專利名稱：Cd40抗體制劑和方法
CD40抗體制劑和方法
背景技術：
CD40是腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族的成員。其在抗原呈遞細胞(B細胞、 樹突細胞、單核細胞)、造血前體、內皮細胞、平滑肌細胞、上皮細胞以及多數人腫瘤上表達。(Grewal & Flavell, Ann. Rev. Immunol. , 1996,16 :111-35 ;Toes & Schoenberger, Seminars in Immunology, 1998,10(6) :443-8)。使用 CD40 激動劑的研究報道了對 CD40 受體的刺激引發了與抗腫瘤活性相關的級聯效果。例如，已經表明對抗原呈遞細胞上CD40 受體的刺激可增強它們的成熟、抗原呈遞功能、共刺激潛能及其免疫調節細胞因子的釋放 (Lee 等，PNAS USA, 1999,96(4) :1421-6 ；Cella 等，J. Exp. Med. , 1996,184(2) :747-52)。 已經報道⑶40激動劑促進了⑶40+腫瘤的凋亡并提高它們被樹突細胞加工的能力(von Leoprechting 等，Cancer Res. ,1999,59 1287-94 ；Sotomayo 等，Nature Medicine,1999, 5(7) :780-87 ；Eliopoulos 等，Mol. Cell Biol.，2000，29 (15) :5503-15 ;Ziebold 等，Arch. Immunol. Therapiae Experimentalis,2000,48(4) :225-33 ；Hoffmann 等，J. Immunol., 2001,24(2) :162-71)。已經在動物模型中說明了這些免疫刺激和直接抗腫瘤效果的重要性，其中已經表明⑶40激動劑抗體能防止腫瘤生長并逆轉腫瘤耐受性(Diehl等，Nature Med.，1999，5 (7) :774-9 ；Francisco 等，Cancer Res.，2000,60 (12) :32225-31)。以下專利公開中涉及 CD40 抗體:U. S. 5，786，456 ；U. S. 5，674，492 ；WO 02/088186 ；US2003059427 ； US20020142358 ；WO 01/56603 ；U.S.5，801，227 ；EP806963 ；W088/06891 和 W094/04570。然而，對于CD40抗體還沒有描述高度有效的給藥方法和制劑。適用于這樣治療中的穩定制劑也是有用的。發明概述本發明涉及治療需要這樣治療的患者的癌癥的方法，包括將CD40激動劑抗體或其片段給藥于所述患者，其中根據至少兩個循環的間歇給藥方案來給藥所述抗體，每個循環包括(a)給藥階段，該過程中將治療有效量的所述⑶40激動劑抗體給藥于所述患者，和此后(b)靜息階段。一實施方案中，給藥產生了 0.0148/1111至1(^8/1111的抗體血漿濃度， 維持至少三小時，而靜息階段為至少1周。另一實施方案中，給藥階段為至少一天、1-5天或 1-3天。另一實施方案中，靜息階段為1-8、1-6周，2-5周，或3-4周。特定實施方案中，⑶40激動劑抗體的治療有效量產生所述抗體約0. 03μ g/ml 至 10 μ g/ml,約 0. 03 μ g/ml 至 1 μ g/ml,約 0. 03 μ g/ml 至 0. 3 μ g/ml,或約 0. 1 μ g/ml 至 0.3 μ g/ml的血漿濃度，持續3至120小時。一些實施方案中，所指明的血漿濃度維持至少一天，24至30小時，24至36小時，24至48小時，24至72小時，24至96小時，或M至120 小時。一些實施方案中，血漿濃度維持3至96或12至72小時。特定實施方案中，在給藥階段過程中給藥的CD40激動劑抗體的治療有效量為約 0. 03 至 3. 0mg/kg/ 天，0. 1 至 3. 0mg/kg/ 天，0. 1 至 1. 0mg/kg/ 天，或約 0. 1 至 0. 3mg/kg/ 天。一實施方案中，給藥所述劑量持續1-5天或1-3天，連續或隔天。如上結合腫瘤治療所述的，CD40激動劑抗體的間歇給藥方案，在提高患者的免疫應答中也是有用的，因此，本發明還提供了這樣的用途。特定實施方案中，患者免疫應答的提高使得患者全血中B細胞上CD23或MHC-II表達的提高，例如，可以在給藥階段結束時進行測量。一些實施方案中，將抗CD40抗體給藥于患有原發和/或聯合免疫缺陷的患者，包括⑶40-依賴性高-IgM性免疫缺陷綜合征、常見的可變型免疫缺陷、Bruton' s丙種球蛋白缺乏血癥、IgG亞類缺乏和X-連鎖的SCID(常見γ鏈突變)。