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檢測EGFR耐藥性突變的方法和組合物與流程

文檔序號:11126256閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,包括:

多個PCR引物;

所述PCR引物為:

(1)正向引物:5’-CGTTCGGCACGGTGTATAA-3’

反向引物:5’-GCCTCCTTCTGCATGGTATT-3’

或者

(2)正向引物:5’-GGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTT-3’

反向引物:5’-ATAGTCCAGGAGGCAGCCGAA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,還包括:

試劑盒;

所述試劑盒包括Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述試劑盒中Taq DNA Polymerase的濃度為2x。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述引物的終濃度為0.2uM,試劑盒中dNTPs終濃度為0.5uM,緩沖液10xTaq PCR Buffer的終濃度為1x。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述用于配置引物的終濃度溶液的引物濃度為10uM。

6.一種采用如權(quán)利要求2-5中任意一項所述的組合物進行檢測EGFR耐藥性突變的方法,其特征在于,包括步驟:

A.模板制備:石蠟包埋組織切片中提取DNA,使用紫外分光光度計對其進行濃度調(diào)整,作為PCR檢測的模板;

B.反應組分配制:分別配制檢測混合物和陰性對照品混合物;其中,檢測混合物按PCR混合液10.5uL、模板DNA溶液2uL,加ddH2O補至50ul配制一管;陰性對照品混合物按PCR混合液10.5uL,不加DNA模板,加ddH2O補至50ul配制一管;

C.擴增:分別將檢測混合物、陰性對照品混合物放入PCR儀擴增,按以下程度進行擴增:

(1)94℃,2-5min,1cycle;

(2)循環(huán)重復如下步驟30-35次:

94℃ 30S

50-60℃ 30S

72℃ 1-2kb/min;

(4)72℃, 5-10min;

D.結(jié)果判定:擴增產(chǎn)物直接點樣電泳,如果檢測物中擴增出片段和理論上設(shè)計引物時參照的目的片段大小一致,且陰性對照物無條帶,說明樣本DNA中含有該突變;如果檢測物中沒有擴增出片段,且陰性對照品無條帶,說明檢測物中不含該突變。

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