮反應物，真空干燥，用柱色譜(5％MeOH/CH2Cl2)純化，得到產物(0.06g，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.16(m，1H)、8.28(m，1H)、8.49(m，1H)、12.26(s，1H)ppm。
步驟C把上述步驟B得到的硝基化合物(0.32g，1.6mmol)溶解于過量甲醇(40mL)中，用氬氣保護。加入5％的鈀-碳(催化量)，把氫氣球系于該燒瓶上，真空下清除系統的氣體，以氫氣代替，重復該步驟共3次。然后在氫氣下攪拌反應過夜，移開氣球，用硅藻土過濾溶液，然后用甲醇洗滌數次。濃縮濾液，真空干燥，得到所要的苯胺產物(0.17g，70％)。1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ6.63(m，1H)、6.88(m，1H)、7.07(d，1H)ppm。
制備實施例53 步驟A把3-硝基水楊酸(2.00g，10.9mmol)與1，3-二異丙基碳二亞胺(1.71mL，10.9mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(催化量)在二氯甲烷(150mL)中混合。加入甲醇，攪拌反應2小時，然后濃縮反應物，用柱色譜(3/1 H/E)純化，得到甲酯(0.32g，15％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ3.92(s，3H)、7.11(dd，1H)、8.05(d，1H)、8.19(d，1H)、11.46(s，1H)ppm。
步驟B把該硝基化合物(0.32g，1.6mmol)溶解于過量甲醇(40mL)中，用氬氣保護。加入5％的鈀-碳(催化量)，把氫氣球系于該燒瓶上。真空下清除系統的氣體，以氫氣代替。重復上述步驟3次。在氫氣下攪拌反應過夜，然后移開氣球，用硅藻土過濾溶液，然后用甲醇洗滌數次。濃縮濾液，真空干燥，得到所需要的苯胺產物(0.18g，68％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ3.92(bs，3H)、6.70(dd，1H)、6.89(dd，1H)、7.22(d，1H)、10.85(bs，1H)ppm。
質譜計算值167，實測值168.0(M+1)+制備實施例54 把苯二胺(2.20g，20mmol)溶解于吡啶(20mL)中，冷卻至0℃，把乙酸酐(1.89mL，20mmol)和二氯甲烷(10mL)混和，用15分鐘的時間滴加到上述溶液中。0℃下攪拌反應1小時，然后溫熱至室溫。2小時后，蒸發溶劑。將殘余物與甲苯共沸，真空干燥，得到上述固體狀化合物(2.8g，93％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.15(s，3H)、4.80-5.05(bs，2H)、6.62(m，1H)、6.80(d，1H)、7.00(t，1H)、7.23(d，1H)、9.20(s，1H)ppm。
制備實施例55 把苯二胺(5.0g，46mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中。在攪拌下，緩慢加入甲磺酰氯(3.6mL，46mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液。16小時后，過濾除去沉淀，蒸發剩余溶液，得到上述固體狀化合物(5.5g，65％)。
質譜，計算值186.0，實測值186.9(M+1)+制備實施例56 步驟A把2-硝基芐基溴(5.0g，0.0231mol)、THF(50mL)和嗎啉(6.05g，0.0694mol)加入到密封管中。將該反應混合物加熱至回流過夜。除去溶劑，然后加入水(400mL)，用DCM(3×80mL)提取。合并有機相，用Na2SO4干燥，濃縮后用柱色譜(25％EtOAc/HEX)純化，得到上述化合物(5.07g，99％)。
1H NMR(300MHz，d-CHCl3)δ2.5(m，4H)、3.8(m，4H)、3.9(s，2H)、7.5(t，1H)、7.7(m，2H)、7.9(d，1H)ppm。
步驟B把步驟A的硝基化合物(4.57g，0.0206mol)溶解于甲醇(100mL)中，在氫氣環境下與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，濾液濃縮后用柱色譜(EtOAc/HEX/Et3N 20/60/1)純化，得到上述化合物(3.14g，79％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ2.5(m，4H)、3.5(s，2H)、3.7(m，4H)、5.4(s，2H)、6.6(t，1H)、6.7(d，1H)、7.1(m，2H)ppm。
制備實施例57 步驟A把2-硝基芐基溴(5.0g，0.0231mol)、THF(50mL)和咪唑(4.72g，0.0694mol)加入到密封管中。將該反應混合物加熱至回流過夜。蒸發溶劑得到殘余物，將其注入水(400mL)中，用乙酸乙酯(3×80mL)提取。合并有機相，用Na2SO4干燥，真空濃縮，得到所要的化合物(4.07g，87％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ5.7(s，2H)、6.9(d，1H)、7.1(d，1H)、7.3(s，1H)、7.7(t，1H)、7.8(m，2H)、8.2(d，1H)ppm。
步驟B把步驟A的硝基化合物(2.23g，0.0110mol)溶解于甲醇(50mL)中，在氫氣環境下，與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，濾液濃縮后用柱色譜(DCM/MeOH/Et3N 20/2/1)純化，得到上述化合物(1.77g，93％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ5.2(s，2H)、5.3(s，2H)、6.6(t，1H)、6.8(d，1H)、6.9(d，1H)、7.0(s，1H)、7.1(t，1H)、7.2(s，1H)、7.8(s，1H)ppm。