一些實施方案中，給藥抗 CD40抗體來治療免疫抑制患者，例如由于化療，或具有免疫-衰弱疾病，包括任何獲得性免疫缺陷疾病，如HIV。一些實施方案中，給藥抗CD40抗體來提高老年患者的免疫力。一些實施方案中，給藥抗CD40抗體來治療細菌、病毒、真菌或寄生蟲感染的患者。一些實施方案中，可以將人激動劑抗CD40抗體預防性地給藥于患者來預防感染或減少感染次數或減輕感染嚴重程度，這些患者由于年齡、疾病或總體差的健康狀況而易于受到感染的影響。本發明還提供了治療患者腫瘤的方法，包括給藥⑶40激動劑抗體和DNA復制抑制劑，優選鉬衍生物，尤其是順鉬。特定實施方案中，將順鉬靜脈內給藥。一些實施方案中， 順鉬的給藥量為每m2患者體表面積約25至300mg，每m2約50至150mg，或每m2約75至 IOOmgo 一實施方案，以一次劑量給藥順鉬(例如，單次靜脈內輸注)。另一實施方案中，在 2-5天內給藥。特定實施方案中，聯合順鉬給藥的CD40抗體的給藥劑量為約0. 1至3. Omg/ kg,或約 0. 1 至 1. Omg/kg,或約 0. 1 至 0. 3mg/kg。另一方面中，順鉬的給藥聯合CD40抗體的間歇給藥方案，在一個或多個給藥階段或靜息階段中給藥順鉬。另一方面中，本發明涉及治療需要這樣治療的患者的腫瘤的方法，通過以低于 lmg/kg/天的劑量將CD40激動劑抗體或其片段給藥于患者，其中由給藥抗體引起的患者 Cmax血清濃度低于50 μ g/ml。一實施方案中，劑量為0. 1至0. 3mg/kg,患者的抗體Cmax血清濃度為 0.5 M 10 μ g/ml。另一方面中，本發明涉及適于非腸道給藥的穩定液體藥物制劑，包括pH為 5. 0-6. 0的抗⑶40抗體和藥物學上可接受的載體，制劑穩定至少三個月。制劑優選具有至少約5mg/ml的CD40抗體濃度。一實施方案中，制劑包括抗CD40抗體、醋酸鈉、氯化鈉和聚山梨酸酯80。優選，其含有20mM醋酸鈉、140mM氯化鈉和0. aiig/mL聚山梨酸酯80。抗⑶40 抗體優選具有選自抗體21. 4. 1或3. 1. 1的抗體的氨基酸序列。附圖簡述

圖1顯示了在免疫細胞存在下⑶40激動劑抗體抑制了⑶40(-)腫瘤K562的生長。 在腫瘤攻擊時動物接受單次注射(IP)21.4. 1或KLH。在第21天以mm2記錄每個個體動物的腫瘤大小(每組10只動物)。研究是至少5次單獨研究的代表。圖2顯示了⑶40激動劑抑制了人乳房腫瘤細胞系BT474的生長。數值表示注射后第53天的各個腫瘤測量值，每組使用6只動物。研究是兩次單獨實驗的代表。通過水平線表示每個處理組的平均值。圖3顯示⑶40激動劑抑制了⑶40 (+)腫瘤的生長，單獨或在免疫細胞存在下。在腫瘤攻擊時動物接受單次注射21. 4. 1。(a)單獨注射腫瘤或(b)與人外周血T細胞和DC 一起。數據點表示每個個體動物的腫瘤大小(mm2)。通過水平線表示每個處理組(N = 10) 的平均值。研究是至少3次單獨實驗的代表。圖4顯示了⑶40激動劑抗體延遲由B細胞淋巴瘤(Daudi)誘導的死亡率的效果。數據點指的是存活動物的平均數目。每組N =10。圖5顯示了⑶40激動劑抗體和順鉬聯合治療引起的腫瘤消退。優選實施方案的詳述如在此所用的，術語“激動劑CD40抗體”或“激動劑抗CD40抗體”意思是當加入表達⑶40的細胞、組織或生物體中時，特異性結合人⑶40分子并提高一種或多種⑶40活性至少約20%的抗體。一些實施方案中，抗體激活⑶40活性至少40%、50%、60%、70%、 80%或85%。一些實施方案中，在⑶40L存在下發生激活。一些實施方案中，使用全血表面分子上調測試來測量激活抗體的活性。另一實施方案中，使用測量IL-12釋放的樹突細胞測試來測量激活抗體的活性。另一實施方案中，使用體內腫瘤模型來測量激活抗體的活性。如在此所用的術語“抗體”指的是完整抗體，或其與完整抗體競爭特異性結合的結合片段。通過重組DNA技術，或通過對完整抗體的酶促或化學裂解來產生結合片段。結合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv和單鏈抗體。可以理解在此涉及完整(例如，整個、全長等)抗體時包括重鏈具有末端賴氨酸缺失的抗體，其通常在重組表達過程中發生。優選，激動劑CD40抗體是人抗體。如在此所用的，術語“人抗體”意思是其中可變和恒定結構域序列源自人序列的抗體。人CD40抗體詳細描述于2001年11月9日申請的U. S.臨時申請no. 60/348, 980和2002年11月8日申請的PCT國際申請No. PCT/ US02/36107(現在公開為WO 03/040170)中，整個公開內容在此引入作為參考。