本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
截短側(cè)耳素(式1)是由高等真菌Pleurotusmutiliz(Fr.)Sacc.和Pleurotus Passeckeranius Pilat產(chǎn)生的一種具有5-6-8三環(huán)二萜結(jié)構(gòu)的化合物，該類化合物只選擇性的抑制原核細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，對真核細(xì)胞沒有影響，也不與哺乳動物的核糖體相互作用，且不易與其他抗生素產(chǎn)生聯(lián)合耐藥性。自發(fā)現(xiàn)至今，研究人員通過對截短側(cè)耳素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，獲得數(shù)以萬計的截短側(cè)耳素衍生物，其中在羥基被取代的其他截短側(cè)耳素已經(jīng)被開發(fā)，且不乏具有高效抗菌活性、低毒性的備選藥物例如抗微生物劑。截止目前，截短側(cè)耳素類抗菌藥已有三種藥物相繼上市，分別為動物專用抗菌藥沃尼妙林(Valnemulin)和泰妙菌素(Tiamulin)，及2007年獲FDA批準(zhǔn)上市的第一個人用截短側(cè)耳素類抗菌藥瑞他妙林(Retapamulin)。
目前應(yīng)用于臨床的截短側(cè)耳素類抗生素抗菌譜廣，對革蘭氏陽性菌有效，對支原體屬和螺旋體屬作用強，而對腸道菌屬如大腸桿菌、沙門氏菌效力較低。
由于截短側(cè)耳素類抗生素的這種獨特的作用機(jī)理，這類藥物和其他藥物之間不會產(chǎn)生交叉耐藥性，故針對截短側(cè)耳素類抗菌藥的耐藥菌尚不多見。而且與其他類抗生素如青霉素類、頭孢類、氨基糖苷類等相比，截短側(cè)耳素類至今被成功開發(fā)的藥物只有三種，我們有理由相信截短側(cè)耳素類抗生素的開發(fā)潛力是巨大的。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點和不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物；
本發(fā)明的另一目的在于提供上述具有酰基哌嗪基側(cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物的制備方法；
本發(fā)明的再一個目的在于提供一種藥物組合物，其包含上述具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物作為活性成分；
本發(fā)明的又一個目的在于提供上述具有酰基哌嗪基側(cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物在制備治療感染性疾病特別是多藥耐藥菌引起的感染性疾病的藥物中的用途。
本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
一種具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物，該截短側(cè)耳素衍生物是具有如式3、式4和式5所示結(jié)構(gòu)的化合物及其可藥用鹽：
其中，
R4為氯代特戊酰基、2-氯丙?；?、3-氯丙?；?-氯苯甲酰基、4-氯丁酰基中的一種。
R5為中的一種。
R1為氫原子、羥基、氨基、巰基、羥甲基、胺甲基、硝基、鹵素、三鹵代甲基、甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子數(shù)為1～6的烷氧基中的一種，優(yōu)選為氫、羥基、氨基、羥甲基、胺甲基、氟、三氟甲基、硝基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、脯氨酰氨基和纈氨酰氨基中的一種。
R2為氫原子、羥基、氨基、巰基、羥甲基、胺甲基、硝基、鹵素、三鹵代甲基、甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子數(shù)為1～6的烷氧基中的一種，優(yōu)選為氫、羥基、氨基、羥甲基、胺甲基、氟、三氟甲基、硝基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、脯氨酰氨基和纈氨酰氨基中的一種。
R3為氫原子、羥基、氨基、巰基、羥甲基、胺甲基、硝基、鹵素、三鹵代甲基、甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子數(shù)為1～6的烷氧基中的一種，氫、羥基、氨基、羥甲基、胺甲基、氟、三氟甲基、硝基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、脯氨酰氨基和纈氨酰氨基中的一種。
術(shù)語“鹵素”表示氟、氯、溴、碘。
更加優(yōu)選的：所述R1為氫原子，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為硝基，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為硝基，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氫原子，R3為硝基；
或R1為氯原子，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氯原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氫原子，R3為氯原子；
或R1為甲氧基，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為甲氫基，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氫原子，R3為甲氧基；
或R1為羥基，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為羥基，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氫原子，R3為羥基；
或R1為甲基，R2為氫原子，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為甲基，R3為氫原子；
或R1為氫原子，R2為氫原子，R3為甲基；
上述優(yōu)選方式也可以如表1、2、3所示：
表1本發(fā)明代表性化合物b-f結(jié)構(gòu)式
表2本發(fā)明代表性化合物1a-1f結(jié)構(gòu)式
表3本發(fā)明代表性化合物2a-17a,3b-17b,2c-17c,2d-17d,2e-17e,2f-17f結(jié)構(gòu)式
