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一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法與流程

文檔序號:11170595閱讀:955來源:國知局
本發明屬于化學物質或藥品的制造方法,具體涉及以銀杏葉為原料,經過提取分離純化,得到多種活性物質的方法。

背景技術:
2億年前銀杏科植物廣泛存在于亞、非、歐、南美洲和澳洲。幾乎遍布于整個地球表面。由于第三紀和第四紀時期地球發生巨變,大部分銀杏科植物滅絕,僅有銀杏一種幸存,因而被稱為“活化石”植物。銀杏是我國特有的珍貴樹種,尤其長江以南和臺灣省,占世界銀杏資源總量的70%以上。隨著銀杏葉中有效成分的藥用、保健等綜合價值的挖掘和開發,對銀杏葉的系統研究在世界范圍內掀起了高潮,其銀杏葉化學成分的藥用機制和臨床運用成為研究的熱點。中國很早就意識到了銀杏的藥用價值,明代李時珍在《本草綱目》中提到,銀杏“人肺經,益肺氣,定喘咳,縮小便”。20世紀60年代,德國科學家發現銀杏黃酮能防治心腦血管疾病和降血脂。20世紀70年代,德國醫學媒體報道,銀杏葉提取物能增加中樞和外周血管血流量,可用于心、腦及外周血管缺血性疾病。20世紀80年代,法國科學家Brapuat發現了銀杏葉的內酯成分有很強的拮抗血小板活化因子(PAF)的作用,隨后銀杏葉制劑作為第一個進入臨床的PAF拮抗劑進行了三期臨床觀察,銀杏葉制劑的研究和開發進入了一個新的領域。1991年,美國哈佛大學的學者因發現銀杏內酯B的分子結構而榮獲諾貝爾獎。至今在世界上同一種研究中,唯有銀杏兩次獲諾貝爾獎。隨后,銀杏葉提取物的用途得到更深入、廣泛的研究,如用來治療慢性腎功能衰竭、冠心病、突發性耳聾、胃黏膜損傷、精神分裂癥、阿爾茨海默癥、腦血栓等病癥,并可抗腫瘤。更進一步的研究也表明,銀杏內酯B在臨床上用于中風、器官移植排斥反應、休克等的治療和血液透析,其效果明顯優于銀杏內酯混合物,于是國際市場又出現了銀杏葉的純化提取物B。銀杏葉中有效成分的制備工藝主要有以下類型:1、水蒸汽蒸餾法:將銀杏葉干燥、粉碎后,100~120℃水蒸餾,蒸餾液冷卻后,用非極性大孔樹脂吸附、濃縮,然后用乙醇洗脫,蒸干即得到粉狀結晶。該方法提取率很低;2、有機溶液萃取法:其提取工藝的專利也較多,可歸納為兩種形式:一種是制備銀杏葉粗提物,這類方法是把銀杏葉干燥、粉碎后用有機溶劑(例如乙醇或丙酮、石油醚等)浸泡、萃取、過濾,濾液中的溶劑用減壓蒸餾除去后,得銀杏浸膏。這種方法的制備簡單,產品的收率高(約12%~14%),但產品中雜質含量較高,通常呈棕黑色。另一種是制備銀杏葉精提物,這種方法通常在粗提物制備基礎上,進一步精制,常用的精制方法有:液-液萃取(例如用二氯甲烷、氯仿或苯脫脂),沉淀法(NH4OH或PbAc等沉淀劑)以及硅藻土或硅膠吸附法。再通過干燥、過濾、減壓濃縮除去溶劑后,即可得到精提物。一般為黃褐色粉末,收率為1~3%,該類方法耗費大量有機試劑,且得到的產品純度不高;3、超臨界流體萃取法:近十年來,用該技術提取天然植物中的藥用有效成分也越來越廣泛。它和上述的提取工藝相比較,具有提取率高,無溶劑殘留毒性、天然植物中活性成分和熱不穩定性成分不易被分解破壞而保持其天然特征等優點,但是隨著超臨界流體萃取法的深入研究,該技術的不足在于不能得到需要分離的單組分純品,對于銀杏內酯A、B、C只是粗分離。目前,還有許多關于采用柱分離提取、純化、制備銀杏提取物的方法,但這些方法基本上都耗大量有機溶劑,引起環境污染;或運用較為復雜的分離技術難以放大生產;或取效率不高,原料利用率較低。