制備實施例58 步驟A把2-硝基苯酚(4.32g，30mmol)溶解于EtOH(40mL)中，然后加入到2-(二甲基氨基)乙基氯化物鹽酸鹽(5.56g，34mmol)和KOH(3.5g，63.0mmol)的BuOH(50mL)和DMF(10mL)的溶液中。把反應混合物加熱至回流過夜，冷卻至室溫后，減壓蒸發掉大部分溶劑，把剩余的殘余物加入到水(400mL)中，用EtOAc(3×100mL)提取。然后合并有機相，用5％NaOH(3×100mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，該溶液濃縮后，用柱色譜(10％MeOH/DCM)純化，得到產物(1.35g，21％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.48(s，6H)、2.93(2，2H)、4.36(t，2H)、7.16(dd，1H)、7.20(d，1H)、7.63(dd，1H)、7.97(d，1H)ppm。
步驟B把步驟A的硝基化合物(1.35g，6.43mmol)溶解于MeOH(50mL)中，在10psi、氫氣環境下與10％Pd/C振蕩3小時。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝20/1/0.1)純化后，得到上述化合物(980mg，85％)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ2.46(s，6H)、2.95(t，2H)、3.60(bs，2H)、4.21(t，2H)、6.81(m，2H)、6.95(m，2H)ppm。
制備實施例59
步驟A把2-硝基芐基溴(2.0g，9.3mmol)溶解于DCM(50mL)中。加入二甲胺(2.0N的THF溶液，9.3mL，18.6mmol)，攪拌反應混合物過夜，然后把混合物傾入水(200mL)中，用DCM(3×100mL)提取。合并有機相，用硫酸鈉干燥。真空濃縮該溶液，柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝20/1/0.1)純化后，得到純化合物(540mg，32％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.36(s，6H)、3.73(s，2H)、7.21(t，1H)、7.37(d，1H)、7.43(t，1H)、7.52(d，1H)ppm。
步驟B把步驟B的硝基化合物(500mg，2.78mmol)溶解于MeOH(50mL)中，在氫氣環境下，與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝20/1/0.1)純化后，得到上述化合物(400mg，約80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.32(s，6H)、3.62(s，2H)、4.11(bs，2H)、6.42(m，2H)、6.85(m，2H)ppm。
制備實施例60 步驟A把2-硝基苯酚(5.0g，36.0mmol)加入到水(20mL)中。加入NaOH(1.44g，36.0mmol)和二溴乙烷(27.0g，144.0mmol)后，回流反應混合物4 0小時。冷卻至室溫，把反應混合物加入到水(400mL)中，用EtOAc(3×100mL)提取。然后，合并有機相，用5％NaOH(3×100mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥。溶液被濃縮后用柱色譜(75％EtOAc/戊烷)純化，得到產物(3.4g，38％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.79(t，2H)、4.57(t，2H)、7.20(m，2H)、7.65(dd，1H)、7.97(d，1H)ppm。
步驟B把硝基溴化物(1.7g，6.9mmol)溶解于THF(20mL)中，加入嗎啉(1.81mL，20.7mmol)后，把反應混合物回流過夜，冷卻至室溫，把反應混合物加入到水(300mL)中，用DCM(3×100mL)提取。合并有機相，用硫酸鈉干燥。溶液濃縮后用柱色譜(CH2Cl2/MeOH/NH4OH＝20/1/0.1)純化，得到產物(1.73g，99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.74(t，4H)、3.00(t，2H)、3.84(t，4H)、4.39(t，2H)、7.18(dd，1H)、7.20(d，1H)、7.63(dd，1H)、7.93(d，1H)ppm。
步驟C把步驟B的硝基化合物(1.71g，6.78mmol)溶解于MeOH(50mL)中，在氫氣環境下與10％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝20/1/0.1)純化后，得到所需要的化合物(1.43g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(t，4H)、2.92(t，2H)、3.84(t，4H)、4.00(bs，2H)、4.28(t，2H)、6.82(m，2H)、6.94(m，2H)ppm。
制備實施例61 步驟A按照制備實施例60步驟A的方法進行該反應。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.79(t，2H)、4.57(t，2H)、7.20(m，2H)、7.65(dd，1H)、7.97(d，1H)ppm。
步驟B把步驟A的硝基溴化物(1.7g，6.9mmol)溶解于THF(20mL)中，加入咪唑(1.41g，20.7mmol)，把反應混合物回流過夜，冷卻至室溫，把反應混合物加入到水(300mL)中，用二氯甲烷(3×100mL)提取。合并有機相，用硫酸鈉干燥。溶液濃縮后用柱色譜(CH2Cl2/MeOH/NH4OH＝10/1/0.1)純化，得到產物(1.25g，78％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.41(t，2H)、4.56(t，2H)、7.06(d，1H)、7.18(s+dd，2H)、7.26(s，1H)、7.63(dd，1H)、7.74(s，1H)、7.99(d，1H)ppm。