所述可藥用鹽是具有如式3、式4和式5所示結(jié)構(gòu)的化合物，與鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富馬酸、馬來酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的鹽。
優(yōu)選地，本發(fā)明的通式3和式4所示的化合物中部分具有代表性的化合物的可藥用鹽結(jié)構(gòu)式如表4所示：
表4部分化合物的可藥用鹽
上述具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物的制備方法，包括以下操作步驟：
(1)將截短側(cè)耳素與對甲苯磺酰氯反應(yīng)，獲取如下式所示結(jié)構(gòu)的中間體Ⅰ；
(2)以中間體Ⅰ為原料，通過與碘化鈉反應(yīng)進(jìn)一步活化，再與N-BOC-哌嗪(N-叔丁氧羰基-哌嗪)在堿性條件下反應(yīng)，除去BOC(叔丁氧羰基)獲得如式2所示結(jié)構(gòu)的中間體Ⅱ；
(3)以中間體Ⅱ為原料，與酰氯反應(yīng)，分別獲得中間體IV或如式3所示結(jié)構(gòu)的中間體Ⅲ；
(4)以中間體Ⅲ或中間體IV作為原料，與各取代苯基哌嗪反應(yīng)，得到如式4或式5所示結(jié)構(gòu)的具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素類化合物。
步驟(1)所述反應(yīng)是采用乙酸乙酯作為溶劑，在常溫條件下反應(yīng)3小時；所述截短側(cè)耳素與對甲苯磺酰氯摩爾比為1：1.1。
步驟(2)所述反應(yīng)是采用非質(zhì)子溶劑作為溶劑，先將中間體Ⅰ溶于非質(zhì)子溶劑中，溶劑用量為中間體Ⅰ質(zhì)量的10倍，再加入無水碘化鈉，加熱回流1小時，其中中間體Ⅰ與無水碘化鈉摩爾比為1：1.1；再將N-BOC-哌嗪、堿與活化所得產(chǎn)物一起加熱回流2小時，其中中間體Ⅰ與N-BOC-哌嗪摩爾比為1：1.1，N-BOC-哌嗪與堿摩爾比為1：2；然后將上述反應(yīng)所得產(chǎn)物加入到質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液，常溫攪拌8h，獲得中間體Ⅱ；所述堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銫、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸銫；所述非質(zhì)子溶劑為乙腈。
步驟(3)所述反應(yīng)采用非質(zhì)子溶劑作為溶劑，加入酰氯及堿，與中間體Ⅱ在0℃進(jìn)行反應(yīng)3小時；其中中間體Ⅱ與酰氯摩爾比為1:1.1，酰氯與堿摩爾比為1:2；其中所述酰氯為氯乙酰氯、氯代特戊酰氯、2-氯丙酰氯、3-氯苯甲酰氯、4-氯丁酰氯或3-氯丙酰氯；所述非質(zhì)子溶劑為乙腈。
步驟(4)所述反應(yīng)采用非質(zhì)子溶劑作為溶劑，加入取代苯基哌嗪及堿，與中間體Ⅲ或中間體IV一起加熱回流3小時，即得目標(biāo)產(chǎn)物，重結(jié)晶或柱層析純化；其中中間體Ⅲ或中間體IV，與取代苯基哌嗪摩爾比為1:1.1，取代苯基哌嗪與堿摩爾比為1:2；其中，所述非質(zhì)子溶劑為二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、吡啶；所述取代苯基哌嗪為1-甲基哌嗪、N-苯基哌嗪、2-甲基苯基哌嗪、3-甲基苯基哌嗪、4-甲基苯基哌嗪、2-甲氧基苯基哌嗪、3-甲氧基苯基哌嗪、4-甲氧基苯基哌嗪、2-硝基苯基哌嗪、3-硝基苯基哌嗪、4-硝基苯基哌嗪、2-羥基苯基哌嗪、3-羥基苯基哌嗪、4-羥基苯基哌嗪、2-氯苯基哌嗪、3-氯苯基哌嗪或4-氯苯基哌嗪。
上述制備方法的合成路線如下，可以合成出中間體Ⅱ、I I I、IV(式2、3化合物)和化合物1a-1f，2a-17a，2b-17b，2c-17c，2d-17d，2e-17e，2f-17f：
一種藥物組合物，該藥物組合物包含了上述具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物作為活性成分。
上述的具有酰基哌嗪基側(cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物在制備治療感染性疾病藥物中的用途，所述感染性疾病為人或動物經(jīng)支原體或多藥耐藥菌感染引起的感染性疾病。
上述具有?；哙夯鶄?cè)鏈的截短側(cè)耳素衍生物用來制備抗感染藥物時，可以單獨使用，或者按照制藥學(xué)上的常規(guī)方法，將其與可藥用的賦形劑、稀釋劑等混合，制成口服給藥的片劑、膠囊劑、顆粒劑、糖漿劑、預(yù)混劑、微丸劑，或者制成非口服方式給藥的搽劑或注射劑等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：本發(fā)明提供的截短側(cè)耳素類化合物是首次報道的具有全新結(jié)構(gòu)的化合物；本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，合成了大量化合物并進(jìn)行了廣泛的生物活性篩選，首次發(fā)現(xiàn)具有通式3、通式4及通式5結(jié)構(gòu)的化合物具有良好的抑制金黃色葡萄球菌和支原體活性的抗菌活性，特別適合作為新興抗菌藥物用于動物或人全身系統(tǒng)感染，用于防治人或動物經(jīng)支原體或多藥耐藥菌感染引起的感染性疾病。
附圖說明
圖1是MRSA感染小鼠死亡保護(hù)實驗結(jié)果圖。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。下述實施例1-19所得化合物的編號如權(quán)利要求書中所示。
中間體Ⅰ制備實施例：
截短側(cè)耳素10g(26.42mmol)溶于25ml乙酸乙酯，加入對甲苯磺酰氯5.5g(29.06mmol)，冰浴至0℃左右，加入氫氧化鈉溶液(氫氧化鈉2.1g(52.84mmol)溶于10mL水)。常溫攪拌反應(yīng)3h后加入50mL水淬滅反應(yīng)。將反應(yīng)液倒入分液漏斗，先加30mL氯仿分層，除去水相，后再用水100mL洗滌有機(jī)相2次，最后用去離子水100mL洗滌有機(jī)相2次并用無水硫酸鈉干燥。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干有機(jī)相，往殘余固體中加入36mL異丙醇并加熱溶解，冷卻后析出大量白色粉末，減壓抽濾，濾出物用異丙醇洗滌，產(chǎn)物白色粉末剩余液體自然揮發(fā)至干燥，得白色粉末即中間體Ⅰ12.0g，產(chǎn)率85.71％。
