專利名稱：一種從楝中提取三唇素b、三唇素d和三唇素h的方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，特別是涉及一種從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法。
背景技術：
楝azedarach L.系楝科楝屬植物,其藥用部位為干燥樹皮及根皮,又名苦楝，常作為驅蟲藥被收入中國藥典，且楝在我國分布較廣，資源豐富。近年來，國內外有大量的楝科楝屬植物的研究報道，證實楝屬植物提取物具有殺蟲、抑菌、抗病毒、抗腫瘤、康生于等多種藥理活性，楝屬植物作為植物源農藥，具有對有害植物高效、對非靶標生物安全、易分解、不污染環境和不破壞生態平衡等優點。從楝的根皮中分離出的三唇素B(TrichilinB)、三唇素D ( (Trichilin D))及三唇素H (Trichilin H)屬于檸檬苦素類化合物，均對有害昆蟲甜菜夜蛾的幼蟲有一定的拒食作用。 目前，國內尚未見三唇素B、三唇素D和三唇素H的提取純化方法方面的專利和文獻報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，為百子蓮皂苷A的制備提供一種簡便易行的方法。為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案來實現的
O將楝的根皮粉碎，用體積百分比濃度為60-75%的乙醇水溶液微波提取2次，每次
O.2-0. 5h，過濾得到提取液；
2)將步驟I)所得提取液減壓回收除去乙醇，得到濃縮液，先用石油醚萃取，萃取液再用二氯甲烷萃取，各萃取3-5次，每次用量均為濃縮液體積量的2-4倍，將二氯甲烷萃取液濃縮得到浸膏；
3)將步驟2)所得浸膏用甲醇溶解干法拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁，粒度為100-200目，梯度洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，按體積比由高到低，依次按20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品；
4)將步驟3)所得半成品合并，加入甲醇溶解，再經制備高效液相色譜分離得到三唇素B、三唇素D和三唇素H流分；
5)將步驟4)所得三種流分分別采用兩相溶劑結晶法進一步純化，得到純度達98.5%以上的產品。所述步驟I)中乙醇溶液的用量為原料的8-12倍(V/W)，微波功率為500-700W。所述步驟4)中色譜條件為檢測波長212nm，流動相為乙腈-水，其中乙腈的體積百分比為38-55%。所述步驟5)中兩相溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1。本工藝采用微波提取，生產周期短，且提取均勻、快速、能耗低；采用氧化鋁柱分離，石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，操作簡單易于放大生產，制備液相色譜分離，產品純度高，制備量大。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。實施例I :
取楝的根皮粉碎，稱量20kg，加11倍量的70%乙醇溶液微波提取2次，每次15min，微波功率為500W，過濾得到提取液，減壓回收乙醇，得到濃縮液，先用15L石油醚萃取，萃余液再用30L 二氯甲烷萃取，各萃取3次，二氯甲烷萃取液合并濃縮，得到浸膏。將所得浸膏用 甲醇溶解干法混合拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁(100-200目)，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按體積比20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品。將分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再經制備高效液相色譜分離，檢測波長為212nm，流動相為乙腈-水(乙腈體積百分比濃度為45%)，得到含量分別達89. 3%、
90.1%和88. 7%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再將所得三種流分采用兩相溶劑結晶法進一步純化，結晶溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1，得到純度達98. 5%以上的產品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。實施例2:
取楝的根皮粉碎，稱量20kg，加8倍量的60%乙醇溶液微波提取2次，每次30min，微波功率為700W，過濾得到提取液，減壓回收乙醇，得到濃縮液，先用30L石油醚萃取，萃余液再用50L 二氯甲烷萃取，各萃取4次，二氯甲烷萃取液合并濃縮，得到浸膏。將所得浸膏用甲醇溶解干法混合拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁(100-200目)，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按體積比20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品。將分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再經制備高效液相色譜分離，檢測波長為212nm，流動相為乙腈-水(乙腈體積百分比濃度為38%)，得到含量分別達88. 4%,86. 5%和90. 2%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再將所得三種流分采用兩相溶劑結晶法進一步純化，結晶溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1，得到純度達98. 5%以上的產品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。實施例3:
