本發(fā)明屬于活性蛋白提取領(lǐng)域，具體涉及一種從印度辣木籽中活性蛋白提取方法。

背景技術(shù)：

辣木籽是白花菜目辣木科，又稱鼓槌樹。多年生熱帶落葉喬木。辣木籽除少量用于種植之外，大量的用途是用來做生產(chǎn)原料，在食品、醫(yī)藥、保健、化妝品等領(lǐng)域都有著良好的應(yīng)用價(jià)值，因?yàn)楦缓蹦咀延停湓诮档脱⒀獕海瑴p肥瘦身，調(diào)節(jié)腸胃，護(hù)肝戒酒，增強(qiáng)人體免疫力方面都具有顯著療效。

現(xiàn)有技術(shù)提供多種活性蛋白提取方法，例如，中國(guó)發(fā)明授權(quán)專利文獻(xiàn)一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法授權(quán)公告號(hào)：CN102020695B 該發(fā)明涉及一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法，該方法通過超聲協(xié)助提取、硫酸銨沉淀得到具有生物活性(如抗氧化活性)的蛋白質(zhì)和多肽，再通過常規(guī)方法確定提取的蛋白質(zhì)和多肽的成分及其分子量和確定蛋白質(zhì)和多肽的抗氧化活性。為維吾爾藥食兩用植物芹菜籽的生物活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并開發(fā)相應(yīng)的產(chǎn)品提供了依據(jù)。該方法提取過程簡(jiǎn)單，又不易使蛋白質(zhì)和多肽失活，制備的蛋白質(zhì)和多肽生物活性(如抗氧化活性)高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，易于擴(kuò)大規(guī)模生產(chǎn)，降低提取過程的成本，是提取制備生物活性蛋白質(zhì)和多肽的理想方法之一。通過該方法獲得的蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品以及化妝品添加劑的用途。

現(xiàn)有技術(shù)制備的蛋白質(zhì)和多肽生物活性高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，但工藝復(fù)雜且預(yù)處理不太理想，活性蛋白提取率有待提高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題提供一種從印度辣木籽中活性蛋白提取方法，上述方法提取方法簡(jiǎn)單且提取活性蛋白含量高。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)所采取的方法為：一種從印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，去離子水浸泡，干燥，超微粉碎，過篩；去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，離心取上清液，上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確保活性采用凍干工藝。

步驟1中內(nèi)子在去離子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器內(nèi)干燥，干燥器內(nèi)設(shè)有干燥劑。通過加熱使辣木籽粉中的濕分氣化逸出，獲得干燥的辣木籽粉末，干燥后再經(jīng)超微粉碎，用50~150目篩網(wǎng)后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后續(xù)的脫脂工藝。

干燥劑由以下成分及重量份組成：生石灰70~90重量份、三聚磷酸鈉0.1~0.5份，殼聚糖0.1~0.5份，納米二氧化硅1~5份、無水硫酸銅5~10份、硫酸亞鐵2~8份、四甲基哌啶醇2~6份，在預(yù)處理過程中辣木子內(nèi)部含有太多水分不利于后續(xù)的脫脂和提取蛋白，辣木子內(nèi)部水分過多可能會(huì)因環(huán)境影響而導(dǎo)致活性蛋白減少，采用干燥劑可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果優(yōu)異，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的減少而影響提取率。

去離子水內(nèi)含有磷酸二氫鉀2~4重量份和異丙醇3~6重量份，可有效溶解辣木籽中雜質(zhì)，提取活性蛋白過程中若存在雜質(zhì)會(huì)直接導(dǎo)致活性蛋白提取率的降低，通過去離子水的浸泡將辣木子中的雜質(zhì)浸泡出來并溶解，再經(jīng)過干燥來達(dá)到去除辣木籽中可溶解雜質(zhì)的效果，效果優(yōu)異。

Tris-Hcl緩沖液由三羥甲基氨基甲烷2~6重量份和超純水15~25重量份組成，pH值為8.6~8.9，濃度為1.3~1.6mol/L。值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異，緩沖液中的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)有利于活性蛋白的提取。脫脂劑體積為內(nèi)子粉末2~4倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置1~2天后用50~150目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。

步驟3中采用離心機(jī)離心，離心轉(zhuǎn)速為3000~4000r/min，離心時(shí)間10~20min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。

有益效果：本發(fā)明在預(yù)處理中使用干燥器進(jìn)行干燥，且干燥器內(nèi)設(shè)有干燥劑。通過加熱使辣木籽粉中的濕分氣化逸出，獲得干燥的辣木籽粉末，采用干燥劑可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果優(yōu)異，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的減少而影響提取率，在預(yù)處理中用去離子水浸泡辣木子，將其中的雜質(zhì)浸泡出來并溶解，再經(jīng)過干燥來達(dá)到去除辣木籽中可溶解雜質(zhì)的效果，效果優(yōu)異。本發(fā)明通過預(yù)處理工藝改善來達(dá)到高效脫脂，活性蛋白提取率明顯提高，提取的活性蛋白效果優(yōu)異。

具體實(shí)施例

實(shí)施例1：

一種從印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，去離子水浸泡，干燥，超微粉碎，過篩；去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，離心取上清液，上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確保活性采用凍干工藝。