人抗體在本發明的治療方法中提供了實質性的優勢，因為預期它們可最小化與人患者中使用非人抗體相關的免疫原性和過敏性反應。用于本發明的示范性人抗⑶40抗體包括具有指定為3. 1. 1,3. 1. 1H-A78T、 3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A、7. 1. 2,10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1,22. 1. 1,22. 1. 1H-C109A、 23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1,23. 28. 1H_D16E、23. 29. 1,24. 2. 1、3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1 .1L-L4M-L83V和23. 28. 1L-C92A的抗體的氨基酸序列的抗體，以及包括任何示范性抗體的 CDR或可變區的抗體。識別相同或相似表位的抗體或其片段，和任一種示范性抗體一樣，也可以用于本發明中。即，因為本領域技術人員基于在此所提供的公開內容，可以理解與本發明抗體(例如，3. 1. 1,3. 1. 1Η-Α78Τ、3· 1. 1H-A78T-V88A_V97A、7. 1. 2,10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1、 22. 1. 1,22. 1. 1H-C109A、23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1,23. 28. 1H_D16E、23. 29. 1,24. 2. 1、3· 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V 和 23. 28. 1L-C92A，等)競爭的抗體可以如在此別處所公開的一樣有用。使用本領域公知的表征抗體的方法可以容易地鑒定與在此列舉的抗體競爭的目標抗體。更具體地，評估抗體結合特征的測試以及將那些結合特征與另一種抗體相比較的測試，是本領域技術人員公知的。這樣的方法包括，但不限于，基于ELISA的測試， 使用BIAcore結合研究以及詳細描述于Walker等的US專利申請公開No. 2003/0157730A1 中的那些。如在此所用的關于抗體的術語“競爭”，意思是第一個抗體與第二個抗體競爭結合，其中與第二個抗體不存在時第一個抗體的結合相比較，在第二個抗體存在下，可檢測到第一個抗體與其同源表位的結合降低。或者，可以是(但無需是)在第一個抗體存在下， 可檢測到第二個抗體與其表位的結合也降低了。即，第一個抗體可以抑制第二個抗體與其表位的結合而第二個抗體沒有抑制第一個抗體與其表位的結合。然而，當每個抗體可檢測地抑制另一個抗體與其同源表位或配體的結合，不管程度是相同、更高或更低，認為抗體彼此相互“交叉競爭”結合它們各自的表位。例如，交叉競爭抗體可以結合本發明抗體(例如，3. 1. 1,3. 1. 1Η-Α78Τ、3· 1. 1H-A78T-V88A_V97A、7. 1. 2,10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1、 22. 1. 1,22. 1. 1H-C109A、23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1,23. 28. 1H_D16E、23. 29. 1,24. 2. 1、3· 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V 和 23. 28. 1L-C92A)結合的表位，或表位的一部分。 本發明包括競爭和交叉競爭抗體兩者。與產生這樣的競爭或交叉競爭的機理(例如，位阻， 構象改變或與共同表位或其片段結合等)無關，本領域技術人員基于在此提供的教導將認識到這樣的競爭和/或交叉競爭抗體被包括在內并可用于在此所公開的方法中。此外，可以通過一個或多個氨基酸殘基的置換、添加或缺失來進一步修飾示例抗體而不消除抗體結合抗原并發揮其激動劑功能的能力。實際上，稱為“3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V”的抗體，在重鏈可變區中包括三個氨基酸置換，即氨基酸殘基編號 78的丙氨酸置換為蘇氨酸，氨基酸殘基編號88的纈氨酸置換為丙氨酸，和氨基酸殘基編號 97的纈氨酸置換為丙氨酸(SEQ ID NO :9)，所有均相對于抗體3. 