1.一種冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的菌體進(jìn)行階梯降溫處理;
將菌體進(jìn)行洗滌離心處理,收集菌體;
將菌體破碎;
離心收集上清液,并進(jìn)行凍干處理,獲得冷凍保護(hù)劑。
2.如權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,
所述的梯度降溫處理包括在31℃-0、0--45℃、-45--80℃,每個(gè)溫度梯度下冷凍處理0.5-5h。
3.如權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,
所述將菌體進(jìn)行洗滌離心處理,收集菌體包括:
將菌體在轉(zhuǎn)速為5000rpm,離心時(shí)間為10-20min,溫度為0-6℃下進(jìn)行離心;
用緩沖液洗滌,緩沖液為摩爾濃度0.05M的pH為6.63的Tris-HCl溶液,其中,菌體的質(zhì)量和緩沖液的體積配比為1g:(30-50)ml。
4.如權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,
所述將菌體破碎包括:
采用超聲破碎,破碎條件為:功率為300-350w,超聲5s,停止5s,共超聲30min-60min。
5.如權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,
所述離心收集上清液,并進(jìn)行凍干處理,獲得冷凍保護(hù)劑包括:
離心條件為6000-20000rpm,時(shí)間為10-20min,溫度為4℃。
6.如權(quán)利要求1-5任一所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法,其特征在于,所述菌體為嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌、乳酸片球菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、雙歧桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種中的任一一種。
7.一種凍干保護(hù)劑,其特征在于,是采用如權(quán)利要求1-6任一所述的冷凍保護(hù)劑的制備方法制備的。
8.一種凍干保護(hù)劑的使用方法,其特征在于,包括以下步驟:
用緩沖液將凍干保護(hù)劑稀釋,至蛋白濃度為5-10μg/μl,獲得凍干保護(hù)劑溶液;
將凍干保護(hù)劑溶液與菌體發(fā)酵液進(jìn)行混合凍干,其中,凍干保護(hù)劑溶液與菌體發(fā)酵液的體積比為1:(4-10)。
9.如權(quán)利要求8所述的凍干保護(hù)劑的使用方法,其特征在于,
所述的菌體發(fā)酵液為對(duì)數(shù)期的菌體發(fā)酵液。