本發明屬于醫藥原料加工技術領域，具體地說，涉及一種通過破乳精制高純度蛋黃卵磷脂的方法。
背景技術：
卵磷脂是生命的基礎物質，存在于每個細胞之中，是構成神經組織的重要成分，屬于神經高級營養素。因此補充卵磷脂可激活腦細胞、消除疲勞、增強記憶、改善精神狀態，從而保持腦組織及神經系統的健康。鑒于卵磷脂特殊的功能，目前已由保健品逐漸轉向藥品。因為其對脂強力的乳化作用，可以溶解膽固醇、甘油三酯等，因此對減輕血管壁類脂質，抑制動脈粥樣硬化具有顯著的作用。
為了更適合于藥用，具有更好的生物活性和人體利用率的蛋黃卵磷脂成為重點研究對象。目前提取蛋黃卵磷脂的盡管方法較多，但純度相對較低，難以滿足要用的要求。傳統的提取蛋黃卵磷脂的方法一般用有機溶劑法，獲得的蛋黃卵磷脂富集了膽固醇等，因此純度低，而采用溶劑通常為丙酮，引入有毒有害溶劑，這樣不僅會造成有機溶劑在產品中的殘留，而且導致環境污染。
中國發明專利CN101029057A 公開了一種蛋黃卵磷脂的制備方法，該方法是以禽蛋為原料，分離出蛋黃攪拌成蛋黃液，用食用酒精提取，分離出提取液，將提取液濃縮、脫水得卵磷脂初品，將卵磷脂初品再進行超臨界CO2 萃取，脫除中性脂肪，制得脫除中性脂肪的卵磷脂，但該方法得到的蛋黃卵磷脂純度仍然不能滿足醫藥用要求。
中國發明專利CN1733777A 公開了一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，包括1) 新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2) 經鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3) 粗磷脂用甲醇溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4) 待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液。采用丙酮脫脂造成有毒物殘留，且對環境有污染。
中國發明專利CN102924506 A公開了一種高純度卵磷脂的制備方法，采用模擬移動床連續色譜分離技術確保卵磷脂與原料脂質中所含其他成分的有效分離，得到高純度的卵磷脂產品。該方法工藝復雜，盡管純度高，但效率低，難以滿足規模化提取的要求。
為此，無污染、高效、規模化提取高純蛋黃卵磷脂對發展藥用卵磷脂意義重大，而現有技術還不能完全滿足上述需求。
技術實現要素：
針對目前蛋黃卵磷脂精制工藝復雜，容易造成二次污染的缺陷，本發明提出了一種通過破乳精制高純度蛋黃卵磷脂的方法。其突出的特點是針對卵磷脂對甘油三酯、膽固醇等中性脂具有極強的乳化能力，卵磷脂粗品中卵磷脂與甘油三酯、膽固醇等中性油脂難以分離的特性，通過采用硫酸鹽破乳，將卵磷脂粗品中極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂分離出，從而實現了清潔化、無污染化生產高純蛋黃卵磷脂。得到的卵磷脂純度超過98%，完全滿足卵磷脂產品作為藥用原料使用。
為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：
一種通過破乳精制高純度蛋黃卵磷脂的方法，其特征在于：具體提取方法如下：
（1）將低溫存儲的禽蛋清洗，進行紫外滅菌，在全程真空條件下分離出蛋黃，將蛋黃與體積濃度為90-95%的乙醇以體積比1:5-10加入高速分散機，高速分散機溫度恒定在15-20℃，以5000-10000rpm的轉速高速分散，使蛋黃中的卵磷脂與蛋黃蛋白質完全分離，分散時間30-45min，然后靜置15min，乙醇從蛋黃中萃取出包含蛋黃油和卵磷脂的混合液；
