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一種有效制備果樹高分子量DNA的方法與流程

文檔序號:11126032閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種有效制備果樹高分子量DNA的方法,其特征在于包括以下制備步驟:

(1)取蘋果或桃或杏或櫻桃或柿的鮮葉;核提取緩沖液;

(2)將10g鮮葉在液氮中研成細粉,加入200ml核提取緩沖液,置于冰浴中,用磁力攪拌器攪拌l0分鐘;該勻漿經兩層紗布過后,以3000轉/分鐘的速度,離心20分鐘;

(3)棄上清,將沉淀物中加入少量核洗滌緩沖液,用毛刷輕輕打散,再加入約200ml核洗滌緩沖液混勻,以60轉/分鐘的速度,離心5分鐘,棄沉淀;

(4)將上清液于2000轉/分鐘的速度下離心20分鐘;

(5)將該沉淀洗滌l-3次,用lml lHB(無β-mercaptoet hanol )將粗提核混勻,于45 C 下,與等量的l % LMP 瓊脂糖混合均勻;

(6)將步驟(5)產物裝入凝膠塊模具中,在4攝氏度溫度下凝固l小時,將包埋有細胞核的凝膠塊推入20倍體積的核裂解緩沖液中,50攝氏度下裂解24小時,其間更換裂解液兩次;

(7)將步驟(6)產物在4攝氏度下保存于0.5mol/L EDTA,lm mol/L PSMF 中;

(8)將上述凝膠塊置于大量的0.5xTBE中透析兩小時,然后包埋于l % 瓊脂糖凝膠的加樣孔中,進行脈沖電泳,電泳結束后染色l0 分鐘后獲得的(HMW)DNA膠塊。

2.如權利要求1所述一種有效制備果樹高分子量DNA的方法,其特征在于:電解液為:0. 5xTBE和濃度為l%(Bio- Rad)的瓊紙糖凝膠混合物。

3.如權利要求1所述一種有效制備果樹高分子量DNA的方法,其特征在于:所述電泳的環境為:脈沖電壓:5V/cm, 脈沖角度:l20;脈沖溫度:11攝氏度,脈沖交變時間為5-l5秒;脈沖電泳時間為l8小時。

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