步驟C把制備實施例61步驟B制備的硝基化合物(1.23g，5.28mmol)溶解于MeOH(50mL)中，在氫氣環境下與10％Pd/C攪拌3小時。用硅藻土過濾該反應混合物，真空濃縮濾液，柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝10/1/0.1)純化后，得到上述化合物(1.01g，94％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.41(bs，2H)、4.38(t，2H)、4.48(t，2H)、6.82(m，3H)、6.95(m，1H)、7.17(s，1H)、7.21(s，1H)、7.62(d，1H)ppm。
制備實施例62 步驟A把2，6-二硝基苯胺(10.0g，55.0mmol)和氯化錫(II)二水合物(111.0g，492.0mmol)溶解于濃HCl(170mL)中。把反應混合物回流5小時，然后冷卻至室溫。攪拌過夜后，過濾出沉淀，然后將其溶解于10％NaOH(50mL)中。減壓蒸去溶劑，殘余物用EtOAc(10×80mL)提取。將提取物合并后除去溶劑，把得到的殘余物(2.5g粗制物)直接用于步驟B而不需進一步純化。
步驟B把步驟A的粗制物質溶解于96％甲酸(10mL)中?；亓?小時后，把溶液蒸發至干。加入水(10mL)，然后用濃氨水溶液將該酸性溶液的pH調至7。收集得到的沉淀，干燥，將其直接用于下一步反應而無需進一步純化。
步驟C把步驟B的粗制甲酰胺溶解于10％HCI(25mL)中，回流30分鐘。除去溶劑后加入10％NaOH(6mL)。蒸掉溶劑，用乙醇(4×50mL)提取得到的殘余物。溶液濃縮后用柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝5/1/0.1)純化，得到終產物(1.23g，3步總收率18％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ5.38(bs，2H)、6.44(d，1H)、7.82(d，1H)、6.99(t，1H)、8.11(s，1H)、12.30(bs，1H)ppm。
制備實施例63 步驟A把2，3-二羥基苯甲酸(15.0g，97.3mmol)懸浮于水(30mL)中。加入KOH(16.4g，292mmol)的水(70mL)溶液，然后加入二碘甲烷(8.1mL，100.2mmol)。把反應混合物在100℃下加熱5天，直至所有二碘化合物幾乎完全消失。把二鹵素起始物的剩余部分與一些水共同蒸發。把該溶液用濃鹽酸酸化，產生沉淀物。收集粗制的乙縮醛，用乙醇重結晶一次，得到結晶(7.0g，43％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ6.21(s，2H)、6.99(dd，1H)、7.22(d，1H)、7.39(d，1H)、13.07(bs，1H)ppm。
步驟B把步驟A得到的重結晶物質(2.0g，12.0mmol)在二氧六環(35mL)和叔丁醇(10mL)的混合物中回流10分鐘。將混合物冷卻至室溫，一次性加入二苯基磷?；B氮化物(2.6mL，12.0mmol)和DIEA(1.81mL，13.0mmol)。把反應混合物回流8小時，減壓除去二氧六環。把反應混合物加入到水(200mL)中，用CH2Cl2(3×100mL)提取。合并有機相，然后用硫酸鈉干燥。濃縮溶液，最后用柱色譜純化，得到產物(2.28g，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(s，9H)、6.21(s，2H)、6.56(m，2H)、6.81(t，1H)、7.23(s，1H)ppm。
步驟C把步驟B的氨基甲酸酯(2.28g，9.6mmol)懸浮于EtOH(50mL)中。往該懸浮液中加入5N HCl(50mL)。攪拌過夜，得到澄清的溶液。減壓除去溶劑，把殘余物溶解于水(200mL)。所得溶液用KOH中和，然后用EtOAc(3×100mL)提取。合并有機相后，用硫酸鈉干燥，濃縮，最后用柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH＝20/1/0.2)純化，得到所需產物(1.05g，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.48(bs，2H)、6.03(s，2H)、6.43(d，1H)、6.46(d，1H)、6.79(t，1H)ppm。
制備實施例64 把2-氨基芐胺(5.0g，41.0mmol)溶解于二氧六環/水(各30mL)混合物中。加入Boc-脫水物(8.94g，41.0mmol)和碳酸鉀(8.5g，61.5mmol)，攪拌混合物過夜。把溶液注入水(300mL)，然后用EtOAc(3×100mL)提取。合并有機相后，用硫酸鈉干燥，濃縮，最終用柱色譜(25％EtOAc/戊烷)純化，得到所要的產物(7.28g，80％)。
質譜計算值222.1，實測值223.0(M+1)+制備實施例65 步驟A把2，3-二氨基硝基苯酚(4.0g，26.1mmol)溶解于AcOH(200mL)中。加入亞硝酸鈉(2.25g，32.7mmol)，把反應混合物在60℃下加熱3小時。減壓除去溶劑，把殘余物注入水(200mL)，用EtOAc(3×100mL)提取。合并有機相后，用硫酸鈉干燥，濃縮，最后用柱色譜(50％EtOAc/戊烷)純化，得到所要的產物(3.42g，80％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.78(dd，1H)、8.60(d，1H)、8.73(d，1H)ppm。
步驟B把步驟A的硝基三唑(3.4g，20.9mmol)溶解于MeOH(50mL)中，在氫氣環境下與10％Pd/C攪拌過夜，用硅藻土過濾該反應混合物，用甲醇充分洗滌。最后，真空濃縮濾液，得到所要的化合物(2.38g，85％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ5.99(bs，2H)、6.51(d，1H)、6.93(d，1H)、7.22(dd，1H)ppm。
