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一種鏈霉菌屬菌種及用途的制作方法

文檔序號:11125943閱讀:1556來源:國知局

本發明屬于生物技術領域,具體來說涉及鏈霉菌屬菌種,及該鏈霉菌屬菌種在產酯類物質中的用途。



背景技術:

放線菌按照其生存環境的不同可分為土壤放線菌、海洋放線菌、植物內生放線菌和極端環境放線菌。目前,對放線菌的研究主要集中在菌株的分離、代謝成分分析、產酶分析、分子研究等方面。隨著現代微生物技術的發展,對白酒釀造環境和釀造過程中各類微生物的研究在不斷的深入。大曲是釀酒用的一種糖化劑和發酵劑,高溫制曲是醬香型白酒生產的一大特色,高溫大曲的最高制曲溫度可達60℃以上,曲坯溫度變化從低溫培菌期,品溫30℃~40℃,進入高溫轉化期,品溫50℃~65℃,最后到后火排潮生香期,品溫不低于45℃。這樣的制曲溫度的變化導致在大曲中就有耐高溫微生物的存在,如耐高溫的酵母及芽孢桿菌。在大曲中“菌系”中的放線菌在白酒釀造過程中相對于其他三大類微生物,還沒被引起足夠的重視。

嗜熱放線菌主要以鏈霉菌屬、高溫放線菌屬、小單孢菌屬、高溫單孢菌屬的種群為主,在傳統酒曲中已有關于放線菌及其產土味素的報道,但關于鏈霉菌屬中嗜熱放線菌及產酯類物質的相關研究報道未有。



技術實現要素:

本發明的目的在于提供的一種產酯類物質的鏈霉菌屬菌種。

本發明的另一目的在于提供該鏈霉菌屬菌種在產酯類物質中的用途。

本發明的一種鏈霉菌屬菌種,其形態特征:該菌株在ISP2培養基上,45℃培養3d,菌落直徑10~12mm,菌落形狀圓形,基內菌絲棕黃色,氣生菌絲灰白色,菌落平坦、干燥致密,無可溶性色素產生;掃描電鏡觀察菌絲細長,有直鏈狀的孢子,孢子未分散,菌絲表面有附著物。該菌種于 2016年5月30日保藏在中國典型培養物保藏中心(地址:中國 武漢 武漢大學),保藏號:CCTCC M 2016295,名稱為:Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004

(一)Streptomyces bangladeshensisstrain FBKL4.004的分離步驟:

從貴州某酒廠酒曲中,稱取保存曲粉樣品10g,按照樣品與CaCO3質量比為10:1的比例在無菌燒杯混合,添加2ml無菌水,空氣濕度30%,在28℃富集培養1周;將富集后的大曲樣品放入盛90ml無菌CMC水溶液(2.5g/L)并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,45℃、200r/min振蕩30min;將大曲樣品懸液在50℃水浴鍋中熱處理10min,取1ml樣品懸液進行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5、10-6和10-7稀釋度的樣品懸液中各取0.2ml涂布于分離培養基上,45℃靜止培養3d,挑取單菌落進一步篩選,斜面培養基上保藏。

(二)培養

Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004采用的培養基:

分離篩選培養基:

GTY培養基(g/L):葡萄糖10.0g、胰蛋白胨0.5g、酵母浸粉2.0g、CaCO3 1.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.2-7.4,115℃滅菌20min,放置培養基冷卻到50℃加入經0.22um的無菌濾膜過濾的新生霉素(30mg/L)和制霉菌素(20mg/L)混勻倒平板;

保藏培養基:

ISP2培養基(g/L):酵母膏4g、麥芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.0-7.2。

固態發酵培養基:

高粱麥粒培養基:高粱與小麥質量比為1:1,小麥高粱的粉碎顆粒與整粒比為1:1,加90℃熱水(加水量40%)攪拌均勻,潤糧1d,200g/瓶裝瓶,121℃滅菌20min。

(三)菌種的保種和傳代:

1、菌種保藏培養基:

ISP2培養基(g/L):酵母膏4g、麥芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.0-7.2。

2、保存方法有4種:

