技術特征：

1.一種用于乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，包括雜交用試劑、PCR擴增試劑及富集度檢測試劑；其中所述雜交用試劑包括如下SEQ NO.1-SEQ NO.173探針混合物，且摩爾數比為SEQ NO.1:SEQ NO.(2-172):SEQ NO.173＝1：1：1,檢測時，濃度為2nM each的上述探針混合物用量為1μl；

所述PCR擴增試劑包括如下SEQ NO.176和SEQ NO.177構成的引物對：

所述富集度檢測試劑包括如下SEQ NO.156和SEQ NO.157構成的引物對：

2.如權利要求1所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，還包括雜交體系所用試劑：Block3.1/3.2、Human Cot-1PerfectHyb^TMPlus hybridization buffer；其中，Block3.1/3.2包括如下SEQ NO.174和SEQ NO.175構成的引物：

SEQ NO.174AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTSEQ NO.175CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATIIIIIIGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT

且摩爾數比為SEQ NO.174：SEQ NO.175＝1：1，檢測時濃度為300μM each的上述混合液用量為1μl。

3.如權利要求1所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述雜交體系所用試劑由以下體積的各組分組成：

4.如權利要求3所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，還包括雜交后通過生物素親和素的反應使目標DNA片段錨定在帶有親和素的Streptavidin beads，以及用于洗去非目標DNA的1×washing buffer緩沖液、0.1×washing buffer緩沖液和將捕獲的DNA洗脫下來的FE buffer緩沖液。

5.如權利要求4所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述1×washing buffer緩沖液包括0.15M濃度的氯化鈉、15mM的檸檬酸鈉和0.1％SDS。

6.如權利要求4所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述0.1×washing buffer緩沖液包括0.015M的氯化鈉、1.5mM的檸檬酸鈉、0.1％SDS。

7.如權利要求4所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述FE buffer緩沖液為pH8.2的含95％甲酰胺的10mMEDTA的溶液。

8.如權利要求4所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，還包括雜交后用于洗滌Streptavidin beads的BW緩沖液。

9.如權利要求8所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，BW緩沖液包括5mM Tris·Cl、0.5mM EDTA、1.0M氯化鈉和0.01％吐溫-20。

10.如權利要求1所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑還包括PCR預混液和去離子水。

11.如權利要求10所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述PCR預混液為2×預混液，使用時終濃度為1×。

12.如權利要求11所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述2×預混液包括2×Q5buffer、1×GC enhancer buffer、各組分濃度為0.4mM的dNTP、用量為0.2μl的濃度2000U/ml為Q5高保真DNA聚合酶。

13.如權利要求1所述的乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變檢測的雜交捕獲試劑盒，其特征在于，所述富集度檢測試劑還包括2×SYBR Green Master Mix(vazyme)、Primer mix(10uM each)、dH₂O和input/R1/R2。

14.一種檢測乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突變雜交富集的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

1)文庫構建。

2)雜交捕獲：對構建好的文庫等比例混合后使用SEQ NO.1-SEQ NO.173探針混合物進行液相探針捕獲雜交，富集獲得DNA；其中SEQ NO.1-SEQ NO.173探針混合物的摩爾數比為SEQ NO.1:SEQ NO.(2-172):SEQ NO.173＝1：1：1,檢測時，濃度為2nM each的上述探針混合物用量為1μl；

雜交捕獲所采用的雜交體系由以下體積的各組分組成：

雜交程序如下：

將H1、H2混勻離心后分別放入PCR中，變性退火程序如下：

程序運行完畢后將H1用移液槍一次性小心加入到H2中，由于PerfectHyb^TMPlus hybridization buffer比較粘稠請勿用槍頭吹打混勻；將混合液放在漩渦振蕩器上振蕩混勻離心后放入PCR儀中，50℃雜交過夜；

用1ml BW重新懸浮Streptavidin beads，洗滌兩次；

將雜交完畢的混合液用移液槍小心轉移至含SA beads的離心管中，緩慢地一次性將管壁上的SA beads沖到離心管底部，漩渦振蕩10s后甩一下，于50℃1200rpm孵育45min；

取預熱好的500μl 1×washing buffer/each sample洗滌SA beads兩次，每次50℃1200rpm孵育1min；

然后用500μl 0.1×washing buffer/each sample洗滌SA beads兩次，每次50℃1200rpm孵育1min；

向洗滌后的磁珠加入20μl FE buffer，漩渦振蕩混勻短暫離心后95℃1200rpm孵育10min；

最后使用Nucleotide Removal Kit對上清進行純化；

3)PCR擴增：對一輪富集獲得DNA進行PCR擴增，擴增使用的引物對(SEQ NO.176和SEQ NO.177)，擴增后使用1×AMPur XP beads進行純化。

所述的擴增體系包括：雜交產物20μl、5ul引物(SEQ NO.176和SEQ NO.177)、50μl PCR預混液、去離子水，總體積100μl。

PCR擴增程序如下：

4)二輪雜交富集：對純化后的一輪PCR產物留取20ng用于富集度檢測，其余全部用于二輪雜交。其中，二輪雜交input量為100ng-500ng，雜交時間為4h，其余條件與步驟同一輪雜交；

5)PCR擴增：對二輪富集獲得DNA進行PCR擴增，擴增使用的引物對SEQ NO.176和SEQ NO.177，擴增所用循環數為10，擴增后使用1×AMPur XP beads進行純化；

6)富集度檢測：對步驟2)所得的multiplex DNA sample library pool、步驟3)和步驟5)經過PCR擴增后的一輪、二輪DNA分別使用StepOne^TM and StepOnePlus^TM Realtime PCR system進行Realtime PCR富集度檢測，每個樣本做三個重復，以超純水做陰性對照，以混合前任意一文庫做陽性對照。模板使用量均為3.44ng；計算每個樣本Ct的平均值，然后使用富集前DNA樣本Ct的平均值減去富集后的DNA樣本Ct的平均值得到ΔCt；計算富集度，富集度計算方法為：Fold enrichment＝E^ΔCp，其中E為引物對為SEQ NO.156和SEQ NO.157的PCR擴增效率，經檢測該引物對的擴增效率為2.0，R²為0.991；

7)測序：對經步驟6)檢測后有一定富集度的步驟2)獲得的PCR擴增產物進行測序。

8)分析：對步驟7)獲得的測序結果進行分析，完成全外顯子區的突變檢測。