制備實施例66 把3，4-二甲氧基-3-環丁烯-1，2-二酮(1.30g，9.2mmol)溶解于甲醇中。往該溶液中滴加苯胺(0.84mL，9.2mmol)。室溫下攪拌反應物16小時。得到的固體確定為所需產物。過濾收集固體，真空干燥(1.8g，96％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ4.39(s，3H)、7.12(m，1H)、7.35(m，4H)、10.75(bs，1H)ppm。
制備實施例67-83 按照制備實施例66所述方法，應用下列表V中所示的烷氧基方形酸酯和胺或苯胺(R2-NH2)，得到下列產物。
表V

制備實施例84 把1，2-苯二胺(5.0g，0.0462mol)溶解于二氯甲烷(125mL)中。滴加苯磺酰氯(5.6mL，0.0439mol)，攪拌反應72小時。然后，TLC(5％MeOH/DCM)顯示反應完全。過濾反應物除去所有固體物質，用二氯甲烷洗滌濾物。濾液濃縮后，用柱色譜(3％MeOH/DCM)純化。分離得到所要的固體狀產物(2.28g，0.0092mol，20％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ6.40(m，2H)、6.73(d，1H)、6.94(m，1H)、7.46(m，2H)、7.58(m，1H)、7.68(m，2H)ppm。
MS-APCI計算值248.06，實測值248.9(M+1)+制備實施例85 步驟A把2-硝基芐基溴(5.18g，0.024mol)溶解于EtOH(25mL)中。在氬氣下，滴加NaOMe(11.0mL 25％重量的甲醇溶液，0.048mol)。室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉溶液(200mL)。用氯仿(3×80mL)提取混合物。合并有機相，用飽和碳酸氫鈉溶液(80mL)、水(80mL)和鹽水(80mL)洗滌，用硫酸鈉干燥。濃縮，用柱色譜(20％EtOAc/HEX)純化，得到所要的化合物(3.70g，92％)。
1H NMR(300MHz，d-CHCl3)δ3.60(s，3H)、4.95(s，2H)、7.55(t，1H)、7.78(t，1H)、7.90(d，1H)、8.20(d，1H)ppm。
步驟B在氬氣下，攪拌下把阮內鎳的乙醇懸浮液加入到步驟A的硝基化合物(3.00g，0.018mol)的EtOAc/EtOH(10mL/10mL)溶液中?；亓骰旌衔镞^夜，然后用硅藻土過濾。濃縮濾液，用柱色譜(25％EtOAc/HEX)純化，得到所要的化合物(1.65g，67％)。
1H NMR(300MHz，d-CHCl3)δ3.45(s，3H)、4.38(bs，2H)、4.60(s，2H)、6.82(t，2H)、7.22(m，2H)ppm。
MS(MH+)137.08，實測值137.9。
制備實施例86 把2-氨基苯酚(1.26g，0.012mol)、氫氧化鈉(1.84g，0.046mol)和溴化四丁基銨(0.19g，0.58mmol)在室溫下混合，攪拌10分鐘。加入1-氯丁烷(1.2mL，0.012mol)，把混合物在60℃下加熱8小時。直接用柱色譜(25％EtOAc/HEX)純化該混合物，得到所要的化合物(0.95g，50％)。
1H NMR(300MHz，d-CHCl3)δ1.08(t，3H)、1.62(m，2H)、1.90(m，2H)、4.05(t，2H)、4.23(bs，2H)、6.85(m，4H)ppm。
MS(MH+)165.12，實測值166.1。
制備實施例87 把2-氨基苯酚(5.0g，0.046mol)、氫氧化鈉(7.33g，0.183mol)和溴化四丁基銨(0.74g，2.29mmol)在室溫下混合，攪拌10分鐘。加入2-氯丙烷(4.2mL，0.046mol)，把混合物在60℃下加熱8小時。直接用柱色譜(25％EtOAc/HEX)純化該混合物，得到所要的化合物(0.92g，13％)。
1H NMR(300MHz，d-CHCl3)δ1.45(d，6H)、4.03(bs，2H)、4.60(m，1H)、6.93(m，4H)ppm。
MS(MH+)151.10，實測值152.1。
制備實施例89 步驟A把2-硝基苯甲醛(2.0g，0.0132mol)、1，2-二氯乙烷(100mL)和3-(二甲基氨基)丙胺(1.83mL，0.0145mol)攪拌1小時。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(4.20g，0.0198mol)后，攪拌反應混合物過夜。加入1NNaOH(100mL)，然后用EtOAc(3×100mL)提取，用硫酸鈉干燥。溶液濃縮后，用柱色譜(DCM/MeOH/Et3N 40/4/1)純化，得到所要的化合物(1.62g，52％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ1.58(m，2H)、2.20(s，6H)、2.28(t，2H)、2.58(m，2H)、3.15(s，1H)、4.00(s，2H)、7.58(t，1H)、7.78(m，2H)、8.00(d，1H)ppm。
MS(MH+)237.15，實測值238.2。
步驟B把步驟A的硝基化合物(1.62g，0.0068mol)溶解于THF(50mL)和水(50mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(1.49g，0.0068mol)和碳酸鈉(1.44g，0.0136mol)，攪拌反應混合物過夜。加入水(100mL)，然后用EtOAc(3×50mL)提取。合并有機相后，用硫酸鈉干燥，濃縮后，用柱色譜(DCM/MeOH/NH4OH 40/4/1)純化，得到所要的化合物(1.38g，60％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ1.40(d，9H)、1.68(m，2H)、2.18(s，6H)、2.23(t，2H)、3.32(d，2H)、4.78(s，2H)、7.42(d，1H)、7.26(t，1H)、7.83(t，1H)、8.15(d，1H)。