中間體Ⅱ制備實施例：
中間體Ⅰ1g(1.88mmol)溶于10mL乙腈，加入無水碘化鈉0.31g(2.07mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)1h。取BOC哌嗪0.38g(2.07mmol),碳酸鉀0.52g(3.76mmol)，加入上述反應(yīng)體系中，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)2h。將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，加30mL氯仿萃取，50mL水洗滌兩次，再經(jīng)無水硫酸鈉干燥，取有機(jī)相。所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物加入二氯甲烷15mL復(fù)溶，再加入三氟乙酸5mL常溫攪拌8h。將所得反應(yīng)液旋轉(zhuǎn)蒸干，用30mL氯仿復(fù)溶，再用飽和碳酸氫鈉溶液萃取，得有機(jī)相至PH 7～8，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，二氯甲烷：甲醇＝5：1為流動相)，得到產(chǎn)物如式2所示結(jié)構(gòu)的中間體Ⅱ的純品0.52g。產(chǎn)率61.9％。HR-MS(ESI):Calcd.for C26H43N2O4(M+H+):447.3217；Found:447.3201.tR＝8.24min。
中間體Ⅲ制備實施例：
中間體Ⅲ1g(2.24mmol)溶于10mL二氯甲烷，冰鹽浴條件下加入氯乙酰氯0.187mL(2.46mmol),碳酸鉀0.619g(4.48mmol)，常溫攪拌2.5h。加反應(yīng)液倒入分液漏斗中，加30mL氯仿萃取，50mL水洗滌兩次，再經(jīng)無水硫酸鈉干燥，取有機(jī)相。所得有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，石油醚：乙酸乙酯＝1：1為流動相)，得到產(chǎn)物如式3所示結(jié)構(gòu)的中間體Ⅲ的純品0.71g。產(chǎn)率60.7％。HR-MS(ESI):Calcd.for C28H44ClN2O5(M+H+):523.2933；Found:523.2938.tR＝10.04min
實施例1：14-O-1-(4-(2-N-甲基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物1a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，1-甲基哌嗪0.233mL(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-N-甲基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物1a)的純品。產(chǎn)率40.78％。HR-MS(ESI):Calcd.for C33H55N4O5(M+H+):587.4167；Found:665.41803。
實施例2：14-O-1-(4-(2-甲基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物2a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，2-甲基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-甲基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物2a)的純品。產(chǎn)率46.74％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O5(M+H+):663.4480；Found:663.4485。
實施例3：14-O-1-(4-(3-甲基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物3a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，3-甲基苯基哌嗪0.36mL(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(3-甲基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物3a)的純品。產(chǎn)率60.56％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O5(M+H+):663.4480；Found:663.4470。
實施例4：14-O-1-(4-(4-甲基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物4a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，4-甲基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(4-甲基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物4a)的純品。產(chǎn)率48.92％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O5(M+H+):663.4480；Found:663.4488。
實施例5：14-O-1-(4-(2-甲氧基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物5a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，2-甲氧基苯基哌嗪0.4g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-甲氧基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物5a)的純品。產(chǎn)率43.75％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O6(M+H+):679.4429；Found:679.4409。