①傳代培養放線菌菌種保存法:將放線菌接種于ISP2斜面培養基上,置恒溫箱45℃培養3d后,將橡膠塞用滅菌固體石蠟熔封,移至4℃冰箱保存,一般放線菌在4℃冰箱內可以保存一個月,需定期移植。②砂土管放線菌菌種保存法:取清潔的海沙,用1mol/L的氫氧化鈉溶液清洗,然后再用1mol/L的鹽酸溶液清洗,在后用流水沖洗。分裝試管,約2-3厘米深,干熱滅菌,加入放線菌培養液1mL左右與砂土混勻,置真空干燥管內干燥,待完全干燥后熔封保存。

③真空冷凍干燥放線菌菌種保存法:將待保存的微生物細胞或者孢子懸浮在合適的保護劑中,預先將細胞冷凍,使水凍結,然后在真空條件下,使冰升華以除去大部分水,殘留的一些不凍結的水分,再通過蒸發從細胞中除去。

④液體石蠟法:亦稱礦物油保藏法,將放線菌菌種接種在適宜的斜面培養基上,最適條件下培養至待得到健壯的菌體后注入滅菌的液體石蠟,使其覆蓋整個斜面,再直立放置于低溫(4℃)干燥處進行保存的一種菌種保藏方法,是定期移植保藏法的輔助方法。

(四)菌種的生態特征:

該菌形成的菌落在ISP2培養基上,45℃培養3d,菌落直徑12~14mm,菌落形狀圓形,基內菌絲棕黃色,氣生菌絲灰白色,菌落平坦、干燥致密,無可溶性色素產生;掃描電鏡觀察菌絲細長,有直鏈狀的孢子,孢子未分散,菌絲表面有附著物。

(五)菌種的培養特性

(1)培養溫度45℃~55℃,最適溫度45℃~50℃;

(2)培養pH 6~8;最佳范圍為7.2~7.4。

菌絲細長,有直鏈狀的孢子,孢子未分散,菌絲表面有附著物。根據根據伯杰細菌鑒定手冊描述,鑒定該菌株屬于鏈霉菌屬(Streptomyces bangladeshensis strain ),故命為Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004。

本發明的一種鏈霉菌屬菌種在產酯類物質中的用途。

本發明與現有技術相比,具有明顯的有益效果,從以上技術方案可知:本發明的Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004對溫度、pH等自然環境條件的適應范圍廣,對不良環境的耐受力強,容易培養和保存及工業化生產,生產成本低,不污染環境,不破壞生態平衡。

具體實施方式

本發明的Streptomyces bangladeshensis strain FBKL4.004的分離方法,包括以下步驟:

從貴州某酒廠酒曲中,稱取保存曲粉樣品10g,按照樣品與CaCO3質量比為10:1的比例在無菌燒杯混合,添加2ml無菌水,空氣濕度30%,在28℃富集培養1周;將富集后的大曲樣品放入盛90ml無菌CMC水溶液(2.5g/L)并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,45℃、200r/min振蕩30min;將大曲樣品懸液在50℃水浴鍋中熱處理10min,取1ml樣品懸液進行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5、10-6和10-7稀釋度的樣品懸液中各取0.2ml涂布于分離培養基上,45℃靜止培養3d,挑取單菌落進一步篩選,斜面培養基上保藏。

該菌株在ISP2培養基上,45℃培養3d,菌落直徑10~12mm,菌落形狀圓形,基內菌絲棕黃色,氣生菌絲灰白色,菌落平坦、干燥致密,無可溶性色素產生;掃描電鏡觀察菌絲細長,有直鏈狀的孢子,孢子未分散,菌絲表面有附著物。

試驗例:產香能力測定

將菌株接種于GTY液體培養基,45℃振蕩培養3d,取10ml接種于盛有200g高粱麥粒培養基的三角瓶中,45℃恒溫靜置培養5d,進行感官評定,酯味較濃。

通過GC-MS對發酵產物的易揮發性物質進行分析,發酵試驗后,實驗組物質成分與對照組差距明顯,產物增多,種類豐富,主要以酯類物質為主,占34.57%,主要包括肉豆蔻酸甲酯、十二酸甲酯、14-甲基 - 十五烷酸甲酯等;其次包括萜烯類、醇類物質,此外該菌還能代謝產生17.63%吡嗪類物質。該菌代謝產生的物質的風味比較豐富,主要包括酯味、醬味、花香味、果香味及酸味。

以上所述,僅是本發明的較佳實施例而已,并非對本發明作任何形式上的限制,任何未脫離本發明技術方案內容,依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾,均仍屬于本發明技術方案的范圍內。

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