MS337.20，實測值338.1。
步驟C把步驟B的硝基化合物溶解于MeOH(25mL)中，在氫氣下，與催化量的5％Pd/C攪拌過夜。用硅藻土過濾該反應混合物，濾液濃縮后，用柱色譜(4％Et3N/EtOAc)純化，得到所要的化合物(1.16g，92％)。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ1.53(s，9H)、1.62(m，2H)、2.08(s，6H)、2.20(t，2H)、3.15(t，2H)、4.33(s，2H)、5.20(s，2H)、6.58(t，1H)、6.72(d，1H)、7.03(m，2H)ppm。
MS(MH+)307.23，實測值308.1。
制備實施例90 步驟A把方形酸(1.14g，10mmol)懸浮于亞硫酰氯(8mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.050mL)中，在氬氣下回流2小時。蒸發溶劑，把殘余物溶解于乙醚中，用冰水洗滌。乙醚層用硫酸鈉干燥，蒸發成油狀物。真空儲存該油狀物1小時。
步驟B把步驟A的二氯化物溶解于1，2-二氯苯(5mL)中，將其與2-氨基-5-硝基苯酚(1.54g，10mmol)混合，10分鐘后形成沉淀。把溶液攪拌2個多小時。過濾收集固體，用1，2-二氯苯洗滌。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.29(d，1H)、7.87(m，2H)ppm。
MS-計算值268.0，實測值267.0(M-1)-。
制備實施例91 把制備實施例90步驟A制備的二氯化物(1.13g，7.5mmol)溶解于四氫呋喃(5mL)中，冷卻至0℃。把苯胺(0.697mL，7.5mmol)溶解于四氫呋喃(5mL)中，冷卻至0℃，用10分鐘的時間將其滴加到上述二氯化物溶液中。把上述混合物溫熱至室溫，同時攪拌1小時。蒸發溶劑得到固體。把該固體加入到乙腈中，過濾后，再用乙腈洗滌，回收粉末(0.91g，59％收率)。
質譜計算值207.0，實測值209.2(M+2)+實施例1 把制備實施例22的產物(93mg)、制備實施例30的乙氧基方形酸酯化合物(75mg)、三乙胺(0.12mL)和純乙醇(5mL)加熱回流過夜。真空濃縮反應混合物，殘余物用制備性薄層色譜(硅膠，用氨水飽和的8％MeOH/CH2Cl2)純化，得到產物(51mg，34％，MH+＝437)。
實施例2-27 按照實施例1記載的方法，應用所示制備實施例的胺(或所示的市售胺)和制備實施例30的乙氧基方形酸酯，制備下列表VI中所示的產物。
表VI


實施例28 把制備實施例31的化合物(100mg)、3-氨基芐腈(78mg)、三乙胺(0.23mL)和純乙醇(10mL)在80℃下加熱過夜。真空濃縮反應混合物，用1N氫氧化鈉水溶液稀釋，用二氯甲烷洗滌。酸化水相(1M HCI)，用EtOAc提取，有機相用Na2SO4干燥。過濾后真空濃縮。殘余物用柱色譜(硅膠，被氨水飽和的5％MeOH/CH2Cl2)純化，得到產物(35mg，28％，MH+＝377，mp＝135-140℃)。
實施例29-37 按照實施例28記載的方法，應用下面所示的芳香胺代替3-氨基芐腈，制備下列表VII所示的產物。在某些情況下，產物從溶液中沉淀，能夠分離出來不需作進一步純化。
表VII 實施例38
按照已知方法氧化2-氨基吡啶(Farmaco 1993，48，857-869)，得到吡啶基N-氧化物，按照實施例28記載的方法，將其與制備實施例31的化合物偶聯，得到所要的化合物。
實施例39 按照已知方法氧化3-氨基吡啶(Chem.Lett.1998，8，829-830)，得到吡啶基N-氧化物，按照實施例28記載的方法，將其與制備實施例31的化合物偶聯，得到所要的化合物。
實施例40 步驟A按照制備實施例30記載的方法，應用市售3-氨基吡嗪代替苯胺，得到乙氧基中間體。
步驟B按照制備實施例1中記載的方法，把上述步驟A的乙氧基中間體與制備實施例19的化合物縮合，得到標題化合物。
實施例41-43
按照實施例40記載的方法，應用下列所示的芳胺代替3-氨基吡嗪，可以得到下列表VIII所示的產物。
表VIII 實施例44 把制備實施例33的N，N-二甲基酰胺(0.74g，4.1mmol)和制備實施例66的方形酸甲酯衍生物(0.84g，4.1mmol)在甲醇中混合，加熱回流，攪拌混合物96小時，然后用LCMS顯示得到所要的產物，把反應物濃縮后，用HPLC純化分離得到的產物(102.6mg，7.31％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.95(s，6H)、6.94(m，2H)、7.09(m，1H)、7.39(m，2H)、7.51(d，2H)、7.74(dd，1H)。
LCMS計算值351.12，實測值352.0(M+1)+實施例45-82按照實施例44記載的方法，應用所示制備實施例的苯胺(或所示的市售苯胺)和所示制備實施例的烷氧基方形酸酯，制備下列表IX所示的產物。用TLC檢測苯胺，經16-96小時后反應完全。
表IX




實施例83 把制備實施例46的苯胺314(52mg，0.25mmol)和制備實施例67的乙氧基方形酸酯衍生物(50mg，0.25mmol)在乙醇(2mL)中與二異丙基乙胺(0.10mL)混和，加熱回流16小時。濃縮反應液，用HPLC純化分離得到的產物(7.2mg，7.4％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ3.04(s，6H)、7.02(d，1H)、7.20(t，1H)、7.48(t，2H)、7.59(m，2H)、8.03(d，1H)、9.70(s，1H)、10.34(s，1H)、10.60(s，1H)ppm。
LCMS計算值385.1，實測值386.0(M+1)+實施例84-93按照實施例83記載的方法，應用所示制備實施例的胺(或所示的市售苯胺)和所示制備實施例的乙氧基方形酸酯，制備下列表X所示的產物。
表X