實施例6：14-O-1-(4-(3-甲氧基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物6a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，3-甲氧基苯基哌嗪0.36mL(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(3-甲氧基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物6a)的純品。產(chǎn)率46.05％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O6(M+H+):679.4429；Found:679.4416。
實施例7：14-O-1-(4-(4-甲氧基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物7a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，4-甲氧基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(4-甲氧基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物7a)的純品。產(chǎn)率55.67％。HR-MS(ESI):Calcd.for C39H59N4O6(M+H+):679.4429；Found:679.4434。
實施例8：14-O-1-(4-(2-硝基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物8a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，2-硝基苯基哌嗪0.43g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-硝基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物8a)的純品。產(chǎn)率51.78％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56N5O7(M+H+):694.4174；Found:694.4174。
實施例9：14-O-1-(4-(3-硝基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物9a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，3-硝基苯基哌嗪0.43g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(3-硝基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物9a)的純品。產(chǎn)率53.47％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56N5O7(M+H+):694.4174；Found:694.4143。
實施例10：14-O-1-(4-(4-硝基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物10a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，4-硝基苯基哌嗪0.43g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(4-硝基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物10a)的純品。產(chǎn)率49.26％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56N5O7(M+H+):694.4174；Found:694.4182。
實施例11：14-O-1-(4-(2-羥基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物11a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，2-羥基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-羥基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物11a)的純品。產(chǎn)率64.21％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H57N4O6(M+H+):665.4273；Found:665.4271。
實施例12：14-O-1-(4-(3-羥基苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物12a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，3-羥基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(3-羥基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物12a)的純品。產(chǎn)率68.32％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H57N4O6(M+H+):665.4273；Found:665.4276。
實施例13：14-O-1-(4-(4-羥基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物13a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，4-羥基苯基哌嗪0.37g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(4-羥基苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物13a)的純品。產(chǎn)率66.77％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H57N4O6(M+H+):665.4273；Found:665.4277。