技術實現要素:
本發明提供一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,采用強極性或極性大孔吸附樹脂分離,解決現有制備銀杏提取物銀杏酸偏高的問題,并解決現有提取及制備銀杏活性物質耗費大量有機溶劑,引起環境污染;或運用較為復雜的分離技術難以放大生產;或取效率不高,原料利用率較低等問題。并能同時得到銀杏多糖、銀杏提取物、銀杏總黃酮、銀杏總內酯、銀杏內酯A、B、C單體等多種活性物質。本發明的一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,包括:(1)原料前處理步驟;銀杏葉干品原料粉碎后,加入含有纖維素酶及果膠酶的水溶液進行破壁反應,烘干得到提取原料;(2)提取步驟;在步驟(1)得到的提取原料,50~80%乙醇提取,60~90℃下提取,料液比1∶8~1∶20,提取2~4次,合并后得到提取液;(3)多糖沉淀步驟;沉淀分離步驟;將步驟(3)中得到的提取液濃縮后,加入絮凝劑進行沉淀反應,過濾得到沉淀物銀杏多糖;過濾得到的上清液為沉淀分離液;(4)大孔樹脂分離步驟;將步驟(3)中得到的沉淀分離液,經過極性或強極性大孔樹脂分離,得到銀杏提取物;(5)硅膠干柱分離步驟;將步驟(4)中得到的銀杏提取物濕法上樣于硅膠干柱上,銀杏提取物與硅膠的質量比為1/50~1/100,在常壓下利用壓力差以展開劑下行展開,分別獲得銀杏總黃酮與銀杏總內酯;展開劑為甲醇與正己烷的混合液;(6)反相層析精制步驟;對步驟(5)中得到的銀杏總內酯,以C18填料為固定相,以甲醇與水的混合液為流動相,進行中低壓反相層析,分別收集富含銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的正組分;(7)結晶步驟;分別將反相層析的三個正組分減壓蒸餾至干得到固形物,各加入濃度為60%~80%的甲醇水溶液,40℃~60℃下充分溶解后,趁熱過濾后,冷凍結晶,分別獲得純度大于98%的銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C。所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,其特征在于:所述原料前處理步驟中,所述纖維素酶及果膠酶的水溶液為:水溶液的體積與原料的質量比為0.5~2∶1(體積質量比),纖維素酶的量與原料的質量比為0.5~3∶1000(質量比),果膠酶的質量與原料的質量比為0.5~2∶1000(質量比);所述破壁反應為:反應溫度30~60℃,反應時間1~3小時。所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,其特征在于:所述多糖沉淀步驟中,所述提取液濃縮為:將提取液濃縮至與銀杏葉干品原料的體積質量比為2~5∶1(L/kg);所述絮凝劑劑為:殼聚糖、聚苯烯酰胺、聚苯烯酸鈉、聚苯烯酸鈣中的一種;所述加入絮凝劑進行沉淀反應,過濾得到沉淀物金銀花多糖,其過程為:在濃縮液中加入絮凝劑,所加入絮凝劑與濃縮液的質量體積比為0.05~2∶100(kg/L),攪拌10~30min后,常溫靜置6~12小時,過濾得到沉淀物干燥后得到金銀花多糖。所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,其特征在于:所述大孔樹脂分離步驟中,所述極性或強極性大孔樹脂為:ADS-2、ADS-7、HPD-826、HPD-600中的一種;所述經過極性或強極性大孔樹脂分離,其過程為:將沉淀分離液上樣到大孔樹脂上,用純水或5%~15%的乙醇水溶液洗脫2~4柱體積,棄去洗脫液,再用40%~60%的乙醇水溶液洗脫2~4柱體積,收集洗脫液,干燥得到銀杏提取物。所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質的方法,其特征在于:所述硅膠干柱分離步驟中,所述硅膠干柱為:填裝有硅膠基填料、高徑比5∶1~20∶1的裝置,硅膠基填料由硅膠和硅藻土組成,硅藻土與硅膠的質量百分比為10%~20%;硅膠粒徑為30μm~80μm,硅膠活...
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