1. 1的重鏈可變區的氨基酸序歹Ij (SEQ ID NO 1) ο 此外，3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V 抗體進一步包括輕鏈可變區中氨基酸殘基編號4的亮氨酸至甲硫氨酸的氨基酸置換和氨基酸殘基編號83 的亮氨酸至纈氨酸的置換(SEQ I D NO :10)，與抗體3. 1. 1的輕鏈可變區的氨基酸序列相比較(SEQ I D NO 3)。3. 1. 1 和 3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V 抗體的重鏈 (SEQ ID NO 2)和輕鏈(SEQ ID NO 4)恒定區的氨基酸序列是相同的。抗體3. 1. 1Η-Α78Τ -V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V也稱為“3. 1. 1H3L2”來反映出相對于抗體3. 1. 1，該抗體包括重鏈中的三個氨基酸置換和輕鏈中的兩個氨基酸置換。因此，一些實施方案中，可以通過例如⑶R或框架區中一至十個，一至五個，或一至三個氨基酸殘基的置換、添加或缺失來修飾示例抗體。這些示例抗體和產生它們的方法詳細描述于2001年11月9日申請的U. S.臨時申請no. 60/；348，980和2002年11月8日申請的PCT國際申請No. PCT/US02/36107(W0 03/040170)中。然而，本發明不受限于這些或任何其他的氨基酸置換。相反，本領域技術人員根據在此所提供的教導將認識到本發明包括多種氨基酸置換。雜交瘤3. 1. 1,7. 1. 2、10. 8. 3、15. 1. 1和21. 4. 1根據布達佩斯條約于2001年8月 6日保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)，10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209。雜交瘤 21. 2. 1,22. 1. 1,23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1,23. 29. 1 和 24. 2. 1 于 2002 年7月16日保藏于ATCC。已經指定雜交瘤為以下保藏編號
雜交瘤保藏No.3. 1. 1(LN 15848)PTA-36007. 1. 2(LN 15849)PTA-360110「8;3-("LrN"15-8-50)--P-T-A-36 0215. 1. 1(LN15851)PTA-360321.4. 1(LN15853)PTA-360521. 2. 1(LN15874)PTA-454922. 1. 1(LN15875)PTA-455023. 5. 1(LN15855)PTA-454823. 25.1 (LN15876)PTA-455123. 28.1 (LN15877)PTA-455223. 29.1 (LN 15878)PTA-455324. 2. 1(LN15879)PTA-4554這些抗體的序列是已知的，并描述于WO 03/040170中, 些抗體中兩個的重鏈和輕鏈的氨基酸序列抗體3. 1. 1
為了方便，以下顯示了這
權利要求
1.激活CD40活性至少40%的CD40激動劑抗體或其片段用于制備治療患者的癌癥的藥物的用途，其中所述藥物適于根據至少兩個循環的間歇給藥方案給藥所述抗體，每個循環包括(a)給藥階段，該過程中將治療有效量的所述CD40激動劑抗體給藥于所述患者，此后，(b)靜息階段；其中給藥的CID40激動劑抗體的治療有效量是0. 03至3. Omg/kg/天，持續1-5天，連續或隔天；且靜息階段是1-8周。
2.激活CD40活性至少40%的CD40激動劑抗體或其片段用于制備在患者中增強免疫應答的藥物的用途，其中所述藥物適于根據至少兩個循環的間歇給藥方案給藥所述抗體， 每個循環包括(a)給藥階段，該過程中將治療有效量的所述⑶40激動劑抗體給藥于所述患者，此后，(b)靜息階段；其中給藥的CD40激動劑抗體的治療有效量是0. 03至3. Omg/kg/ 天，持續1-5天，連續或隔天；且靜息階段是1-8周。
3.權利要求1或2的用途，其中治療有效量產生所述抗體0.01 μ g/ml至10 μ g/ml的血漿濃度持續至少三小時，且靜息階段為至少1周。
4.根據權利要求1或2的用途，其中治療有效量產生0.03 μ g/ml至1. 0 μ g/ml的血漿濃度。