取楝的根皮粉碎，稱量50kg，加12倍量的65%乙醇溶液微波提取2次，每次25min，微波功率為500W，過濾得到提取液，減壓回收乙醇，得到濃縮液，先用50L石油醚萃取，萃余液再用80L 二氯甲烷萃取，各萃取3次，二氯甲烷萃取液合并濃縮，得到浸膏。將所得浸膏用甲醇溶解干法混合拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁(100-200目)，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按體積比20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品。將分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再經制備高效液相色譜分離，檢測波長為212nm，流動相為乙腈-水(乙腈體積百分比濃度為42%)，得到含量分別達89. 2%、87. 7%和86. 9%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再將所得三種流分采用兩相溶劑結晶法進一步純化，結晶溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1，得到純度達98. 5%以上的產品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。實施例4:取楝的根皮粉碎，稱量50kg，加8倍量的75%乙醇溶液微波提取2次，每次20min，微波功率為600W，過濾得到提取液，減壓回收乙醇，得到濃縮液，先用30L石油醚萃取，萃余液再用75L 二氯甲烷萃取，各萃取5次，二氯甲烷萃取液合并濃縮，得到浸膏。將所得浸膏用甲醇溶解干法混合拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁(100-200目)，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按體積比20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品。將分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再經制備高效液相色譜分離，檢測波長為212nm，流動相為乙腈-水(乙腈體積百分比濃度為40%)，得到含量分別達87. 6%,89. 6%和90. 3%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再將所得三種流分采用兩相溶劑結晶法進一步純化，結晶溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1，得到純度達98. 5%以上的產品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。 實施例5:
取楝的根皮粉碎，稱量50kg，加10倍量的65%乙醇溶液微波提取2次，每次12min，微 波功率為500W，過濾得到提取液，減壓回收乙醇，得到濃縮液，先用60L石油醚萃取，萃余液再用100L 二氯甲烷萃取，各萃取4次，二氯甲烷萃取液合并濃縮，得到浸膏。將所得浸膏用甲醇溶解干法混合拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁(100-200目)，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按體積比20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品。將分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再經制備高效液相色譜分離，檢測波長為212nm，流動相為乙腈-水(乙腈體積百分比濃度為43%)，得到含量分別達88. 4%、89. 7%和88. 3%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再將所得三種流分采用兩相溶劑結晶法進一步純化，結晶溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1，得到純度達98. 5%以上的產品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。
權利要求
1.一種從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，其特征在于，包括以下步驟 O將楝的根皮粉碎，用體積百分比濃度為60-75%的乙醇水溶液微波提取2次，每次.O.2-0. 5h，過濾得到提取液； 2)將步驟I)所得提取液減壓回收除去乙醇，得到濃縮液，先用石油醚萃取，萃取液再用二氯甲烷萃取，各萃取3-5次，每次用量均為濃縮液體積量的2-4倍，將二氯甲烷萃取液濃縮得到浸膏； 3)將步驟2)所得浸膏用甲醇溶解干法拌樣后進行常壓柱層析，層析柱填料為中性氧化鋁，粒度為100-200目，梯度洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，按體積比由高到低，依次按20:1-1:1進行洗脫，分段收集半成品； 4)將步驟3)所得半成品合并，加入甲醇溶解，再經制備高效液相色譜分離得到三唇素B、三唇素D和三唇素H流分； 5)將步驟4)所得三種流分分別采用兩相溶劑結晶法進一步純化，得到純度達98.5%以上的產品。
2.根據權利要求I所述從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，其特征在于所述步驟I)中乙醇溶液的用量為原料的8-12倍(V/W)，微波功率為500-700W。
3.根據權利要求I所述從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，其特征在于所述步驟4)中色譜條件為檢測波長212nm，流動相為乙腈-水，其中乙腈的體積百分比為38-55%。
4.根據權利要求I所述從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，其特征在于所述步驟5)中兩相溶劑為石油醚-乙酸乙酯，體積比為4:1。
全文摘要
本發明涉及一種從楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法。其通過下列的步驟得到1)將楝的根皮粉碎，乙醇水溶液微波提取；2)溶劑萃取；3)氧化鋁作為填料，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，分段收集半成品；4)制備高效液相色譜分離；5)采用兩相溶劑結晶法，將分段收集的粗品用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶，得到純度達98.5%以上的三唇素B、三唇素D和三唇素H。采用該方法制備三唇素B、三唇素D和三唇素H，工藝方法簡單，成本低，效率高，具有較高的經濟價值和學術價值。
文檔編號C07J71/00GK102863504SQ201210360000
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司