（2）將步驟（1）得到的混合液在30-35℃條件下真空減壓濃縮至膏狀，進一步在45℃條件下真空干燥、粉碎，得到粉狀卵磷脂混合物；
（3）將步驟（2）得到的粉狀卵磷脂混合物加入萃取釜，通入液態二氧化碳進行超臨界萃取蛋黃油，二氧化碳與蛋黃油混合流體送入分離器，進一步泄壓使得二氧化碳與蛋黃油迅速分離，回收蛋黃油；萃取釜內收集得到卵磷脂粗品；
（4）在步驟（3）得到的卵磷脂粗品中加入體積濃度為80-85%的乙醇，控制乙醇加入量，與卵磷脂粗品混合得到粘度10-15cP的溶液，然后加入硫酸鹽，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞；
（5）進一步降低溫度，進行二級離心處理：
第一級：在-30℃條件下以2000-3000rpm的離心速度下離心，將極少量的以膽固醇為主的中性脂除脫，得到清液；
第二級：將第一級得到的清液在-50℃條件下以4000-5000rpm的離心速度離心，將極少量的以甘油三酯膽為主的中性脂除脫；
（6）將步驟（5）經過二級離心得到的溶液通過減壓干燥、水洗、乙酸乙酯洗、減壓干燥得到精制的高純蛋黃卵磷脂。
優選的，步驟（4）所述的硫酸鹽為硫酸鋁、硫酸鋁鉀中的至少一種。
優選的，步驟（4）所述的硫酸鹽加入量為卵磷脂粗品溶液質量的3-5%。
優選的，步驟（4）所述的硫酸鹽為粒徑小于5微米的微細粉體。
進一步優選，步驟（4）所述的硫酸鹽為納米級粉體。
優選的，步驟（5）所述的第一級離心速度為2500rpm。
優選的，步驟（5）所述的第二級離心速度為4500rpm。
卵磷脂由于對甘油三酯、膽固醇等具有極強的乳化能力，因此在卵磷脂粗品中卵磷脂與甘油三酯、膽固醇等中性油脂乳化以均相存在，盡管通過超臨界二氧化碳除脫了大部分蛋黃油，但殘留少量的甘油三酯、膽固醇等中性油脂影響了卵磷脂的品質，致使卵磷脂純度低，無法作為醫藥原料使用。
本發明突出的特點是將經過乙醇萃取、超臨界二氧化碳萃取得到的卵磷脂粗品進一步進行了精制，其顯著的進步是采用了硫酸鹽，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞，從而使卵磷脂粗品中的卵磷脂與中性脂出現相分離，進一步通過二級降溫，在高速離心條件下將極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂除脫，從而精制出高純度蛋黃卵磷脂。
一個典型的操作實例，使產品的純度提高到98％以上，實現了高純蛋黃卵磷脂清潔化、無污染化生產，完全滿足卵磷脂產品作為藥用原料使用。更為顯著的優勢是，精制過程中利用乙酸乙酯清洗，有效防止卵磷脂受外界氧、水環境的影響，較好的保證了卵磷脂的活性，延長其保存期限。
本發明一種通過破乳精制高純度蛋黃卵磷脂的方法，與現有技術相比其突出的特點和優異的效果表現在：
1、采用了硫酸鹽，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞，從而使卵磷脂粗品中的卵磷脂與中性脂出現相分離，進一步通過二級降溫，在高速離心條件下將極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂除脫，從而精制出高純度蛋黃卵磷脂。
2、精制過程中利用乙酸乙酯清洗，有效防止卵磷脂受外界氧、水環境的影響，較好的保證了卵磷脂的活性，延長其保存期限。
