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一種豬戊型肝炎病毒ORF2重組蛋白的制備方法及其ORF2蛋白和檢測試劑盒與流程

文檔序號:11107758閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種豬戊型肝炎病毒重組蛋白的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1. 以表達HEV ORF2 C段第337個到第645個氨基酸片段的核苷酸序列為目的片段,利用上游引物F和下游引物R擴增該目的片段;上游引物F和下游引物R的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;

S2. 連接pMAL-c5X載體,獲得pMAL-c5X-ORF2重組質粒,轉入原核表達菌誘導表達即可。

2. 根據權利要求1所述的豬戊型肝炎病毒重組蛋白的制備方法,其特征在于,S2所述誘導表達條件為:IPTG終濃度0.8 mmol/L,溫度30℃,時間5h。

3.權利要求1或2所述方法獲得的豬戊型肝炎病毒重組蛋白。

4.權利要求3所述豬戊型肝炎病毒重組蛋白作為免疫原在制備檢測豬戊型肝炎病毒的試劑中的應用。

5.一種檢測豬戊型肝炎病毒的羧基化熒光微球12-ORF2,其特征在于,是將權利要求3所述豬戊型肝炎病毒重組蛋白與羧基化熒光微球012偶聯獲得。

6.權利要求5所述豬戊型肝炎病毒的羧基化熒光微球12-ORF2的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1. 羧基化熒光微球的活化:將清洗后的羧基化熒光微球012分別依次重懸于磷酸氫二鈉緩沖液、Sulfo-NHS溶液和EDC溶液中進行活化;

S2. 活化后的羧基化熒光微球012懸液中加入豬戊型肝炎病毒重組蛋白進行孵育,并用PBS-TBN重懸即得。

7.一種檢測豬戊型肝炎病毒的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒含有權利要求3所述的豬戊型肝炎病毒重組蛋白。

8.一種檢測豬戊型肝炎病毒的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒含有權利要求5所述的豬戊型肝炎病毒的羧基化熒光微球12-ORF2。

9.根據權利要求8所述的檢測豬戊型肝炎病毒的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還含有生物標記的雞抗鼠IgG抗體或者兔抗豬IgG抗體、鏈霉素-藻紅蛋白。

10.根據權利要求9所述的檢測豬戊型肝炎病毒的試劑盒,其特征在于,所述生物標記的雞抗鼠IgG抗體的稀釋度為1:1000,兔抗豬IgG抗體的稀釋度為1:5000,鏈霉素-藻紅蛋白的稀釋度為1:1000。

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