實施例94 把制備實施例90的化合物(50mg，0.19mmol)溶解于四氫呋喃(2mL)中。加入苯胺(0.017mL，0.19mmol)，將該混合物攪拌2小時。蒸發溶劑，把殘余物加入到乙腈中。過濾回收不溶性粉末，得到所要的產物(30mg，49％收率)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.18(m，1H)、7.35(m，1H)、7.48(m，2H)、7.54(m，1H)、7.83(m，2H)、8.13(d，1H)、9.95(s，1H)、10.86(s，1H)、11.50(s，1H)ppm。
質譜計算值325.0，實測值326.1(M+1)+實施例95-105按照實施例94記載的方法，應用所示制備實施例的苯胺(或所示的市售苯胺)和所示制備實施例的氯化物，制備下列表XI所示的產物。
表XI

實施例107 把實施例101中的Boc-保護的化合物(14.5mg，0.027mol)在TFA/DCM(5mL/5mL)中攪拌2小時。簡單濃縮后，得到產物(11.2mg，95％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.08(t，2H)、2.82(s，6H)、3.18(m，4H)、4.40(s，2H)、7.43(m，2H)、7.58(d，1H)、7.65(d，1H)、7.80(s，1H)、7.90(d，1H)、8.18(d，1H)、9.18(1H)、9.80(m，1H)、10.43(s，1H)、11.62(s，1H)ppm。
LCMS(MH+)439.19，實測值439.8。
實施例108
制備樹脂的常規方法樹脂的雙重加載(Double-Loading)在一個大肽容器中，把Argogel(NH2)樹脂(10g，160u，0.4mmol/g)懸浮于二氯甲烷(100mL)中。把雙-(Fmoc)-賴氨酸(7.09g，12mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(1.62g，12mmol)溶解于含有N，N-二甲基甲酰胺(12mL)的二氯甲烷(100mL)中，然后加入到上述容器中。振蕩該容器10分鐘。在振蕩的第一個15分鐘期間，時常通氣，把1，3-二異丙基碳二亞胺(3.76mL，24mmol)加入到上述容器中。振蕩該混合物16小時。過濾樹脂，依次用二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷各洗滌三次。真空干燥樹脂。
酸可裂解的連結劑的連接(Acid-Cleavable LinkerAttachment)把上述雙重加載的樹脂(0.9g)加入到含有20％哌啶的DMF溶液的小肽容器中。振蕩該混合物2小時，然后過濾。過濾樹脂后依次用N，N-二甲基甲酰胺、甲醇和二氯甲烷各洗滌三次。把該樹脂懸浮于4-(4′-甲?；?3′-甲氧基)-苯氧基丁酸(0.463g，2mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(0.262g，2mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中。振蕩該混合物10分鐘，然后在第1個15分鐘，時常通氣，加入1，3-二異丙基碳二亞胺。把該混合物振蕩16小時。過濾樹脂，依次用二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷各洗滌三次。真空干燥樹脂。
步驟A把制備的樹脂(1g)與三乙酰氧基硼氫化鈉(1.1g，5mmol)和二氯乙烷(10mL)一起懸浮于一個小肽容器中。加入鄰甲氧基苯胺(0.564mL，5mmol)，振蕩混合物16小時。過濾樹脂，依次用甲醇、二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷連續洗滌兩次。
步驟B把方形酰氯(squaryl chloride)(0.690g，4.6mmol)溶解于四氫呋喃(10mL)中，加入到步驟A的樹脂中。振搖混合物過夜，然后連續用二氯甲烷、乙腈和二氯甲烷各洗滌兩次。
步驟C把步驟B的樹脂(0.25g)與2-氨基-5-硝基苯酚(0.308g，2mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.35mL，2mmol)一起懸浮于四氫呋喃(4mL)中。振蕩該混合物16小時。過濾樹脂，依次用二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷各洗滌三次。為了裂解，把樹脂懸浮于90％三氟乙酸/二氯甲烷中，攪拌6小時。過濾樹脂，用乙腈洗滌，拋棄，把濾液和洗滌液濃縮，得到所需要的純產物(11.6mg，26％收率)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ4.01(s，3H)、7.08(m，1H)、7.22(m，2H)、7.62(d，1H)、7.81(s，1H)、7.88(dd，1H)、8.09(d，1H)、10.33(s，1H)、10.42(s，1H)、11.38(s，1H)ppm。
質譜計算值355.1，實測值356.0(M+1)+制備實施例109-120按照實施例108記載的方法，應用市售的步驟A苯胺或所示的胺或所示制備實施例的步驟C苯胺(或者所示的市售苯胺)，制備下列表XII所示的產物。(小規模制備(＜50mg樹脂)的收率是不精確的，在表中以“NA”表示)。
表XII

實施例123 按照實施例1所述的方法，使制備實施例26的化合物與制備實施例30的化合物反應，得到所示產物。
實施例124 按照實施例1所述的方法，使制備實施例27的化合物與制備實施例30的化合物反應，得到所示產物。
實施例125 按照實施例1所述的方法，使制備實施例28步驟B或制備實施例29步驟E的化合物與制備實施例30的化合物反應，得到所示產物。
權利要求