3、本發明提供的制備方法，實現了高純蛋黃卵磷脂清潔化、無污染化生產，完全滿足卵磷脂產品作為藥用原料使用。
具體實施方式
以下通過具體實施例對本發明做進一步的解釋，但不應將此理解為本發明的范圍僅限于以下的實施例。在不脫離本發明上述方法思想的情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應包含在本發明的范圍內。
實施例1
（1）將低溫存儲的雞蛋清洗，進行紫外滅菌，在全程真空條件下分離出蛋黃，將蛋黃與體積濃度為95%的乙醇以體積比1:5加入高速分散機，高速分散機溫度恒定在15-20℃，以5000rpm的轉速高速分散，使蛋黃中的卵磷脂與蛋黃蛋白質完全分離，分散時間30min，然后靜置15min，乙醇從蛋黃中萃取出包含蛋黃油和卵磷脂的混合液；
（2）將步驟（1）得到的混合液在30-35℃條件下真空減壓濃縮至膏狀，進一步在45℃條件下真空干燥、粉碎，得到粉狀卵磷脂混合物；
（3）將步驟（2）得到的粉狀卵磷脂混合物加入萃取釜，通入液態二氧化碳進行超臨界萃取蛋黃油，二氧化碳與蛋黃油混合流體送入分離器，進一步泄壓使得二氧化碳與蛋黃油迅速分離，回收蛋黃油；萃取釜內收集得到卵磷脂粗品；
（4）在步驟（3）得到的卵磷脂粗品中加入體積濃度為80%的乙醇，控制乙醇加入量，與卵磷脂粗品混合得到粘度10cP的溶液，然后加入粒徑小于5μm的硫酸鋁粉末，通過攪拌使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞；硫酸鋁加入量為卵磷脂粗品溶液質量的3%。
（5）進一步降低溫度，進行二級離心處理：
第一級：在-30℃條件下以2500rpm的離心速度下離心，將極少量的以膽固醇為主的中性脂除脫，得到清液；
第二級：將第一級得到的清液在-50℃條件下以4500rpm的離心速度離心，將極少量的以甘油三酯膽為主的中性脂除脫；
（6）將步驟（5）經過二級離心得到的溶液通過減壓干燥、水洗、乙酸乙酯洗、減壓干燥得到精制的高純蛋黃卵磷脂。
通過對收集的精細蛋黃卵磷脂檢驗，產品純度達到了98.5％。
實施例2
（1）將低溫存儲的鵝蛋清洗，進行紫外滅菌，在全程真空條件下分離出蛋黃，將蛋黃與體積濃度為95%的乙醇以體積比1:8加入高速分散機，高速分散機溫度恒定在15-20℃，以10000rpm的轉速高速分散，使蛋黃中的卵磷脂與蛋黃蛋白質完全分離，分散時間45min，然后靜置15min，乙醇從蛋黃中萃取出包含蛋黃油和卵磷脂的混合液；
（2）將步驟（1）得到的混合液在30-35℃條件下真空減壓濃縮至膏狀，進一步在45℃條件下真空干燥、粉碎，得到粉狀卵磷脂混合物；
（3）將步驟（2）得到的粉狀卵磷脂混合物加入萃取釜，通入液態二氧化碳進行超臨界萃取蛋黃油，二氧化碳與蛋黃油混合流體送入分離器，進一步泄壓使得二氧化碳與蛋黃油迅速分離，回收蛋黃油；萃取釜內收集得到卵磷脂粗品；
（4）在步驟（3）得到的卵磷脂粗品中加入體積濃度為85%的乙醇，控制乙醇加入量，與卵磷脂粗品混合得到粘度15cP的溶液，然后加入硫酸鋁鉀納米粉，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞；硫酸鋁鉀加入量為卵磷脂粗品溶液質量的5%。
（5）進一步降低溫度，進行二級離心處理：
第一級：在-30℃條件下以3000rpm的離心速度下離心，將極少量的以膽固醇為主的中性脂除脫，得到清液；
第二級：將第一級得到的清液在-50℃條件下以5000rpm的離心速度離心，將極少量的以甘油三酯膽為主的中性脂除脫；
