專利名稱：C_m-s-C_m型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法
技術領域：
本發明屬于生物工程中反膠束萃取技術領域，特別涉及一種新型表面活性劑形成的反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法。
背景技術：
反膠束是表面活性劑在非極性溶劑中形成的一種分子有序組合體。它具有特殊的納米空間——“水池”，該“水池”能將酶和蛋白質等增溶于其中，并為它們提供一個特殊的微環境，使其周圍均為水分子，從而可以很好的保持其天然活性。反膠束對牛血清蛋白的液-液萃取是蛋白質分離、轉移、富集和純化的一種方法，包括前萃取(即將牛血清蛋白萃取至反膠束中)和后萃取(即將牛血清蛋白從反膠束再次轉 移至水相)兩步。一般在反膠束萃取牛血清蛋白技術中用到的表面活性劑為1，4-二(2-乙基己基)丁二酸酯磺酸鈉(AOT)和十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)。雖然AOT極易形成反膠束，但是它對牛血清蛋白進行萃取時，不僅用量大(0. 16 M，即70 g/L)，而且需要2 M無機鹽(KCl)存在才能保證萃取效率。CTAB用于牛血清蛋白萃取時，雖然用量遠遠低于AOT(CTAB用量不能低于0.04 11，即14.5 g/L)，但是仍然要求至少I. 7 M的無機鹽(NaBr)存在才能保證萃取效率。在無鹽存在的情況下，這兩種表面活性劑對牛血清蛋白的萃取效率接近于O。高濃度鹽的存在不僅對牛血清蛋白的后續純化帶來不便，同時對工藝設備的要求也比較高，以防止鹽對有關工藝設備造成腐蝕。此外，牛血清蛋白萃取過程中尚存在以下無法避免的不利因素=(I)AOT濃度高時易于使水相乳化，(2) CTAB在萃取過程中容易與牛血清蛋白形成白色不溶的復合物，(3)待萃取的牛血清蛋白含量不得高于6 g/L，否則萃取率會急劇降低。本發明將一種新型表面活性劑用于牛血清蛋白的萃取轉移，不僅表面活性劑用量少(大于3 g/L即可)，無需加入無機鹽，且待萃取牛血清蛋白的含量可高至28 g/L。此夕卜，本發明所用的表面活性劑在濃度達到90 g/L的情況下也不會導致水相乳化，亦不會與牛血清蛋白形成不溶復合物。

發明內容
本發明的目的是提供一種操作簡單、表面活性劑用量少、無需無機鹽即可萃取轉移牛血清蛋白，并使牛血清蛋白保持天然活性的Cnrs-Cm型表面活性劑反膠萃取轉移牛血清蛋白的方法。本發明方法是將牛血清蛋白配制成待萃取的牛血清蛋白溶液后以反膠束進行前萃取，取得有機相后再用緩沖液進行后萃取，離心取得牛血清蛋白水溶液，再通過真空冷凍干燥得到牛血清蛋白干粉；本發明的特點是采用Cm-S-Cm型表面活性劑配制反膠束。本發明用Cm-S-Cm型表面活性劑形成的反膠束對牛血清蛋白進行萃取(即前萃取)，在萃取過程中僅需少量的表面活性劑，且在無鹽的條件下就能使水相的牛血清蛋白完全轉移至反膠束，此過程操作簡單，萃取過程中，牛血清蛋白被反膠束內的水環境包圍，能使BSA保持天然活性。在后萃取階段，即將BSA從反膠束再次轉移至水相的過程中，僅需調節溶液的pH值就能使牛血清蛋白轉移并富集在水相中。本發明方法操作簡單，無需無機鹽，在表面活性劑用量極少的情況下即可高效地萃取轉移牛血清蛋白，并能保持牛血清蛋白的天然活性。另，本發明所述反膠束由Cm-S-Cm型表面活性劑、正構烷烴、短鏈醇和水組成。本發明所述Cm-S-Cm型表面活性劑結構式為
權利要求
1.Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，包括將牛血清蛋白配制成待萃取牛血清蛋白溶液后以反膠束進行前萃取，取得有機相后再用緩沖液進行后萃取，離心取得牛血清蛋白水溶液，再通過真空冷凍干燥得到牛血清蛋白干粉；其特征在于采用Cm-S-Cm型表面活性劑配制反膠束。
2.根據權利要求I所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述Cm-S-Cm型表面活性劑結構式為
3.根據權利要求I或2所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述反膠束由Cm-S-Cm型表面活性劑、正構烷烴、短鏈醇和水組成，所述反膠束中Cm-S-Cm型表面活性劑的濃度為0. 003 g/ml 0. 09 g/ml。
4.根據權利要求3所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述反膠束中正構烷烴和短鏈醇的體積比為12 5 : I。
5.根據權利要求3所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述反膠束中水與Cm-S-Cm型表面活性劑的摩爾比為5 20 : I。
6.根據權利要求3所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述正構烷烴為正戊烷、正己烷或正辛烷中的任意一種。
7.根據權利要求3所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于所述短鏈醇為正戊醇、正己醇或正辛醇中的任意一種。
8.根據權利要求I所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其特征在于以pH為5 10的緩沖液溶解牛血清蛋白，制成牛血清蛋白溶液。
9.根據權利要求I所述Cm-S-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，其 特征在于后萃取所用的緩沖液的pH為3. 0 4. 5。
全文摘要
Cm-s-Cm型表面活性劑反膠束萃取轉移牛血清蛋白的方法，屬于生物工程中反膠束萃取技術領域。包括以下步驟用Cm-s-Cm型表面活性劑配制反膠束；配制牛血清蛋白溶液；前萃取；后萃取；真空冷凍干燥得到牛血清蛋白產品。本發明用Cm-s-Cm型表面活性劑形成的反膠束對牛血清蛋白進行萃取(即前萃取)，無需加入無機鹽即可使水相的牛血清蛋白完全轉移至反膠束；在后萃取階段，即將牛血清蛋白從反膠束再次轉移至水相的過程中，僅需調節水的pH值，無需加入無機鹽，即可使BSA高效地富集在水相中。本方法操作簡單，無需加入無機鹽，表面活性劑用量少，牛血清蛋白的天然活性不受影響。
文檔編號C07K1/14GK102746396SQ201110402730
公開日2012年10月24日 申請日期2011年12月7日 優先權日2011年12月7日
發明者肖靜, 郭霞 申請人:揚州大學