5.根據權利要求1-4任一項的用途，其中所述抗體選自具有抗體3.1. 1,3. 1. 1H-A78T、 3.1.1H-A78T-V88A-V97A.3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V、7.1. 2、 10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1,22. 1. 1,22. 1. 1H_C109A、23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1、 23. 28. 1H-D16E、23. 29. 1,24. 2. 1、3. 1. 1L-L4M-L83V 和 23. 28. 1L-C92A 的氨基酸序列的抗體。
6.根據權利要求1-4任一項的用途，其中所述抗體包括選自稱為3.1. 1,3. 1. 1H-A78T、 3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A.3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V、7. 1. 2、 10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1,22. 1. 1,22. 1. 1H_C109A、23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1、 23. 28. 1H-D16E、23. 29. 1,24. 2. 1,3. 1. 1L-L4M-L83V 禾口 23. 28. 1L-C92A 的抗體的抗體的 CDR或可變區。
7.根據權利要求1-4任一項的用途，其中所述抗體與選自稱為3.1. 1,3. 1. 1H-A78T、 3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A.3. 1. 1L-L4M-L83V、3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1. 1L-L4M-L8 3V、7. 1. 2,10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1,22. 1. 1,22. 1. 1H_C109A、23· 5. 1,23. 25. 1、 23. 28. 1,23. 28. 1H_D16E、23. 29. 1,24. 2. 1 和 23. 28. IL-C 92A 的抗體的 CD40 抗體結合相同的表位。
8.根據權利要求1-4任一項的用途，其中所述抗體與選自稱為3.1. 1,3. 1. 1H-A78T、 3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A、7. 1. 2,10. 8. 3,15. 1. 1,21. 4. 1,21. 2. 1,22. 1. 1,22. 1. 1H-C109A、 23. 5. 1,23. 25. 1,23. 28. 1,23. 28. 1H_D16E、23. 29. 1,24. 2. 1,3. 1. 1H-A78T-V88A-V97A/3. 1. IL -L4M-L83V和23. 28. 1L-C92A的抗體的CD40抗體競爭。
9.根據權利要求1-4任一項的用途，其中所述抗體具有選自21.4.1,3. 1. 1和3. 1. IH-A78T-V88A-V97A/3. 1. 1L-L4M-L83V 的抗體的氨基酸序列。
10.適于非腸道給藥的穩定液體藥物制劑，包括pH5.0-6. 0的⑶40激動劑抗體和藥物學上可接受的載體，所述制劑穩定至少三個月，其中所述抗CD40抗體具有21. 4. 1抗體的氨基酸序列，其中所述抗體的濃度為至少約5mg/ml，且其中所述藥學上可接受的載體選自醋酸鈉、氯化鈉和聚山梨酸酯80。
11.權利要求10的制劑，含有醋酸鈉、氯化鈉和聚山梨酸酯80。
全文摘要
本發明涉及CD40抗體制劑和方法。具體而言，本發明提供了治療患者腫瘤的方法，包括根據間歇給藥時間表將CD40激動劑抗體給藥于所述患者。本發明還提供了治療患者腫瘤的方法，包括給藥CD40激動劑抗體和DNA復制抑制劑的組合。還提供了治療中所用的制劑。
文檔編號C07K16/28GK102552905SQ20121000286
公開日2012年7月11日 申請日期2004年12月9日 優先權日2003年12月22日
發明者J·D·庫斯馬諾, R·P·格拉杜, V·貝蒂安 申請人:輝瑞產品公司