1.下式化合物，其前藥、或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體， 其中A為未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；B為 或 R2為氫、OH、C(O)OH、SH、SO2NR7R8、NHC(O)R7、NHSO2NR7R8、NHSO2R7、C(O)NR7R8、C(O)NR7OR8、OR13或者未取代或取代的雜環酸性官能團；R3和R4可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、烷氧基、OH、CF3、OCF3、NO2、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)NR7R8、SO(t)NR7R8、SO(t)R7、C(O)NR7OR8、R8-C＝N-OR7、氰基、未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；R5和R6可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、烷基、烷氧基、CF3、OCF3、NO2、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)NR7R8、SO(t)NR7R8、C(O)NR7OR8、氰基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的雜芳基；R7和R8可相同或不同，其獨立地為氫、未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的烷基芳基、未取代或取代的芳基烷基、未取代或取代的環烷基、羧烷基、氨基烷基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的雜芳基烷基或者未取代或取代的雜烷基芳基；或者R7、R8與所述NR7R8和NR7OR8上的氮原子一起可形成3-7元環，所述環還可以在環上含有1-3個其它雜原子作為環原子；并且所述環可以是未取代的，也可以是被一個或者多個相同或不同基團取代的，其中各個基團獨立地選自羥基、氰基、羧基、羥基烷基、烷氧基、COR7R8或氨基烷基；R9和R10可相同或不同，其獨立地為氫、鹵素、CF3、OCF3、NR7R8、NR7C(O)NR7R8、OH、C(O)OR7、SH、SO(t)NR7R8、SO2R7、NHC(O)R7、NHSO2NR7R8、NHSO2R7、C(O)NR7R8、C(O)NR7OR8、OR13或者未取代或取代的雜環酸性官能團；R13為COR7；R15為氫、OR13、或者未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的芳基烷基、未取代或取代的環烷基或者未取代或取代的烷基；且t為1或2。
2.權利要求1的化合物、其前藥、或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中A為 或 和R11和R12可相同或不同，其獨立地為H、OH、鹵素、氰基、CF3、CF3O、NR7R8、NR7C(O)NR7R8、C(O)NR7R8、CO2R7、OR7、SO(t)NR7R8、NR7SO(t)R8、COR7、和取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的雜芳基烷基、取代或未取代的雜環烷基、取代或未取代的羥基烷基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基COO烷基、氨基烷氧基、烷氧基氨基烷基或取代或未取代的氨基烷基。
3.權利要求1的化合物、其前藥，或者所述化合物或者所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為氫、OH、NHC(O)R7或NHSO2R7；R3為SO2NR7R8、C(O)NR7R8、SO2R7、NO2或氰基；R4為氫、NO2、CF3或氰基；R5為氫、鹵素、NO2、氰基或CF3；以及R6為氫或CF3。
4.權利要求2的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中A為 或
5.權利要求2的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為氫、OH、NHC(O)R7或NHSO2R7；R3為SO2NR7R8、C(O)NR7R8、SO2R7、NO2或氰基；R4為氫、NO2、CF3或氰基；R5為氫、鹵素、氰基、NO2或CF3；和R6為氫或CF3。
6.權利要求4的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為氫、OH、NHC(O)R7或NHSO2R7；R3為SO2NR7R8、C(O)NR7R8、SO2R7、NO2或氰基；R4為氫、NO2、CF3或氰基；R5為氫、鹵素或CF3；和R6為氫或CF3。
7.權利要求3的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH或NHSO2R7；R3為C(O)NR7R8、NO2或氰基；R4為氫，NO2或氰基；R5為氫，Cl或CF3；和R6為氫或CF3。
8.權利要求7的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH；R3為C(O)NR7R8；R4為氫；R5為氫，Cl或CF3；和R6為氫。
9.權利要求5的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH或NHSO2R7；R3為C(O)NR7R8、NO2或氰基；R4為氫、NO2或氰基；R5為氫、Cl或CF3；和R6為氫或CF3。
10.權利要求6的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH或NHSO2R7；R3為C(O)NR7R8、NO2或氰基；R4為氫、NO2或氰基；R5為氫、Cl或CF3；和R6為氫或CF3。
11.權利要求9的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH；R3為C(O)NR7R8；R4為氫；R5為氫、Cl或CF3；和R6為氫。
