背景技術(shù)：
：中國(guó)釀酒歷史悠久，酒文化底蘊(yùn)深厚。在漫長(zhǎng)的釀酒實(shí)踐中，形成了各具特色、風(fēng)格迥異的多種香型的白酒；其中，芝麻香型白酒既有清香型白酒的清凈典雅，又具有濃香型白酒的綿柔豐滿(mǎn)，還具有醬香型白酒的幽雅細(xì)膩，綜合感官有焙烤芝麻的特殊香味等特點(diǎn)，形成了獨(dú)特的口感和風(fēng)格特征。芽孢桿菌是生產(chǎn)芝麻香型白酒的有益菌株，細(xì)菌純種制曲的使用，對(duì)芝麻香型麩曲酒的生產(chǎn)具有重要意義。芝麻香型白酒注重“高溫堆積、高溫發(fā)酵”的工藝原則，產(chǎn)蛋白酶嗜熱細(xì)菌制備的麩曲、強(qiáng)化大曲等，具有一定的液化力、糖化力及蛋白質(zhì)水解力等，有利于原料中淀粉的糖化和蛋白質(zhì)的分解，為生成芝麻香白酒所需的含氮化合物提供了保證，強(qiáng)化了美拉德反應(yīng)，生成多種酮、醛、醇及呋喃等一系列風(fēng)味物質(zhì)，在芝麻香型白酒風(fēng)味物質(zhì)的生成過(guò)程中起到重要作用，有助于提高原酒的品質(zhì)和出酒率。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)菌株Nxzd4，該菌株已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏（CGMCC），保藏單位地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；菌種保藏號(hào)：CGMCCNO.12439,保藏日期：2016.05.12。本發(fā)明一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)菌株的最佳培養(yǎng)基組成是：（1）、固體斜面培養(yǎng)基：干酪素5g、蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、蒸餾水1000mL、瓊脂20g、pH7.0；（2）、液體發(fā)酵培養(yǎng)基：干酪素5g、蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、蒸餾水1000mL、pH7.0。本發(fā)明一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)菌株，其菌落呈暗白色，大而扁平，表面粗糙，邊緣不整齊有毛茸狀枝條，透明性差，稍黏稠，易挑??；顯微觀察，其菌體多呈長(zhǎng)桿狀，單個(gè)較多，芽孢可見(jiàn)，有少數(shù)兩連桿或三連桿鏈狀現(xiàn)象。本發(fā)明的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)菌株最佳培養(yǎng)條件為：（1）、固體斜面培養(yǎng)，溫度40-45℃，培養(yǎng)48h；（2）、液體發(fā)酵培養(yǎng)：接種1環(huán)活化后的固體斜面菌種，溫度40-45℃，100-130r/min搖床培養(yǎng)48h。本發(fā)明的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)菌株具有溫度耐受性，45℃條件下時(shí)仍然表現(xiàn)出高產(chǎn)特性。本發(fā)明的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)菌株，其菌種來(lái)源于安徽金種子酒業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的濃香型中高溫大曲，采用熱處理產(chǎn)芽孢、酪蛋白選擇培養(yǎng)基、高溫培養(yǎng)等方法分離篩選得到。將菌株Nxzd4的16SrDNA測(cè)序，在GeneBank的比對(duì)結(jié)果顯示，Nxzd4與地衣芽孢桿菌(EU304950)的16SrDNA基因的相似性達(dá)到100%。結(jié)合菌體形態(tài)特征的鑒定結(jié)果,將菌株Nxzd4確定為地衣芽孢桿菌。2016年5月12號(hào)，該菌株已經(jīng)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC）,(郵編100101),保藏編號(hào)為CGMCCNO.12439。