提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，該方法包括以下步驟：⑴將新鮮或經(jīng)浸潤(rùn)、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wildyak的牦牛皮清洗干凈，放入水溶液后加酶進(jìn)行酶解，得到保毛脫毛后的牦牛皮；⑵保毛脫毛后的牦牛皮加水后加熱，經(jīng)清水沖洗得到滅酶后的牦牛皮；⑶滅酶后的牦牛皮剪切成小塊后用水進(jìn)行提取，得到濾液；⑷濾液濃縮后加涼水提沫，得到除沫后的濾液；⑸除沫后的濾液用水稀釋后進(jìn)行分離，即得14~25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；⑹14~25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、效果顯著，所制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，具有提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的功能。
【專利說(shuō)明】提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種膠原蛋白的制備方法，尤其涉及提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糖原是由多個(gè)葡萄糖組成的大分子多糖，是體內(nèi)糖的貯存形式，主要貯存在肌肉和肝臟中，在肌肉中約占f 2%，肝臟中約占6~8%。
[0003]肌糖原酵解后可提供組織能量，能夠滿足活動(dòng)時(shí)肌肉對(duì)能量需要，特點(diǎn)是釋放能量時(shí)不需要氧參與，在高海拔缺氧條件下或無(wú)氧條件下均可以及時(shí)提供機(jī)體需要的能量，肌糖原儲(chǔ)備與缺氧、疲勞密切相關(guān)。肝糖原是葡萄糖聚合物以糖原的形式儲(chǔ)存于肝臟，當(dāng)機(jī)體需要時(shí)，可分解成葡萄糖，轉(zhuǎn)化為能量。肝糖原和肌糖原都可以調(diào)理血糖，不同的是肝糖原分解直接變成葡萄糖，維持血糖均衡，而肌糖原需由肝臟轉(zhuǎn)換成肝糖原后在分解變成葡萄糖。
[0004]牦牛是中國(guó)古老而又原始的牛種之一，是唯一能在青藏高原生態(tài)環(huán)境下生存繁衍的牛種，是青藏高原特有的優(yōu)勢(shì)畜種，具有獨(dú)特的生態(tài)學(xué)特性及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。經(jīng)過(guò)千百年的自然選擇與進(jìn)化，形成了其獨(dú)特的遺傳性能和對(duì)高寒缺氧惡劣環(huán)境的適應(yīng)能力，具有極強(qiáng)的抗逆能力、抗病能力、耐受性和適應(yīng)性，能適應(yīng)一般家畜不能適應(yīng)的高海拔、高缺氧等嚴(yán)酷的高寒惡劣生態(tài)環(huán)境 。牦牛體內(nèi)含有許多抗疲勞、抗缺氧的生物活性物質(zhì)，從牦牛皮中提取純天然的膠原蛋白，提供 人體能量?jī)?chǔ)備很有必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種方法簡(jiǎn)單、效果顯著的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法。
[0006]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所述的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮或經(jīng)浸潤(rùn)、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wild yak的牦牛皮清洗干凈，放入PH值為4、的水溶液中，然后加入質(zhì)量濃度為0.1-20%的酶，在溫度為1(T50°C的條件下酶解2~20小時(shí)，得到保毛脫毛后的牦牛皮；
⑵將所述保毛脫毛后的牦牛皮按其重量的2飛倍加入水，并在溫度為3(T80°C的條件下加熱廣30分鐘后，用清水沖洗2~3次，洗凈殘余毛屑，得到滅酶后的牦牛皮；
⑶將所述滅酶后的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水進(jìn)行提取，提取時(shí)間為2~10小時(shí)后，過(guò)濾，棄去殘?jiān)?，得到濾液；
⑷將所述濾液濃縮至比重為1:1.2^1.5時(shí)，加入溫度為(T10°C涼水，提沫，并重復(fù):3-8次，得到除沫后的濾液；
(5)將所述除沫后的濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進(jìn)行分離，即得ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；(6)將所述ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。
[0007]所述步驟⑴中酶為木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或兩種。
[0008]所述步驟(5)中的濾液分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
[0009]所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮方法中任意一種。
[0010]所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明以牦牛皮為原料，通過(guò)酶法保毛脫毛處理牦牛皮，經(jīng)過(guò)提取分離得到大分子膠原蛋白。采用該方法制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，其分子量在14~25 KDa，粒徑大小在5.8^8 nm之間，含量大于98%以上(參見(jiàn)表1、表2、圖1、圖2)。
[0012]表1 牦牛皮膠原DLS動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟: ⑴將新鮮或經(jīng)浸潤(rùn)、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛Wild yak的牦牛皮清洗干凈，放入PH值為4、的水溶液中，然后加入質(zhì)量濃度為0.1~20%的酶，在溫度為10~50°C的條件下酶解2~20小時(shí)，得到保毛脫毛后的牦牛皮； ⑵將所述保毛脫毛后的牦牛皮按其重量的2飛倍加入水，并在溫度為30~80°C的條件下加熱廣30分鐘后，用清水沖洗2~3次，洗凈殘余毛屑，得到滅酶后的牦牛皮； ⑶將所述滅酶后的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水進(jìn)行提取，提取時(shí)間為2~10小時(shí)后，過(guò)濾，棄去殘?jiān)玫綖V液； ⑷將所述濾液濃縮至比重為1:1.2^1.5時(shí)，加入溫度為(T10°C涼水，提沫，并重復(fù)3~8次，得到除沫后的濾液； (5)將所述除沫后的濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進(jìn)行分離，即得ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液； (6)將所述ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。
2.如權(quán)利要求1所述的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟⑴中酶為木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或兩種。
3.如權(quán)利要求1所述的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)中的濾液分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
4.如權(quán)利要求1所述的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮方法中任意一種。
5.如權(quán)利要求1所述的提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
【文檔編號(hào)】C07K14/78GK103805669SQ201410080302
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年3月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月6日
【發(fā)明者】杜玉枝, 魏立新, 楊紅霞, 畢宏濤, 庫(kù)進(jìn)良 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所, 青海信成醫(yī)藥集團(tuán)有限公司