12.權利要求10的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中R2為OH；R3為C(O)NR7R8；R4為氫；R5為氫，Cl或CF3；和R6為氫。
13.權利要求1的化合物、其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中A和B如下表所示
14.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
15.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
16.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
17.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
18.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
19.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
20.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
21.下列結構式的權利要求13的化合物，其前藥，或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
22.藥物組合物，含有權利要求1的化合物、其前藥、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，和可藥用載體。
23.治療趨化因子介導的疾病的方法，其中趨化因子與哺乳動物的CXCR2和/或CXCR1受體結合，包括對需要的患者給予治療有效量的權利要求1的化合物、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
24.治療趨化因子介導的疾病的方法，其中趨化因子與哺乳動物的CXC受體結合，包括對需要的患者給予治療有效量的權利要求1的化合物或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體。
25.權利要求23的方法，其中趨化因子介導的疾病選自牛皮癬、特應性皮炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸疾病、關節炎、炎性腸疾病、局限性回腸炎、潰瘍性結腸炎、膿毒性休克、內毒素休克、革蘭氏陰性敗血癥、毒性休克綜合癥、中風、心腎再灌注損傷、腎小球性腎炎或血栓形成、阿爾茨海默病、移植對宿主反應、同種移植排斥、瘧疾、急性呼吸道綜合癥、延遲型過敏反應、動脈粥樣硬化以及腦和心臟血局部缺血。
26.治療癌癥的方法，包括把治療有效量的權利要求1的化合物、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體給予需要的患者。
27.權利要求26的方法，其還包括對患者給予至少一種抗癌劑和/或放療。
28.權利要求27的方法，其中抗癌劑選自烷基化試劑、抗代謝劑、天然產物及其衍生物、激素、抗激素、抗血管生成試劑、甾體和合成物。
29.抑制血管生成的方法，包括把抗血管生成量的權利要求1的化合物、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體給予需要的患者。
30.權利要求29的方法，其還包括對患者給予至少一種已知的抗血管生成試劑。
31.權利要求30的方法，其中已知的抗血管生成試劑選自Marimastat、AG3340、Col-3、Neovastat、BMS275291、酞咪哌啶酮、Squalamine、內皮抑素、SU-5416、SU-6668、干擾素-α、抗-VEGF抗體、EMD121974、CAI、白細胞間介素-12、IM862、血小板因子-4、Vitaxin、制管張素、蘇拉明、TNP-470、PTK-787、ZD-6474、ZD-101、Bay129566、CGS27023A、VEGF受體激酶抑制劑、泰索蒂和紫杉醇。
32.治療齦炎、呼吸病毒、皰疹病毒、肝炎病毒、HIV、卡波濟氏肉瘤相關病毒和動脈粥樣硬化的方法，包括把治療有效量的權利要求1的化合物、或者所述化合物或所述前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體給予需要的患者。
33.權利要求23的方法，其中趨化因子介導的疾病為血管生成性眼疾病。
34.權利要求33的方法，其中血管生成性眼疾病選自眼炎、早產兒視網膜病、糖尿病性視網膜病、黃斑變性，優選濕型，以及角膜新血管形成。
35.權利要求26的方法，其中癌性腫瘤為黑素瘤、胃癌或非小細胞肺癌。
36.權利要求35的方法，其中還包括給予患者至少一種抗癌劑和/或放療。
37.權利要求36的方法，其中抗癌劑選自烷基化試劑、抗代謝劑、天然產物及其衍生物、激素、抗激素、抗血管生成試劑、甾體和合成物。
38.權利要求37的方法，其中抗血管生成試劑選自Marimastat、AG3340、Col-3、Neovastat、BMS275291、酞咪哌啶酮、Squalamine、內皮抑素、SU-5416、SU-6668、干擾素-α、抗-VEGF抗體、EMD121974、CAI、白細胞間介素-12、IM862、血小板因子-4、Vitaxin、制管張素、蘇拉明、TNP-470、PTK-787、ZD-6474、ZD-101、Bay129566、CGS27023A、VEGF受體激酶抑制劑、泰索蒂和紫杉醇。
全文摘要
本發明公開了式(I)化合物、其前藥、或者所述化合物或前藥的可藥用鹽、溶劑化物或異構體，其中變量A和B為權利要求中定義的芳基或雜芳基；其能夠用于治療趨化因子－介導的疾病，例如急性和慢性炎癥和癌癥。
文檔編號C07D277/56GK1575273SQ02804517
公開日2005年2月2日 申請日期2002年2月1日 優先權日2001年2月2日
發明者A·G·塔維拉斯, C·J·阿基, R·W·邦德, J·朝, M·德懷爾, J·A·費雷拉, J·帕赫特爾, J·J·鮑德溫, B·凱澤, G·李, J·R·梅里特, K·H·小內爾森, L·L·羅科斯茲 申請人:先靈公司, 法馬科皮亞公司