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溝葉結縷草中一個新的耐鹽基因ZmPDI及其植物表達載體和應用的制作方法

文檔序號:12097416閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI,其特征在于該基因的序列為SEQ ID NO. 1。

2.含有權利要求1所述的溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI的植物表達載體,其特征在于由權利要求1所述的溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI與植物表達載體構成。

3.根據權利要求2所述的含有權利要求1所述的溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI的植物表達載體,其特征在于所述的植物表達載體為BamHⅠ和EcoRⅤ雙酶切ZmPDI后插入到gateway入門載體pENTR1A,經線性化后與pEarleyGate103表達載體質粒進行重組反應得到。

4.權利要求3所述的溝含有權利要求1所述的溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI的植物表達載體的構建方法,其特征在于包括如下步驟:(1)ZmPDI基因全長的獲得:設計引物ZmPDI- F: SEQ ID NO.2和ZmPDI-R: SEQ ID NO.3,以溝葉結縷草cDNA為模板進行PCR反應,PCR產物連接到pMD19-T Simple載體,轉化TOP10感受態細胞,提取陽性質粒并測序獲得ZmPDI全長序列SEQ ID NO. 1;(2)pENTR1A-ZmPDI質粒構建:設計引物ZmPDI-BamH Ⅰ-F: SEQ ID NO.4和ZmPDI-EcoRⅤ-R: SEQ ID NO.5,以步驟(1)測序的陽性質粒為模板,用高保真酶進行PCR反應,獲得在上游和下游分別引入BamHⅠ和EcoRⅤ酶切位點的ZmPDI基因,PCR產物連接到pMD19-T Simple載體,轉化TOP10感受態細胞,提取陽性質粒pMD19-T Simple-ZmPDI;BamHⅠ和EcoRⅤ分別對陽性質粒pMD19-T Simple-ZmPDI和pENTR1A進行雙酶切,取酶切后的ZmPDI片段與BamHⅠ和EcoRⅤ雙酶切的pENTR1A連接,連接產物轉化TOP10感受態細胞;37 ℃過夜培養,挑取陽性單克隆擴大培養,提取質粒pENTR1A-ZmPDI;(3)提取的陽性質粒pENTR1A-ZmPDI經NsiⅠ單酶切線性化后與pEarleyGate103載體質粒進行LR重組反應,轉化,提取陽性質粒,電泳檢測并測序驗證為SEQ ID NO. 1,植物表達載體pEarleyGate103-ZmPDI構建成功。

5.權利要求1所述的溝葉結縷草耐鹽基因ZmPDI在創建耐鹽新種質中的應用。

6.權利要求2所述的植物表達載體在創建耐鹽新種質中的應用。

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