步驟1中內(nèi)子在去離子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器內(nèi)干燥，干燥器內(nèi)設(shè)有干燥劑。通過加熱使辣木籽粉中的濕分氣化逸出，獲得干燥的辣木籽粉末，干燥后再經(jīng)超微粉碎，用50~150目篩網(wǎng)后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后續(xù)的脫脂工藝。

干燥劑由以下成分及重量份組成：生石灰70~90重量份、三聚磷酸鈉0.1~0.5份，殼聚糖0.1~0.5份，納米二氧化硅1~5份、無水硫酸銅5~10份、硫酸亞鐵2~8份、四甲基哌啶醇2~6份，在預(yù)處理過程中辣木子內(nèi)部含有太多水分不利于后續(xù)的脫脂和提取蛋白，辣木子內(nèi)部水分過多可能會(huì)因環(huán)境影響而導(dǎo)致活性蛋白減少，采用干燥劑可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果優(yōu)異，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的減少而影響提取率。

去離子水內(nèi)含有磷酸二氫鉀2~4重量份和異丙醇3~6重量份，可有效溶解辣木籽中雜質(zhì)，提取活性蛋白過程中若存在雜質(zhì)會(huì)直接導(dǎo)致活性蛋白提取率的降低，通過去離子水的浸泡將辣木子中的雜質(zhì)浸泡出來并溶解，再經(jīng)過干燥來達(dá)到去除辣木籽中可溶解雜質(zhì)的效果，效果優(yōu)異。

Tris-Hcl緩沖液由三羥甲基氨基甲烷2~6重量份和超純水15~25重量份組成，pH值為8.6~8.9，濃度為1.3~1.6mol/L。值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異，緩沖液中的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)有利于活性蛋白的提取。

脫脂劑體積為內(nèi)子粉末2~4倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置1~2天后用50~150目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。

步驟3中采用離心機(jī)進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速為3000~4000r/min，離心時(shí)間10~20min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。

實(shí)施例2：

一種從印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，內(nèi)子在去離子水中浸泡優(yōu)選30min取出后置于干燥器內(nèi)干燥，干燥器內(nèi)設(shè)有干燥劑。通過加熱使辣木籽粉中的濕分氣化逸出，獲得干燥的辣木籽粉末，干燥后再經(jīng)超微粉碎，50~150目篩網(wǎng)后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后續(xù)的脫脂工藝，超微粉碎，過篩；去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，脫脂劑體積為內(nèi)子粉末優(yōu)選3倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置優(yōu)選2天后用優(yōu)選80目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，Tris-Hcl緩沖液由三羥甲基氨基甲烷優(yōu)選4重量份和超純水優(yōu)選20重量份組成，pH值為優(yōu)選8.8，濃度為優(yōu)選1.5mol/L。值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異，緩沖液中的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)有利于活性蛋白的提取。攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，放入離心機(jī)進(jìn)行離心取上清液，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為優(yōu)選4000r/min，離心時(shí)間優(yōu)選15min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確保活性采用凍干工藝。

干燥劑由以下成分及重量份組成：優(yōu)選生石灰80重量份、三聚磷酸鈉優(yōu)選0.5份，殼聚糖優(yōu)選0.5份，納米二氧化硅優(yōu)選3份、無水硫酸銅優(yōu)選10份、硫酸亞鐵優(yōu)選6份、四甲基哌啶醇優(yōu)選4份，在預(yù)處理過程中辣木子內(nèi)部含有太多水分不利于后續(xù)的脫脂和提取蛋白，辣木子內(nèi)部水分過多可能會(huì)因環(huán)境影響而導(dǎo)致活性蛋白減少，采用干燥劑可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果優(yōu)異，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的減少而影響提取率。

去離子水內(nèi)含有磷酸二氫鉀優(yōu)選3重量份和異丙醇優(yōu)選5重量份，可有效溶解辣木籽中雜質(zhì)，提取活性蛋白過程中若存在雜質(zhì)會(huì)直接導(dǎo)致活性蛋白提取率的降低，通過去離子水的浸泡將辣木子中的雜質(zhì)浸泡出來并溶解，再經(jīng)過干燥來達(dá)到去除辣木籽中可溶解雜質(zhì)的效果，效果優(yōu)異。0.02~0.1份的二甲亞砜和0.01~0.05份的甘油可以有效的提高綜合效果，其原因尚待進(jìn)一步研究。本發(fā)明在預(yù)處理中使用干燥器進(jìn)行干燥，且干燥器內(nèi)設(shè)有干燥劑。通過加熱使辣木籽粉中的濕分氣化逸出，獲得干燥的辣木籽粉末，采用干燥劑可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果優(yōu)異，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的減少而影響提取率，在預(yù)處理中用去離子水浸泡辣木子，將其中的雜質(zhì)浸泡出來并溶解，再經(jīng)過干燥來達(dá)到去除辣木籽中可溶解雜質(zhì)的效果，效果優(yōu)異。本發(fā)明通過預(yù)處理工藝改善來達(dá)到高效脫脂，活性蛋白提取率明顯提高，提取的活性蛋白效果優(yōu)異。

以上實(shí)施方式僅用于說明本發(fā)明，而并非對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，還可以做出各種變化和變型。因此，所有等同的技術(shù)方案也屬于本發(fā)明的范疇，本發(fā)明的專利保護(hù)范圍應(yīng)由權(quán)利要求限定。