本發(fā)明的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)，可產(chǎn)耐溫淀粉酶、中性蛋白酶等，兼具有溫度耐受性，其有益效果是適應(yīng)于芝麻香型白酒的“高溫堆積、高溫發(fā)酵”原酒釀造過(guò)程中的溫度變化要求，應(yīng)用于釀酒細(xì)菌麩曲、強(qiáng)化大曲等的生產(chǎn)，具有一定的液化力、糖化力及蛋白質(zhì)水解力等，有利于原料中淀粉的糖化和蛋白質(zhì)的分解，進(jìn)而促進(jìn)美拉德反應(yīng)的發(fā)生，生成多種酮、醛、醇及呋喃等一系列風(fēng)味物質(zhì)，有助于提高原酒的品質(zhì)和出酒率。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)，其菌種來(lái)源于安徽金種子酒業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的濃香型中高溫大曲，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,(郵編100101),保藏編號(hào)為CGMCCNO.12439。具體為:(1)、酪蛋白選擇培養(yǎng)基配制:先配制酪蛋白選擇培養(yǎng)基，其組成：蛋白胨10g、牛肉膏3g、干酪素4g、氯化鈉5g、蒸餾水1000mL、pH7.4-7.6、pH7.0；稱(chēng)量溶解后，121℃滅菌30min，固體培養(yǎng)基加2%瓊脂。(2)、菌株的分離與形態(tài)觀察:在裝有100mL無(wú)菌水的三角瓶中，加入1.0g經(jīng)研磨過(guò)的大曲樣品，棉塞封口，65℃水浴加熱10min，冷卻稀釋10-2、10-3、10-4、10-5倍。將稀釋液涂布于培養(yǎng)基平板上，55℃倒置培養(yǎng)24h，觀察菌落特征，選取差異明顯、透明圈直徑與菌落直徑比值較大的菌落備篩選、純化，重復(fù)純化2-3次，篩選到一株高產(chǎn)蛋白酶的嗜熱菌株Nxzd4。經(jīng)形態(tài)觀察，Nxzd4其菌落呈暗白色，大而扁平，表面粗糙，邊緣不整齊有毛茸狀枝條，透明性差，稍黏稠，易挑??；顯微觀察，其菌體多呈長(zhǎng)桿狀，單個(gè)較多，芽孢可見(jiàn)，有少數(shù)兩連桿或三連桿鏈狀現(xiàn)象。(3)、菌株的16SrDNA序列測(cè)定:菌株Nxzd4的16SrDNA序列測(cè)定由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司（上海市浦東新區(qū)康新公路3399號(hào)時(shí)代醫(yī)創(chuàng)園3號(hào)樓，021-51875086）完成。在GeneBank的比對(duì)結(jié)果顯示,菌株Nxzd4與地衣芽孢桿菌(EU304950)的16SrDNA基因的相似性達(dá)到100%；結(jié)合菌體形態(tài)特征的鑒定結(jié)果,將菌株Nxzd4確定為地衣芽孢桿菌。2016年5月12日該菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，(郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12439。實(shí)施例2本發(fā)明的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱地衣芽孢桿菌Nxzd4(CGMCCNO.12439)具有較高溫度耐受特性，具體為：（1）、菌種活化：將保藏的一株產(chǎn)蛋白酶嗜熱細(xì)菌（CGMCCNO.12439）挑取1接種環(huán)在固體斜面培養(yǎng)基劃線，再置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)40-45℃培養(yǎng)48h，得一級(jí)活化菌種。（2）、二級(jí)液體菌懸液：制備液體培養(yǎng)基，分裝滅菌，冷卻后接種1接種環(huán)步驟（1）所得的一級(jí)活化菌種，再置于40-60℃溫度梯度下，110r/min搖床上培養(yǎng)48h，得二級(jí)液體菌懸液；其中，液體培養(yǎng)基：干酪素5g、蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、蒸餾水1000mL、pH7.0。（3）、中性蛋白酶活力檢測(cè)：按照GB/T28715-2012分光光度法，測(cè)定二級(jí)液體菌懸液的中性蛋白酶活力，如表1所示：表1.不同溫度條件下產(chǎn)蛋白酶嗜熱細(xì)菌CGMCCNO.12439的中性蛋白酶活力溫度（℃）4045505560中性蛋白酶活力（u/ml）83.78±0.02112.05±0.0910.75±0.094.71±0.072.04±0.03當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3