（6）將步驟（5）經過二級離心得到的溶液通過減壓干燥、水洗、乙酸乙酯洗、減壓干燥得到精制的高純蛋黃卵磷脂。
通過對收集的精細蛋黃卵磷脂進行常規檢測，其成分為：含磷脂酰膽堿98.0％，磷脂酰乙醇胺0.5％，溶血性磷脂酰膽堿0.5%。
實施例3
（1）將低溫存儲的鵪鶉蛋清洗，進行紫外滅菌，在全程真空條件下分離出蛋黃，將蛋黃與體積濃度為90%的乙醇以體積比1:10加入高速分散機，高速分散機溫度恒定在15-20℃，以8000rpm的轉速高速分散，使蛋黃中的卵磷脂與蛋黃蛋白質完全分離，分散時間30min，然后靜置15min，乙醇從蛋黃中萃取出包含蛋黃油和卵磷脂的混合液；
（2）將步驟（1）得到的混合液在30-35℃條件下真空減壓濃縮至膏狀，進一步在45℃條件下真空干燥、粉碎，得到粉狀卵磷脂混合物；
（3）將步驟（2）得到的粉狀卵磷脂混合物加入萃取釜，通入液態二氧化碳進行超臨界萃取蛋黃油，二氧化碳與蛋黃油混合流體送入分離器，進一步泄壓使得二氧化碳與蛋黃油迅速分離，回收蛋黃油；萃取釜內收集得到卵磷脂粗品；
（4）在步驟（3）得到的卵磷脂粗品中加入體積濃度為85%的乙醇，控制乙醇加入量，與卵磷脂粗品混合得到粘度10cP的溶液，然后加入硫酸鋁粉末，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞；硫酸鋁加入量為卵磷脂粗品溶液質量的4%。
（5）進一步降低溫度，進行二級離心處理：
第一級：在-30℃條件下以2000rpm的離心速度下離心，將極少量的以膽固醇為主的中性脂除脫，得到清液；
第二級：將第一級得到的清液在-50℃條件下以4000rpm的離心速度離心，將極少量的以甘油三酯膽為主的中性脂除脫；
（6）將步驟（5）經過二級離心得到的溶液通過減壓干燥、水洗、乙酸乙酯洗、減壓干燥得到精制的高純蛋黃卵磷脂。
通過對收集的精細蛋黃卵磷脂檢驗，產品純度達到了98.1％。
實施例4
（1）將低溫存儲的鴨蛋清洗，進行紫外滅菌，在全程真空條件下分離出蛋黃，將蛋黃與體積濃度為90%的乙醇以體積比1:5加入高速分散機，高速分散機溫度恒定在15-20℃，以5000rpm的轉速高速分散，使蛋黃中的卵磷脂與蛋黃蛋白質完全分離，分散時間45min，然后靜置15min，乙醇從蛋黃中萃取出包含蛋黃油和卵磷脂的混合液；
（2）將步驟（1）得到的混合液在30-35℃條件下真空減壓濃縮至膏狀，進一步在45℃條件下真空干燥、粉碎，得到粉狀卵磷脂混合物；
（3）將步驟（2）得到的粉狀卵磷脂混合物加入萃取釜，通入液態二氧化碳進行超臨界萃取蛋黃油，二氧化碳與蛋黃油混合流體送入分離器，進一步泄壓使得二氧化碳與蛋黃油迅速分離，回收蛋黃油；萃取釜內收集得到卵磷脂粗品；
（4）在步驟（3）得到的卵磷脂粗品中加入體積濃度為85%的乙醇，控制乙醇加入量，與卵磷脂粗品混合得到粘度15cP的溶液，然后加入硫酸鋁鉀與硫酸鋁的混合物，使卵磷脂粗品中的卵磷脂與極少量的甘油三酯、膽固醇等中性脂形成的乳液體系破壞；硫酸鹽混合物加入量為卵磷脂粗品溶液質量的5%。
（5）進一步降低溫度，進行二級離心處理：
第一級：在-30℃條件下以25000rpm的離心速度下離心，將極少量的以膽固醇為主的中性脂除脫，得到清液；
第二級：將第一級得到的清液在-50℃條件下以4500rpm的離心速度離心，將極少量的以甘油三酯膽為主的中性脂除脫；
（6）將步驟（5）經過二級離心得到的溶液通過減壓干燥、水洗、乙酸乙酯洗、減壓干燥得到精制的高純蛋黃卵磷脂。
通過對收集的精細蛋黃卵磷脂檢驗，產品純度達到了98.3％。