實施例14：14-O-1-(4-(2-氯苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物14a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，2-氯苯基哌嗪0.41g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-氯苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物14a)的純品。產(chǎn)率55.76％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56ClN4O5(M+H+):683.3934；Found:683.3933。
實施例15：14-O-1-(4-(3-氯苯基哌嗪基乙酰基))哌嗪基妙林(化合物15a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，3-氯苯基哌嗪0.35mL(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(3-氯苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物15a)的純品。產(chǎn)率52.92％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56ClN4O5(M+H+):683.3934；Found:683.3940。
實施例16：14-O-1-(4-(4-氯苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物16a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，4-氯苯基哌嗪二鹽酸鹽0.57g(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(4-氯苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物16a)的純品。產(chǎn)率63.71％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H56ClN4O5(M+H+):683.3934；Found:683.3939。
實施例17：14-O-1-(4-(2-N-苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物17a)合成
中間體Ⅲ1g(1.91mmol)溶于10mL乙腈，加入碳酸鉀0.53g(3.82mmol)，N-苯基哌嗪0.32mL(2.1mmol)，70℃左右加熱攪拌反應(yīng)3h，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所得混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸干得混合物經(jīng)二氯甲烷復(fù)溶，加入100-200目硅膠1g充分混合，待溶劑揮發(fā)完后，將上述粗產(chǎn)物-硅膠粉混合物用柱層析過柱提純(200～300目硅膠粉為固定相，乙酸乙酯：甲醇＝20：1為流動相)，得到產(chǎn)物14-O-1-(4-(2-N-苯基哌嗪基乙?；?)哌嗪基妙林(化合物17a)的純品。產(chǎn)率77.25％。HR-MS(ESI):Calcd.for C38H57N4O5(M+H+):649.4323；Found:649.4329。
實驗實施例：體外抑菌實驗
實驗方法
采用瓊脂二倍稀釋法測定本發(fā)明所得的系列化合物的最小抑菌濃度(MIC)，實驗對照藥物選用泰妙菌素、沃尼妙林、瑞他妙林為截短側(cè)耳素類抗生素，是該類抗生素中目前經(jīng)FDA批準(zhǔn)使用的抗菌藥(泰妙菌素及沃尼妙林為動物專用、瑞他妙林為人用抗菌藥)。使用多點接種器將菌液接種在含不同濃度藥物的培養(yǎng)皿中，接種菌量為106CFU/ml。37℃孵育24小時后觀察結(jié)果，以不長菌的培養(yǎng)皿中的化合物濃度作為該化合物的最小抑菌濃度(MIC)。
實驗中所用的菌株為大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC29213、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCC43300、金黃色葡萄球菌ATCC29212、糞腸球菌ATCC35667。
精密稱取25.6mg所合成的目標(biāo)化合物，置于10mL的容量瓶中，先用少量甲醇溶解后，再用甲醇定容至10mL，配成2560μg/mL的儲備液。另精密稱取25.6mg截短側(cè)耳素、泰妙菌素、沃尼妙林、瑞他妙林，置于10ml容量瓶中，甲醇稀釋并定容至10mL，配成2560μg/mL的對照儲備液。
將儲備液以倍比稀釋法稀釋在培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿含藥液1mL，以融化的MH瓊脂稀釋至20mL，使系列培養(yǎng)皿中受試化合物的終濃度分別為32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03，0.015μg/ml。
下表5為MIC結(jié)果。
表5體外抑菌數(shù)據(jù)
全部目標(biāo)化合物對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出較好的抗菌活性，化合物5a,6a,7a,8a對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌抗菌活性強于目前臨床上廣泛使用的沃尼妙林及瑞他妙林，其中化合物3a,5a,8a對金黃色葡萄球菌抗菌活性均接近目前臨床上廣泛使用的沃尼妙林及瑞他妙林。
實驗實施例：MRSA感染小鼠死亡保護(hù)實驗
以MRSA ATCC43300構(gòu)建ICR小鼠感染模型，選取化合物5a與市場上廣泛應(yīng)用的泰妙菌素為受試藥物，比較5a與泰妙菌素對MRSA感染小鼠死亡保護(hù)作用。具體實驗步驟如下：
實驗動物：25-28g ICR鼠，雌雄各半，每組10只。
實驗材料：環(huán)磷酰胺，DMSO，吐溫80。
實驗步驟：
建立小鼠免疫缺陷模型，連續(xù)三天給小鼠腹腔注射150mg/kg環(huán)磷酰胺，停一天，再腹腔注射100mg/kg的環(huán)磷酰胺，24h后進(jìn)行腹腔攻毒，ATCC43300菌量為1x107CFU/mL。攻菌一小時后給藥，藥物用DMSO20％，吐溫805％，生理鹽水75％進(jìn)行溶解。另做泰妙菌素為陽性對照組，與5a組的處理方式一致，每組10只老鼠。結(jié)果如圖1所示。
圖1結(jié)果顯示，40mg/kg劑量下，5a對MRSA感染小鼠的死亡保護(hù)作用明顯優(yōu)于泰妙菌素。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。